IV. Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции. Современные методы диагностики вич-инфекции Лабораторная диагностика вич инфекции основывается на выявлении

При диагностике ВИЧ-инфекции используется 4 группы методов:

1. Определение наличия вируса, его антигенов или копий РНК в мате­риалах от больного или ВИЧ-инфицированного

2. Серологическая диагностика, основанная на выявлении специфических антител к поверхностным (gp 120 и gp 41) и внутренним (р 18 и р 24) белкам ВИЧ.

3. Выявление патогномоничнъгх (специфических) для ВИЧ-инфекции изменений в иммунной системе.

4. Лабораторная диагностика оппортунистических инфекций (СПИД-ассоциированных заболеваний).

1. Вирусологическая диагностика. Материалом для выделения ВИЧ являются Т-лимфоциты крови, лейкоциты костного мозга, лимфатические узлы, ткани мозга, слюна, сперма, спинномозговая жидкость, плазма крови. Полу­ченным материалом заражают перевиваемую культуру Т-лимфоцитов (Н9). Индикацию ВИЧ в культуре клеток проводят по ЦПД (образование симпла-стов), а также методами иммунофлюоресценции, электронной микроскопии, по выраженной активности обратной транскриптазы. Современные методы ис­следования позволяют обнаружить один инфицированный лимфоцит на 1000 клеток.

Выявление вирусных антигенов в инфицированных Т-лимфоцитах осу­ществляют с помощью моноклональнъгх антител

В последние годы решающее значение для определения прогноза и тя­жести ВИЧ-инфекции имеет определение количества копий РНК ВИЧ в плазме крови методом полимеразной цепной реакции (ТТЦР) - так называемая вирусная нагрузка. Если у пациентов, не получающих терапии, вирусная нагрузка находится ниже предела определения (это менее 5000 копий РНК ВИЧ в I мл плазмы), это свидетельствует об отсутствии прогрессирования или о медленном прогресси-ровании. Степень заразности при этом минимальная. Высокая вирусная нагруз­ка (более 10000 копий РНК в 1 мл плазмы) у пациентов с числом СО4-лимфоцитов менее 300 в 1 мкл всегда свидетельствует о прогрессировании болезни.

2. Серологическая диагностика. В настоящее время получила наиболь­шее распространение.

Материал для исследовать: 5 мл. гепаринизированной крови, которую до доставки в лабораторию можно хранить 6-8 часов в охлажденном, но не в замороженном состоянии.

С целью серологической диагностики СПИДа используют прежде всего методы иммуноферментного анализа со стандартными иммуноферментными системами (ИФА). Это скрининговый метод. Принцип работы основан на клас­сическом принципе прямого ИФА. Иммуносорбентом являются полистироло­вые планшеты с иммобилизированным инактивированным вирусспецифиче-ским антигеном, полученным из ВИЧ, либо синтетическим путем. Затем вносят испытуемую сыворотку в разведении. Проводят инкубацию в лунках с антиге­ном. После связывания АГ с AT следует трехкратное отмывание несвязавшихся белков, а после этого в лунки вносят коньюгат антител к иммуноглобулинам человека с ферментной меткой. Образование специфического комплекса АГ+АТ выявляют внесением субстрата для фермента (раствор ортофенилендиамина и перекиси водорода). В результате окраска среды меняется пропорционально ко­личеству антител. Результаты исследования учитывают на спектрофотометре. Сыворотки крови, имеющие вирусспецифические антитела по данным ИФА, в дальнейшем необходимо исследовать методом иммунного блотинга.

Иммунный блотипг является подтверждающим тестом, так как позволяет выявить антитела к различным белкам ВИЧ. Он основан на предварительном фракционировании по молекулярной массе (разделении) белков ВИЧ электро­форезом в полиакриламидном геле с последующим перенесением антигенов на мембрану из нитроцеллюлозы. Затем на мембрану наносится испытуемая сыво­ротка. При этом специфические антитела образуют комплекс с конкретным АГ (gp.120, gp.41, p.24, p.18). Заключительный этап исследования - выявление ан­тител к различным белкам ВИЧ. Для этого в систему добавляют антитела про­тив белков человека, меченые ферментом или радиоизотопной меткой. Таким образом, в сыворотке пациента выявляют (либо не выявляют) вирусспецифиче­ские антитела ко всем или большинству антигенов ВИЧ.

3. Исследования иммунного статуса. Направлены на выявление:

1) уменьшения соотношения CD4/CD8 клеток (в N 2 и >, при СПИДе - 0,5 и <);

2) снижения содержания CD4 клеток (<200 клеток/мл.);

3) наличия одного из лабораторных признаков, включающих анемию, лейкопе­нию, тромбошггопению, лимфопению;

4) повышения концентрации Ig А и Ig G в сыворотке крови;

5) снижения реакции бластгрансформации лимфоцитов на митогены;

6) отсутствие кожной реакции ГТЗ на несколько антигенов;

7) повышение уровня циркулирующих иммунных комплексов.

Диагностика ВИЧ-инфекции на ранних порах просто необходима. От этого зависит сложность терапии и развитие патологических осложнений. На сегодняшний день существует множество инновационных методов исследования для выявления столь страшного диагноза. Именно об этом и пойдет речь дальше.

Какие существуют методы диагностики ВИЧ-инфекции?

На самом деле существует много методик диагностирования ВИЧ. В среднем они разделены на подгруппы – лабораторное исследование, дифференциальное обследование и аппаратное. Кроме того, нужно учитывать этапы проведения диагностических мероприятий. Обо всем этом и других аспектах подробнее поговорим дальше.

Лабораторная диагностика

Для рассматриваемого метода диагностики необходима высокоспециализированная лаборатория. В таких условиях можно выявить следующие показания:

• Определяются антитела, антигены возбудителей и иммунные комплексы.
• При обнаружении вируса, его культивируют и выявляют геномный материал и ферменты.
• Оценивается функциональность иммунитета.
• Осуществляется эпинадзор и мониторинг превалентности вируса иммунодефицита человека.
• Изучается динамика распространения, и определяется популяция.
• Можно определить степень безопасности трансплантации и гемотрансфузии.

Если выявляется соответствующий ВИЧ-возбудитель, больной направляется на дополнительное обследование. После этого человека ставят на учёт для дальнейшего контроля прогрессирования болезни.

Дифференциальная диагностика

Дифференцируется заболевание по разным причинам:

• При первых симптомах инфицирования ВИЧ, находящегося в фазе обострения, особенно если существует мононуклеозоподобный синдром. Диагностика отталкивается от таких патологий, как мононуклеоз инфекционного характера, сифилис, краснуха, аденовирус, лейкоз в острой форме, иерсиниоз, гиперкератоз.
• Если ВИЧ переходит в стадию генерализованной лимфаденопатии персистирующего характера, тогда дифференцируются болезни, при которых лимфатические узлы увеличиваются. Например, лимфолейкоз, сифилис, токсоплазмоз, лимфогранулематоз. В этой фазе у больного симптоматика становится более выраженной.
• Если обнаруживаются вторичные патологии, дифференцируется иммунодефицит, возникший на фоне приема некоторых групп препаратов – лучевая терапия, применение глюкокортикостероидных средств и цитостатических препаратов. Значительно снижается иммунитет и при таких заболеваниях, как миелома, лимфоидная лейкемия, онкологические новообразования и прочее.
• Если ВИЧ локализуется в ротовой полости, тогда дифференцируются болезни слизистой оболочки рта.

