При диагностицирането на HIV инфекцията се използват 4 групи методи:
1. Определяне на наличието на вирус, неговите антигени или РНК копия в материали от пациент или HIV-инфектиран
2. Серологична диагностика, базирана на откриване на специфични антитела към повърхностни (gp 120 и gp 41) и вътрешни (p 18 и p 24) HIV протеини.
3. Установяване на патогномонични (специфични) за HIV инфекцията промени в имунната система.
4. Лабораторна диагностика на опортюнистични инфекции (СПИН-асоциирани заболявания).
1. Вирусологична диагностика.Материалът за изолиране на ХИВ са кръвни Т-лимфоцити, левкоцити от костен мозък, лимфни възли, мозъчни тъкани, слюнка, сперма, цереброспинална течност и кръвна плазма. Полученият материал се използва за заразяване на непрекъсната култура от Т-лимфоцити (Н9). Индикацията на ХИВ в клетъчна култура се извършва чрез CPP (образуване на симпласти), както и чрез имунофлуоресценция, електронна микроскопия, чрез изразена активност на обратната транскриптаза. Съвременните методи на изследване позволяват да се открие един заразен лимфоцит на 1000 клетки.
Откриването на вирусни антигени в инфектирани Т-лимфоцити се извършва с помощта на моноклонални антитела
През последните години определянето на броя на копията на ХИВ РНК в кръвната плазма чрез метода на полимеразна верижна реакция (PTCR), т. нар. вирусен товар, е от решаващо значение за определяне на прогнозата и тежестта на ХИВ инфекцията. Ако при пациенти, които не получават терапия, вирусният товар е под границата на откриване (това е по-малко от 5000 копия на ХИВ РНК в 1 ml плазма), това показва липса на прогресия или бавна прогресия. Степента на заразяване е минимална. Високият вирусен товар (повече от 10 000 РНК копия в 1 ml плазма) при пациенти с по-малко от 300 CO4-лимфоцити в 1 µl винаги показва прогресия на заболяването.
2. Серологична диагностика.В момента е най-популярният.
Материал за изследване: 5 мл. хепаринизирана кръв, която може да се съхранява в хладилник 6-8 часа преди доставката в лабораторията, но не и да се замразява.
За целите на серологичната диагностика на СПИН се използват предимно методи за ензимно-свързан имуносорбентен анализ със стандартни ензимно-свързани имуносорбентни анализи (ELISA). Това е скрининг метод. Принципът на действие се основава на класическия принцип на директния ELISA. Имуносорбентите са таблетки от полистирол с имобилизиран инактивиран вирус-специфичен антиген, получен от HIV или синтетично. След това тестваният серум се добавя в разреден вид. Инкубацията се извършва в ямки с антиген. След свързване на AG към AT, несвързаните протеини се промиват три пъти и след това към ямките се добавя конюгат от антитела към човешки имуноглобулини с ензимен етикет. Образуването на специфичен AG + AT комплекс се открива чрез въвеждане на субстрат за ензима (разтвор на ортофенилендиамин и водороден пероксид). В резултат на това цветът на средата се променя пропорционално на количеството антитела. Резултатите от изследването се отчитат на спектрофотометър. Кръвните серуми, които имат вирус-специфични антитела според ELISA, трябва да бъдат допълнително изследвани чрез имуноблотинг.
Имунният блотинг е потвърждаващ тест, тъй като открива антитела срещу различни HIV протеини. Основава се на предварително фракциониране по молекулно тегло (отделяне) на HIV протеини чрез електрофореза в полиакриламиден гел, последвано от прехвърляне на антигени към нитроцелулозна мембрана. След това тестовият серум се нанася върху мембраната. В този случай специфичните антитела образуват комплекс със специфичен антиген (gp.120, gp.41, p.24, p.18). Последният етап от изследването е откриването на антитела към различни HIV протеини. За целта към системата се добавят антитела срещу човешки протеини, маркирани с ензим или радиоизотопен етикет. По този начин в серума на пациента се откриват (или не се откриват) вирус-специфични антитела срещу всички или повечето от HIV антигените.
3. Изследвания на имунния статус.Насочени към идентифициране на:
1) намаляване на съотношението на CD4 / CD8 клетки (в N 2 и >, със СПИН - 0,5 и<);
2) намаляване на съдържанието на CD4 клетки (<200 клеток/мл.);
3) наличието на един от лабораторните признаци, включително анемия, левкопения, тромбоцитопения, лимфопения;
4) повишаване на концентрацията на Ig A и Ig G в кръвния серум;
5) намаляване на реакцията на бластно гранулиране на лимфоцити към митогени;
6) липса на GTZ кожна реакция към няколко антигена;
7) повишаване на нивото на циркулиращите имунни комплекси.
Диагностицирането на ХИВ инфекцията на ранен етап е от съществено значение. От това зависи сложността на терапията и развитието на патологични усложнения. Към днешна дата има много иновативни методи за изследване за идентифициране на такава ужасна диагноза. Това е, което ще бъде обсъдено допълнително.
Какви методи съществуват за диагностициране на HIV инфекцията?
Всъщност има много методи за диагностициране на ХИВ. Средно те се разделят на подгрупи - лабораторни изследвания, диференциални изследвания и апаратни. Освен това е необходимо да се вземат предвид етапите на диагностичните мерки. За всичко това и други аспекти ще говорим по-подробно по-късно.Лабораторна диагностика
Разглежданият диагностичен метод изисква високоспециализирана лаборатория. При такива условия могат да се идентифицират следните индикации:- Определят се антитела, антигени на патогени и имунни комплекси.
- Когато се открие вирус, той се култивира и се откриват геномен материал и ензими.
- Оценява се функционалността на имунната система.
- Извършва се епидемиологично наблюдение и мониторинг на разпространението на вируса на човешката имунна недостатъчност.
- Изследва се динамиката на разпространение и се определя популацията.
- Възможно е да се определи степента на безопасност на трансплантацията и кръвопреливането.
Диференциална диагноза
Заболяването се диференцира по различни причини:- При първите симптоми на HIV инфекция, която е в острата фаза, особено ако има мононуклеоза-подобен синдром. Диагнозата се основава на такива патологии като инфекциозна мононуклеоза, сифилис, рубеола, аденовирус, остра левкемия, йерсиниоза, хиперкератоза.
- Ако ХИВ премине в стадия на генерализирана лимфаденопатия с персистиращ характер, тогава се диференцират заболявания, при които се увеличават лимфните възли. Например, лимфоцитна левкемия, сифилис, токсоплазмоза, лимфогрануломатоза. В тази фаза симптомите на пациента стават по-изразени.
- Ако се открият вторични патологии, се диференцира имунодефицит, който е възникнал на фона на приема на определени групи лекарства - лъчева терапия, употреба на глюкокортикостероидни лекарства и цитостатици. Имунитетът също е значително намален при заболявания като миелом, лимфоидна левкемия, онкологични неоплазми и др.
