Лабораторная диагностика
Лабораторная диагностика системных поражений соединительной ткани направлена главным образом на определение активности в ней воспалительного и деструктивного процессов. Активность патологического процесса при этих системных заболеваниях приводит к изменениям содержания и качественного состава белков сыворотки крови.
Определение гликопротеидов. Гликопротеиды (гликопротеины) - биополимеры, состоящие из белкового и углеводного компонентов. Гликопротеиды входят в состав клеточной оболочки, циркулируют в крови как транспортные молекулы (трансферрин, церулоплазмин), к гликопротеидам относятся некоторые гормоны, ферменты, а также иммуноглобулины.
Показательным (хотя далеко не специфичным) для активной фазы ревматического процесса является определение содержания белка серомукоида в крови , в состав которого входят несколько мукопротеидов. Общее содержание серомукоида определяют по белковому компоненту (биуретовый метод), у здоровых оно составляет 0,75 ± 0,025 г/л. Сейчас возможно не только определение общего содержания серомукоида, но и его фракционирование. Так, в настоящее время выделено 9 индивидуальных белков, входящих в состав серомукоида. К серомукоидным белкам крови относится гаптоглобин, который входит в состав α2-глобулиновой фракции. Гаптоглобин обладает способностью соединяться с гемоглобином. При этом гаптоглобин-гемоглобиновый комплекс поглощается системой макрофагов (система мононуклеарных фагоцитов) и предотвращает тем самым потерю железа при разрушении эритроцитов. В норме содержание гаптоглобина составляет 1,0 ± 0,032 г/л. В острую фазу диффузных заболеваний соединительной ткани наблюдается резкое увеличение содержания этого белка пропорционально активности и распространенности процесса. Это является более постоянным диагностическим признаком, чем, например, увеличение СОЭ. Для количественного определения гаптоглобина используют методы электрофореза. В настоящее время открыто несколько вариантов гаптоглобина, но найти преобладание того или иного типа гаптоглобина у больных с ревматическими заболеваниями не удается. Определенное диагностическое значение имеет выявление в крови больных с ревматическими заболеваниями медьсодержащего гликопротеида крови - церулоплазмина. Церулоплазмин - транспортный белок, связывающий в крови медь и относящийся к α2-глобулинам. Определяют церулоплазмин в депротеинизированной сыворотке с помощью парафенилдиамина. В норме его содержание составляет 0,2-0,05 г/л, в активную фазу воспалительного процесса уровень его в сыворотке крови увеличивается. Об активности воспаления при диффузных заболеваниях соединительной ткани можно судить не только по концентрации белковых компонентов сыворотки крови, но и по содержанию в ней углеводных компонентов гликопротеидов, к которым относятся гексозы (D-галактоза, D-манноза, D-глюкоза), пентозы (D-ксилоза, L-арабиноза), дезоксисахара (L-фруктоза, L-рамноза); типичным компонентом гликопротеидов является также нейраминовая (сиаловая) кислота.
Определение содержания гексоз . Наиболее точным считается метод, в котором используют цветную реакцию с орцином или резорцином с последующей колориметрией цветного раствора и расчетом по калибровочной кривой. Особенно резко увеличивается концентрация гексоз при максимальной активности воспалительного процесса.
Определение содержания фруктозы. Для этого применяется реакция, при которой к продукту взаимодействия гликопротеида с серной кислотой прибавляют гидрохлорид цистеина (метод Дише). Нормальное содержание фруктозы 0,09 ± 0,01 г/л.
Определение содержания сиаловых кислот. В период максимальной активности воспалительного процесса у больных с ревматическими заболеваниями крови нарастает содержание сиаловых кислот, которые чаще всего определяют методом (реакцией) Гесса. Эта реакция основана на образовании окрашенного продукта соединения отщепленных от сывороточных гликопротеидов сиаловых кислот с уксусносерным реактивом определяемого с помощью последующей колориметрии раствора (цветного). Нормальное содержание сиаловых кислот 0,6 ± 0,02 г/л.
Определение содержания фибриногена. При максимальной активности во- спалительного процесса у больных с ревматическими заболеваниями может возрастать содержание фибриногена в крови, которое у здоровых людей обычно не превышает 4,0 ± 0,03 г/л. Содержание фибриногена определяют или весовым методом, взвешивая сгусток, выделенный из плазмы крови, или ферментативным методом по Бидвеллу.
Определение С-реактивного белка. При ревматических заболеваниях в сыворотке крови больных появляется С-реактивный белок, который в крови у здоровых людей отсутствует. Это название он получил благодаря своей способности вступать в реакцию преципитации с С-дисахаридом пневмококков. При электрофорезе он перемещается с (32- глобулинами. Его наличие в крови определяют методом Андерсена и Маккарти по реакции преципитации со специфической иммунной сывороткой. Надо отметить, что обнаружение С-реактивного белка также не является специфическим диагностическим признаком ревматического заболевания, так как он может появляться в крови больных пневмонией, стрептококковыми и стафилококковыми инфекциями, при инфаркте миокарда. При ревматоидном артрите и системной красной волчанке в крови больных можно обнаружить ревматоидный фактор, который представляет собой иммуноглобулин класса М. В настоящее время доказано, что в крови этих больных появляются также иммуноглобулины классов G и А, поэтому правильнее было бы говорить о ревматоидных факторах.
Определение ревматоидного фактора. Ревматоидный фактор определяют или с помощью латекс-теста, когда сыворотку больного исследуют в реакции агглютинации с человеческим у-глобулином, адсорбированным на частицах латекса, или реакции Ваалера -Розе, где у-глобулин кролика адсорбирован на эритроцитах барана. Результаты учитывают по максимальному разведению сыворотки (титру), при котором ревматоидный фактор можно еще обнаружить. У здоровых максимальный титр не превышает 1:64. Обнаружение ревматоидного фактора имеет только относительное диагностическое значение, потому что он может выявляться при ряде других заболеваний, таких, как гепатит, сифилис, туберкулез, опухоли.