Экспресс-диагностика

На сегодняшний день разработаны даже экспресс-тесты, благодаря которым уже через 15 минут можно определить наличие инфекции ВИЧ. Их существует несколько видов :

• Самый точный тест – это иммунохроматографический. Тест состоит из специальных полосок, на которые наносится капиллярная кровь, моча или слюна. Если выявляются антитела к ВИЧ, то полоска имеет цветную и контрольную линию. Если ответ отрицательный – заметна лишь линия.
• Наборы домашнего использования «OraSure Technologies1». Разработчик – Америка. Именно этот тест был одобрен организацией «FDA».
• Существуют и прочие экспресс-тесты, но они не обладают одобрением специалистов, поэтому и нежелательны для проведения теста.

Если выявилась положительная реакция на вирус иммунодефицита человека, необходимо дополнительно провести соответствующее обследование в клинических условиях.

Ранняя диагностика

Ранняя диагностика ВИЧ существует для того, чтобы своевременно определить риски по поражению иммунитета. Благодаря этому болезнь купируется на начальных этапах, в результате чего инфицирование других внутренних органов снижается к минимуму.

Чтобы самостоятельно диагностировать патологию на ранних стадиях, обратите внимание на симптоматику, которая при этом существует:

Полимеразная цепная реакция

ПЦР или полимеразная цепная реакция используется для определения любого инфекционного возбудителя, в том числе и вируса ВИЧ. В данном случае выявляется его РНК, причем выявить возбудитель можно на очень ранних стадиях (после заражения должно пройти минимум 10 дней).

Это довольно дорогостоящая диагностика, но в некоторых случаях может давать ложный результат. Поэтому при обследовании на ВИЧ дополнительно применяются и другие методики.

Количественное выражение полимеразной цепной реакции нужно для определения скорости развития ВИЧ и осложнений, например, СПИДа. Это позволяет своевременно определить прогноз на длительность жизни ВИЧ-инфицированного больного.

Иммунный блоттинг

Иммунный блоттинг является последним методом обследования больного перед точной постановкой диагноза. В основе методики лежит использование специализированной полоски (нитроцеллюлозной) с вирусными белками. Врач собирает венозную кровь, после чего отправляет её на обработку. После этого процесса белки сыворотки разделяются в гелеобразной субстанции, исходя из молекулярной массы и заряда. Для этого используется аппаратура с действующим электрическим полем. Затем в данный гель помещается вышеуказанная полоска и промакивается, то есть подвергается блоттингу. Это осуществляется в специализированной камере.

Результат определяется по связыванию белков крови с белками, нанесенными на нитроцеллюлозную полоску. Если ВИЧ присутствует в организме больного, то просвечиваются единые линии. Существуют определенные показатели выявления линий, которые сигнализируют о наличии ВИЧ. Но бывают и заниженные цифры. В этом случае существует риск развития начальной стадии вируса иммунодефицита человека, образования онкологических опухолей, туберкулеза, трансфузии крови.

ИФА-тест

ИФА-тест относится к скрининговому методу обследования при подозрениях на ВИЧ. Исследование осуществляется в лабораторных условиях. Именно там создаются специфические белки заболевания, которые способны уловить белки, вырабатываемые человеческим организмом. При взаимодействии с реагентами меняется цвет индикатора. Таким образом, выявляется не сам возбудитель, а антитела к вирусу. Данный тест может выявить вирус иммунодефицита человека на ранних стадиях развития.

Существует несколько видов ИФА тестов, но используются только последние разработки – 3 и 4 поколение. Методика основана на сборе кровяной жидкости из вены. Существует определенная подготовка – пациент не должен потреблять пищу на протяжении 8-ми часов до сдачи анализа. Поэтому кровь собирается натощак в утреннее время.

Как проводят диагностику во время инкубационного периода?

Инкубационный период вируса ВИЧ составляет 90 дней. В этот промежуток выявить наличие патологии сложно, но это сделать можно посредством ПЦР.

После этого на протяжении года человек находится под пристальным вниманием докторов и проходит множественное обследование. Только через этот период можно с точностью установить диагноз – ВИЧ.

Особенности диагностики у детей

Если рождается ребенок у женщины с диагнозом вируса иммунодефицита человека, младенец обследуется на протяжении 3-х первых лет жизни. Дело в том, что антитела матери могут этот период находиться в кровяной жидкости ребенка. Но при этом даже анализы крови не подтверждают инфицирование. Конечно, существует множество случаев, когда болезнь устанавливается сразу же после рождения. Подробно о беременности при ВИЧ-инфекции .

Первые анализы на ВИЧ у ребенка берут на вторые сутки после появления на свет. Потом по достижении 2-х месяцев, затем каждые 4 месяца.

Для выявления патологии в детском возрасте используются серологические методики обследования, ПЦР. Именно последний вид диагностирования недуга позволяет выявить на первых месяцах жизни младенца ДНК и РНК вируса. Для этого у малыша осуществляется сбор крови, которая впоследствии размещается в пробирку, содержащую консервант ЭДТА. Далее материал хранится 2 дня при температуре, не превышающей 8-ми градусов. Но и замораживать кровь не допустимо. Также может быть использована и сухая кровяная жидкость, которая получена из цельной крови и высушена.

Этапы проведения диагностики

Диагностические мероприятия по выявлению вируса иммунодефицита человека проводятся в три основных этапа:

• Предварительная сортировка, она же скрининг.
• Референтная диагностика.
• Подтверждающий этап или экспертная диагностика.

Скрининг – предварительная сортировка

Предварительный этап обследования позволяет определить общие антитела посредством иммуноферментного анализа, то есть ИФА. Можно получить информацию о наличии вируса уже через 3 месяца после заражения. Но были зафиксированы случаи выявления возбудителя в более ранних стадиях – через 3 недели.

Нужно знать, что ИФА может при некоторых условиях дать ложноположительный результат. Это может быть в период вынашивания ребенка, при аутоиммунных болезнях (псориазе, ревматизме, волчанке и т. д.), заболевании Эпштейн-Бара и прочих патологиях.

Референтная диагностика

На данном этапе используются разнообразные тестирования минимум дважды, максимум трижды. Если в двух случаях результат положительный – требуется этап подтверждения.

Подтверждающий этап – экспертный

На данном этапе проводится диагностика с помощью иммунного блоттинга. Определяются антитела соответственно к определенным белкам возбудителя. Результат обычно точный, но бывают и случаи ложного положительного ответа. Такое возможно при терминальной степени развития СПИДа и в период затишья заболевания ВИЧ. Поэтому важно через определенное время пройти процедуру дополнительно.

Ошибки при проведении диагностики

Как это ни парадоксально, но существует возможность получения ложноположительного результата. Обычно такое происходит при домашнем тестировании, особенно в случаях использования экспресс-тестов. В клинических условиях такое возможно только при определенных заболеваниях или положениях:

• период беременности;
• перекрестная реакция организма;
• аутоиммунные патологические нарушения;
• простудные заболевания в стадии обострения;
• онкологические новообразования;
• туберкулез;
• склероз.

Особенность – если человек инфицирован вирусами и грибками, то результат тестирования может быть тоже ложным. Особенно такое отмечается при аллергических состояниях.