- Ако ХИВ е локализиран в устната кухина, тогава се диференцират заболявания на устната лигавица.
Експресна диагностика
Към днешна дата са разработени дори бързи тестове, благодарение на които след 15 минути е възможно да се определи наличието на ХИВ инфекция. Има няколко видове:- Най-точният тест е имунохроматографският. Тестът се състои от специални ленти, върху които се нанася капилярна кръв, урина или слюнка. Ако се открият антитела срещу HIV, тогава лентата има цвят и контролна линия. Ако отговорът е не, се вижда само линията.
- OraSure Technologies1 комплекти за домашна употреба. Разработчик - Америка. Този тест е одобрен от FDA.
- Има и други бързи тестове, но те нямат одобрението на специалистите и затова са нежелателни за теста.
Ако се установи положителна реакция към вируса на човешката имунна недостатъчност, е необходимо допълнително да се проведе подходящо изследване в клинична среда.
Ранна диагностика
Ранната диагностика на ХИВ съществува, за да се определят навреме рисковете от увреждане на имунната система. Благодарение на това заболяването се спира в началните етапи, в резултат на което инфекцията на други вътрешни органи се свежда до минимум.За да диагностицирате самостоятелно патологията в ранните етапи, обърнете внимание на симптомите, които съществуват в този случай:
полимеразна верижна реакция
PCR или полимеразна верижна реакция се използва за определяне на всеки инфекциозен агент, включително HIV вируса. В този случай се открива неговата РНК и патогенът може да бъде открит на много ранен етап (трябва да минат поне 10 дни след заразяването).Това е доста скъпа диагностика, но в някои случаи може да даде фалшив резултат. Следователно при скрининг за ХИВ се използват допълнително други методи.
Количественото изразяване на полимеразната верижна реакция е необходимо за определяне на скоростта на развитие на ХИВ и усложнения, като СПИН. Това ви позволява своевременно да определите прогнозата за продължителността на живота на пациент, заразен с ХИВ.
имунно блотиране
Имунният блотинг е последният метод за изследване на пациент преди точна диагноза. Техниката се основава на използването на специализирана лента (нитроцелулоза) с вирусни протеини. Лекарят взема венозна кръв и след това я изпраща за обработка. След този процес суроватъчните протеини се разделят на гелообразно вещество въз основа на молекулно тегло и заряд. За това се използва оборудване с активно електрическо поле. След това, горната лента се поставя в този гел и се попива, тоест, подлага се на попиване. Това се извършва в специализирана камера.Резултатът се определя от свързването на кръвни протеини с протеини, нанесени върху нитроцелулозната лента. Ако HIV присъства в тялото на пациента, тогава единичните линии са полупрозрачни. Има определени индикатори за идентифициране на линии, които сигнализират за наличието на ХИВ. Но има и ниски числа. В този случай съществува риск от развитие на началния стадий на вируса на човешката имунна недостатъчност, образуване на онкологични тумори, туберкулоза и кръвопреливане.
ELISA тест
Тестът ELISA се отнася до метода за скрининг на изследване за съмнение за ХИВ. Изследването се провежда в лаборатория. Именно там се създават специфични болестни протеини, които са в състояние да уловят протеините, произведени от човешкото тяло. При взаимодействие с реагентите цветът на индикатора се променя. Така не се открива самият патоген, а антитела срещу вируса. Този тест може да открие човешкия имунодефицитен вирус в ранните етапи на развитие.Има няколко вида тестове ELISA, но се използват само най-новите разработки - 3-то и 4-то поколение. Техниката се основава на събирането на кръвна течност от вената. Има определена подготовка - пациентът не трябва да яде 8 часа преди изследването. Следователно, кръвта се събира на празен стомах сутрин.
Как се поставя диагнозата по време на инкубационния период?
Инкубационният период на ХИВ вируса е 90 дни. През този интервал е трудно да се идентифицира наличието на патология, но това може да се направи чрез PCR.След това през цялата година лицето е под внимателното внимание на лекарите и се подлага на множество прегледи. Само след този период е възможно точно да се установи диагнозата - ХИВ.
Характеристики на диагнозата при деца
Ако дете е родено от жена с диагноза вирус на човешка имунна недостатъчност, бебето се изследва през първите 3 години от живота. Факт е, че през този период антителата на майката могат да бъдат в кръвната течност на бебето. Но в същото време дори кръвните тестове не потвърждават инфекцията. Разбира се, има много случаи, когато заболяването се установява веднага след раждането. Научете повече за бременността с HIV инфекция.Първите тестове за ХИВ при дете се вземат на втория ден след раждането. След това след достигане на 2 месеца, след това на всеки 4 месеца.
За откриване на патология в детска възраст се използват серологични методи на изследване, PCR. Това е последният тип диагностика на заболяването, което прави възможно идентифицирането на ДНК и РНК на вируса през първите месеци от живота на бебето. За целта се взема кръв от бебето, която впоследствие се поставя в епруветка, съдържаща консерванта EDTA. Освен това материалът се съхранява в продължение на 2 дни при температура не по-висока от 8 градуса. Но замразяването на кръвта не е приемливо. Може да се използва и суха кръвна течност, която се получава от цяла кръв и се изсушава.
Етапи на диагностика
Диагностичните мерки за откриване на вируса на човешката имунна недостатъчност се извършват на три основни етапа:- Предварително сортиране, известно още като пресяване.
- Референтна диагностика.
- Потвърждаващ етап или експертна диагностика.
Пресяване - предварително сортиране
Предварителният етап на изследването ви позволява да определите общите антитела чрез ензимен имуноанализ, т.е. ELISA. Можете да получите информация за наличието на вируса още 3 месеца след заразяването. Но имаше случаи на откриване на патогена в по-ранни етапи - след 3 седмици.Трябва да знаете, че ELISA може при определени условия да даде фалшиво положителен резултат. Това може да бъде по време на периода на раждане на дете, с автоимунни заболявания (псориазис, ревматизъм, лупус и др.), Болест на Епщайн-Бар и други патологии.
Референтна диагностика
На този етап различни тестове се използват поне два пъти, най-много три пъти. Ако в два случая резултатът е положителен, е необходима стъпка за потвърждение.Етап на потвърждаване – експерт
На този етап диагностицирането се извършва с помощта на имунен блотинг. Антителата се определят според определени протеини на патогена. Резултатът обикновено е точен, но има случаи на фалшив положителен отговор. Това е възможно в терминалния стадий на развитие на СПИН и по време на затишието на ХИВ заболяването. Затова е важно да се подложите на допълнителна процедура след определено време.Грешки по време на диагностика
Колкото и парадоксално да изглежда, има възможност за получаване на фалшив положителен резултат. Това обикновено се случва по време на домашни тестове, особено в случаите, когато се използват бързи тестове. В клинични условия това е възможно само при определени заболявания или състояния:
- период на бременност;
- кръстосана реакция на тялото;
- автоимунни патологични разстройства;
- настинки в острия стадий;
- онкологични неоплазми;
- туберкулоза;
- склероза.
