ELISA (ензимно-свързан имуносорбентен анализ, ELISA - английски) навлиза в живота на практическата медицина някъде другаде през 60-те години на миналия век. Първоначалната му задача е хистологично изследване за научни цели, което се ограничава до търсене и идентифициране на антигенната структура на клетките на живия организъм.
Методът ELISA се основава на взаимодействието на специфични (AT) и свързани антигени (AG) с образуването на комплекс антиген-антитяло, който се открива с помощта на ензим. Този факт навежда учените на идеята, че методът може да се използва за диагностични цели за идентифициране на специфични имуноглобулини от различни класове, участващи в имунния отговор към определена инфекция. И това беше пробив в клиничната лабораторна диагностика!
Методът започва да се използва активно едва в началото на 80-те години, и то предимно в специализирани институции. Първите анализатори ELISA бяха доставени на центрове и станции за кръвопреливане, инфекциозни и венерически болници, тъй като страховитият СПИН, роден на африканския континент, се появи на хоризонта с нас и веднага се присъедини към „старите“ инфекции, изисква незабавни мерки за диагностициране и търсене на терапевтични лекарства, които му въздействат.
Обхват на метода ELISA
Възможностите на ензимния имуноанализ са наистина обширни.Сега е трудно да си представим как може да се направи без такива изследвания, които се използват буквално във всички отрасли на медицината. Изглежда, че ELISA може да направи в онкологията? Оказва се, че може. И то много. Способността на анализа да открива маркери, характерни за определени видове злокачествени новообразувания, е в основата на ранното откриване на тумор, когато той все още не е открит по друг начин поради малкия си размер.
Съвременната клинична лабораторна диагностика (КЛД), в допълнение към туморните маркери, разполага със значителен арсенал от панели за ELISA и ги използва за диагностициране на различни патологични състояния (инфекциозни процеси, хормонални нарушения) и мониториране на фармацевтични лекарства, за да идентифицира ефекта им върху пациента. тяло и, между другото, не само човек. В момента ензимният имуноанализ се използва широко във ветеринарната служба, тъй като "нашите по-малки братя" също са податливи на много заболявания, от които понякога страдат много.
Поради това, ELISA, поради своята чувствителност и специфичност, може да определи от кръвна проба, взета от вена:
- Хормонален статус (хормони на щитовидната жлеза и надбъбречните жлези, полови хормони);
- Наличието на вирусна и бактериална инфекция (HIV, B и C, хламидия, сифилис и, и, както и много други заболявания, причинени от патогенни микроорганизми);
- Следи от жизнена активност на микроорганизми, които са инициирали инфекциозния процес, който е завършил успешно и е преминал към етапа на формиране на имунен отговор към този патоген. Такива следи, тоест антитела, в много случаи остават да циркулират в кръвта за цял живот, което предпазва човек от повторно заразяване.
Каква е същността на IF?
Методът на ензимния имуноанализ позволява да се определи не само наличието на самия патоген (качествен анализ), но и неговото количествено съдържание в кръвния серум на пациента.
Вирусна или бактериална доза значително влияе върху хода на инфекциозния процес и неговия резултат, следователно количественият анализ играе важна роля в диагностиката и лечението на заболявания в различни форми и етапи.
Познавайки обаче ензимно-свързания имуноанализ като метод ELISA, ние дори не се замисляме как той успява да обхване толкова широк спектър от микроорганизми, обитаващи нашата планета, много от които представляват пряка заплаха за здравето и живота на хората и животни. Факт е, че ELISA има много опции (неконкурентни и конкурентни - директни и косвени), всяка от които решава свой собствен проблем и по този начин дава възможност за целенасочено търсене.
За откриване на имуноглобулини от един или друг клас се използва традиционен 96-ямков панел от полистирол (таблетка), в чиито ямки са концентрирани адсорбирани рекомбинантни протеини в твърда фаза. Антителата или антигените, попаднали в ямката с кръвен серум, намират „познат“ обект и образуват комплекс с него (AG - AT), който, фиксиран от ензимния конюгат, ще се прояви като промяна в цвета на ямката при четене на резултатите.
Имуноензимният анализ се извършва на тест-системи с определена специфичност, направени в специални лаборатории и оборудвани с всички необходими реагиращи компоненти. Изследванията могат да се извършват с помощта на шайби ("шайби") и спектрофотометри за отчитане, където е включен най-много ръчен труд. На напълно автоматични машини, освобождаващи лаборанта от монотонно вливане, измиване и други рутинни задачи, разбира се, е по-бързо и по-удобно да се работи, но не всички лаборатории могат да си позволят такъв лукс и да продължат да работят по старомодния начин - на полуавтоматични устройства.
Тълкуването на резултатите от ELISA е в компетенцията на лекаря по лабораторна диагностика, като задължително се взема предвид свойството, присъщо на почти всички имунохимични реакции, да дават фалшиво положителни или фалшиво отрицателни отговори.
Видео: модерен ензимен имуноанализ
Резултати от ELISA на примера на сифилис
ELISA е подходящ за откриване на всички формии освен това се използва в скринингови изследвания. За анализ се използва венозна кръв на пациента, взета на празен стомах. В работата се използват плаки с определена специфичност (AT класове A, M, G) или общи антитела.
Като се има предвид, че антителата при сифилис се произвеждат в определена последователност, ELISA може лесно да отговори на въпроса кога е настъпила инфекцията и на какъв етап е процесът, а декодирането на получените резултати може да бъде представено в следната форма:
- IgM показват продължителността на инфекциозния процес (може да се появи по време на обостряне на хронични възпалителни заболявания);
- IgA показват, че инфекцията е станала преди повече от месец;
- IgG показват, че инфекцията е в разгара си или скорошно лечение, което лесно се установява при събиране на анамнеза.
При тестване за сифилис, отрицателните ямки (и отрицателната контрола) ще останат безцветни, докато положителните (като положителната контрола) ще покажат ярко жълт цвят поради промяната на цвета на добавения по време на теста хромоген. Но интензивността на цвета не винаги съответства на контролата, тоест може да е малко по-бледа или леко жълтеникава. Това са съмнителни резултати, които по правило подлежат на повторно изследване със задължителното отчитане на количествените показатели, получени на спектрофотометъра, но като цяло цветът е пряко пропорционален на броя на имунните комплекси (свързани антигени и антитела). един на друг).
Най-вълнуващият ензимен имуноанализ - ELISA за HIV
Анализът, може би повече от други, представлява интерес за широк кръг от населението, тъй като все още не е възможно да се каже със сигурност, че много социални проблеми (проституция, наркомания и др.) са изчезнали. За съжаление, ХИВ засяга не само тези части от човешкото общество, можете да се заразите при различни обстоятелства, които не са свързани със сексуална безразборност или употреба на наркотици. Но ако има нужда от тест за ХИВ, тогава не трябва да се страхувате, че всички наоколо ще разберат за посещението на такава лаборатория. Сега ХИВ-инфектираните са защитени от закона и тези, които имат съмнения, могат да се обърнат към анонимни офиси, където могат да разрешат проблема без страх от публичност и осъждане.