Подготовка к сдаче анализов

Очень важно соблюдать правила подготовки к сдаче анализов на ВИЧ, потому что от этого зависит точность получения результата:

• В первую очередь, Вам необходимо посетить соответствующего специалиста, чтобы он дал Вам точные указания по мероприятиям подготовки.
• Анализы крови собираются всегда натощак. Поэтому перед выходом в клинику нельзя ничего кушать. Ваше последнее потребление пищи должно осуществляться не позже 21:00.
• Запрещено курить в день сдачи анализов.
• Нельзя накануне употреблять алкогольные напитки.
• Если Вы принимаете какие-либо медикаменты, обязательно заранее проконсультируйтесь с доктором. Потому что многие препараты перед сдачей анализов на ВИЧ применять запрещено.
• Не рекомендовано за несколько дней до сбора анализа проводить ультразвуковое исследование.
• Не желательно за день-два до процедуры кушать чрезмерно жирные блюда и потреблять много сладостей.

Диагностика ВИЧ-инфекции (видео)

Вы можете узнать более подробно о различных методах диагностики ВИЧ от квалифицированных специалистов. Для этого стоит просмотреть следующее видео.

Производится несколькими разными методами. Казалось бы, ничего проще, чем выявить это заболевание посредством забора крови, нет. Но это не совсем так. Диагноз ВИЧ действительно можно выявить таким образом, но дальнейшее исследование производится разными методами. От них во многом зависит, какое лечение будет прописано пациенту, и какие меры будут приняты впоследствии. Среди самых распространенных и высокоэффективных методов принято выделять скрининговый анализ и иммунный блоттинг. Каждый из них следует рассмотреть более подробно.

СПИД диагностика: скрининговый анализ

Скрининговый анализ или метод исследования ИФА применяется на начальном этапе диагностики ВИЧ-инфекции. При разработке этого способа в лабораторных условиях искусственно создавались белки вируса. Они особым образом реагируют на антитела. Последние вырабатываются в организме при появлении в нем клеток, зараженных страшным недугом. Лабораторная диагностика ВИЧ в этом случае производится при помощи искусственных ферментов. Вступая во взаимодействие с антителами, они окрашиваются в определенный цвет. Полоска с индикатором после попадания на нее крови, помещается под специальный аппарат, с помощью которого удается определить, имеется ли у человека данное заболевание или нет. Современные методы диагностики ВИЧ, в том числе и ИФА позволяют определить факт заражения или его отсутствия с высокой точностью. Но, как и вся техника, аппарат для скринингового анализа имеет погрешность. Именно поэтому при необходимости анализ пересдается пациентом.

Важно знать, что ИФА тест - один из самых ранних методов определения наличия в организме вируса иммунодефицита. ВИЧ-инфекция - диагноз, который возможно выявить только через несколько недель после заражения. При попадании инфицированных клеток в кровь, иммунная система организма начинает активно сопротивляться. Происходит выработка антител, которые обнаруживаются методом лабораторного исследования спустя две или три недели. Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции посредством ИФА теста позволяет выявить антитела к вирусу иммунодефицита в крови человека. В этом заключается ее основное отличие от других современных методов.

Стоит отметить, что у некоторых людей антитела к данному заболеванию начинают вырабатываться на более поздних сроках. С момента заражения до начала данного процесса может пройти от трех до шести недель. Именно поэтому специалисты в области медицины рекомендуют проходить скрининговый анализ спустя четыре - пять недель после незащищенного полового контакта или другой причины, по которой можно подозревать факт случайного заражения.

Методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции ИФА разрабатывались на протяжении длительного времени. На сегодняшний день существует четыре поколения тестов. Наиболее точными и эффективными из них считаются те, что были разработаны последними. Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции и СПИДа при использовании третьего и четвертого поколения ИФА тестов осуществляется при помощи рекомбинантных белков и пептидов. Чувствительность этих тестов к антителам, вырабатываемым организмом, составляет 92 - 93%. Речь идет о российских методах исследования. Европейцы научились делать подобные тесты с чувствительностью от 99%.

Современные методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции на основе ИФА используются не только для того, чтобы выявить наличие заболевания. С помощью скринингового анализа возможно проводить мониторинг распространения вируса иммунодефицита, а также забор тестового материала перед осуществлением взятия крови у доноров.

ИФА - стандартный метод диагностики ВИЧ инфекции: как осуществляется, почему дает ложный результат?

Диагностика ВИЧ и СПИД посредством ИФА - стандартная процедура. Забор крови у пациента производится из вены. Для анализа достаточно пяти миллилитров материала. Клиническая диагностика ВИЧ 2 и 1 типа производится минимум через восемь часов после приема пищи. Врачи рекомендуют проводить ее утром натощак. Результаты полного исследования бывают известны через два или три дня. Экспресс скрининг производится за меньшее время. Как правило, на это уходит всего несколько часов. Однако погрешность в этом случае увеличивается. Экспресс постановка диагноза ВИЧ необходима в экстренных случаях, например, когда больному нужна срочная операция. Такой анализ обязательно производится перед внеплановыми хирургическими вмешательствами, ведь при наличии у пациента вируса иммунодефицита, медики соблюдают повышенные меры безопасности. Клиническая диагностика ВИЧ-инфекции в короткий промежуток времени необходима и в том случае, когда забор донорской крови должен быть произведен быстро для спасения другого пациента.

Бывают случаи, когда человеку поставили диагноз СПИДа или ВИЧ, а в результате он не подтвердился или наоборот. Почему так происходит в случае с ИФА тестом? Ложноотрицательный результат может быть по причине того, что кровь была подготовлена к исследованию ненадлежащим образом. Иногда причиной этому становится неправильное выполнение ее забора. Ложноотрицательный результат при верификации диагностики ВИЧ-инфекции не подтверждается и в том случае, когда материалы для исследования были взяты слишком рано. Ведь после заражения должно было пройти не менее трех недель. Существуют случаи, когда результат обнаружения вируса иммунодефицита оказывается ложноположительным. Это связано с общим состоянием иммунной и гормональной систем человеческого организма. В большинстве случаев у пациента наблюдаются заболевания, которые и являются следствием ложноположительного результата. Речь идет об алкогольном гепатите, при котором печень вырабатывает особые ферменты, что может стать причиной неправильной формулировки диагноза ВИЧ. Беременность и некоторые аутоиммунные заболевания, наряду с множественной миеломой также могут стать причиной ложноположительного результата. В этот перечень можно включить пациентов на диализе и лиц, которые незадолго до дифференциальной диагностики ВИЧ проходили вакцинацию.

Говоря о скрининговом анализе, важно отметить, что этот метод исследования требует подтверждения. Врачи, перед тем, как ставят диагноз ВИЧ на его основании, обязательно отправляют больного на иммунный блоттинг.

Основные методы лабораторной диагностики ВИЧ инфекции: иммунный блоттинг

СПИД, диагностика и лечение которого тесно взаимосвязаны, выявляется сразу несколькими способами. Как уже говорилось выше, одного ИФА теста бывает недостаточно для того, чтобы окончательно определиться с диагнозом. Дифференциальная диагностика ВИЧ-инфекции в этом случае дополняется иммунным блоттингом. В современной медицине его называют окончательным подтверждающим методом постановки диагноза. Для исследования в этом случае используются белки, содержащиеся в крови пациента. Они разделяются в специальном геле, после чего у работников лаборатории появляется возможность изучить молекулярный состав крови.