Характеристика - ако човек е заразен с вируси и гъбички, тогава резултатът от теста също може да бъде фалшив. Това е особено вярно при алергични състояния.
Подготовка за тестване
Много е важно да се спазват правилата за подготовка за тестване за ХИВ, тъй като от това зависи точността на получаване на резултата:- На първо място е необходимо да посетите съответния специалист, за да Ви даде точни указания относно подготвителните дейности.
- Кръвните тестове винаги се вземат на празен стомах. Ето защо, преди да отидете в клиниката, не можете да ядете нищо. Последното ви хранене трябва да е не по-късно от 21:00 часа.
- В деня на теста е забранено пушенето.
- Не пийте алкохол предната вечер.
- Ако приемате някакви лекарства, не забравяйте да се консултирате с Вашия лекар предварително. Тъй като много лекарства са забранени преди вземане на тестове за ХИВ.
- Не се препоръчва провеждането на ултразвуково изследване няколко дни преди събирането на анализа.
- Не е препоръчително ден-два преди процедурата да ядете прекалено мазни храни и да консумирате много сладкиши.
Диагностика на HIV инфекция (видео)
Можете да научите повече за различните методи за диагностика на ХИВ от квалифицирани специалисти. За да направите това, гледайте следното видео.Произвежда се по няколко различни начина. Изглежда, че нищо не е по-лесно от това да се идентифицира това заболяване чрез кръвни проби, не. Но не е така. Диагнозата ХИВ наистина може да бъде открита по този начин, но по-нататъшните изследвания се извършват с различни методи. От тях до голяма степен зависи какво лечение ще бъде предписано на пациента и какви мерки ще бъдат предприети впоследствие. Сред най-често срещаните и високоефективни методи е обичайно да се отделят скрининг анализ и имунен блот. Всеки от тях трябва да бъде разгледан по-подробно.
Диагноза СПИН: скрининг анализ
В началния етап на диагностициране на ХИВ инфекцията се използва скринингов анализ или изследователски метод ELISA. По време на разработването на този метод вирусните протеини са изкуствено създадени в лабораторията. Те реагират по специален начин на антителата. Последните се произвеждат в тялото, когато в него се появят клетки, заразени с ужасна болест. Лабораторната диагностика на ХИВ в този случай се извършва с помощта на изкуствени ензими. Взаимодействайки с антителата, те се оцветяват в определен цвят. Лента с индикатор, след като върху нея се получи кръв, се поставя под специален апарат, с помощта на който е възможно да се определи дали човек има това заболяване или не. Съвременните методи за диагностициране на ХИВ, включително ELISA, позволяват да се определи фактът на инфекцията или нейното отсъствие с висока точност. Но, както всяка технология, апаратът за скрининг анализ има грешка. Ето защо, ако е необходимо, анализът се прави повторно от пациента.
Важно е да знаете, че ELISA тестът е един от най-ранните методи за определяне наличието на вирус на имунна недостатъчност в организма. HIV инфекцията е диагноза, която може да бъде открита само няколко седмици след заразяването. Когато заразените клетки навлязат в кръвта, имунната система на тялото започва активно да се съпротивлява. Произвеждат се антитела, които се откриват лабораторно след две-три седмици. Ранната диагностика на ХИВ инфекцията чрез тест ELISA позволява откриването на антитела срещу вируса на имунната недостатъчност в човешката кръв. Това е основната му разлика от другите съвременни методи.
Струва си да се отбележи, че при някои хора антителата срещу това заболяване започват да се произвеждат на по-късна дата. От момента на заразяване до началото на този процес може да отнеме от три до шест седмици. Ето защо медицинските експерти препоръчват скрининг четири до пет седмици след незащитен секс или друга причина за съмнение за случайна инфекция.
Методите за лабораторна диагностика на HIV инфекция чрез ELISA са разработени в продължение на дълъг период от време. Към днешна дата има четири поколения тестове. Най-точните и ефективни от тях са тези, които са разработени последно. Лабораторната диагностика на ХИВ инфекция и СПИН с помощта на ELISA тестове от трето и четвърто поколение се извършва с помощта на рекомбинантни протеини и пептиди. Чувствителността на тези тестове към антитела, произведени от тялото, е 92 - 93%. Говорим за руски методи на изследване. Европейците са се научили да правят подобни тестове с чувствителност от 99%.
Съвременните методи за лабораторна диагностика на HIV инфекцията, базирани на ELISA, се използват не само за откриване на наличието на болестта. С помощта на скрининг анализ е възможно да се следи разпространението на вируса на имунната недостатъчност, както и да се събере материал за изследване преди вземане на кръв от донори.
ELISA е стандартен метод за диагностициране на HIV инфекция: как се провежда, защо дава фалшив резултат?
Диагностиката на ХИВ и СПИН чрез ELISA е стандартна процедура. Кръвта на пациента се взема от вената. Пет милилитра материал са достатъчни за анализ. Клинични 
Диагнозата на ХИВ тип 2 и 1 се прави най-малко осем часа след хранене. Лекарите препоръчват да го правите сутрин на празен стомах. Резултатите от пълното изследване са известни след два-три дни. Експресният скрининг се извършва за по-кратко време. Обикновено това отнема само няколко часа. Грешката обаче в този случай се увеличава. Експресната диагностика на ХИВ е необходима в спешни случаи, например когато пациентът се нуждае от спешна операция. Такъв анализ задължително се извършва преди непланирани хирургични интервенции, тъй като ако пациентът има вирус на имунна недостатъчност, лекарите спазват повишени мерки за сигурност. Клиничната диагностика на ХИВ инфекцията за кратък период от време е необходима и в случай, че трябва бързо да се вземе донорска кръв, за да се спаси друг пациент.
Има случаи, когато човек е диагностициран със СПИН или ХИВ и в резултат на това не е потвърден, или обратното. Защо това се случва в случая с теста ELISA? Фалшиво отрицателен резултат може да се дължи на факта, че кръвта не е била правилно подготвена за изследването. Понякога причината за това е неправилното изпълнение на оградата му. Фалшиво-отрицателен резултат при проверката на диагнозата ХИВ инфекция не се потвърждава, дори ако материалите за изследването са взети твърде рано. В края на краищата след инфекцията трябва да са минали поне три седмици. Има случаи, когато резултатът от откриването на вируса на имунната недостатъчност е фалшиво положителен. Това се дължи на общото състояние на имунната и хормоналната система на човешкото тяло. В повечето случаи пациентът има заболявания, които са резултат от фалшив положителен резултат. Говорим за алкохолен хепатит, при който черният дроб произвежда специални ензими, което може да доведе до неправилна диагноза ХИВ. Бременността и някои автоимунни заболявания, заедно с множествената миелома, също могат да причинят фалшив положителен резултат. Този списък може да включва пациенти на диализа и лица, които са били ваксинирани малко преди диференциалната диагноза на ХИВ.