Определение волчаночного фактора. В крови, пунктатах костного мозга, экссудате больных системной красной волчанкой можно обнаружить волчаночный фактор (LE- клетки красной волчанки), происхождение которого объясняют следующим образом. Благодаря присутствию в сыворотке крови больных фактора LE-глобулиновой природы ядра клеток крови и тканей набухают, хроматин утрачивает структуру и превращается в аморфную массу. Это уже чужеродный для организма материал, поэтому он фагоцитируется лейкоцитами. LE-клетки находят микроскопически, обычно они представляют собой нейтрофильные лейкоциты, в цитоплазме которых содержится одно или несколько гомогенных, красновато-фиолетовых (окраска азур-эозином) образований. Можно видеть и свободно лежащие тельца, окраска и строение которых идентичны находящимся в клетках. Можно обнаружить и волчаночные тельца, окруженные нейтрофилами, так называемые розетки. LE-клетки следует отличать от клеток Тарта, которые являются нейтрофильными лейкоцитами, поглотившими остатки ядра с сохраненными контурами хроматиновой сети. Для поиска LE-клеток добиваются высокой концентрации лейкоцитов в мазках, которые затем окрашивают по Романовскому. Частота обнаружения LE-клеток у больных системной красной волчанкой колеблется от 40 до 95%. LE-феномен можно наблюдать, хотя значительно реже, при тяжелых поражениях печени и острых лейкозах, но при этих заболеваниях LE-клетки обнаруживаются непостоянно и бывают единичными.
Ангинуклеарные реакции. В последнее время диагностическое значение приобрело изучение антинуклеарных реакций, среди которых основное место занимает определение антител к ДНК, дезоксирибонуклеотиду и ядрам клеток. Эти исследования проводят методом иммунофлюоресценции.
Общий анализ крови. В анализе крови у больных с системными заболеваниями соединительной ткани обнаруживают увеличение СОЭ, иногда нейтрофильный лейкоцитоз. Обычно эти изменения бывают при ревматизме в стадии максимальной активности. При системной красной волчанке можно наблюдать и лейкопению со сдвигом лейкоцитарной формулы влево вплоть до миелоцитов. При затяжных и непрерывно рецидивирующих формах ревматизма у больных выявляется гипо- или нормохромная анемия. Анемия встречается также при ревматоидном артрите и системной красной волчанке.
Иммунологические пробы. К изменениям иммунологических проб при диффузных заболеваниях соединительной ткани, кроме описанных ранее, относятся увеличение титров противострептококковых антител (антистрептогиалуронидазы и антистрептокиназы более 1:300, антистрептолизина более 1:250). Повышение титров противострептококковых антител становится особенно серьезным показателем при отсутствии очагов инфекции в организме и при очень высоких титрах (1:1500 и выше). Иногда уровень стрептококковых антител при ревматизме может оставаться нормальным.
Белки, связанные с углеводными группами, составляют обширный класс соединений, в котором выделяют две большие группы:
1. Гликопротеины - белки, содержащие в качестве простетической группы небольшое количество углеводов (до 15%), присоединенных к аминокислотным радикалам ковалентными связями. В составе углеводной части определяются гексозы (галактоза, манноза, редко глюкоза), пентозы (ксилоза, арабиноза), дезоксисахара (фукоза, рамноза), аминосахара (ацетилгалактозамин, ацетилглюкозамин), нейраминовая кислота и ее уксуснокислые эфиры (сиаловые кислоты). Большинство этих белков обладает слабовыраженными кислыми свойствами. В группе гликопротеинов выделяют серомукоиды (серогликоиды), обладающие выраженными кислыми свойствами и растворимых в хлорной, трихлоруксусной и сульфосалициловой кислотах. Эта фракция, составляя 1% всех белков сыворотки, включает 12% всех углеводов плазмы.
2. Протеогликаны (мукополисахариды) - гидрофильные соединения, в состав которых входит 20‑80% углеводов. Углеводные компоненты протеогликанов называют гликозаминогликанами . Выделяют 7 типов гликозаминогликанов, из них 5 типов содержат в своем составе глюкуроновую кислоту (к ним относятся гиалуроновая кислота, хондроитин-4‑сульфат и хондроитин-6‑сульфат, гепарин и гепарансульфат), шестой тип (дерматансульфат) содержит идуроновую (галактуроновую) кислоту, седьмой (кератансульфат) - галактозу. Сиаловые кислоты, манноза, ксилоза присутствуют в минимальном количестве. Протеогликаны имеют сильно выраженные кислотные свойства благодаря наличию большого числа карбоксильных групп и остатков серной кислоты.
При исследовании содержания углеводсодержащих белков возможно использование нескольких методических подходов:
1. Определение индивидуальных гликопротеинов острой фазы посредством специфических энзиматических или иммунологических методов.
2. Выявление богатых гликопротеинами электрофоретических фракций.
3. Исследование углеводно-белковых комплексов по их белковой части (турбидиметрические и нефелометрические методы, по тирозину белка).
4. Определение суммы углеводов , связанных с белками. Методы этой группы являются наиболее приемлемыми для биохимических лабораторий. В крови можно определить любой из углеводных компонентов, однако более простым и дешевым является определение сиаловых кислот и связанных с белком гексоз:
- общее количество гексоз, связанных с белком, соответствует содержанию гликопротеинов, а количество серогликоидов определяется по концентрации гексоз, растворимых в хлорной кислоте и нерастворимых в фосфорновольфрамовой кислоте:
- при изучении уровня протеогликанов углеводный компонент предварительно осаждают четвертичными аминами, в частности, цетилтриметиламмонием, затем определяют гликозаминогликаны специфической реакцией:
Различие в окраске после проведения карбазоловой и орциновой реакций позволяет судить об относительном содержании дерматансульфата в пробе. Для чистого образца дерматансульфата отношение содержания гликозаминогликанов по карбазоловой реакции к их концентрации, определенной по орциновой реакции, равняется 0,67. При наличии других гликозаминогликанов (кроме кератансульфата) коэффициент возрастает.
В качестве унифицированных утверждены резорциновый метод определения концентрации сиаловых кислот и орциновый метод определения всех гексоз, входящих в состав гликопротеинов, и гексоз, связанных с серогликоидами.
Резорциновый метод определения концентрации
сиаловых кислот (по Свеннерхольму)
Принцип
При нагревании гликопротеинов плазмы с трихлоруксусной кислотой отщепляются сиаловые кислоты, которые в свою очередь гидролизуются с образованием нейраминовой кислоты. Резорцин в присутствии солей меди в солянокислой среде дает с нейраминовой кислотой синее окрашивание.
Нормальные величины
Концентрация сиаловых кислот в крови возрастает при различных воспалительных процессах (эндокардите, остеомиелите), при туберкулезе, лейкемии, лимфогранулематозе, нефрозе, резко повышается при опухоли головного мозга, инфаркте миокарда, увеличивается при поражении паренхимы печени, коллагенозах, при других процессах, протекающих с деструкцией соединительной ткани.
Снижение сывороточного уровня сиаловых кислот отмечается у больных с пернициозной анемией, гемохроматозом, болезнью Вильсона и дегенеративными процессами в ЦНС.