Сроки диагностики ВИЧ при таком методе составляет от одного до трех дней. Для исследования из вены испытуемого берут кровь, которую помещают на тестер с гелем. Результат, который ставится под сомнение, может возникнуть при беременности, наличии онкологических процессов, туберкулезе. Ложноотрицательная реакция на тест может возникнуть при неправильном проведении исследования и в случае, если оно проводилось слишком рано. С момента заражения должно пройти не менее трех недель. Ведь то, через какое время диагностируется ВИЧ, напрямую зависит от состояния иммунитета.

Другие методы диагностики СПИДа и ВИЧ

Методы лучевой диагностики при СПИДе используются, как правило, в терминальной или вторичной стадиях. С их помощью удается установить изменения, которые происходят в организме из-за вторичных заболеваний или оппортунистических инфекций.

Биорезонансная диагностика ВИЧ, которую также называют нелинейным сканированием, для выявления вируса иммунодефицита используется в основном в частных клиниках. Официальная медицина считает такой метод недостаточно точным и эффективным. Возможно, усовершенствование нелинейной диагностики в будущем позволит выявлять этот страшный диагноз уже в инкубационном периоде.

Диагностика ВИЧ-инфекции: серологический метод и его особенности

Это сравнительно новая методика, при которой лабораторные критерии диагностики ВИЧ-инфекции основываются на принципе антиген-антитело. В случае с вирусом иммунодефицита происходит поиск антител к вирусу в организме человека. Для этого используется искусственным образом выведенный антиген, на который должны отреагировать антитела. Специфические серологические маркеры ВИЧ-инфекции вызывают специфические изменения в составе крови. Стоит отметить, что данный метод исследования наиболее эффективен в острой стадии, которая заканчивается сероконверсией. За ней следует бессимптомный латентный период, во время которого найти антиген бывает не просто.

Референс-диагностика ВИЧ-инфекции: описание и особенности

ВИЧ-референсные значения считаются наиболее точными в выявлении диагноза. Данный метод исследования объединяет ИФА тест и иммунный блоттинг. Референс-лаборатория диагностики ВИЧ позволяет осуществить забор анализов и последующую их обработку сразу двумя способами. Это позволяет в течение суток получить максимально точный результат. Перепроверка анализа, полученного в референс-лаборатории необходима лишь в том случае, если данные ИФА теста и иммунного блоттинга противоречат друг другу. Это достаточно редкое явление, которое чаще всего бывает у людей с вышеописанными сопутствующими заболеваниями.

всего страниц: 8

Клинико-лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции имеет три направления:

1. Установление факта инфицированностм ВИЧ, диагноза ВИЧ-инфекции.
2. Определение стадии клинического течения болезни и выявление вторичных заболеваний.
3. Прогноз прогрессии клинического течения заболевания, лабораторный контроль эффективности проводимого лечения и побочных эффектов антиретровирусных препаратов.

1. Установление инфицированности ВИЧ, диагноза ВИЧ-инфекции

Для определения ВИЧ-инфицированности используют следующие специфические показатели: антитела к ВИЧ, антигены ВИЧ, РНК ВИЧ и ДНК провируса. Антитела к ВИЧ определяются методом иммуноферментного анализа (ИФА) или иммуноблотинга, являющегося по сути разновидностью ИФА. Антигены (белки) ВИЧ определяются методом ИФА. С помощью молекулярно-генетических методов полимеразной цепной реакции (ПНР) и bДНК можно определять РНК ВИЧ и ДНК провируса. Применение дополнительно метода гибридизации нуклеиновых кислот со специфическими ДНК-зондами позволяет проверить специфичность последовательностей ДНК, полученных при проведении ПЦР. Чувствительность ПЦР - обнаружение вирусных генов в одной из пяти тысяч клеток .

При первичной инфекции наблюдается следующая динамика маркеров ВИЧ в крови инфицированных. В первый месяц в результате активации репликативного процесса происходит резкое увеличение вирусной нагрузки (содержание РНК ВИЧ в плазме), затем, вследствие диссеминации вируса и массового инфицирования клеток-мишеней в крови и лимфатических узлах, становится возможным определение провирусной ДНК. Первостепенную диагностическую ценность имеет факт выявления ДНК провируса, интегрированной в геном клетки-мишени.

Вирусная нагрузка отражает интенсивность репликативного процесса в инфицированных клетках. В период первичной инфекции уровень вирусной нагрузки различен при инфицировании разными субтипами ВИЧ, однако динамика его изменений примерно одинакова. Так, при инфицировании субтипом В, например, если в первый месяц после заражения значение вирусной нагрузки составляет 700 копий/мл, то во 2-й месяц происходит снижение до 600, в 3-й - до 100, в 4-й - до 50 копий/мл. Такая динамика наблюдается на фоне нарастания содержания в крови специфических антител к ВИЧ. Содержание провирусной ДНК в мононуклеарах крови ВИЧ-инфицированных характеризуется относительным постоянством в течение первых 6 мес с незначительными флюктуациями у некоторых субтипов. Таким образом РНК- и ДНК-нагрузки не являются тождественными.

В стадии инкубации в течение некоторого времени не происходит образования специфических антител к ВИЧ в количестве, достаточном для определения существующими лабораторными методами. До регистрации антител в течение очень короткого времени наблюдается появление в крови белка Nef, которым репрессирует репликативный процесс, и структурного белка р24. Антиген р24 может быть выявлен в крови методом иммупоферментного анализа уже через 1-2 пед после заражения и определяться до 8-й нед, затем его содержание резко снижается. Далее в клиническом течении ВИЧ-инфекции отмечается второй подъем содержания в крови белка р24. Он приходится на период формирования СПИД. Исчезновение в крови свободных (не связанных антителами) сердцевинных белков р24 и появление специфических антител к белкам ВИЧ знаменуют наступление сероконверсии (рис. 9.6).

Виремия и антигенемия вызывают образование специфических антител класса IgM (анти-р24, анти-gр41, анти-gр120, анти-gр160). Свободные антитела классов IgM и IgG к белку р24 могут появиться, начиная со 2-й нед, их содержание повышается в течение 2-4 нед, достигая определенного уровня, на котором сохраняется в течение месяцев (IgM) и лет (IgG) (рис. 9.7).

Появление полной сероконверсии, когда в периферической крови регистрируется высокий уровень специфических антител класса IgG к структурным белкам ВИЧ р24, gp41, gp120, gр160, существенно облегчает диагностику ВИЧ-инфекции. Антитела к ВИЧ появляются у 90-95% инфицированных в течение 3-х мес после заражения, у 5-9% - в период от 3 до 6 мес от момента заражения и у 0,5-1% - в более поздние сроки.

Не смотря на то, что антитела к ВИЧ появляются в последнюю очередь, основным лабораторным диагностическим показателем до настоящего времени является выявление специфических антител методом ИФА и иммуноблотинга.

Данные, представленные в табл.9.2 [показать] и 9.3 [показать] , наглядно демонстрируют высокую чувствительность современных иммуноферментпых тест-систем при определении антител к ВИЧ, превосходящую чувствительность иммуноблотинга. В некоторых случаях при получении первичного положительного результата в ИФА подтвердить его в иммуноблотинге можно только через 2-3 нед.