Ензимният имуноанализ, използван за диагностициране на ХИВ инфекция, е едно от основните стандартни изследвания, които обаче изискват специални условия, тъй като темата е много чувствителна.
Има смисъл да се провежда ELISA за ХИВ след сексуален контакт, кръвопреливане, други медицински процедури, свързани с инфекция, и в края на инкубационния период („серонегативен прозорец“), но трябва да се има предвид, че този период от време не е постоянен. Може да приключи след 14-30 дни или да продължи до шест месеца, така че средната стойност се счита за интервал от 45 до 90 дни. Кръвта се дарява за ХИВ по същия начин, както при други инфекции - от вена на празен стомах. Резултатите ще бъдат готови в зависимост от натрупването на материал в лабораторията и нейната натовареност (от 2 до 10 дни), въпреки че повечето лаборатории дават отговор на същия ден или на следващия.
Какво може да се очаква от резултатите за ХИВ?
ELISA за HIV инфекция открива антитела срещу два вида вирус: HIV-1 (по-често срещан в Русия и други европейски и азиатски страни) и HIV-2 (по-често срещан в Западна Африка).
Задачата на HIV ELISA е да търси антитела от клас G, които се откриват във всички тестови системи, но в по-късен период, и антитела от клас А и М, откривани в рекомбинантни тестови комплекти от ново поколение, което позволява откриването на антитела най-рано етапи (инкубационният период е серонегативен прозорец). От ELISA могат да се очакват следните отговори:
- Първичен положителен резултат: кръвта подлежи на повторна проверка на тестова система от същия тип, но по възможност от друга серия и от друго лице (лаборант);
- Повторното (+) включва ново вземане на кръв от пациент с изследване, подобно на първичния анализ;
- Следващият положителен резултат подлежи на референтен анализ, при който се използват високоспецифични тестови комплекти (2-3 бр.);
- Положителният резултат и в двете (или три) системи се изпраща за имуноблотинг (същият ELISA, но извършен индивидуално върху тестови комплекти с особено висока специфичност).
Заключението за HIV инфекция се прави само въз основа на имуноблотинг. Със заразения се провежда разговор при пълна конфиденциалност. Разкриването на медицинска тайна в Русия, както и в други страни, подлежи на наказателно наказание.
Анализите за хламидия и цитомегаловирус чрез ензимен имуноанализ също придобиха особена популярност, поради факта, че ви позволяват да определите времето на инфекцията, стадия на заболяването и ефективността на терапевтичните мерки.
По време на въвеждането е възможно също да се наблюдава появата на антитела от различни класове.в различни фази на патологично състояние, причинено от инфекциозен агент:
- IgM може да се открие още седем дни след заразяването;
- IgA показват, че инфекцията живее в тялото повече от месец;
- IgG потвърждава диагнозата хламидия, помага да се наблюдава лечението и да се определи неговата ефективност. Трябва да се отбележи, че антителата от клас G остават и циркулират в тялото независимо от продължителността на заболяването, следователно за правилното тълкуване на анализа трябва да се вземат предвид референтните стойности (норми), които, от начина, са различни за всеки CDL: като се вземе предвид марката на тест системата и спецификата на реагентите, включени в комплекта. Нормалните стойности се въвеждат във формуляра до резултата от ELISA.
Що се отнася до това, тук е малко по-различно:антитела от клас М се появяват след около месец и половина, т.е. положителен резултат (IgM +) става във фазата на първична инфекция или по време на реактивиране на латентна инфекция и остава такъв от 4 месеца до шест месеца.
Наличието на антитела от клас G е характерно за началото на първична остра инфекция или реинфекция. Анализът посочва наличието на вируса, но не дава информация на какъв етап е инфекциозният процес. Междувременно определянето на нормата на титъра на IgG също създава трудности, тъй като зависи изцяло от имунния статус на конкретен човек, който обаче се установява чрез откриване на имуноглобулини от клас G. Като се има предвид това поведение на антителата, при диагностицирането на CMVI, става необходимо да се оцени способността на антителата от клас G да взаимодействат с CMV, за да го „неутрализират“ по-късно (AT авидитет). В началния стадий на заболяването IgG се свързва много слабо с антигените на вируса (нисък авидитет) и едва тогава те започват да проявяват активност, следователно можем да говорим за повишаване на авидитета на антителата.
Можем да говорим за предимствата на ензимния имуноанализ дълго време, тъй като този метод успя да реши много диагностични проблеми, използвайки само венозна кръв. Няма нужда от дълго чакане, притеснения и проблеми с вземането на материал за изследване. В допълнение, тестовите системи за ELISA продължават да се подобряват и денят, в който тестът ще даде 100% надеждност на резултата, не е далеч.
Видео: учебен филм на Московския държавен медицински университет. Сеченов за основите на ELISA
ХИВ е бичът на нашето поколение. Какви методи съществуват за диагностициране на ХИВ, задълбочена информация за теста ELISA за ХИВ. Как да вземете, как да интерпретирате резултатите от анализа.
Вирусът на човешката имунна недостатъчност е една от най-страховитите инфекции на нашето поколение.
ХИВ има разрушителен ефект върху нашата имунна система,и ако развитието на болестта не бъде спряно навреме, то може да се трансформира в синдром на придобита имунна недостатъчност. ХИВ се предава чрез директен контакт между партньорите по време на полов акт през мъжките и женските полови органи. Друга причина за инфекция може да бъде навлизането на вируса през кръвта. Това се случва поради използването на нестерилни инструменти, преливане на заразена кръв и дори през поколенията: на дете от заразена майка по време на кърмене.
Досега учените по света се озадачават над създаването на ново поколение лекарства, които могат да лекуват СПИН, но въпреки големите темпове на научния прогрес, вирусът на човешкия имунодефицит продължава да се разпространява по цялата планета.
ELISA - метод за диагностициране на ХИВ
Учените от поколението на 20-ти век разработиха няколко метода за диагностициране на ХИВ, най-важният от които се счита свързан имуносорбентен анализ. ELISA за ХИВ започна да се извършва сравнително наскоро - в началото на деветдесетте години. С течение на времето методът беше усъвършенстван, придоби нови подробности. Сега надеждността на метода ELISA е една от най-високите - около 98%. Съответно този метод се използва все по-често.
ELISA е първият тест, с който пациентът се сблъсква при тестване за ХИВ. Методът ELISA определя наличието на антитела в кръвта. Ако тестът установи наличие на антитела в кръвта, тогава вирусът е наличен. Въпреки това информацията за този тест трябва да бъде подкрепена от други анализи, като имуноблотинг (IB) и метод от последно поколение, полимеразна верижна реакция (PCR).
Антителата са специални протеинови съединения, които се произвеждат от плазмени клетки след реакция на инфекция, навлизаща в тялото (антителата започват да се образуват 1-2 месеца след инфекцията).