Определение содержания серомукоидов и общего
количества гликопротеинов орциновым методом
Принцип
Гликопротеины осаждают вместе с белками сыворотки или плазмы крови спиртом, осадок отмывают, растворяют в щелочи и после гидролиза серной кислотой определяют концентрацию гексоз по реакции с орцином, что соответствует содержанию гликопротеинов.
Для определения серомукоидов белки осаждают хлорной кислотой, при этом серомукоиды не осаждаются. Затем из надосадочной жидкости осаждают серомукоиды при помощи фосфорновольфрамовой кислоты, осадок отмывают и после растворения его в щелочи определяют уровень гексоз.
Нормальные величины
Клинико‑диагностическое значение
Количество гексоз гликопротеинов увеличивается при разнообразных воспалительных процессах: туберкулезе, плеврите, пневмонии, остром ревматизме, гломерулонефрите, при диабете, инфаркте миокарда, подагре, злокачественных новообразованиях. Особое значение определение концентрации гликопротеинов имеет при вяло текущих заболеваниях, при этом возрастание активности свидетельствует об активации процесса, хотя клинические симптомы еще могут не проявляться.
Возрастание содержания гексоз серомукоидов наблюдается при всех воспалительных и некробиотических процессах: инфаркте миокарда, злокачественных опухолях, хроническом холецистите, деструктивном туберкулезе легких, ревматизме.
Снижение показателей выявляется при инфекционном гепатите, гепатоцеллюлярной дистрофии, при рассеяном склерозе.
Гликозилированный гемоглобин
Гемоглобин, как и другие белки, при выдерживании его в растворе глюкозы или другого редуцирующего моносахарида, подвергается неэнзиматическому гликозилированию, то есть присоединяет углевод к своей структуре с образованием шиффовых оснований. Степень гликозилирования гемоглобина прямо соответствует времени инкубации и концентрации глюкозы в среде. Таким образом, содержание гликозилированного гемоглобина (обозначается как HbA 1c) характеризует средний уровень концентрации глюкозы в крови за 4‑6 недель, то есть за период, соизмеримый с временем жизни молекулы гемоглобина (полупериод распада равен 90‑100 дней).
Выделяют следующие нормальные типы гемоглобина: A 1 (составляет 96‑98% всего пула белка), A 2 (2‑5%), A 3 (<1%), F (1‑2%). Гемоглобин A 1 состоит из трех компонентов: HbA 1а, HbA 1b и HbA 1c . Последний компонент представляет собой гликозилированный гемоглобин и дает выраженную корреляцию со степенью сахарного диабета.
1. Хроматографические - наиболее точны, но трудоемки и требуют специальной посуды и реактивов.
2. Электрофоретические - используются различные носители.
3. Химические методы, использующие гидролиз связи между белком и моносахаридным остатком.
Определение уровня гликозилированного гемоглобина
по реакции с тиобарбитуровой кислотой
Принцип
Нормальные величины
| Сыворотка | 4,5‑6,1% |
Клинико‑диагностическое значение
Уровень гликозилированного гемоглобина повышается при сахарном диабете и характеризует эффективность терапии. При этом увеличение концентрации HbA 1с до 8‑10% свидетельствует о хорошо компенсированном, до 10‑12% - о частично компенсированном, свыше 12% - о некомпенсированном сахарном диабете.
Снижение показателя наблюдается при регенерации крови после кровопотери.
- < Назад
МУЗ «ПЕРВАЯ ГОРОДСКАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ БОЛЬНИЦА СКОРОЙ МЕДИЦИНСКОЙ ПОМОЩИ»
СЕВЕРНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
КУРС КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ
Общий белок, его значение и методы определения
Выполнила врач-интерн:
Гернет М.М.
г. Архангельск 2008 г.
ВВЕДЕНИЕ
Классификация
Белки плазмы крови
Альбумины
Глобулины
Клинико-диагностическое значение
Гипопротеинемия
Гиперпротеинемия
Методы определения общего белка в сыворотке крови
Список использованной литературы
ВВЕДЕНИЕ
Белки - высокомолекулярные органические азотсодержащие соединения, состоящие более чем из 20 видов альфа-аминокислот. Условной границей между крупными полипептидами и белками служит молекулярная масса 8000-10000. Плазменные белки синтезируются преимущественно в печени, клетках плазмы, лимфатических узлах, селезенке и костном мозге.
Плазма крови человека содержит более 100 различных белков, различающихся по происхождению и функциям. Из 9-10% сухого остатка плазмы крови на долю белков приходится 6.5-8.5%.
Классификация
· Простые (протеины) (содержат только аминокислоты)
· Сложные (протеиды) (аминокислоты и неаминокислотные компоненты: гем, производные витаминов, липиды или углеводы)
· Фибриллярные (составляющие многие плотные ткани)
· Глобулярные (альбумины (4-5%), глобулины (2-3%), фибриноген (0.2-0.4%)
Существуют следующие функциональные классы белков:
Транспортные белки (трансферрин)
Белки острой фазы (С-реактивный белок)
Белки неострой фазы (Альбумин, трансферрин)
Комплемент и свертывающие факторы (комплемент С4, фактор VIII)
Ферменты (Амилаза)
Антифермент (Антитромбин III)
Протеогормоны (Инсулин)
Иммуноглобулины (IgG)
Белки, чьи функции недостаточно изучены (альфа-гликопротеиновая кислота)
Физиологическая функция белков плазмы состоит в поддержании коллоидно-осмотического давления, буферной емкости плазмы, в некоторых случаях - депонировании (хранении) молекул липидов, продуктов метаболизма, гормонов, лекарственных веществ и микроэлементов. Некоторые белки плазмы выполняют ферментативную функцию, иммуноглобулины осуществляют гуморальный иммунитет. Компоненты комплемента и С-реактивный белок важны для осуществления неспецифической резистентности, особенно в случае бактериальных инфекций. Баланс между факторами и ингибиторами свертывания обеспечивают жидкое состояние крови в норме и быстрое свертывание в случае травмы
Бел ки плазмы крови
Альбумины:
Нормируемое значение 56.5 - 66.8 (На альбумин в сыворотке крови приходится приблизительно 60% общего белка. Альбумины синтезируются в печени (примерно 15г/сут), время их полураспада составляет примерно 17 дней. Онкотическое давление плазмы на 65-80 % обусловлено альбумином. Альбумины выполняют важную функцию транспортировки многих биологически активных веществ, в частности гормонов. Они способны связываться с ХС, билирубином. Значительная часть кальция в крови также связана с альбумином. Альбумины способны соединяться с различными ЛС.