Таблица 9.3. Пример мониторинга сероконверсии (по Н.Fleury, 2000)
Момент определения	Антиген р24, пг/мл	Антитела к белкам ВИЧ
		ИФА, ОП обр /ОП кр **			Иммуноблотинг
		HIV DUO	Gen-screen	Uniform
Пациент 1
Первично	17	1,24	меньше 1	меньше 1	*
Через 4 дня	67	1,36	1,85	меньше 1	-
Через 7 дней	*	2,33	6,84	меньше 1	-
Через 2 дня	*	6,77	15,0	4,8	gp160
Пациент 2
Первично	400	13	меньше 1	меньше 1	-
Через 5 дней	450	18	2,11	меньше 1	-
Через 10 дней	*	33	12,19	2,9	gp160
Примечание: * - определение не проводились ** - отношение оптической плотности исследуемого образца сывороткм к критическому (пороговому) значению оптической плотности

При обследовании больных ВИЧ-инфекцией (ВИЧ-инфицированных) с использованием тест-систем иммуноблотинга ведущих фирм мира во всех случаях выявляются антитела к gp160 и р24/25, к другим белкам антитела обнаруживают в 38,8-93,3% случаев (табл. 9.4 [показать] ).

Трудности с выявлением антител у больных ВИЧ-инфекцией могут возникнуть в периоды массивной виремии и антигенемии, когда имеющиеся специфические антитела в крови связаны с вирусными частицами, и репликативный процесс опережает наработку новых противовирусных антител. Такая ситуация может возникать и исчезать в течение инфекционного процесса .

У пациентов с исходно ослабленной иммунной системой виремия и антигенемия появляются раньше и сохраняются на высоком уровне до исхода заболевания. У таких больных отмечается низкое содержание свободных антител к ВИЧ, обусловленное двумя причинами - недостаточной продукцией антител В-лимфоцитами и связыванием антител вирионами и растворимыми белками ВИЧ, поэтому для определения инфицированности требуются тест-системы с повышенной чувствительностью или модификации методов анализа, предусматривающие этап высвобождения антител из иммунных комплексов .

Наиболее часто снижение содержания антител к ВИЧ по указанным причинам происходит в терминальной стадии, когда антитела к ВИЧ в сыворотке кроим могут не улавливаться не с помощью методов иммуноферментного анализа, ни метода иммумоблотинга (Western blot). Кроме появления специфических антител к ВИЧ иммунный ответ в первые 4 мес характеризуется снижением содержания в крови инфицированного CD4+- и увеличением СD8+-клеток. Далее содержание клеток, несущих рецепторы СD4 и СD8, стабилизируется и остается неизменным в течение некоторого времени. Увеличение содержания СD8-лимфоцитов является защитной реакцией, т.к. клеточнозависимая цптотоксичность реализуется СD8+-лимфоцитами, которые направлены на уничтожение ВПЧ-инфицированных клеток. Вначале цитотоксические лимфоциты (ЦТЛ) реагируют на регуляторный белок Nef вируса, что играет важную роль в снижении вирусной (РНК) нагрузки в плазме ВИЧ-инфицированного в первые месяцы. Затем формируется ответ ЦТЛ и к другим, в т.ч. структурным, белкам ВИЧ, в результате чего через 12 мес после заражения цптотоксический эффект значительно возрастает.

Схемы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции

С учетом приведенной динамики специфических маркеров ВИЧ-инфекции на практике целесообразно придерживаться следующих схем лабораторной диагностики у взрослых (рис. 9.8-9.10).

На схемах отражены три основных этапа первичной лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции:

1. Скрининговый.
2. Референтный.
3. Экспертный.

Необходимость нескольких этапов лабораторной диагностики обусловлена прежде всего экономическими соображениями. Так, например, стоимость проведения с помощью отечественных тест-систем одного экспертного исследования методом иммуноблотинг составляет до 40 долларов США, скринингового (методом ИФА) - около 0,2, то есть соотношение составляет 1:200.

На первом этапе (рис. 9.8) у обследуемых проводится определение антител к ВИЧ с помощью одной иммуноферментной тест-системы, предназначенной для детекции антител к обоим типам вируса - ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

Фирмами-производителями в предлагаемых тест-системах в качестве антигенной основы используются вирусный лизат, рекомбинантные белки, синтетические пептиды. Каждый из перечисленных носителей антигенных детерминант ВИЧ обладает своими достоинствами и недостатками. Поэтому при выборе тест-систем приблизительно равной стоимости следует предпочитать наборы с наибольшей чувствительностью (желательно 100%). Среди тест-систем одинаковой стоимости и чувствительности целесообразно остановиться на имеющих максимальную специфичность.

На основе лизата вируса были созданы первые тест-системы для лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции. В 80-х годах такие тест-системы характеризовались чувствительностью менее 100% и низкой специфичностью, проявляющейся большим количеством (до 60%) ложноположительных результатов.

При формировании вириона в культуре лимфоцитов его оболочка создается из наружной мембраны и поэтому содержит антигены главного комплекса гистосовместимости I и II классов. Это обстоятельство обусловливает ложно-положительные реакции в том случае, если в крови пациентов присутствуют антитела к аллоантигенам гистосовместимости.

Позднее для получения вируса было предложено использовать культуру макрофагов, в которых вирусные частицы формируются преимущественно внутриклеточно путем почкования не от наружной мембраны клетки, а от мембран эндоплазматического ретикулума. Такая технология позволила снизить количество ложноположительных результатов.

Одними из лучших по самым важным характеристикам - чувствительности и специфичности - признаны иммуноферментные тест-системы, в составе которых использована комбинация очищенного вирусного лизата с синтетическими пептидами, представляющими собой наиболее антигензначимые участки белков вируса, или рекомбинантными белками.

Чувствительность тест-системы зависит также и от характеристик других компонентов наборов. Так, тест-системы, в которых использованы конъюгаты, распознающие антитела не только класса IgG, но и IgM, и IgА, позволяют выявлять более раннюю фазу сероконверсии. Перспективным представляется применение тест-систем, с помощью которых можно одновременно определять и противовирусные антитела, и антиген р24, что делает еще более ранней лабораторную диагностику ВИЧ-инфекции.

Первичный положительный результат необходимо перепроверять повторным исследованием образца в той же тест-системе, но желательно другой серии и другим лаборантом. Если при повторном исследовании получен отрицательный результат, исследование проводится третий раз.

После подтверждения положительного результата желательно осуществить повторное взятие крови и исследовать ее на антитела к ВИЧ как первичную. Повторное взятие крови позволяет предупредить ошибку, обусловленную неточностью маркировки пробирок и заполнения бланков направлений.

Серопозитивная на скрининговом этапе сыворотка крови направляется на референтные исследования, выполняемые с использованием двух-трех высокоспецифичных ИФА тест-систем. В случае двух положительных результатов проводят экспертное исследование методом иммуноблотинга.

Применение в референтной диагностике иммуноферментных тест-систем, с помощью которых можно дифференцировать специфические антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, облегчает дальнейшую работу и позволяет исследовать позитивный образец на экспертном этапе сразу с использованием соответствующего иммуноблотинга (ВИЧ-1 или ВИЧ-2).