Говорейки за скрининг анализ, важно е да се отбележи, че този метод на изследване изисква потвърждение. Лекарите, преди да поставят диагноза ХИВ въз основа на него, винаги изпращат пациента за имунен блот.
Основните методи за лабораторна диагностика на ХИВ инфекцията: имунно блотиране
СПИН, чиято диагноза и лечение са тясно свързани, се открива по няколко начина наведнъж. Както бе споменато по-горе, един тест ELISA не е достатъчен, за да се определи окончателно диагнозата. Диференциалната диагноза на ХИВ инфекцията в този случай се допълва от имуноблотинг. В съвременната медицина се нарича окончателен потвърдителен метод за диагностика. За изследване в този случай се използват протеини, съдържащи се в кръвта на пациента. Те се отделят в специален гел, след което лаборантите имат възможност да изследват молекулярния състав на кръвта.
Времето за диагностициране на ХИВ с този метод е от един до три дни. За изследване се взема кръв от вената на субекта, която се поставя върху тестер с гел. Резултатът, който се поставя под въпрос, може да възникне по време на бременност, наличие на онкологични процеси, туберкулоза. Фалшиво отрицателна реакция на теста може да възникне, ако изследването е проведено неправилно и ако е извършено твърде рано. От момента на заразяването трябва да минат поне три седмици. В крайна сметка, след колко време се диагностицира ХИВ, това пряко зависи от състоянието на имунитета.
Други методи за диагностициране на СПИН и ХИВ
Методите за радиационна диагностика при СПИН се използват, като правило, в терминални или вторични стадии. С тяхна помощ е възможно да се установят промени, които настъпват в тялото поради вторични заболявания или опортюнистични инфекции.
Биорезонансната диагностика на ХИВ, която също се нарича нелинейно сканиране, се използва главно в частни клиники за откриване на вируса на имунната недостатъчност. Официалната медицина смята този метод за недостатъчно точен и ефективен. Може би подобряването на нелинейната диагностика в бъдеще ще направи възможно идентифицирането на тази ужасна диагноза още в инкубационния период.
Диагностика на HIV инфекция: серологичен метод и неговите характеристики
Това е сравнително нова техника, при която лабораторните критерии за диагностициране на HIV инфекцията се основават на принципа антиген-антитяло. В случай на вируса на имунната недостатъчност, има търсене на антитела срещу вируса в човешкото тяло. За това се използва изкуствено получен антиген, на който антителата трябва да реагират. Специфичните серологични маркери на HIV инфекцията причиняват специфични промени в състава на кръвта. Трябва да се отбележи, че този метод на изследване е най-ефективен в острия стадий, който завършва със сероконверсия. Следва асимптоматичен латентен период, през който не е лесно да се открие антигенът.
Референтна диагностика на HIV инфекция: описание и характеристики
Референтните стойности на ХИВ се считат за най-точни при идентифициране на диагнозата. Този метод на изследване съчетава теста ELISA и имунен блотинг. Референтната лаборатория за диагностика на ХИВ позволява вземане на проби и последваща обработка едновременно по два начина. Това ви позволява да получите най-точния резултат в рамките на един ден. Повторна проверка на анализа, получен в референтната лаборатория, е необходима само ако данните от теста ELISA и имунния блот си противоречат. Това е доста рядко явление, което най-често се среща при хора с гореописаните съпътстващи заболявания.
Клинична и лабораторна диагностика на HIV инфекцияима три направления:
- Установяване на факта на HIV инфекция, диагностика на HIV инфекция.
- Определяне на стадия на клиничния ход на заболяването и идентифициране на вторични заболявания.
- Прогноза за прогресията на клиничния ход на заболяването, лабораторен мониторинг на ефективността на лечението и страничните ефекти на антиретровирусните лекарства.
1. Установяване на HIV инфекция, диагностика на HIV инфекция
За определяне на HIV инфекцията се използват следните специфични показатели: антитела срещу HIV, HIV антигени, HIV РНК и провирусна ДНК. Антителата срещу HIV се определят чрез ензимен имуноанализ (ELISA) или имуноблотинг, който по същество е вид ELISA. Антигените (протеините) на HIV се определят чрез ELISA. С помощта на молекулярно-генетични методи на полимеразна верижна реакция (PNR) и bDNA е възможно да се определи HIV РНК и провирусна ДНК. Използването на допълнителен метод за хибридизация на нуклеинови киселини със специфични ДНК сонди ви позволява да проверите специфичността на ДНК последователностите, получени по време на PCR. Чувствителност на PCR - откриване на вирусни гени в една от пет хиляди клетки.
При първична инфекция се наблюдава следната динамика на HIV маркерите в кръвта на заразените. През първия месец, в резултат на активиране на репликативния процес, има рязко увеличение на вирусния товар (съдържание на ХИВ РНК в плазмата), след това поради разпространение на вируса и масивна инфекция на целевите клетки в кръвта и лимфата възли, става възможно да се определи провирусна ДНК. От първостепенна диагностична стойност е фактът на откриване на провирусна ДНК, интегрирана в генома на целевата клетка.
Вирусният товар отразява интензивността на процеса на репликация в заразените клетки. По време на първичната инфекция нивото на вирусния товар е различно при заразяване с различни подтипове на ХИВ, но динамиката на промените е приблизително еднаква. Така че, когато се заразите с подтип B, например, ако през първия месец след инфекцията стойността на вирусния товар е 700 копия / ml, тогава през 2-ия месец има намаление до 600, през 3-тия - до 100, в 4-то - до 50 копия / мл. Такава динамика се наблюдава на фона на повишаване на съдържанието на специфични антитела срещу HIV в кръвта. Съдържанието на провирусна ДНК в кръвните мононуклеарни клетки на HIV-инфектирани пациенти се характеризира с относително постоянство през първите 6 месеца с леки колебания в някои подтипове. По този начин натоварванията на РНК и ДНК не са идентични.