Возможны как качественные, так и количественные изменения альбуминов плазмы крови. Качественные изменения альбуминов очень редки из-за гомогенного состава этой белковой фракции; количественные изменения проявляются гипер- и гипоальбуминемией.
Гиперальбуминемию наблюдают при дегидратации в случаях тяжелых травм, при обширных ожогах, холере.
Гипоальбуминемии бывают первичные (у новорожденных детей в результате незрелости печеночных клеток) и вторичные, обусловленные различными патологическими состояниями, аналогичными тем, что вызывают гипопротеинемию. В понижении концентрации альбуминов может также играть роль гемодилюция, например при беременности. Снижение содержания альбуминов ниже 22-24 г/л сопровождается развитием отека легких.)
Глобулины:
· Альфа 1 - 3.5 - 6.0 (основные компоненты данной фракции включают б 1 -антитрипсин, б 1 - липопротеид, кислый б 1 - гликопротеид) (Изменение фракции б 1 - глобулинов наблюдают при острых, подострых, обострении хронических воспалительных процессов; поражении печени; всех процессах тканевого распада или клеточной пролиферации. Снижение фракции б 1 - глобулинов наблюдают при дефиците б 1 - антитрипсина, гипо - б 1 - липопротеидемии.)
· Альфа 2 - 6.9 - 10.5 (фракция содержит б 2 - макроглобулин, гаптоглобин, алипопротеины А, В (апо-А, апо-В), С, церулоплазмин) (увеличение фракции б 2 - глобулинов наблюдают при всех видах острых воспалительных процессах, особенно с выраженным экссудативным и гнойным характером (пневмонии, эмпиема плевры, другие виды гнойных процессов); заболеваниях, связанных с вовлечением в патологический процесс соединительной ткани (коллагенозы, аутоиммунные заболевания, ревматические заболевания); злокачественных опухолях; в стадии восстановления после термических ожогов; нефротическом синдроме; гемолизе крови в пробирке. Снижение фракции наблюдают при сахарном диабете, панкреатитах (иногда), врожденной желтухе механического происхождения у новорожденных, токсических гепатитах. К б 2 - глобулинам относится основная масса белков острой фазы. Увеличение их содержания отражает интенсивность стрессорной реакции и воспалительных процессов при перечисленных видах патологии.
· Бета - 7.3 - 13.0 (в-фракция содержит трансферрин, гемопексин, компоненты комплемента, иммуноглобулины и липопротеины) (увеличение фракции бета-глобулинов выявляют при первичных и вторичных гиперлипопротеинемиях, заболеваниях печени, нефротическом синдроме, кровоточащей язве желудка, гипотиреозе. Понижение величины содержания бета-глобулинов выявляют при гопо-бета-липопротеинемии.
· Гамма - 12.8 - 19.0 (г-фракция содержит Ig (IgG, IgA, IgM IgD, IgE), поэтому повышение содержания г-глобулинов отмечают при реакции системы иммунитета, когда происходит выработка AT и аутоантител: при вирусных и бактериальных инфекциях, воспалении, коллагенозах, деструкции тканей и ожогах. Значительная гипергаммаглобулинемия, отражая активность воспалительного процесса, характерна для хронически активных гепатитов и циррозов печени. Повышение фракции г - глобулинов наблюдают у 88-92% больных хроническим активным гепатитом (причем у 60-65% больных оно весьма выраженное -- до 26 г/л и выше). Почти такие же изменения отмечают у больных при высокоактивном и далеки зашедшем циррозе печени, при всём этом нередко содержание г-глобулином превышает содержание альбуминов, что считают плохим прогностическим признаком.
При определённых заболеваниях возможен повышенный синтез белком, попадающих в фракцию г-глобулинов, и в крови появляются патологические протеины -- парапротеины, которые выявляют при электрофорезе. Для уточнения характера этих изменений необходим иммуноэлектрофорез. Подобные изменения отмечают при миеломной болезни, болезни Вальденстрема.
Уменьшение содержания г-глобулинов бывает первичным и вторичным.
Различают три основных вида первичных гипогаммаглобулинемий: физиологическую (у детей в возрасте 3-5 мес), врождённую и идиопатическую. Причинами вторичных гипогаммаглобулинемий могут быть многочисленные заболевания и состояния, приводящие к истощению иммунной системы.
Сопоставление направленности изменении содержания альбуминов и глобулинов с изменениями общего содержания белка даёт основание для заключения, что гиперпротеинемия чаще связана с гиперглобулинемиями, в то время как гипопротеинемия обычно обусловлена гипоальбуминемией. В прошлом широко применяли вычисление альбумин-глобулинового коэффициента, то есть отношения величины фракции альбуминов к величине фракции глобулинов. В норме этот показатель составляет 2,5-3,5. У больных хроническими гепатитами и циррозами печени этот коэффициент снижается до 1,5 и даже до 1 за счёт снижения содержания альбумина и повышения фракции глобулинов. В последние годы всё больше внимания уделяют определению содержания преальбуминов, особенно у тяжёлых реанимационных больных, находящихся на парентеральном питании. Снижение концентрации преальбуминов -- ранний и чувствительный тест белковой недостаточности в организме больного.)
Коэффициент А\Г обычно используется как индекс соотношения альбумина и глобулинов.
Изменения этого коэффициента могут наблюдаться при циррозе печени, гломерулонефрите, нефротическом синдроме, остром гепатите, системной красной волчанке.
Концентрация белков в плазме крови зависит от соотношения между скоростью их синтеза и выведения из организма, а также объема распределения.
Многие белки образуются в печени, плазматические клетки и лимфоциты синтезируют иммуноглобулины, макрофаги - белки системы комплимента. Пассивная потеря белков с низкой молекулярной массой происходит через почечные клубочки и стенку кишечника. Часть из этих белков подвергается реабсорбции либо захватывается и расщепляется в слизистой оболочке кишечника. Большинство белков плазмы после их захвата путем пиноцитоза катаболизируется в клетках эндотелия капилляров или мононуклеарных фагоцитов.
Физиологические роли белков крови многочисленны, основные из них следующие:
· Поддерживают коллоидно-онкотическое давление, сохраняя объем крови, связывая воду и задерживая ее, не позволяя выходить из кровеносного русла;
· Принимают участие в процессах свертывания крови;
· Поддерживают постоянство Рн крови, формируя одну из буферных систем крови;
· Соединяясь с рядом веществ (ХС, билирубин и др.), а также с ЛС, доставляют их в ткани.