Лабораторное экспертное заключение об инфицированности ВИЧ выносится только на основании положительного результата иммуноблотинга (Western blot). При проведении экспертной диагностики необходимо пользоваться предложенными в 1990 г. группой экспертов ВОЗ номенклатурой генов и генных продуктов ВИЧ (табл. 9.5 [показать] ).

Специфичность полос на иммуноблоте следует оценивать очень внимательно и тщательно, используя при этом результаты исследований контрольных сывороток (положительной и отрицательной), которые проводятся параллельно с исследованием опытных проб, и образец иммуноблота с обозначением белков ВИЧ (прилагается фирмой-производителем к тест-системе). Интерпретацию полученных результатов следует проводить согласно прилагаемой к тест-системе инструкции. Как правило, критерием позитивности является обязательное наличие антител к двум белкам (предшественнику, наружному или трансмембранному), кодируемым геном env, и возможное присутствие антител к продуктам двух других структурных генов ВИЧ - gag и pol (табл. 9.6 [показать] ).

Таблица 9.6. Критерии интерпретации результатов иммуноблотинга для ВИЧ-1 и ВИЧ-2 (ВОЗ, 1990)
Результат	ВИЧ-1	ВИЧ-2
Положительный	+/- полосы pol +/- полосы gag	2 полосы env (предшественник, наружный gр или трансмембранный gp) +/- полосы pol +/- полосы gag
Отрицательный	Отсутствие ВИЧ-1 специфических полос	Отсутстпне ВИЧ-2 специфических полос
Неопределенный		Другие профили, не рассматриваемые как позитивные или негативные

В случае получения сомнительного результата необходимо пользоваться перечнем рекомендации для окончательного выяснения результатов иммуноблотинга (табл. 9.7 [показать] ).

Таблица 9.7. Рекомендации для окончательного выяснения неопределенных результатов иммуноблотинга (ВОЗ, 1990)
Наличие полос, соответствующих белкам ВИЧ	Интерпретация результата, дальнейшие действия
ВИЧ-1
Только р17
Только р24 и gp160	Столь необычная картина может иметь место в начале сероконверсии. Следует провести немедленное повторное исследование образца. В случае получения того же профиля, необходимо через 2 нед после взятия 1-й пробы взять второй образец для тестирования в иммуноблотинге
Другие профили	Эти профили (gag и/или роl без env) могут свидетельствовать о сероконверсии или неспецифнческих реакциях
ВИЧ-2
Только р16	Может классифицироваться как отрицательный, дополнительных определений не требует
I полоса env при наличии или отсутствии gag/роl	Следует провести повторное тестирование того же образца, но с использованием другой серии реагентов
Только р24 или gp140	Этот необычный профиль может иметь место в начале сероконверсии. Следует провести немедленное повторное исследование образца. В случае получения того же профиля, через 2 нед после взятия 1-й пробы необходимо взять второй образец для тестирования в иммуноблотинге
Другие профили	Эти профили (gag и/или роl без env) могут свидетельствовать о сероконверсии или неспецифических реакциях.

По рекомендациям Российского научно-методического центра по профилактике и борьбе со СПИД, положительным считается результат при наличии антител хотя бы к одному из белков gp41, gp120, gp160 в сочетании с антителами к другим специфическим белкам ВИЧ-1 или без них . Настоящие рекомендации сделаны па основании опыта работы с сыворотками детей из внутрибольничных очагов, у которых часто определялись антитела только к одному из белков оболочки вируса.

Основная часть первично обследованных серопозитивных в ИФА пациентов относится к фазе персистируюшей генерализованной лимфаденопатии (ПГЛ) или к бессимптомной фазе. Поэтому на иммуноблоте (нитроцеллюлозной полоске, на которой иммобилизованы белки ВИЧ) определяется, как правило, следующая комбинация антител к ВИЧ-1: антитела к оболочечным белкам gp160, gp120 и gp41, кодируемым геном env, в сочетании с антителами к сердцевинным белкам р24 (белок нуклеокапсида, кодируемый геном gag) и р31/34 (эндонуклеаза, кодируемая геном pol).

Положительные реакции только с белками gag и/или роl могут иметь место в случае ранней фазы сероконверсии, а также указывать на инфекцию, вызванную ВИЧ-2, или неспецифическую реакцию.

В случае получения сомнительного результата возможно использование различных методических приемов, позволяющих уточнить факт ВИЧ-инфекции.

В зависимости от технических возможностей (наличия диагностических наборов и реактивов, оснащенности специальной аппаратурой и подготовки персонала) экспертной лаборатории проводят дополнительные диагностические исследования (рис.9.10).

В ряде случаев целесообразно применение молекулярно-генетических методов, позволяющих определить генетические последовательности ВИЧ в сыворотке, в лимфоцитах крови или пунктатах лимфоузлов. Проверку специфичности последовательностей ДНК, полученных в результате ПЦР, можно провести методом гибридизации нуклеиновых кислот со специфическими ДНК-зондами.

Методы радиоиммунопреципитации (РИП) и непрямой иммунофлюоресценции (ИФл) могут быть также использованы для окончательной верификации сывороток с сомнительными результатами в иммуноблотинге .

Обнаружение РНК ВИЧ в плазме крови качественным или количественным методом не является значимым для диагностики инфекции ВИЧ. Такой результат должен быть подтвержден стандартными методами, такими как иммуноблотинг, через 2-4 мес после получения первичного сомнительного или отрицательного ответа.

Выделение ВИЧ в культуре клеток является истиной в последней инстанции. Однако метод сложен, дорог и выполняется только в специально оборудованных научно-исследовательских лабораториях.

Содержание СD4+ - клеток в крови является неспецифическим показателем, однако в спорных случаях (ИФА "+", иммуноблот "-", наличие клинических признаков ВИЧ-инфекции/СПИД) он может быть использован в качестве ориентира для принятия экспертного решения. Если же в лаборатории имеется возможность выполнения только иммуноблотинга, то следует придерживаться рекомендаций, изложенных в табл. 9.7 и на рис. 9.9.

Лица, при экспертном исследовании сыворотки которых получены сомнительные (неопределенные) результаты, за исключением случаев выявления антител только к р17 (ВИЧ-1) или р16 (ВИЧ-2), должны проходить повторное тестирование в течение 6 мес (через 3 мес). В случае истинной ВИЧ-инфекции по прошествии 3-6 мес в спектре антител наблюдают "положительную" динамику - дополнительное образование антител к другим белкам вируса. Ложная реакция характеризуется сохранением в течение длительного времени сомнительной картины иммунного блотинга или исчезновением подозрительных полос. Если по истечении указанного срока результаты повторного иммуноблотинга будут отрицательными или останутся сомнительными, то при отсутствии факторов риска, клинических симптомов или других факторов, связанных с ВИЧ-инфицированием, человек может считаться серонегативным в отношении антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

Ложноположительные результаты, обусловленные содержанием в крови пациентов антител к аллоантигенам гистосовместимости, входящим в состав оболочки ВИЧ, проявляются на иммуноблоте в виде полос на уровне gp41 и gp31. Причины других неспецифических реакций (например, к р24, часто встречающейся у лиц с аутоиммунными процессами) пока не выяснены.

Совершенствование технологии производства иммунноферментных тест-систем позволило достичь высокой чувствительности - до 99,99%, в то время как чувствительность метода иммуноблотинга составляет 97%. Поэтому отрицательный резукльтат в иммуноблотинге при положительных результатах в ИФА может указывать на начальный период сероконверсии, характеризующийся низким уровнем специфических антител. Поэтому необходимо повторить исследование через 1,5-2 мес., то есть отрезок времени, необходимый для завершения сероконверсии, достижения в крови концентрации специфических антител, достаточной для выявления методом иммуноблотинга.