По време на инкубационния етап за известно време не се образуват специфични антитела срещу ХИВ в количество, достатъчно за определяне чрез съществуващите лабораторни методи. Преди откриването на антитела за много кратко време се наблюдава появата в кръвта на протеина Nef, който потиска репликативния процес, и структурния протеин р24. Антигенът p24 може да бъде открит в кръвта чрез ензимно-свързан имуносорбентен анализ вече 1-2 седмици след инфекцията и може да се определи до 8-та седмица, след което съдържанието му рязко намалява. Освен това в клиничния ход на ХИВ инфекцията се отбелязва второ повишаване на съдържанието на протеина р24 в кръвта. Той пада върху периода на формиране на СПИН. Изчезването на свободни (несвързани с антитела) p24 основни протеини в кръвта и появата на специфични антитела срещу HIV протеините отбелязват началото на сероконверсия (фиг. 9.6).
Виремията и антигенемията причиняват образуването на специфични антитела от клас IgM (анти-р24, анти-gp41, анти-gp120, анти-gp160). Свободните антитела от класовете IgM и IgG към протеина p24 могат да се появят от 2-та седмица, тяхното съдържание се увеличава в рамките на 2-4 седмици, достигайки определено ниво, което остава в продължение на месеци (IgM) и години (IgG) (фиг. 9.7). ).
Появата на пълна сероконверсия, когато в периферната кръв се регистрира високо ниво на специфични антитела от клас IgG към структурните протеини на HIV p24, gp41, gp120, gp160, значително улеснява диагностицирането на HIV инфекцията. Антителата срещу HIV се появяват при 90-95% от заразените в рамките на 3 месеца след заразяването, при 5-9% - в периода от 3 до 6 месеца от момента на заразяването и при 0,5-1% - на по-късна дата.
Въпреки факта, че антителата срещу HIV се появяват последни, основният лабораторен диагностичен показател досега е откриването на специфични антитела чрез ELISA и имуноблотинг.
Данните са представени в таблица 9.2 [покажи] и 9.3 [покажи] , ясно демонстрират високата чувствителност на съвременните тест системи ELISA при откриване на антитела срещу HIV, която надвишава чувствителността на имуноблотинга. В някои случаи, когато се получи първичен положителен резултат при ELISA, той може да бъде потвърден при имуноблотинг само след 2-3 седмици.
| Таблица 9.3. Пример за мониторинг на сероконверсията (според H. Fleury, 2000) | |||||
| Момент на дефиниция | p24 антиген, pg/ml | Антитела срещу HIV протеини | |||
| ELISA, OD arr/OD cr ** | Имуноблотинг | ||||
| ХИВ DUO | Gen екран | Униформа | |||
| Пациент 1 | |||||
| Преди всичко | 17 | 1,24 | по-малко от 1 | по-малко от 1 | * |
| След 4 дни | 67 | 1,36 | 1,85 | по-малко от 1 | - |
| След 7 дни | * | 2,33 | 6,84 | по-малко от 1 | - |
| След 2 дни | * | 6,77 | 15,0 | 4,8 | gp160 |
| Пациент 2 | |||||
| Преди всичко | 400 | 13 | по-малко от 1 | по-малко от 1 | - |
| След 5 дни | 450 | 18 | 2,11 | по-малко от 1 | - |
| След 10 дни | * | 33 | 12,19 | 2,9 | gp160 |
| Забележка: * - не е определено ** - съотношението на оптичната плътност на изследваната серумна проба към критичната (прагова) стойност на оптичната плътност |
|||||
При изследване на пациенти с ХИВ инфекция (инфектирани с ХИВ) с помощта на имуноблотинг тестови системи на водещи световни компании, антитела към gp160 и p24/25 се откриват във всички случаи, антитела към други протеини се откриват в 38,8-93,3% от случаите (Таблица 1 ).9.4 [покажи] ).
Трудности при откриване на антитела при пациенти с ХИВ инфекция могат да възникнат по време на периоди на масивна виремия и антигенемия, когато съществуващите специфични антитела в кръвта са свързани с вирусни частици и процесът на репликация изпреварва производството на нови антивирусни антитела. Тази ситуация може да възниква и да си отива по време на инфекциозния процес.
При пациенти с първоначално отслабена имунна система виремията и антигенемията се появяват по-рано и остават на високо ниво до изхода на заболяването. При такива пациенти има ниско съдържание на свободни антитела срещу HIV поради две причини - недостатъчно производство на антитела от В-лимфоцити и свързване на антитела от вириони и разтворими HIV протеини, следователно, за определяне на инфекцията, тест системи с повишена чувствителност или са необходими модификации на методите за анализ, които включват етапа на освобождаване на антитела от имунни комплекси.
Най-често намаляването на съдържанието на антитела срещу ХИВ поради посочените причини се случва в терминалния стадий, когато антителата срещу ХИВ в серума на разреза не могат да бъдат уловени чрез методи на ензимен имуноанализ, нито чрез имуноблотинг (Western blotting). В допълнение към появата на специфични антитела срещу HIV, имунният отговор през първите 4 месеца се характеризира с намаляване на съдържанието на заразени CD4+ в кръвта и увеличаване на CD8+ клетките. Освен това съдържанието на клетки, носещи CD4 и CD8 рецептори, се стабилизира и остава непроменено за известно време. Увеличаването на съдържанието на CD8-лимфоцити е защитна реакция, т.к. клетъчно-зависимата цитотоксичност се реализира от CD8+-лимфоцити, които са насочени към унищожаване на HPV-инфектирани клетки. Първоначално цитотоксичните лимфоцити (CTL) реагират на Nef регулаторния протеин на вируса, който играе важна роля за намаляване на вирусното (РНК) натоварване в плазмата на HIV-инфектиран човек през първите месеци. След това се формира CTL отговорът към други, вкл. структурни протеини на ХИВ, в резултат на което 12 месеца след заразяването, cптотоксичният ефект се повишава значително.
Схеми за лабораторна диагностика на HIV инфекция
Като се има предвид дадената динамика на специфичните маркери на HIV инфекцията, на практика е препоръчително да се придържате към следните схеми за лабораторна диагностика при възрастни (фиг. 9.8-9.10).
Схемите отразяват трите основни етапа на първичната лабораторна диагностика на HIV инфекцията:
- Прожекция.
- справка.
- Експерт.
Необходимостта от няколко етапа на лабораторна диагностика се дължи преди всичко на икономически съображения. Така например разходите за провеждане на едно експертно изследване с помощта на местни тестови системи чрез имуноблотинг са до 40 щатски долара, скринингът (чрез ELISA) е около 0,2, т.е. съотношението е 1:200.
На първия етап (фиг. 9.8) субектите се изследват за антитела срещу ХИВ с помощта на една тестова система ELISA, предназначена за откриване на антитела към двата вида вирус - ХИВ-1 и ХИВ-2.
Производителите в предложените тестови системи използват като антигенна основа вирусен лизат, рекомбинантни протеини, синтетични пептиди. Всеки от изброените носители на HIV антигенни детерминанти има своите предимства и недостатъци. Следователно, когато избирате тестови системи с приблизително еднаква цена, трябва да се предпочитат комплекти с най-висока чувствителност (за предпочитане 100%). Сред тестовите системи със същата цена и чувствителност е препоръчително да се спрем на тези с максимална специфичност.