· Поддерживают нормальный уровень катионов в крови путем образования с ними недиализируемых соединений (например, 40-50%кальция сыворотки связано с белками; значительная часть железа, меди, магния и других микроэлементов также связано с белками);
· Играют важнейшую роль в иммунных процессах;
· Служат резервом аминокислот;
· Выполняют регулирующую функцию (гормоны, ферменты и другие биологически активные белковые вещества).
К линико-диагностическое значение
Нормопротеинемия - нормальное содержание общего белка
Гипопротеинемия - пониженное содержание общего белка
Гиперпротеинемия - повышенное содержание белка
Гипопротеинемия
1. Недостаточное поступления белка пищи, наблюдаемое обычно при недоедании, голодании, опухоли, сужении пищевода, нарушении функции желудочно-кишечного тракта (вследствие ухудшения переваривания и всасывания белковых компонентов пищевых продуктов), например, при продолжительных воспалительных процессах кишечника.
По мнению А.А.Покровского, даже несбалансированный аминокислотный состав пищи может иногда приводить к гипопротеинемии.
Для обеспечения нормальных процессов жизнедеятельности организм утилизирует альбуминовую фракцию белков плазмы крови. При усиленном расходовании альбуминов (в основном обусловливающих онкотическое давление крови) развиваются так называемые онкотические или голодные отеки. Вообще говоря, всякое уменьшение содержания белка в плазме крови ниже 5 г% часто сопровождается гипопротеинемическими отеками тканей.
2. Понижение процессов биосинтеза белка (хронические паренхиматозные гепатиты, острые и хронические заболевания, длительные нагноительные процессы, злокачественные новообразования, тяжелые тиреотоксикозы и т.д.).
3. Потеря белка организмом при острых и хронических кровотечениях, при резко увеличенной проницаемости капиллярных стенок (при токсическом их поражении, когда белки крови выходят в ткани), при кровоизлияниях, образовании обширных экссудатов, выпотов в серозные полости, отеках.
Выход белков(главным образом альбуминов)из русла крови происходит при нарушении почечного фильтра вследствие органических заболеваний почек (особенно нефрозах и амилоидозах), при которых белок почти всегда обнаруживается в моче, а также при ожогах.
4. Дефектопротеинемии (альбуминемия) - врожденное отсутствие или недостаточное содержание церулоплазмина в плазме крови при болезни Вильсона.
5. У женщин в период лактации и последних месяцев беременности.
6. Нефротический синдром
7. Квашиоркор (острая белковая недостаточность)
8. Ретенционный солевой синдром
Гиперпротеинемия
1. Серьезное обезвоживание
2. При сгущении крови из-за незначительных потерь жидкости, что бывает при профузных поносах, усиленном потоотделении, неукротимой рвоте, несахарном диабете, при холере, непроходимости кишечника, генерализованном перитоните, тяжелых ожогах, лишении воды.
3. При хроническом полиартрите и некоторых и некоторых хронических воспалительных процессах.
4. Стойкая гиперпротеинемия до 12 г% и выше отмечается при миеломной болезни (плазмацитоме), макроглобулинемии Вандельстрема, при которых в плоских костях черепа появляются дополнительные очаг и образования «ненормальных», патологических белков - парапротеинов.
Гипопротеинемия связана почти всегда с гипоальбуминемией, а гиперпротеинемия - с гиперглобулинемией.
Гипоальбуминемию организм компенсирует гиперглобулинемией (даже если нет раздражения ретикуло-эндотелиальной системы) для того, чтобы сохранить уровень коллоидно-осмотического давления. Напротив, увеличение глобулинов компенсируется гипоальбуминемией.
Важное диагностическое значение имеет выяснение количественных взаимоотношений между отдельными фракциями сыворотки крови. Их изучение позволяет произвести дифференциацию заболеваний даже тогда, когда содержание общего белка в сыворотке оказывается неизменным.
Методы определения общего белка в сыворотке крови
Референтные величины концентрации общего белка в сыворотке крови - 65-85 г/л
1. Азотметрические
2. Определение удельного веса сыворотки
3. Весовые (гравиметрические), когда белки крови осаждают, высушивают до постоянного веса и взвешивают на аналитических весах.
4. Рефрактометрические
5. Колориметрические
6. Нефлометрические
7. Поляриметрические
8. Спектрофометрические
1. Рефрактометр ИРФ - 454 Б2М
предназначен для определения белка в сыворотке крови, спинно-мозговой жидкости, контроля концентрации лекарств, измерения плотности мочи.
2. Cobas integra - Total Protein Gen .2
Принцип теста: двухвалентная медь реагирует в щелочном растворе с белковыми пептидными связями с образованием характерного пурпурного цветного биуретового комплекса.
3. Определение белковых фракций сыворотки крови методом электрофореза на ацетатцеллюлозной пленке .
Буферный раствор предназначен для электрофоретического разделения белков сыворотки крови на мембранах из ацетатцеллюлозы с последующим денситометрическим определением белковых фракций.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип электрофоретического разделения белков основан на различной скорости движения молекул белков сыворотки крови в постоянном электрическом поле определенной напряженности. Разделенные белковые фракции окрашиваются красителем. Интенсивность окраски белковых фракций пропорциональна их количеству.
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Сыворотка крови, свободная от гемолиза, липемии и не желтушная. Белковые фракции сыворотки крови стабильны в плотно закрытой пробирке при 18-25 в течение 8 часов, при 2-8 - в течение 3 дней, при 20 - в течение 1 месяца.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
1. Проведение электрофореза
1.1. сухие мембраны осторожно положить на поверхность буфера для электрофореза, избегая быстрого их погружения, и выдержать до полного смачивания. Смоченные мембраны аккуратно промокнуть между листами плотной фильтровальной бумаги, не допуская их высыхания. Перед нанесением образцов желательно провести фазу префореза. Для этого мембрану следует поместить в камеру для электрофореза и включить ток в выбранном режиме на 10 минут. Фазу префореза можно заменить длительным замачиванием мембраны в растворе буфера (несколько часов).
1.2. с помощью аппликатора нанести анализируемые образцы сыворотки крови на расстоянии 2-3 см от катодного края мембраны. Мембрану поместить в электрофоретическую камеру и подключить ток.
2. Обработка электрофореграммы
2.1. краситель Пунцовый С.
После отключения тока мембрану осторожно перенести в раствор красителя на 3-5 минут, затем дважды на 3 минуты в 5-7% раствор уксусной кислоты (до отбеливания фона).
1.2. электрофореграмму обработать с помощью сканера и компьютерной программы.