Причини за ХИВ
Лекарят ще ви напише направление за анализ, ако сте били в контакт с лице, заразено с ХИВ или има риск от инфекция. Поколения хора, изложени на риск от ХИВ инфекция, включват:
- преминаване на курс на инжекционно лечение в рамките на един месец;
- сексуални отношения без специални средства за защита;
- носители на инфекции, предавани по време на сексуален контакт;
- пациенти след преливане на кръв или инжекция, за да открият причината за съсирването на кръвта през осемдесетте години.
Ако имате съмнения относно своя ХИВ статус и страхове, свързани с възможността от заразяване, препоръчително е незабавно да потърсите помощ във всяко лечебно заведение у нас за цялостен тест за ХИВ. Резултатите от изследванията се получават до един месец. Хората с риск от ХИВ се препоръчват да се изследват на всеки 4 месеца.
Как да вземете анализ
Няма специална подготовка за кръвен тест за ХИВ, но е по-добре следвайте простите правила:
- по-добре е да не ядете вечер, а сутрин да вземете анализ на празен стомах;
- не се препоръчва натоварване на тялото с физическа работа;
- яжте здравословна храна, въздържайте се от цигари и алкохол за известно време;
- за да изключите фалшивите показатели на теста, не трябва да правите анализ след лечение на сериозни заболявания.
Собствениците на патент RU 2515051:
Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите и медицината. Тестова система ELISA за определяне на вероятния момент на инфекция с човешкия имунодефицитен вирус тип 1 (HIV-1), включително HIV-1 група O, в човешки серум (плазма). Тестовата система включва имуносорбент на базата на антигени на човешкия имунодефицитен вирус тип 1 (env HIV-1 и HIV-1 група O), разтвор за разреждане на пробата (RRS) и реактиви за откриване (конюгати, хромоген/субстрат). Изобретението също така се отнася до метод за определяне на вероятното време на инфекция с вируса на човешката имунна недостатъчност тип 1 (HIV-1), включително HIV-1 група O, в човешки серум (плазма) чрез изследване на кръвния серум на пациента с помощта на описания ELISA тестова система. ЕФЕКТ: Изобретението позволява бързо и лесно определяне на вероятния момент на ХИВ инфекция. 2 н.п. f-ly, 4 табл., 2 pr.
ИЗОБРЕТЕНИЕТО се отнася до областта на биотехнологиите и медицината. И може да се използва за определяне на вероятния момент на инфекция с човешкия имунодефицитен вирус тип 1 (HIV-1), включително HIV-1 група O, в човешки серум (плазма).
Разпространението на ХИВ инфекцията остава истински проблем в съвременния свят. Тъй като навременната и висококачествена диагностика е реален инструмент за намаляване на зоната на инфекция с ХИВ, разработването на ефективна тестова система, която може да определи вероятната продължителност на инфекцията, е важна задача на съвременното общество.
Анализът на предшестващото състояние на техниката показа съществуването на редица методи и тестове, предложени от различни автори за определяне на етапите на HIV инфекцията, като се използват различни методи. Известен е например молекулярно-генетичен тест, базиран на определяне на вирусния товар на периферната кръв чрез полимеразна верижна реакция (PCR) (Kravchenko A.V., Serebrovskaya L.V., Golokhvostova E.L. и др. Timazid в комбинация с Chivid и invirase в комплексната терапия на пациенти с ХИВ инфекция - Епидемиология и инфекциозни болести - 1998 г. - № 5 - с.51-52). Известен метод за оценка на етапите на HIV инфекцията (Клинична имунология и алергология, изд. G. Lolor Jr. - M .: Practice, 2000. - S. 585-587), който се състои в определяне на нивото на серумния β 2 - микроглобулин. Описан е метод за диагностициране на етапите на HIV инфекцията (V.V. Pokrovsky et al. "Клинична диагностика и лечение на HIV инфекция". - М.: GOU VUNMC RF, 2001. - P. 11), който се състои в определяне на абсолютния брой на CD4+ лимфоцити периферна кръв. Известен е и метод за диагностициране на етапите на HIV инфекцията, основан на факта, че при изследване на кръвния серум на пациента чрез ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA), оптичната плътност (OD) на първоначалната проба от кръвен серум, отразяваща нивото на на HIV-специфични антитела и OD на първоначалната серумна проба, инкубирана за 10 минути със 100 μl 3,5 М разтвор на натриев изотиоцианат. При намаляване на ОП с 40% или по-малко се диагностицира стадий А - генерализирана лимфаденопатия, с намаляване на ОП в диапазона от 40-60% - стадий В - бациларна ангиоматоза, орофарингеална кандидоза и др., И с намаляване на OP с 60% или повече - етап C - СПИН (RU 2251701).
По този начин анализът на предшестващото състояние на техниката показа, че нито един от съществуващите източници не може да служи като най-близък аналог на заявеното изобретение, тъй като всички тези документи се отнасят до методи и тестове, които определят етапа на HIV инфекцията, и нито един от описаните източници не съдържа технически решения, насочени към определяне на вероятния времеви интервал на заразяване. Изобретението се отнася до тестова система, която определя вероятната продължителност на HIV инфекцията. Анализът на предшестващото състояние на техниката не разкрива подобни решения, насочени към решаване на проблема.
Настоящото изобретение претендира за набор от реагенти "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" за определяне на вероятния момент на инфекция с човешкия имунодефицитен вирус тип 1 (HIV-1), включително HIV-1 група O, в човешки серум (плазма ). Тестът е предназначен за допълнително изследване на ХИВ-позитивни проби с потвърден положителен резултат в имунния блот. Възможно е да се изследват проби с неопределен или отрицателен резултат от изследването в имунния блот, в който се потвърждава наличието на HIV РНК и / или HIV-1 p24 антиген.
Настоящото изобретение също претендира за метод за използване на този набор от реагенти "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" за определяне на вероятния момент на инфекция с човешки имунодефицитен вирус тип 1 (HIV-1), включително HIV-1 група O, в серум (плазма) човешка кръв.
Техническият резултат от претендираното изобретение е да се определи вероятният момент на инфекция с вируса на човешката имунна недостатъчност тип 1 (HIV-1), включително HIV-1 група O, простотата на теста, което позволява използването на претендираното изобретение за епидемиологично наблюдение на динамиката на разпространението на HIV инфекцията, динамиката на откриването на сероконвертори в определена популация (пол-възраст, социални групи от населението), както и при епидемиологичното изследване на случаи и огнища на HIV инфекция.