На базата на вирусния лизат са създадени първите тест системи за лабораторна диагностика на ХИВ инфекцията. През 80-те години на миналия век такива тестови системи се характеризираха с чувствителност под 100% и ниска специфичност, проявяваща се с голям брой (до 60%) фалшиво положителни резултати.
По време на образуването на вирион в култура от лимфоцити, неговата обвивка се създава от външната мембрана и следователно съдържа антигени на главния комплекс за хистосъвместимост от класове I и II. Това обстоятелство причинява фалшиво положителни реакции в случай, че в кръвта на пациентите присъстват антитела срещу алоантигени на хистосъвместимост.
По-късно за получаване на вируса беше предложено да се използва култура от макрофаги, в която вирусните частици се образуват главно вътреклетъчно чрез пъпкуване не от външната мембрана на клетката, а от мембраните на ендоплазмения ретикулум. Тази технология намали броя на фалшивите положителни резултати.
Имуноензимните анализи са признати за едни от най-добрите по отношение на най-важните характеристики - чувствителност и специфичност - като част от тях комбинация от пречистен вирусен лизат със синтетични пептиди, които са най-антиген-значимите области на вирусните протеини, или се използват рекомбинантни протеини.
Чувствителността на тестовата система зависи и от характеристиките на другите компоненти на комплектите. По този начин тестовите системи, които използват конюгати, които разпознават антитела не само от клас IgG, но също и от IgM и IgA, позволяват да се открие по-ранна фаза на сероконверсия. Изглежда обещаващо да се използват тестови системи, които могат едновременно да определят както антивирусни антитела, така и антиген p24, което прави лабораторната диагноза на HIV инфекцията още по-ранна.
Първоначалният положителен резултат трябва да бъде проверен отново чрез повторно тестване на пробата в същата система за тестване, но за предпочитане в различна партида и от различен лаборант. При отрицателен резултат при втория преглед се провежда трети път.
След потвърждаване на положителен резултат е желателно да се вземе отново кръв и да се изследва за антитела срещу ХИВ като първичен. Многократното вземане на кръвни проби помага да се предотврати грешка, причинена от неточно етикетиране на епруветките и попълване на формуляри за насочване.
Положителният серум на етапа на скрининг се изпраща за референтни изследвания, извършени с помощта на две или три високоспецифични тест системи ELISA. При два положителни резултата се извършва експертно изследване чрез имуноблотинг.
Използването на тестови системи ELISA в референтната диагностика, които могат да се използват за диференциране на специфични антитела срещу HIV-1 и HIV-2, улеснява по-нататъшната работа и ви позволява незабавно да изследвате положителна проба на експертния етап, като използвате подходящия имуноблотинг (HIV- 1 или ХИВ-2).
Лабораторно експертно заключение за HIV инфекция се издава само въз основа на положителен резултат от Western blot. При извършване на експертна диагностика е необходимо да се използва номенклатурата на гените и генните продукти на HIV, предложена през 1990 г. от група експерти на СЗО (Таблица 9.5). [покажи] ).
Специфичността на ивиците върху имуноблота трябва да се оценява много внимателно и внимателно, като се използват резултатите от изследванията на контролни серуми (положителни и отрицателни), които се извършват успоредно с изследването на експериментални проби, и имуноблот проба с обозначението на HIV протеини (прикрепени от производителя към тест системата). Тълкуването на получените резултати трябва да се извърши в съответствие с инструкциите, приложени към тест системата. По правило критерият за положителност е задължителното наличие на антитела към два протеина (прекурсор, външен или трансмембранен), кодирани от env гена, и възможното наличие на антитела към продуктите на два други структурни HIV гена - gag и pol ( Таблица 9.6 [покажи] ).
| Таблица 9.6. Критерии за интерпретация на резултати от имуноблот за HIV-1 и HIV-2 (СЗО, 1990 г.) | |||
| Резултат | ХИВ-1 | ХИВ-2 | |
| Положителен | +/- pol ленти +/- ленти за запушване | 2 ленти env (прекурсор, външен gp или трансмембранен gp) +/- pol ленти +/- ленти за запушване |
|
| Отрицателна | Липса на специфични за HIV-1 ленти | Няма специфични ленти за HIV-2 | |
| Несигурно | Други профили, които не се разглеждат като положителни или отрицателни | ||
В случай на получаване на съмнителен резултат е необходимо да се използва списъкът с препоръки за окончателно изясняване на резултатите от имуноблотинга (Таблица 9.7). [покажи] ).
| Таблица 9.7. Препоръки за окончателно изясняване на неопределени резултати от имуноблотинг (СЗО, 1990 г.) | |
| Наличието на ленти, съответстващи на HIV протеини | Тълкуване на резултата, по-нататъшни действия |
| ХИВ-1 | |
| Само стр.17 | |
| Само p24 и gp160 | Такава необичайна картина може да се появи в началото на сероконверсията. Пробата трябва да се тества отново незабавно. В случай на получаване на същия профил е необходимо да се вземе втора проба за изследване в имуноблотинг 2 седмици след вземането на 1-вата проба |
| Други профили | Тези профили (gag и/или pol без env) могат да показват сероконверсия или неспецифични реакции. |
| ХИВ-2 | |
| Само стр.16 | Може да се класифицира като отрицателен, не изисква допълнителни определения |
| I lane env със или без gag/roll | Същата проба трябва да се тества повторно, като се използва различна партида реактиви. |
| Само p24 или gp140 | Този необичаен профил може да възникне в началото на сероконверсията. Пробата трябва да се тества отново незабавно. В случай на получаване на същия профил, 2 седмици след вземането на 1-вата проба трябва да се вземе втора проба за изследване в имуноблотинг |
| Други профили | Тези профили (gag и/или pol без env) могат да показват сероконверсия или неспецифични реакции. |
Според препоръките на Руския научно-методически център за профилактика и контрол на СПИН, положителен резултат се счита за наличие на антитела към поне един от протеините gp41, gp120, gp160 в комбинация с антитела към други специфични HIV- 1 белтъци или без тях. Тези препоръки се основават на опита със серуми от деца от нозокомиални огнища, в които често се откриват антитела само към един от протеините на вирусната обвивка.
Основната част от първоначално изследваните пациенти, серопозитивни при ELISA, принадлежат към фазата на персистираща генерализирана лимфаденопатия (PGL) или към асимптомната фаза. Следователно, върху имуноблот (нитроцелулозна лента, върху която са имобилизирани HIV протеини), обикновено се определя следната комбинация от антитела срещу HIV-1: антитела към протеините на обвивката gp160, gp120 и gp41, кодирани от env гена, в комбинация с антитела към p24 основните протеини (протеинов нуклеокапсид, кодиран от gag гена) и p31/34 (ендонуклеаза, кодирана от pol гена).