4. Тимоловая проба
Принцип метода:
Сывороточные бета-глобулины, гамма-глобулины и липопротеины осаждаются при рН 7.55 тимоловым реактивом. В зависимости от количества и взаимного отношения белковых фракций при реакции возникает помутнение, интенсивность которого измеряют турбидиметрически.
Клинико-диагностическое значение:
Тимоловая проба более пригодна для функционального исследования печени, чем коллоидно-устойчивые пробы. Считают что она положительна в 90-100 % случаев болезни Боткина (уже в преджелтушной ее стадии и при безжелтушной форме) и при токсическом гепатите. Реакция положительна при послегепатитном и постнекротическом, особенно желтушном циррозе (в отличие от других форм циррозов), при коллагеновых заболеваниях, малярии и вирусных инфекциях. При механической желтухе она (в 75% случаев) отрицательна, что имеет дифференциально-диагностическое значение.
При механической желтухе проба становится положительной лишь в случае, если процесс осложняется паренхиматозным гепатитом. Для дифференциации механической желтухи от паренхиматозной большое значение имеет применение тимоловой пробы с пробой Бурштейна (на бета- и пре-беталипопротеиды).
При паренхиматозной желтухе обе пробы положительны, при механической желтухе тимоловая проба отрицательна, проба Бурштейна - резко положительна.
С писок использованной литературы
1. Специфические белки в клинической лабораторной диагностике: вопросы и ответы. - Тёпфер Г., Тома Р., Цавта Б., М., 2004. - 96с
ГЛИКОПРОТЕИДЫ (гликопротеины ) - биополимеры, состоящие из ковалентно связанных между собой пептидного (белкового) и углеводного компонентов. В тех случаях, когда углеводная часть молекулы Г. состоит из глюкозного остатка или остатков, Г. носят название глюко-протеидов. Г. обнаружены в организме животных, бактерий и растений и составляют наиболее обширный и хорошо изученный класс углеводсодержащих соединений. Г. входят в состав клеточной оболочки, циркулируют в кровяном русле в качестве транспортных молекул - напр, трансферрин, церулоплазмин (см. Кровь). К гликопротеидам относятся некоторые гормоны, ферменты, а также иммуноглобулины. Одно из первых предположений, для чего нужен углеводный компонент белкам, было сделано Эйларом (E. H. Eylar, 1965). При рассмотрении довольно большого количества Г. он обнаружил, что все они находятся вне клетки, в кровяном русле, слюне, молоке и других секретах. На основании этого факта им была предположена гипотеза, согласно к-рой углеводный компонент является своего рода пропуском, после получения к-рого белковая молекула должна обязательно покинуть клетку. В дальнейшем, однако, были получены данные, свидетельствующие о том, что многие внутриклеточные белки являются Г. и входят в состав различных внутриклеточных мембран и цитоплазматической мембраны. Кроме того, в различных секретах и сыворотке крови были обнаружены негликозилированные белки (альбумин, a-лактальбумин, химотрипсиноген и др.). Т. о., гипотеза Эйлара не может претендовать на универсальное разрешение вопроса о роли углеводного компонента. В дальнейших исследованиях было обнаружено, что если от углеводной части ряда сывороточных Г. (церулоплазмин, гаптоглобин, фетуин, орозомукоид) отщепить ферментативно сиаловую к-ту, то время полураспада этих асиало-гликопротеидов сократится от нескольких десятков часов до нескольких минут. При этом все указанные асиало-гликопротеиды связываются с мембранами паренхиматозных клеток печени.
Ряд гликопротеидов - гормонов (напр., гонадотропный и фолликулостимулирующий гормоны) после удаления сиаловых к-т очень быстро исчезает из кровотока и, как и сывороточные Г., оказывается в печеночных клетках. В результате гормон не связывается с клетками-мишенями и его биол, действие резко снижается.
Биохимические методы определения гликопротеидов
В биол, жидкостях, крови и моче имеется смесь различных Г. Для выделения каждого из них в чистом виде требуется сложная методика, длительное время, что и затрудняет применение ее для серийных исследований. Поэтому в клин, практике наиболее распространено суммарное определение Г. по одному из входящих в них компонентов углеводной части - гексозам, гексозаминам, фукозе, сиаловым к-там или по способности давать реакцию йодная к-та - реактив Шиффа (см. Шиффа реактив).
Наиболее применяемые методы определения Г. можно условно разделить на две основные группы: химические и электрофоретические. Для специальных исследований применяются хроматографические, полярографические и радиоиммунологические методы.
Большинство хим. методов основано на определении углеводной части молекулы Г. с применением различных цветных реакций, основанных на взаимодействии моносахарида с серной к-той с образованием производного фурфурола (напр., реакции с орцином, антроном, триптофаном, карбозолом, дифениламином, резорцином, альфа-нафтолом). Такие реакции дают окрашенный продукт с одним из перечисленных соединений или ароматическим азотистым основанием. Количество образовавшегося окрашенного продукта определяют с помощью фотоэлектроколориметрирования. Наиболее точным считается метод определения гексоз, использующий цветную реакцию с орцином или резорцином; наиболее чувствительным - метод с применением альфа-нафтола, который, однако, чаще используется для ориентировочных исследований.
Почти все методы, применяемые для определения аминосахаридов, основаны на классическом методе Эльсона - Моргана (1933). Принцип метода заключается в том, что аминосахар реагирует с ацетил ацетоном в горячем слабощелочном р-ре. При этом образуется смесь пирролов, дающая красное окрашивание с реагентом пара-диметиламинобензальдегидом, интенсивность к-рого определяют фотометрически при 530 нм. Глюкозамин дает почти такое же окрашивание, как и галактозамин; с маннозамином окрашивание несколько слабее. Для построения калибровочной кривой в основном используют солянокислый глюкозамин.
Для определения фукозы применяется реакция, в к-рой к продукту взаимодействия Г. с серной к-той прибавляется солянокислый цистеин.
Эта реакция является основой почти всех методов, применяемых для определения метилпентоз (см. Дише метод).
Для обнаружения и количественного определения сиаловых к-т предложен ряд методов: орциновый метод с реактивом Биаля, резорциновый метод, метод с тиобарбитуровой к-той, дифениламиновая реакция и метод Гесса (см. Гесса реакция). Наиболее чувствительным и специфичным является метод с тиобарбитуровой к-той. Электрофорез Г. ввели впервые Кёив и Грёнвалль (E. Koiw, A. Gronwall) в 1952 г. Описан ряд модификаций этого метода; общим недостатком большинства из них является сравнительная сложность метода или значительная окраска фона на электрофореграммах. Принцип метода и техника выполнения электрофореза Г, те же, что и при электрофоретическом разделении белковых фракций сыворотки крови на бумаге (см. Электрофорез).