Същността на предложеното техническо решение се състои в това, че определянето на вероятния период на инфекция с HIV-1 се извършва с помощта на тестова система, която включва имуносорбент на базата на антигени на човешкия имунодефицитен вирус тип 1 (env HIV-1 и HIV-1 група O), проби от разтвор за разреждане (RRS) и реагенти за откриване (конюгати, хромоген/субстрат). Тестовите проби се тестват нативни и се разреждат в разредител за проби. Според резултатите от теста пробите са разделени на "ранни" и "късни". "Ранни" проби - вероятният период на заразяване е до 9 месеца от момента на заразяването, "късни" проби - вероятният период на заразяване е 9 или повече месеца от момента на заразяването. Принадлежността на пробата към "ранна" или "късна" се оценява по процентното понижение на оптичната плътност (ОП) на разредената проба спрямо неразредената.
Тези примери служат за илюстриране на конкретни изпълнения на изобретението и не са предназначени да ограничават правата на заявителя. Всички възможни варианти на изобретението, включително тези, които не са изброени в този раздел, попадат в обхвата на правата на заявителя.
Като имуносорбент се използват рекомбинантни антигени, съдържащи имунодоминантни env региони на HIV-1 и HIV-1 от група O. Конюгат-1 е смес от рекомбинантни HIV-1 gp41 и HIV-1 gp41 антигени от група O, конюгирани с биотин. На първия етап тестовите проби, контролните проби и техните разреждания 1:101, както и PRS се инкубират с конюгат-1. Специфични антитела, присъстващи в тестови и контролни положителни проби, се свързват с антигени, адсорбирани в ямки на микроплака и антигени, конюгирани с биотин и образуват стабилни комплекси. Излишните проби и конюгат-1 се отстраняват чрез промиване. На следващия етап към ямките се добавя стрептавидин, конюгиран с пероксидаза от хрян (конюгат-2). Конюгат-2 се свързва с комплекса антиген-антитяло-антиген, присъстващ в ямката. Излишният конюгат-2 се отстранява чрез промиване и след това хромогенът/субстратът се добавя към ямките. Ямките със свързан конюгат-2 развиват син цвят, който се променя в жълт при добавяне на стоп разтвор. Резултатите се записват с помощта на спектрофотометър.
Като имуносорбент се използват рекомбинантни антигени, съдържащи имунодоминантни env региони на HIV-1 и HIV-1 група О. Използва се един конюгат - смес от рекомбинантни HIV-1 gp41 и HIV-1 gp41 антигени от група О, конюгирани с пероксидаза от хрян . По време на анализа пробите, контролите и техните разреждания, както и PPC, се инкубират с конюгата в покрити с антиген ямки на плаката. Полученият стабилен комплекс след отстраняване на излишната проба и конюгат се проявява чрез добавяне на хромоген/субстрат. При това се получава син цвят, който се променя в жълт, когато се добави стоп разтворът. Резултатите се записват с помощта на спектрофотометър.
Принадлежността на изследваните проби към "ранни" или "късни" се оценява по % спад на ОП при разреждане на пробата, който се изчислява по формулата:
%. П Р С О П
където OPsr. RRS - средна стойност на OP RRS (изчислена от няколко стойности на OP RRS).
Изследваните проби трябва да се разглеждат като "ранни": ако спадът на OD> 40%.
Изследваните проби трябва да се разглеждат като "късни": ако спадът на OD≤40%.
Пример за изчисляване на % спад на ОП при разреждане на проба е показан в таблица 1.
За записване и обработка на резултатите е удобно да използвате програмата Excel. Използването на това приложение ще ви позволи да извършвате изчисления автоматично. Програмата за обработка на резултатите от теста е на диска към комплекта или може да бъде намерена на сайта на компанията.
При разработването и оценката на теста бяха използвани проби от панели за сероконверсия (BBI, Inc., Zeptometrix, САЩ) и проби от ХИВ-позитивен кръвен серум (плазма) с установени вероятни срокове на инфекция. Вероятността за правилно определяне на продължителността на инфекцията с вируса на човешката имунна недостатъчност тип 1 (HIV-1), включително HIV-1 група O, установена от панели за сероконверсия, е 100% (данните са представени в таблица 2), въз основа на серумни проби лица с условно установен период на заразяване (n=129) е 94% (табл. 3, 4; частични данни).
| таблица 2 | ||
| Резултати от тестове на ХИВ-позитивни проби от серум/плазма, определени от панели за сероконверсия | ||
| Панел за сероконверсия | Дни от първото вземане на кръв | Резултат от теста в "DS-IFA-HIV-AT-TERM" |
| BBI PRB 914 | 31 | "рано" |
| BBI PRB 916 | 35 | "рано" |
| BBI PRB 925 | 49 | "рано" |
| BBI PRB 929 | 28 | "рано" |
| BBI PRB 930 | 10 | "рано" |
| BBI PRB 931 | 42 | "рано" |
| BBI PRB 934 | 11 | "рано" |
| BBI PRB 941 | 25 | "рано" |
| BBI PRB 942 | 14 | "рано" |
| BBI PRB 944 | 16 | "рано" |
| BBI PRB 947 | 20 | "рано" |
| BBI PRB 951 | 19 | "рано" |
| BBI PRB 952 | 21 | "рано" |
| BBI PRB 955 | 14 | "рано" |
| BBI PRB 965 | 21 | "рано" |
| BBI PRB 966 | 51 | "рано" |
| BBI PRB 968 | 35 | "рано" |
| BBI PRB 969 | 77 | "рано" |
| ZMC HIV 6243 | 33 | "рано" |
| ZMC HIV 6247 | 30 | "рано" |
| ZMC HIV 9014 | 31 | "рано" |
| ZMC HIV 9017 | 35 | "рано" |
| ZMC HIV 9018 | 33 | "рано" |
| ZMC HIV 9021 | 57 | "рано" |
| ZMC HIV 9022 | 29 | "рано" |
| ZMC HIV 9032 | 55 | "рано" |
| ZMC HIV 9077 | 104 | "рано" |
| ZMC HIV 9079 | 95 | "рано" |
| ZMC HIV 12008 | 42 | "рано" |
Тестът "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" оценява възможността за изследване на проби от кръвен серум (плазма), съдържащи антитела срещу HIV-1 от различни подтипове, включително HIV-1 група O: референтен панел QCS 42-28-327 - 03R (GISC) (подтипове A, B, C) (с изключение на проба № 24, съдържаща антитела срещу HIV-2), 1-ви международен референтен панел анти-HIV (NIBSC код: 02/210) (подтипове A, B, C, E) (с изключение на проба № 5, съдържаща антитела срещу HIV-2), серумни (плазмени) проби, съдържащи антитела срещу HIV-1 група О (№ 1342, K00175, K00259; BioMex). Резултатите показват възможността за изследване на проби от кръвен серум (плазма), съдържащи антитела срещу HIV-1, принадлежащи към различни подтипове, включително група O HIV-1, в теста „DS-ELISA-HIV-AT-TERM“.
Специфичността на комплекта реактиви "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" се определя чрез изследване на проби от донорски кръвни серуми (n=352), които показват отрицателен резултат при ELISA. Специфичността беше 100%. Освен това бяха изследвани 255 проби от кръвен серум (отрицателни при ELISA):
■ 167 проби кръвен серум от бременни жени и инфекциозно болни;
■ 128 проби от кръвен серум от пациенти с различни незаразни заболявания.