Положительный результат (результаты) исследования на референтном или только скрининговом этапе лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции, то есть положительный результат в какой-либо иммуноферментной тест-системе, в итоге не подтвержденный экспертными методами, интерпретируется как наличие в крови обследуемого антител перекрестного реагирования. Под перекрестным реагированием подразумевают связывание антителами неспецифических участков на белках или пептидах ВИЧ, используемых в качестве антигенной основы в той тест-системе, в которой получен положительный результат.

При отсутствии иммунодефицита и клинических признаков ВИЧ-инфекции такие лица считаются серонегативными в отношении антител к ВИЧ и должны быть сняты с учета.

Окончательный диагноз ВИЧ-инфекцин устанавливается только на основании всех клинических, эпидемиологических и лабораторных данных. Сообщить пациенту диагноз инфицированности ВИЧ имеет право только лечащий врач.

Основным методом подтверждающей (экспертной) лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции является иммуноблотинг. Однако, учитывая его более низкую по сравнению с ИФА чувствительность, рядом исследователей было предложено использование комбинации нескольких тест-систем для окончательного определения наличия специфических антител к ВИЧ. Так, например, G. van der Groen с соавт. предложили альтернативный иммуноблотингу способ проверки положительных результатов скринингового этапа лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции. Он предполагает исследование материала параллельно в трех тест-системах, которые основаны на различных методах детекции специфических антител к ВИЧ (несколько вариантов ИФА, реакция агглютинации) с использованием антигенов различной природы. Авторам удалось подобрать такие комбинации тест-систем, использование которых обеспечивает 100% чувствительность н специфичность при сравнении с результатами, полученными в иммуноблотинге.

Дешевизна такого метода экспертной диагностики является несомненным преимуществом, однако отсутствие информации, к каким конкретно белкам вируса имеются антитела в крови пациента, не позволяет оценивать специфичность реакции в каждом отдельном случае, а также отслеживать изменения спектра антител на ранней стадии сероконверсии.

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, имеет свои особенности . С момента рождения в течение длительного времени (до 15 мес) в крови таких детей могут циркулировать материнские антитела к ВИЧ. Через плацентарный барьер проникают только иммуноглобулины класса IgG, поэтому выявление у ребенка специфических к ВПЧ нммупоглобулинов классов IgМ и IgA позволяет подтвердить инфицированность, но отрицательный результат не может свидетельствовать об отсутствии ВИЧ.

У детей в возрасте до 1 мес репликации ВПЧ еще нет, и единственным методом верификации является ПЦР. Определение антигена р24 у детей старше 1 мес также является подтверждающим методом.

Отсутствие антител к ВИЧ у новорожденных не означает, что вирус не проник через плацентарный барьер. В любом случае дети ВИЧ-инфицированных матерей подлежат лабораторно-диагностическому обследованию и наблюдению в течение 36 мес от рождения .

Результаты лабораторных исследований на маркеры ВИЧ-инфекции требуют осторожной интерпретации и должны рассматриваться только в совокупности с данными эпидемиологического и клинического обследований. С другой стороны, следует заметить, что несмотря на высокую чувствительность современных методов, отрицательные результаты исследований не могут полностью исключить наличие ВИЧ-инфекции. Поэтому отрицательный результат исследования, например, методом иммуноблотинга, может быть сформулирован только как отсутствие специфических антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

Диагностика ВИЧ-инфекции у серонегативных больных

Качество тест-систем, применяемых в лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции, с каждым годом улучшается, повышается их чувствительность. Однако высокая изменчивость ВИЧ может привести к появлению новых типов, антитела к которым могут быть не распознаны существующими тест-системами. Кроме того, известны случаи атипичного гуморального ответа иммунной системы организма-хозяина на вирус. Так, L.Montagnier в 1996 г. сообщил о двух больных СПИД, у которых на протяжении предшествующих нескольких лет не были выявлены в крови специфические антитела, диагноз поставлен на основе клинических данных и подтвержден лабораторно только выделением ВПЧ-1 в культуре клеток. В таких случаях необходимо использовать рекомендации ВОЗ, согласно которым клиническая диагностика ВИЧ-инфекции у взрослых и детей возможна при наличии одного из 12 СПИД-индикаторных заболеваний:

1. кандидоз пищевода, трахеи, бронхов, легких;
2. внелегочной криптококкоз;
3. криптоспоридиоз с диареей более одного мес;
4. цитомегаловирусное поражение какого-либо органа (за исключением и помимо печени, селезенки и лимфатических узлов у больного старше 1 мес):
5. инфекция, обусловленная вирусом простого герпеса, персистирующая более 1 мес у больного старше 1 мес;
6. лимфома головного мозга у больного моложе 60 лет;
7. лимфоцитарная интерстициальная пневмония у ребенка до 13 лет;
8. диссиминированная инфекция, вызванная бактериями группы Micobacterium avium intracellulare или M.Kansassii;
9. пневмоцистная пневмония;
10. прогрессирующая многоочаговая лейко-энцефалопатия;
11. токсоплазмоз центральной нервной системы у больных старше 1 мес.

Наличие одного из этих заболеваний позволяет диагностировать ВИЧ-инфекцию при отсутствии возможности проведения лабораторного исследования крови на наличие антител к ВИЧ или даже при получении серонегативного результата.

Лобзин Ю. В., Казанцев А. П. Руководство по инфекционным болезням. - СПб., 1996. - 712 с.

Лысенко А. Я., Турьянов М. X., Лaвдовская М. В., Подольский В.М. ВИЧ-инфекция и СПИД-ассоциированные заболевания / Монография.- М.: ТОО "Рарогъ", 1996,- 624 с.

Новохатский Л. С., Хлябич Г. Н. Теория и практика лабораторной диагностики синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД). - М.: ВИНИТИ, 1992,- 221 с.

Покровский В. И., Покровский В. В. СПИД: синдром приобретенного иммунодефицита.- М.: Медицина, 1988.- 43 с.

Покровский В. И. ВИЧ-инфекция или СПИД // Терапевт, арх. - 1989. - Т. 61, № 11. - С. 3-6.

Покровский В. В. ВИЧ-инфекция: клиника, диагностика / Под общ. ред. В. В. Покровского.- М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 2000.- 496 с.

Рахманова А. Г. ВИЧ-инфекция (клиника и лечение).- СПб: "ССЗ", 2000.- 367 с.

Рекомендации по применению антиретровирусных препаратов у взрослых и подростков, инфицированных вирусом иммунодефицита человека // Consilium Medicum приложение. Январь 2000,- 22 с.

Смольская Т. Т., Ленинская П. П., Шилова Э.А. Серологическая диагностика ВИЧ-инфекции / Методическое пособие для врачей.- СПб, 1992.- 80 с.

Смольскал Т. Т. Второе десятилетие жизни в условиях СППДа: уроки и проблемы / Актовая речь.- СПб., 1997.- 56 с.

Хаитов Р.М., Игнатьева Г. А. СПИД.- М., 1992.- 352 с.

Connor S. Research shows how HIV exhausts the body // Brit. Mod. J.- 1995.- Vol.310.- P. 6973-7145.