Для выявления гликопротеидных фракций предложен ряд методов; окраска толуидиновым синим, коллоидным железом, анциановым голубым и др. Однако наиболее распространен метод окраски гликопротеидов реактивом Шиффа, в основу к-рого легла реакция (йодная к-та - фуксинсернистая к-та), первоначально предложенная Хочкиссом (R. D. Hotchkiss) и Мак-Манусом (J. F. A. McManus) для окрашивания Г. в гистол, срезах. Принцип этого метода состоит в том, что углеводные компоненты Г. окисляются р-ром йодной к-ты до альдегидов, а альдегиды выявляются с помощью реактива Шиффа. Для количественного определения окрашенные фракции элюируются с электрофореграмм с последующим фотометрированием элюатов или определяются с помощью денситометрии (см.).
У здорового человека, по данным различных авторов, относительное содержание фракций Г. (в %) следующее: альбуминовая - 10,4- 16,6; альфа 1 -глобулиновая - 14,2-18,3; альфа 2 -глобулиновая - 24,8-31,8; бета-глобулиновая - 21,7-25,0; углобулиновая - 16,0-19,2.
Наиболее высокий процент содержания углеводов отмечается в глобулиновых фракциях, в частности в альфа2- и бета-глобулинах (см. Глобулины).
Перспективным является метод иммуноэлектрофореза (см.), а также метод электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ), разрешающая способность к-рого может в 10 раз превышать разрешающую способность электрофореза на бумаге.
Результаты определения гликопротеидов имеют важное дифференциально-диагностическое значение при заболеваниях соединительной ткани, сердечно-сосудистой системы, жел.-киш. тракта, печени, почек, легких. При этом изучение изменений в содержании этих веществ в сыворотке крови и других биол, жидкостях в дополнение к клин, данным имеет большое значение для оценки течения патол, процесса, эффективности лечения и для прогноза. При воспалительных процессах - остром ревматизме, туберкулезе, пневмонии, плеврите отмечается увеличение содержания в сыворотке крови всех фракций Г., особенно альфа 1 - и альфа 2 -глобулинов. Наибольшее значение имеет определение абсолютного и относительного содержания Г. в сыворотке крови при ревматизме. Концентрация Г. в сыворотке крови увеличивается также при гломерулонефрите, опухолях, некрозе, нередко при диабете.
Гистохимические методы определения гликопротеидов в тканях
Гистохим, методы обнаружения Г. основаны на выявлении их реакционноспособных групп, таких как 1,2-гликольные группы, а также карбоксильные группы сиаловых к-т. Для фиксации Г. можно использовать 10% р-р формалина при t° от 0 до 4° в течение 24-48 час. Существуют методы фиксации с добавлением в формалин некоторых солей, а также различных катионных детергентов (см.), способствующих лучшей сохранности полисахаридов и их последующей гистохим, дифференцировке. Предпочтение следует отдавать методу лиофильной сушки срезов с последующей заливкой в парафин. Существует значительное число гистохим, методов и их модификаций выявления полисахаридов, но далеко не все они в достаточной степени достоверны и доступны в практическом отношении. Наиболее достоверным при обязательном применении контрольных реакций и обоснованным с точки зрения химии является метод Мак-Мануса - Хочкисса-Шабадаша. В лабораториях нашей страны чаще всего применяется модификация Шабадаша. В основе метода лежит окисление 1,2-гликольных групп полисахаридов солью йодной к-ты с последующим выявлением полученных в результате реакции альдегидов фуксинсернистой к-той (реактивом Шиффа). В участках локализации муко- и гликопротеидов развивается фиолетово-красное окрашивание различной интенсивности. Кроме этих соединений, реакция выявляет также гликоген, гликолипиды и свободные альдегиды. Неспецифические альдегиды могут появиться также в результате окисления соединений с ненасыщенными связями во время фиксации материала формалином. Поэтому для получения достоверных результатов необходим тщательный гистохим, контроль: прежде всего нужно исключить наличие свободных и неспецифических альдегидов и, если они присутствуют, провести реакцию их блокирования. Применяя солодовую диастазу (в крайнем случае амилазу слюны), можно исключить наличие гликогена.
Необходимые реактивы: кристаллический основной фуксин (или так наз. основной фуксин для фуксинсернистой к-ты), 1 н. HCl, метабисульфит калия или натрия (K 2 S 2 O 5 или Na 2 S 2 O 5), перйодная к-та или лучше ее калиевая соль (KIO 4), высокоочищенная солодовая диастаза, солянокислый гидроксиламин. Для реакции ацетилирования: безводный пиридин и уксусный ангидрид, 0,1 н. едкого кали (KOH), препарат нейраминидазы. Липиды удаляют обработкой различными растворителями (напр., горячей смесью хлороформа и метилового спирта).
Ход определения. Серийные срезы, опытные и контрольные, подвергаются обработке р-ром перйодата калия, быстро промывают в дист, воде и помещают в реактив Шиффа, затем промывают в свежеприготовленном р-ре бисульфита (10 мл 10% р-ра метабисульфита калия, 10 мл 1 н. HCl и 200 мл дист. воды). Срезы тщательно отмывают в большом объеме воды, обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле и заключают в нейтральный канадский бальзам.
Реакция ацетилирования гликольных групп и применение нейраминидазы подтверждают достоверность полученных результатов.
Библиография Анасашвили А. Ц. Гликопротеиды сыворотки крови и мочи, М., 1968, библиогр.; Видерщайн Г. Я. Углеводсодержащие соединения, их биосинтез и роль в животной клетке, Мо лек. биол., т. 10, № 5, с. 957, 1976, библиогр.; Гликопротеины, под ред. А. Готтшалка, пер. с англ., т. 1 - 2, М., 1969; Д ере-вицкая В. А. Химия гликопротеинов, Усп. биол. хим. под ред. Б. Н. Степаненко, т. 8, с. 168, М., 1967; Методические указания по применению унифицированных клинических лабораторных методов исследований, под ред. В. В. Меньшикова, М., 1973; Пирс Э. Гистохимия, пер. с англ., с. 741 и др., М., 1962; Принципы и методы гисто-цитохимического анализа в патологии, под ред. А. П. Авцына и др., с. 7, Л., 1971; Spiro R. G. Glycoproteins, Advanc. Protein Chem., V. 27, p. 349, 1973, bibliogr.
Г. Я. Видершайн; А. Ц. Анасашвили (мет. иссл.), P. А. Симакова (гист.).