Положителните реакции само с gag и/или pol протеини могат да възникнат в ранната фаза на сероконверсия и също да показват инфекция, причинена от HIV-2 или неспецифична реакция.
Ако се получи съмнителен резултат, е възможно да се използват различни методологични техники за изясняване на факта на HIV инфекцията.
В зависимост от техническите възможности (наличие на диагностични комплекти и реактиви, оборудване със специално оборудване и обучение на персонала), експертната лаборатория провежда допълнителни диагностични изследвания (фиг. 9.10).
В някои случаи е препоръчително да се използват молекулярно-генетични методи за определяне на генетичните последователности на HIV в серум, кръвни лимфоцити или пункции на лимфни възли. Проверката на специфичността на ДНК последователностите, получени чрез PCR, може да се извърши чрез хибридизация на нуклеинови киселини със специфични ДНК проби.
Методите на радиоимунопреципитация (RIP) и индиректна имунофлуоресценция (IFl) също могат да се използват за окончателна проверка на серуми със съмнителни резултати от имуноблот.
Откриването на ХИВ РНК в плазмата чрез качествен или количествен метод не е от значение за диагностицирането на ХИВ инфекцията. Такъв резултат трябва да бъде потвърден чрез стандартни методи, като имуноблотинг, 2-4 месеца след получаване на първоначален съмнителен или отрицателен отговор.
Изолирането на ХИВ в клетъчна култура е истината от последна инстанция. Методът обаче е сложен, скъп и се извършва само в специално оборудвани изследователски лаборатории.
Съдържанието на CD4+ клетки в кръвта е неспецифичен показател, но в противоречиви случаи (ELISA "+", имуноблот "-", наличие на клинични признаци на ХИВ инфекция / СПИН) може да се използва като насока за вземане на експертно решение. Ако лабораторията има способността да извършва само имуноблотинг, тогава трябва да се следват препоръките, дадени в таблица 1. 9.7 и на фиг. 9.9.
Лицата, чиито серуми имат съмнителни (неопределени) резултати при експертен преглед, с изключение на случаите на откриване на антитела само срещу p17 (HIV-1) или p16 (HIV-2), трябва да бъдат повторно тествани в рамките на 6 месеца (след 3 месеца). В случай на истинска HIV инфекция след 3-6 месеца се наблюдава "положителна" тенденция в спектъра на антителата - допълнително образуване на антитела към други протеини на вируса. Фалшивата реакция се характеризира с персистиране на двусмислен модел на имуноблот за дълго време или изчезване на подозрителни ивици. Ако след определения период от време резултатите от повторното имуноблотинг са отрицателни или остават под съмнение, тогава при липса на рискови фактори, клинични симптоми или други фактори, свързани с HIV инфекцията, лицето може да се счита за серонегативно за антитела срещу HIV- 1 и ХИВ-2.
Фалшиво положителни резултати, дължащи се на съдържанието в кръвта на пациентите на антитела срещу алоантигени на хистосъвместимост, които са част от обвивката на HIV, се появяват на имуноблот под формата на ленти на ниво gp41 и gp31. Причините за други неспецифични реакции (например към p24, често срещани при индивиди с автоимунни процеси) все още не са изяснени.
Подобряването на технологията за производство на тест системи ELISA позволи да се постигне висока чувствителност - до 99,99%, докато чувствителността на метода за имуноблотинг е 97%. Следователно, отрицателен резултат от имуноблот с положителни резултати от ELISA може да означава начален период на сероконверсия, характеризиращ се с ниски нива на специфични антитела. Следователно е необходимо изследването да се повтори след 1,5-2 месеца, т.е. продължителността на времето, необходимо за завършване на сероконверсията, за да се постигне концентрация на специфични антитела в кръвта, достатъчна за откриване чрез имуноблотинг.
Положителният резултат (резултати) от изследването на референтния или единствения етап на скрининг на лабораторна диагностика на ХИВ инфекция, т.е. положителен резултат във всяка тестова система за ензимен имуноанализ, в крайна сметка не потвърден от експертни методи, се тълкува като наличие на кръстосано -реактивни антитела в кръвта на изследваните антитела. Кръстосаната реактивност се отнася до свързването на антитела към неспецифични места на HIV протеини или пептиди, използвани като антигенна основа в тестовата система, при която се получава положителен резултат.
При липса на имунна недостатъчност и клинични признаци на HIV инфекция, такива лица се считат за серонегативни за антитела срещу HIV и трябва да бъдат дерегистрирани.
Окончателната диагноза на HIV инфекцията се установява само въз основа на всички клинични, епидемиологични и лабораторни данни. Само лекуващият лекар има право да информира пациента за диагнозата HIV инфекция.
Основният метод за потвърдителна (експертна) лабораторна диагностика на HIV инфекцията е имуноблотинг. Въпреки това, предвид по-ниската му чувствителност в сравнение с ELISA, редица изследователи предложиха използването на комбинация от няколко тестови системи за окончателно определяне на наличието на специфични антитела срещу HIV. Например G. van der Groen et al. предложи алтернатива на метода за имуноблотинг за проверка на положителните резултати от етапа на скрининг на лабораторната диагностика на HIV инфекцията. Това включва паралелно изследване на материала в три тестови системи, които се основават на различни методи за откриване на специфични антитела срещу HIV (няколко варианта на ELISA, реакция на аглутинация) с помощта на антигени от различно естество. Авторите успяха да изберат такива комбинации от тестови системи, чието използване осигурява 100% чувствителност и специфичност в сравнение с резултатите, получени при имуноблотинг.
Ниската цена на този метод на експертна диагностика е несъмнено предимство, но липсата на информация за това кои специфични протеини на вируса има антитела в кръвта на пациента не позволява да се оцени спецификата на реакцията във всеки отделен случай, както и като проследяване на промените в спектъра на антителата в ранен стадий на сероконверсия.
Лабораторната диагностика на HIV инфекцията при деца, родени от заразени с HIV майки, има свои собствени характеристики. От момента на раждането, за дълго време (до 15 месеца), майчините антитела срещу ХИВ могат да циркулират в кръвта на такива деца. Само имуноглобулини от клас IgG проникват през плацентарната бариера, следователно откриването на HPV-специфични мупоглобулини от класовете IgM и IgA при дете може да потвърди инфекцията, но отрицателният резултат не може да показва липсата на HIV.
Децата на възраст под 1 месец все още нямат HPV репликация и PCR е единственият метод за проверка. Определянето на антигена p24 при деца на възраст над 1 месец също е потвърждаващ метод.