Burcham J., Marmor M., Dubin N. et al. CD4 is the best predictor of development of AIDS in a cohort of HIV-infecteci homosexual men // J. AIDS.- 1991.- jN"9. - P.365.

Furlini G., Vignoli M., Re M. C., Gibellini D., Ramazzotti E., Zauli G.. La Placa M. Human immunodeficiency virus type I interaction with the membrane of CD4+ cells induces the synthesis and nuclear translocation of 70K heat shock protein // J.Gen. Virol.- 1994.- Vol.75, pt 1.- P. 193-199.

Gallo R. C. Mechanism of disease induction by HIV // J.AIDS.- 1990.- N3.- P. 380-389.

Gottlieb M. S., Schroff R., Schanker H. et al. Pneumocystis carinii pneumonia and mucosal candidiasis in previously homosexual mon // Now England J. Med. - 1981. - Vol. 305. - P. 1425-1430.

Harper M. E., Marselle L. M., Gallo R.C., Wong-Staal F. Detection of lymfocytes expressing human T-lymphotropic virus type III in limph nodes and peripheral blood from infected individuals by in situ hybridization // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 1986. - Vol. 83. - N 2. - P. 772-776.

Hess G. Clinical and diagnostic aspects of HIV-infection.- Mannheim: Boehringer Mannheim GmbH, 1992.- 37 p.

Hu D.J., Dondero T.J., Ryefild M. A. et al. The emerging genetic diversity of HIV // JAMA.- 1996. - N 1.- P. 210-216.

Lambin P., Desjobert H., Debbia M. et al. Serum neopterin and beta-2-microglobulin in anti-HIV positive blood donors // Lancet.- 1986.- Vol.8517. - P. 1216.

Maldonado I. A., Retru A. Diagnosis of pediatric HIV disease // The AIDS knowledge base, Fd. Cohen P.T.; Sande M. A. Voiberding. 1994.- P. 8.2.1-8.2.10.

Mc Dougal J.S., Kennedy M.S., Sligh J.M. et al. Binding of the HTLV-III/LAV to T4+ T cells by a complex of the 110K molecule and the T4 molecule // Science.- 1985.- Vol.23.- P. 382-385.

Montagnier L., Gougeon M. L., Olivier R. et al. Factors and mechanisms of AIDS pathogenesis // Science challenging AIDS. Basel: Karger, 1992.- P. 51-70.

Paterlini P., Lallemant-Le C., Lallemant M. et al. Polimerase chain reaction for studies of mother to child transmission of HIV-I in Africa // J.Med. Virol. - 1990.- Vol.30, N 10.- P. 53-57.

Polis M. A., Masur H. Predicting the progression to AIDS // Amor. J. Med. - 1990.- Vol.89, N 6.- P. 701-705.

Roddy M.M., Grieco M. H. Elevated soluble IL-2 receptor levels in serum of HIV infected populations // AIDS Res. Hum. Retrovir. - 1988.- Vol.4, N 2. - P. 115-120.

Van dor Groen. G., Van Kerckhoven I. et al. Упрощенный и менее дорогой, в сравнении с традиционным, способ подтверждения инфекции ВИЧ // Бюлл. ВОЗ.- 1991.- Т. 69, №6.- С. 81-86.

Источник : Медицинская лабораторная диагностика, программы и алгоритмы. Под ред. проф. Карпищенко А.И., СПб, Интермедика, 2001

Выявить СПИД могут только специальные тесты. Сам процесс тестирования состоит из выявления антител, которые в ответ на появление вируса производятся организмом. Лабораторные методы диагностики СПИДа включают четыре теста, которые применяются для обнаружения этого заболевания.

Первый — ИФА (иммуноферментный анализ) является наиболее распространенным методом диагностики. Данный анализ может определить количество антител, которые успели скопиться в организме. Обычно это возможно только если в кровоток попал вирус и с того момента прошло три месяца. Как показывает практика результатов, один процент случаев дает ложноотрицательный или ложноположительный результат.

Ложноотрицательный результат возможен в случае, если к вирусу еще не выработались антитела или если СПИД находится на терминальной стадии, то есть вирус в крови присутствует, но его так много, что антитела и клетки CD-4 практически отсутствуют. Чтобы удостовериться в отрицательном результате, можно повторно сдать ИФА, но только спустя 3 месяца.

В большинстве случаев ложноположительный результат выдает обследование больных страдающих хроническими аутоиммунными, инфекционными, онкологическими и прочими заболеваниями. Ложноположительный результат может выявиться и у беременных женщин. Поэтому каждый положительный результат в обязательном порядке перепроверяется, но только уже на иммуноблоте — это более чувствительный тест.

Если результат иммуноблота положительный, особенно после результата ИФА, то достоверность составляет 99,9%, а это для медицинского теста (притом любого) максимальная точность.

Второй — иммуноблот (полн. Иммунный Блотинг). Данный тест выявляет наличие к ВИЧ специфических антител. В этом случае результат бывает отрицательным, положительным, сомнительным (его еще называют неопределенным).

Сомнительный результат может говорить о том, что в кровотоке присутствует ВИЧ, на что организм еще не выработал весь спектр антител. В этом случае антитела на ВИЧ в сыворотке появляются через 1-3-6 мес. одно за другим, с момента получения первого сомнительного результата. Если результаты подтвердились, то это свидетельствует о ВИЧ-инфекции в начальной стадии

Неопределенный результат данного теста может говорить и об обратном. Сама ВИЧ-инфекция отсутствует, но в организме человека живут антитела, схожие с антителами к ВИЧ. Как правило, сомнительный результат встречается у беременных женщин, у больных туберкулезом, реципиентов, онкобольных, а также у тех, кто многократно получал гемотрансфузии (т.е. переливание крови). Пациент, у которого результат данного теста показал неопределенность, наблюдается у врача-инфекциониста в течение полугода и сдает анализы через 1-3-6 мес.

Третий — ПЦР (полимеразная цепная реакция). Данная диагностика СПИДа позволяет определить ДНК и РНК вируса. Это достаточно чувствительная и эффективная реакция, которая позволяет исследуя ДНК, получить результат. При этом ДНК берется одной клетки и исследуется путем умножения характерных последовательностей ДНК

Этот тест применяется:

• чтобы определить, какой вирус находится в организме (бывает ВИЧ 1 и ВИЧ-2);
• чтобы определить присутствие ВИЧ или его отсутствие;
• чтобы определить и контролировать вирусную нагрузку;
• чтобы определить ВИЧ-статус новорожденного, который был рожден ВИЧ-инфицированной матерью.

Данный тест имеет высокую чувствительность: он может обнаружить вирус, даже если с предполагаемого момента заражения прошло около десяти дней. Такая высокая чувствительность теста реагирует и на другие инфекции, поэтому нередко выдает ложноположительные результаты. Результаты данного теста не являются основанием для окончательного диагноза.

Проведение данного теста требует высокой квалификации медперсонала и сложного лабораторного оборудования. Это дорогостоящий тест, поэтому его не применяют в бесплатных тестированиях на ВИЧ.

Четвертый — экспресс-тест. Данный тест используется в основном в экстренных случаях — при родах, по жизненным показаниям во время оперативного вмешательства. Результат экспресс - теста обычно подтверждается шаблонным тестированием на ВИЧ.