Гликопротеиды получили название от слова «glucos» - сладкий, т. к. было установлено, что они содержат углеводы. Простетическая группа представлена различными углеводами и их производными, связь ее с белком ковалентная, углеводпептидная.
В настоящее время установлено, что практически все белки (за исключением альбуминов крови) содержат небольшое количество углеводов, и поэтому к гликопротеидам относятся только те белки, у которых концентрация углеводов составляет более 4%.
Все гликопротеиды обладают высокой молекулярной массой (до нескольких млн. Д), кислыми свойствами, растворимы в воде, слабых растворах нейтральных солей и щелочей, осаждаются кислотами и обладают высокой вязкостью. Они термостабильны, т. к. углеводы, входящие в их состав, значительно повышают устойчивость молекул к различным химическим веществам и нагреванию, защищают их от действия протеаз, определяя тем самым биологическую роль гликопротеидов. Углеводы придают белкам большую специфичность, за счет этих групп макромолекулы гликопротеида могут распознавать другие структуры.
Гликопротеиды в большом количестве содержатся в межклеточном веществе соединительной ткани, плазме крови, слюне и других секретах, в составе цптоплазматических и различных внутриклеточных мембран, в цитозоле. Роль гликопротеидов разнообразна. Они транспортируют гидрофобные вещества и ионы металлов; входя в состав рецепторов мембран, обеспечивают специфичность контактов клетки, влияют на дифференцировку тканей, участвуют в иммунологических реакциях, выполняют защитную роль, покрывая слизистые оболочки.
Делятся на истинные гликопротеиды и протеогликаны. Это деление основано на различном % соотношении белковой части и простетической группы, а также на строении простетической группы.
1. Истинные гликопротеиды, строение, представители : муцины; иммуноглобулины; белки, обусловливающие группу крови; гормоны; транспортные белки; ферменты; рецепторы, их значение, распространение.
В составе истинных гликопротеидов на белковую часть приходится около 80%, а на долю простетической группы – примерно 20%. В истинных гликопротеидах простетическая группа представлена полисахаридами, не имеющими регулярного строения. В состав простетической группы истинных гликопротеидов входят различные моносахариды и их аминопроизводные, нейраминовые или сиаловые кислоты в различных сочетаниях и соотношениях, т.е. простетическая часть истинных гликопротеидов не имеет регулярного строения. Истинные гликопротеиды широко распространены в организме и выполняют разнообразные функции
К истинным гликопротеидам относятся: муцины, белки, определяющие группу крови; рецепторы, ферменты, гормоны, транспортные белки.
Муцины – это белки слизи, находятся в ротовой полости, покрывают все слизистые оболочки. Состоят из простого белка, а в состав простетической группы входят в различных количествах и в различных сочетаниях моносахариды, гексозамины, сиаловые и нейраминовые кислоты. Из моносахаридов в составе муцинов находятся: глюкоза, галактоза, фукоза и др. Вязкость муцинов зависит от количества сиаловых кислот. Значение муцинов: защитная – покрывая слизистые оболочки ЖКТ, дыхательной, мочевыделительной системы – предохраняют их от высыхания и от воздействия физических и химических факторов.
Белки, определяющие группу крови .
Белки, обуславливающие групповую специфичность крови, по строению простетической группы относятся к истинным гликопротеидам, но отличаются от них высоким (до 85%) содержанием углеводов, наличием в молекуле простетической группы ацетилглюкозамина и весьма своеобразным построением белковой части, которая, по-видимому, участвует в поддержании определённой конформации углеводных цепей. Своеобразие белковой части заключается в том, что 2/3 всех аминокислот составляют 4 аминокислоты: тре, про, сер, ала, т.е. количественный состав белков независимо от их специфичности очень сходен. Антигенная активность этих белков определяется следующей последовательностью углеводов на концах углеводной цепи: Д-галактоза-N-ацетилглюкозамин-Д-галактоза-N-ацетилглюкозамин. Группа крови зависит от того, какой углевод присоединён к этому фрагменту. Для вещества Н – это фукоза, для вещества А – это фукоза и N-ацетилгалактозамин, определяющий А-специфичность, для вещества В – фукоза и концевая галактоза, определяющая В-специфичность. Таким образом различия в специфичности углеводных цепей могут достигаться присоединением к концевому фрагменту фукозы, N-ацетилгалактозамина или галактозы, причём вещество Н может рассматриваться как предшественник группоспецифических веществ А и В. Полная серологическая реактивность группо-специфических веществ возможна только при сохранении целостности всей молекулы этих соединений.
Рецепторы располагаются на наружной поверхности мембран, цитоплазме в мембранах органелл. Некоторые ферменты и некоторые гормоны содержат в своём составе углеводы, а такие белки как транкортин, гаптоглобин, иммуноглобулины тоже относятся к гликопротеидам.
2. Протеогликаны, строение, представители, значение.
В молекуле протеогликанов, наоборот, на долю белков приходится от 2-2,3% до 10%, а на углеводную часть – 90-98%. В протеогликанах – углеводы регулярные.
Протеогликаны – сложные белки, находятся в основном веществе соеди нительной ткани. Т.к. в их составе имеется большое количество кислот в виде простетической группы, они являются полианионами и участвуют в распределении и диффузии воды, катионов. Являясь базальной мембраной, протеогликаны участвуют в распределении питательных веществ. Соединяясь со структурными белками, они образуют «молекулярное сито», а также образуют перегороженные пространства (домены), в которых находится вода, за счет этих перегородок вода не перемещается. Объем клеток и тканей зависит от протеогликанов. Простетическая группа этих белков называется гликозамингликанами (ГАГи). Они делятся на три вида: гиалуроновая, хондроитинсерная кислоты, гепарин.
4. Простетическая группа протеогликанов – гликозамингликаны – (ГАГи) хондроитинсерная, гиалуроновая кислоты, гепарин. Понятие о строении, значение.
Протеогликаны содержат небольшую (2-5%) белковую часть и простетическую группу, представленную гликозамингликанами (ГАГами). Последние имеют регулярное строение, т. е. состоят из чередующихся дисахаридов, в состав которых включены уроновые кислоты и ацетилгексозамины (рис. 7). Различают 6 видов ГАГов - гиалуроновая кислота, хондроитинсульфаты А, В, С, кератансульфаты и гепарин, отличающиеся друг от друга природой уроновых кислот, гексозаминов, степенью сульфатирования, типом химической связи, соединяющей между собой мономеры, молекулярной массой, свойствами. В таблице приведены основные гликозамингликаны тканей человека.
Таблица Химический состав гликозамингликанов