Специфичността беше 100%.
Получените данни показват високата ефективност на разработената тест система "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" при определяне на вероятния момент на инфекция с човешки имунодефицитен вирус тип 1 (HIV-1), включително HIV-1 група О, в серум (плазма) човешка кръв.
1. Тестова система ELISA за определяне на вероятния момент на инфекция с човешкия имунодефицитен вирус тип 1 (HIV-1), включително HIV-1 група O, в човешки серум (плазма), характеризираща се с това, че включва имуносорбент на базата на вирусни антигени човешки имунодефицит тип 1 (env HIV-1 и HIV-1 група O), разтвор за разреждане на пробата (RRS) и реагенти за откриване, които са конюгати, хромоген/субстрат.
2. Метод за определяне на вероятното време на инфекция с вируса на човешката имунна недостатъчност тип 1 (HIV-1), включително HIV-1 група O, в човешки серум (плазма), въз основа на различни нива на антитела в зависимост от продължителността на инфекцията , включително разделяне на тестовата проба на две части и разреждане на една от тях; изследването на двете (нативни и разредени) части от пробата от кръвен серум на пациента, като се използва тестовата система за ензимен имуноанализ, описана в параграф 1; определяне на оптична плътност (OD) на нативни и разредени проби и RRS; изчисляване на средната стойност на ОП РРС; изчисляване на процентното спадане на ОП на разредената проба спрямо неразредената по формулата
%. П Р С О П
в същото време вероятният период на инфекция се счита за "ранен", ако спадът на OD> 40%, и като "късен" - ако спадът на OD е 40%.
Подобни патенти:
Изобретението се отнася до компютърен метод, използващ биохимични бази данни при разработването на нови протеинови съединения. Дизайнът се извършва от оператора с помощта на специално написана програма PROTCOM, базирана на използването на база данни от протеинови пентафрагменти.
Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите и се отнася до метод за откриване на О-гликозилирани протеини в клетъчни хомогенати, подготвени за протеомен и фосфопротеомен анализ.
Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите и имунологията. Осигурено е моноклонално антитяло и негови антиген-свързващи части, които специфично свързват С-края или централната област на фактора за инхибиране на миграцията на макрофагите (MIF).
Изобретението се отнася до областта на молекулярната биология и медицинската диагностика. Предложен е метод за откриване на протеини в амилоидно състояние, при който се получава проба от лизат на дрождена култура или тъкан на бозайник, към пробата се добавя йонен детергент, протеините в амилоидната форма се концентрират върху целулозна ацетатна мембрана и те се откриват с помощта на аптамери, техните конюгати или антитела, специфични за амилоидната форма на протеини.
Изобретението се отнася до биотехнологиите, по-специално до ензимните имуноанализи, и е метод за получаване на вградени контролни проби за ензимни имуноанализни тестови системи за определяне на инфекции от групата TORCH.
Изобретението се отнася до медицината, а именно до гинекологията, и може да се използва за индивидуален подбор на препарати, съдържащи пробиотични щамове лактобацили, за ефективна интравагинална терапия.
Изобретенията се отнасят до реактивен състав на сензор-анализатор, адаптиран да подпомага определянето на концентрацията на аналита в течна проба, до методи за определяне на концентрацията на аналита в течна проба и до метод за прилагане на анализатора сензорен реагентен състав към субстрат чрез ситопечат.
Група изобретения се отнася до ветеринарната медицина и се отнася до адювантни състави, съдържащи комбинация от Quil A или неговата пречистена фракция, холестерол, диметилдиоктадециламониев бромид (DDA), полиакрилова киселина (CARBOPOL) и CpG и/или N-(2-дезокси-2). -L-левциламино-р-D-глюкопиранозил)-N-октадецилдодеканамид ацетат; методът за получаване на такива адювантни състави и използването на такива адювантни състави в имуногенни и ваксинни състави с различни антигени.
Настоящото изобретение се отнася до областта на биотехнологиите и медицината. Предложен е метод за създаване на антитяло и неговите функционални фрагменти, насочени срещу туморен антиген, експресиран върху повърхността на тумор, който е резистентен към поне едно антитуморно съединение, базиран на използването за имунизация на натрошен хомогенат и/или суспензия и/ или клетъчен лизат, получен от такива тумори. Също така се разглежда използването на метода съгласно изобретението за производството на моноклонални антитела и техните функционални фрагменти, моноклонални антитела, получени по този метод, кодиращи техните нуклеинови киселини, експресионен вектор, клетка гостоприемник и метод за производство на антитела, използвайки ги , както и хибридоми, способни да секретират тези антитела, използването на антитела и техните функционални фрагменти за производството на лекарства, антитуморен състав и използването му като лекарство. Това изобретение може да намери допълнително приложение при лечението на резистентни тумори. 16 н. и 26 з.п. f-ly, 7 ill., 4 pr., 6 tab.
Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите и медицината. Тестова система ELISA за определяне на вероятния момент на инфекция с човешкия имунодефицитен вирус тип 1, включително HIV-1 група O, в човешки кръвен серум. Тест системата включва имуносорбент на базата на антигени на вируса на човешката имунна недостатъчност тип 1, разтвор за разреждане на проби и реактиви за откриване. Изобретението също така се отнася до метод за определяне на вероятното време на инфекция с вирус на човешка имунна недостатъчност тип 1, включително HIV-1 от група О, в човешки кръвен серум чрез изследване на кръвния серум на пациента с помощта на описаната система за ензимен имуноанализ. ЕФЕКТ: Изобретението позволява бързо и лесно определяне на вероятния момент на ХИВ инфекция. 2 н.п. f-ly, 4 табл., 2 pr.
А.П. ОБРЯДИНА, Т.И. УЛАНОВА
LLC "Научно-производствено обединение "Диагностични системи",
Нижни Новгород
ЕНЗИМНИ ИМУННИ ТЕСТ СИСТЕМИ "DS-ELISA-HBeAg" и "DS-ELISA-anti-HBe" ЗА СПЕЦИФИЧНА ДИАГНОСТИКА И ПРОГНОЗА НА ИЗХОДИТЕ НА ОСТЪР И ХРОНИЧЕН ХЕПАТИТ B
Хепатит B е вирусно инфекциозно заболяване, характеризиращо се с тежко
възпалително чернодробно заболяване. Приблизително 1% от смъртните случаи се случват в
остър период на заболяването, в 4-10% от случаите има трансформация в хронична
процес с възможно образуване на последваща цироза на черния дроб и първична
хепатокарциноми.
Въпреки тенденцията за намаляване на заболеваемостта от остър хепатит В, продължава да се формира епидемиологично опасна група от пациенти, които за първи път са диагностицирани с хроничен вирусен хепатит, както и група от носители на причинителя на заболяването. Остава неблагоприятна прогноза, свързана с високата честота на хепатит В сред населението в репродуктивна възраст, както и сред юношите.