Липсата на антитела срещу HIV при новородени не означава, че вирусът не е преминал през плацентарната бариера. Във всеки случай децата на HIV-инфектирани майки подлежат на лабораторно диагностично изследване и наблюдение в продължение на 36 месеца от раждането.
Резултатите от лабораторните тестове за маркери на HIV инфекция изискват внимателна интерпретация и трябва да се разглеждат само във връзка с данни от епидемиологични и клинични изследвания. От друга страна, трябва да се отбележи, че въпреки високата чувствителност на съвременните методи, отрицателните резултати от теста не могат напълно да изключат наличието на HIV инфекция. Следователно, отрицателен резултат от теста, например чрез имуноблотинг, може да се формулира само като липса на специфични антитела срещу HIV-1 и HIV-2.
Диагностика на HIV инфекция при серонегативни пациенти
Качеството на тестовите системи, използвани в лабораторната диагностика на ХИВ инфекцията, се подобрява всяка година и тяхната чувствителност се увеличава. Въпреки това, високата променливост на ХИВ може да доведе до появата на нови типове, антителата към които може да не бъдат разпознати от съществуващите тестови системи. Освен това са известни случаи на атипичен хуморален отговор на имунната система на организма гостоприемник към вируса. И така, L. Montagnier през 1996 г. съобщава за двама пациенти със СПИН, при които през последните няколко години не са открити специфични антитела в кръвта, диагнозата е направена въз основа на клинични данни и лабораторно потвърдена само чрез изолиране на HPV- 1 в клетъчна култура. В такива случаи е необходимо да се използват препоръките на СЗО, според които клиничната диагноза на ХИВ инфекцията при възрастни и деца е възможна при наличие на едно от 12-те заболявания, определящи СПИН:
- кандидоза на хранопровода, трахеята, бронхите, белите дробове;
- извънбелодробна криптококоза;
- криптоспоридиоза с диария за повече от един месец;
- цитомегаловирусно увреждане на всеки орган (с изключение и в допълнение към черния дроб, далака и лимфните възли при пациент на възраст над 1 месец):
- инфекция, причинена от вируса на херпес симплекс, която продължава повече от 1 месец при пациент на възраст над 1 месец;
- мозъчен лимфом при пациент на възраст под 60 години;
- лимфоцитна интерстициална пневмония при дете под 13-годишна възраст;
- дисеминирана инфекция, причинена от бактерии от групата Mycobacterium avium intracellulare или M. Kansassii;
- пневмоцистна пневмония;
- прогресивна мултифокална левкоенцефалопатия;
- токсоплазмоза на централната нервна система при пациенти на възраст над 1 месец.
Наличието на едно от тези заболявания позволява да се диагностицира HIV инфекцията при липса на лабораторен кръвен тест за наличие на антитела срещу HIV или дори когато се получи серонегативен резултат.
Източник: Медицинска лабораторна диагностика, програми и алгоритми. Изд. проф. Карпищенко А. И., Санкт Петербург, Интермедика, 2001 г
Само специални тестове могат да открият СПИН. Самият процес на тестване се състои в откриване на антитела, които се произвеждат от тялото в отговор на появата на вируса. Лабораторните методи за диагностициране на СПИН включват четири теста, които се използват за откриване на това заболяване.
Първият - ELISA (ензимно-свързан имуносорбентен анализ) е най-разпространеният диагностичен метод. Този анализ може да определи количеството антитела, натрупани в тялото. Обикновено това е възможно само ако вирус е навлязъл в кръвта и оттогава са минали три месеца. Както показват резултатите от практиката, един процент от случаите дават фалшиво отрицателен или фалшиво положителен резултат.
Фалшиво отрицателен резултат е възможен, ако антителата срещу вируса все още не са разработени или ако СПИН е в терминален стадий, т.е. вирусът присъства в кръвта, но има толкова много от него, че антителата и CD-4 клетките практически липсват. За да проверите отрицателния резултат, можете да направите повторно ELISA, но само след 3 месеца.
В повечето случаи фалшиво положителен резултат дава изследване на пациенти, страдащи от хронични автоимунни, инфекциозни, онкологични и други заболявания. Фалшиви положителни резултати могат да се появят и при бременни жени. Следователно всеки положителен резултат задължително се проверява отново, но само върху имуноблот - това е по-чувствителен тест.
Ако резултатът от имуноблот е положителен, особено след резултата от ELISA, тогава надеждността е 99,9% и това е максималната точност за медицински тест (освен всички).
Вторият е имуноблот (пълен имуноблотинг). Този тест открива наличието на специфични антитела срещу HIV. В този случай резултатът е отрицателен, положителен, съмнителен (нарича се още неопределен).
Съмнителен резултат може да означава, че ХИВ присъства в кръвния поток, за който тялото все още не е развило пълния набор от антитела. В този случай антителата срещу HIV в серума се появяват след 1-3-6 месеца. един след друг, от момента на получаване на първия съмнителен резултат. Ако резултатите се потвърдят, това показва ХИВ инфекция в началния етап
Неопределен резултат от този тест може да показва обратното. Сама по себе си ХИВ инфекцията не съществува, но в човешкото тяло живеят антитела, подобни на антителата срещу ХИВ. По правило съмнителен резултат се получава при бременни жени, при пациенти с туберкулоза, реципиенти, пациенти с рак, както и при тези, които са получавали кръвопреливания (т.е. кръвопреливания) многократно. Пациент, чийто резултат от този тест показа несигурност, се наблюдава от специалист по инфекциозни заболявания в продължение на шест месеца и се тества след 1-3-6 месеца.
Третият е PCR (полимеразна верижна реакция). Тази диагноза на СПИН ви позволява да определите ДНК и РНК на вируса. Това е доста чувствителна и ефективна реакция, която ви позволява да получите резултат чрез изследване на ДНК. В този случай ДНК се взема от една клетка и се изследва чрез умножаване на характерните ДНК последователности
Този тест се прилага:
- да се определи кой вирус е в тялото (има HIV 1 и HIV-2);
- за определяне на наличието или отсъствието на ХИВ;
- за определяне и проследяване на вирусния товар;
- за определяне на HIV статуса на новородено, родено от HIV-инфектирана майка.
Този тест е много чувствителен: той може да открие вируса, дори ако са изминали около десет дни от предполагаемия момент на заразяване. Тази висока чувствителност на теста реагира и на други инфекции, така че често дава фалшиво положителни резултати. Резултатите от този тест не са основа за окончателна диагноза.
Извършването на този тест изисква висококвалифициран медицински персонал и модерно лабораторно оборудване. Това е скъп тест, така че не се използва при безплатни тестове за ХИВ.
Четвъртият е бърз тест. Това изследване се използва предимно в спешни случаи – по време на раждане, по здравословни причини при операция. Резултатът от бърз тест обикновено се потвърждава от рутинен тест за ХИВ.