Ето защо въпросите за лечението, профилактиката и диагностиката на хепатит В са особено актуални.Понастоящем методите за ензимен имуноанализ се използват широко за откриване на маркери на тази инфекция. Най-важните серологични маркери на HBV включват е-антиген (HBeAg) и антитела срещу е-антиген (anti-HBe). HBeAg се свързва с висока кръвна инфекция, което показва активна репликация на вируса на хепатит B (HBV). Установено е, че високите титри на HBeAg съответстват на висока активност на ДНК полимераза и винаги са съчетани с откриване на пълни частици на Дейн. Когато серум, съдържащ HBeAg, навлезе в кръвта на здрав човек, рискът от инфекция е много порядък по-висок, отколкото след сероконверсия.
При остър хепатит B HBeAg се открива в кръвта в ранните стадии на инфекциозния процес още при първите клинични прояви на заболяването, една седмица след появата на HBsAg. Острият хепатит В (AHB) с цикличен курс се характеризира с краткотрайна циркулация на HBeAg. Скоро, на 2-3 седмица от иктеричния период, се появява анти-HBe, което позволява да се предвиди благоприятен изход от заболяването.
Анти-HBe циркулират в кръвта в продължение на 2-5 години, по-рядко в продължение на няколко месеца.
Началото на HBeAg-antiHBe сероконверсия бележи рязък спад в активността
инфекциозен процес. Откриването на HBeAg в кръвта на пациенти след 2 месеца от заболяването показва хронифицирането на патологичния процес. В този случай анти-HBe може да се образува много години след появата на антитела срещу HBcAg или изобщо да не се открие.
Появата на анти-HBe може да има неблагоприятна прогностична стойност при
остър период на HBV в тежки форми, което съответства на мутация в предядрената зона с
образуването на HBV "e-" щам.
целтази работа беше разработката на много чувствителни и специфични
ELISA тест системи за откриване на HBeAg и anti-HBe и оценка на основните им характеристики.
Материали и методи.
1. Система за имуноензимен анализ "DS-ELISA-HBeAg". Валидно начало на теста
са поликлонални кози антитела към рекомбинантен HBeAg, произведени от NPO Diagnostic Systems, Нижни Новгород, адсорбирани върху твърдата фаза, и конюгат, който е поликлонални кози антитела към рекомбинантен HBeAg, белязани с пероксидаза от хрян, произведени от NPO Diagnostic Systems, Нижни Новгород. Схемата за анализ е едноетапна "сандвич".Общото време за реакция е 1,5 часа. Серумната проба се анализира неразредена.
2. ELISA тест система "DS-ELISA-anti-HBe". Основата на теста е
рекомбинантен HBeAg (AHBV 102), произведен от NPO Diagnostic Systems,
Нижни Новгород, адсорбиран върху твърдата фаза и анти-IgG конюгат с пероксидаза от хрян, произведен от Sorbent Service, Москва. Реакцията протича на два етапа. Тестовият серум се добавя към имобилизирания антиген в разреждане 1/10 и след инкубиране и отстраняване на несвързаните компоненти се откриват специфични имунокомплекси с помощта на миши моноклонални антитела срещу човешки IgG, белязани с пероксидаза от хрян.
3. За оценка на разработените тест системи са използвани 2178 серумни проби
кръв. От тях 480 проби са от здрави донори. 1680 проби представляват
са проби от кръвен серум, съдържащи различни маркери на вируса на хепатит В.
Осемнадесет проби са получени във времето от пациенти с клинична диагноза остър вирусен хепатит В. Преди това всички проби бяха тествани за наличие на HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc с помощта на тестови системи, произведени от NPO Diagnostic Systems, Нижни Новгород: "ELISA-HBsAg / m", "DS-ELISA-HBeAg", " DS-ELISA-анти-HBe", "ELISA-анти-HBc".
4. Сравнителната оценка на разработените тестови системи беше извършена с помощта на
търговско лекарство "Monolisa HBe", производство на BIO-RAD, Франция;
Резултати и дискусия.НПО "Диагностични системи" разработи 2 нови диагностични комплекта: "DS-ELISA-HBeAg" и "DS-ELISA-anti-HBe". Тест системата "DS-ELISA-HBeAg" е предназначена за откриване на е-антигена на вируса на хепатит В в серума (плазмата) на човешка кръв чрез имуноензимен анализ и може да се използва за специфична диагностика, определяща активността на инфекциозния процес , прогнозиране на тежестта и изхода на хепатит B.
Тест системата "DS-ELISA-anti-HBe" е предназначена за откриване на IgG антитела към е-антигена на вируса на хепатит B в човешки серум (плазма) и може да бъде
използвани за прогнозиране на хода на инфекциозния процес и проследяване на текущата терапия за хепатит В.
За да се проучи спецификата на новите тестове, разпределението беше оценено
оптична плътност (OD) на проби от кръвен серум, съдържащи и несъдържащи
HBeAg или анти-HBe. Използвани са проби от кръвен серум от здрави донори и проби от кръвен серум, избрани за различни маркери на вируса на хепатит В.
станции за кръвопреливане. Резултатите от изследването показват значително разделение на двете популации. Стойностите на OD на серумни проби, които не съдържат HBeAg, варират от 0,011 до 0,111, а основният пик на серумни проби, съдържащи HBeAg, варира от 2,186 до 3,186 (Фигура 1а).
Фиг.1а. Разпределение на OD на съдържащи и несъдържащи серумни пробиHBeAgв тест системата "DS-ELISA-HBeAg»
Пикът, съответстващ на групата серуми с ниска оптична плътност (0,3-0,6), вероятно е серумни проби, взети в ранните етапи на инфекциозния процес.
Още в инкубационния период HBsAg и HBeAg редовно се регистрират в кръвта на пациентите, което потвърждава тяхната потенциална епидемиологична опасност.
Диапазон на оптична плътност на серумни проби, несъдържащи анти-HBe
беше в диапазона от 0,002 до 0,122, а основният пик OD на серумни проби, съдържащи анти-HBe, беше в диапазона от 2,431 до 3,231 (Фигура 1b).
Ориз. 1б. Разпределение на OD на серумни проби, съдържащи и несъдържащи анти-HБъда, в тест системата „DS-ELISA-анти-HBeAg»
Изследвани са особеностите на разпределението на OD на анти-HBe положителни проби.
серум, съдържащ ( н=78) и не съдържа HBsAg ( н=56). 
Ориз. 2а. HBe-положителни серумни проби, съдържащиHBsAgв тест системата "DS-ELISA-анти-HBe».
Фиг.2б. Характеристики на разпределението на ОП анти-HBe-положителни серуми, които не съдържат HBsAgв тестовата система "DS-ELISA-анти-HBe».
Оптичните плътности на 87% от анти-HBe-позитивните серумни проби, които не съдържат HBsAg, варират от 0,41 до 0,81 (Фигура 2b). В същото време само 14% от анти-HBe-позитивните серуми, съдържащи HBsAg, имат OD в този диапазон (Фигура 2а). Известно е, че във фазата на късна реконвалесценция с отрицателна реактивност към HBsAg има постепенно намаляване на титрите на антителата към HBeAg (Фигура 2b). Следователно е възможно преобладаващата концентрация на анти-HBe-положителни проби да съответства на OD по-малко от 0,8.
Получените данни показват надеждността на разделянето на положителни и
отрицателни проби от кръвен серум, независимо от стадия на заболяването. Изследването на чувствителността и специфичността на тестовите системи "DS-ELISA-HBeAg" и "DS-ELISA-antiHBe" е проведено в сравнение с теста "Monolisa HBe" ("BIORAD", Франция) (таблица 1).
маса 1
Сравнителни характеристики на чувствителността и специфичността
тест системи DS-ELISA-HBeAg и DS-ELISA-antiHB
| Индекс | Дефиниция на HBeAg | Дефиниция на анти-HBe |
||
| NPO "DS", DS-ELISA-HBeAg | БИО-РАД, "Монолиза HBe" | НПО "ДС", DS-ELISA-antiHBe | БИО-РАД, |
|
| Количество изследвани проби | 67 | 67 | 32 | 32 |
| Разкрити положителен проби | 47 | 47 | 16 | 16 |
| Разкрити отрицателен проби | 20 | 20 | 16 | 16 |
Данните, показани в таблица 1, показват 100% съответствие между резултатите.
Известно е, че комбинираната индикация на HBeAg и anti-HBe, особено тяхната количествена оценка, има допълнителна прогностична стойност. Бързото повишаване на анти-HBe титъра характеризира активен хуморален имунен отговор и практически елиминира заплахата от хронифициране. Анализирахме промяната в съдържанието на HBeAg/anti-HBe в проби от кръвен серум на пациенти с клинична диагноза остър вирусен хепатит В (таблица 2).
таблица 2
Динамика на HBeAg/anti-HBe сероконверсия при пациенти с остър хепатит В
| Изследвани болен | Ден на вземане на кръвна проба* | HBeAg | анти-HWe Реф./опц. | Анти-HBc | анти- HBc IgM |
|
| 1 | 1,4+ | 2,1+ | + | + | + |
|
| 12 | 0,5- | 1,0+ | + | + | + |
|
| 21 | 0,3- | 1,3+ | + | + | + |
|
| 1 | 1,2+ | 1,2+ | + | + | + |
|
| 5 | 0,4- | 1,0+ | + | + | + |
|
| 13 | 0,2- | 2,5+ | + | + | + |
|
| 1 | 1,2+ | 0,6- | + | + | + |
|
| 21 | 0,2- | 4,6+ | + | + | + |
|
| 30 | 0,2- | 9,7+ | + | + | + |
|
| 1 | 2,1+ | 0,5- | + | + | + |
|
| 8 | 0,6- | 1,1+ | + | + | + |
|
| 28 | 0,3- | 2,8+ | + | + | + |
|
| 1 | 0,7- | 2,2+ | + | + | + |
|
| 8 | 0,3- | 2,2+ | + | + | + |
|
| 15 | 0,3- | 2,8+ | + | + | + |
|
| 38 | 0,2- | 3,0+ | + | + | + |
|
| 6 | 1 | 1,1+ | 4,4+ | + | + | + |
| 14 | 0,5- | 3,8+ | + | + | + |
* от постъпване в болница
Всички серуми са тествани за наличие на серологични маркери.
OGV: HBsAg, анти-HBc, анти-HBc IgM. Периодът на наблюдение варира от 13 до 38 дни. При пациенти № 1, № 2 и № 6, анти-HBe се открива вече на фона на намаляване на титъра на HBeAg. При пациенти № 3 и № 4 анти-HBe се появяват след изчезването на HBeAg от кръвния серум съответно на 21 и 8 ден. Анализът на откриването на HBeAg в кръвния серум на пациент № 5 при приемане в болницата показа отрицателен резултат. В същото време, превръщането в анти-HBe е регистрирано още на първия ден от изследването.
Всички субекти показват тенденция към повишаване на титъра на антителата срещу HBeAg в
кръвен серум, което позволява да се предвиди благоприятната динамика на клиничните
прояви на OGV и бързо възстановяване.
Изследването на нови тестови системи показа тяхната висока диагностична надеждност. Резултатите от сравняването на DS-ELISA-HBeAg" и "DS-ELISA-antiHBe" показаха 100% съответствие с теста "Monolisa HBe".
При изследване на серумни проби от пациенти с хепатит В в динамика, тестове
потвърдена висока чувствителност и специфичност.
Краткото време на инкубация на тестовите проби и конюгата (1 час) дава възможност да се определи правилната тактика за провеждане на терапевтични мерки в най-кратки срокове. Създадените тест системи са лесни за настройка, икономични (необходими са 50 µl серум за определяне на HBeAg и 10 µl серум за определяне на anti-HBe). Висококачествените характеристики на тестовете позволяват успешното им използване при прогнозиране на хода на инфекциозния процес и проследяване на провежданата терапия на хепатит В.
ЛИТЕРАТУРА
1.Майер К.П.Хепатит и последствия от хепатит / K.P. Майер.– М., GEOTAR, Медицина, 1999.- C.720
2.Онищенко Г.Г.Разпространението на вирусен хепатит като заплаха за националната сигурност / G.G. Онишченко, Л.А. Дементиева // Вестник по микробиология. –2003.-№4.- С.93-99.
3.Соринсън С.Н.Вирусен хепатит / S.N.Sorinson. - Санкт Петербург, Теза, 1997.- 306 с.
4. Баумайстер М.Специфични епитопи за антиген на вируса на хепатит B и ограничения на търговските анти-HBe имуноанализи / M. Baumeister // Journal of Medical Virology.- 2000.-N 60.- P.256-263.
5.Кейн М.Глобална програма за контрол на инфекцията с хепатит В / М. Кейн// Ваксина. - 1995.-N131(Доп. 1).- Р.47-6. Shunichi Satотносно. Вирусни щамове на хепатит B с мутации в основния промотор при пациенти с фулминантен хепатит / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Annals of Internal Medicine. - 1995.- N122.- R.241-248.
7. Оу Дж.-з. Молекулярна биология на антигена на вируса на хепатит В./ J.-H.Ou // Journal of Gastroenterology and Hepatology. - 1997.- № 12 (Suppl.1) - Р. 178-187.
8.Тиолез П.Вирусът на хепатит В. / P.Tiollais, C.Pourcel, A.Dejean // Nature. - 1985. - P.317, 489-495
Публикувано: Ж. "Клинична лабораторна диагностика" - 2005.-№6-С.-34-37
Изследването на кръвни проби с помощта на ELISA за HIV инфекция е един от най-ранните и надеждни диагностични методи. Ензимният имуноанализ е едно от малкото изследвания заедно с PCR, които с висока степен на вероятност потвърждават или опровергават такава ужасна диагноза като ХИВ инфекция или СПИН. От откриването на първите случаи на инфекция с вируса на имунната недостатъчност в Съветския съюз, а това е 1983 г. Лекарство, което да излекува напълно тази инфекция, както и ваксина за нея, не е изобретено, но този процес е в процес на активно развитие. Междувременно само ранната диагностика на ХИВ инфекцията ви позволява да държите патологичния процес под контрол.
Информационна екскурзия за HIV инфекцията
Вирусът на човешката имунна недостатъчност е ретровирус, който причинява бавно протичане на заболяването. Прониквайки в тялото, вирусът на имунната недостатъчност засяга предимно лимфоидната тъкан. Здравият имунитет произвежда Т-лимфоцити, за да разпознае новопоявилия се вирусен агент. След това дайте информация на антителата, по какви признаци да разпознаят вируса на имунната недостатъчност и да го унищожат. Процесът на "разпознаване" на вируса на имунната недостатъчност се осъществява с помощта на CD4 рецепторни протеини. Но точно на този етап се наблюдава нещо странно, нещо, което дълги години не ни позволява да победим чумата на 20 век.
CD4 имунната клетка влиза в контакт с вируса на имунната недостатъчност, за да разпознае чужд агент. В този момент вирусът на имунната недостатъчност се прикрепя към лимфоцитната мембрана, слива се с рецепторната обвивка и въвежда капсула със своята генетична информация и специфични вирусни протеини в имунната клетка. И клетката, изпратена до изчисляването на вируса на имунната недостатъчност, отсега нататък сама се заразява. Но всичко се случва, за съжаление, не с една клетка, а в много голям мащаб. Човешката имунна система, в отговор на вече "бивши" и вече заразени клетки, създава нови антитела. Но вирусите на имунната недостатъчност, съгласно схемата, описана по-рано, отново и отново улавят защитни клетки.
Така човешкият имунитет попада в омагьосан кръг. Единственият начин да се помогне на тялото е да се проведе високоактивна антиретровирусна инфекция (HAART). И също така преминете към напълно здравословен начин на живот и хранене, което ще освободи големи ресурси на имунитета от ненужна работа. Учени от цял свят обединиха усилията си и непрекъснато провеждат изследвания в търсене на ефективен лек срещу ХИВ инфекцията.
Не толкова отдавна беше проведен експеримент с протеина CCR5, който осигурява вродения имунитет на организма на определена част от хората срещу HIV инфекция. Учените са подложили кръвното вещество на човешки доброволци на генна терапия, за да въведат CCR5 в Т-хелперните клетки. При всички пациенти това доведе до масивно намаляване на броя на ретровирусната ДНК. И при един пациент вирусът на имунната недостатъчност беше напълно елиминиран чрез този метод. Въз основа на този експеримент все още може да се предположи само в единичен случай за успешна победа над ужасната чума на 20 век.
От 2016 г. тази дейност е напреднала значително. Получени са зашеметяващи резултати от деветдесет процента унищожаване на вируса на имунната недостатъчност с помощта на атакуващи антитела, секретирани от мускулната тъкан, заобикаляйки уловения имунитет. За да направите това, специален ген беше имплантиран в мускулната тъкан на експериментални живи същества, произвеждайки същите тези клетки убийци за унищожаване на HIV инфекцията. Но този метод все още не е използван при хора, въпреки че е планиран през следващите години.
Освен това няма смисъл да падате духом. И е по-добре да идентифицирате вируса на имунната недостатъчност възможно най-рано, което може да се направи с помощта на ELISA, ако има риск от инфекция. И ако диагнозата бъде потвърдена, поддържайте имунитета си чрез HAART, докато не бъде оповестено ново лекарство за HIV инфекцията.
Диагностика на HIV инфекция
Методът ELISA за HIV инфекция е насочен към откриване на антитела срещу вируса на имунната недостатъчност в проба от човешка кръв. Веднъж попаднали в тялото, ретровирусите, които включват HIV инфекцията, не започват веднага да улавят активно CD4 имунни клетки (Т-лимфоцити). Но не трябва да чакате, докато агресивните агенти започнат смъртоносна дейност в тялото. Не е тайна, че за всяко заболяване и ХИВ инфекцията не е изключение, колкото по-рано започне терапията, толкова по-ефективно е лечението.
Що се отнася до вируса на човешката имунна недостатъчност, случаи на пълно излекуване не са официално регистрирани. Но това изобщо не означава, че трябва да се откажете и да оставите болестта да си върви. Хората с HIV инфекция живеят до 75-80 години, при условие че са открити в началния етап и са на постоянна поддържаща терапия.
Методът на ензимния имуноанализ за диагностика на ХИВ инфекцията има висока надеждност от около 97–99%. Но именно тази малка част от 1–3% може да даде фалшиво положителен или фалшиво отрицателен резултат при диагностицирането на HIV инфекция с помощта на ELISA. За тези цели, за да се потвърдят или опровергаят окончателно показанията на ензимния имуноанализ, се използва анализ, наречен имуноблот (IB).
Какво представляват методите ELISA и IB за HIV инфекция
Ензимният имуноанализ за HIV инфекция от 4-то поколение е насочен не само към търсене и идентифициране на патогенни клетки, но и към определяне на техния брой. Следователно, един ензимен имуноанализ съчетава както качествено, така и количествено изследване. Методът ELISA от 4-то поколение за HIV инфекция за период от шест седмици от момента на предполагаемата инфекция ще покаже 100% висока надеждност на резултатите.
Ензимният имуноанализ се основава на взаимодействието на специфични антитела и сродни антигени. Благодарение на специален ензим се образува комбинацията "антиген-антитяло". За да се извърши тази реакция за откриване на имуноглобулини срещу ХИВ инфекция, кръвна проба се поставя в полистиренов панел с 96 ямки, в които рекомбинантните протеини са в твърда форма (сорбирани). Антигените или антителата, намиращи се в контейнера с кръвен серум, разпознават познатия им обект и образуват с него съединението “AT-AG”. За установяване на антитела срещу вируси на имунна недостатъчност тип 1 и 2 се използва и тестът DS IFF за HIV AG-AT.
Предимства на метода ELISA за HIV инфекция от 4-то поколение:
- Висока надеждност, над 96%. Фалшивите резултати са по-често причинени не от самия анализ, а от неправилна подготовка или скорошно респираторно заболяване.
- Определяне както на наличието, така и на изобилието на имуноглобулини.
- Възможност за проследяване на резултата от ХИВ терапията.
- Скоростта на получаване на резултатите от тест за ХИВ, която е няколко часа, ако се извършва в диагностичен център.
- Анализът за HIV инфекция четири, чиято имуноензимна реактивност е значително по-висока от предшествениците му, е информативен по време на серологичния прозорец на вируса на имунната недостатъчност.
Имуноблотингът е скрининг и се прилага за определяне на вида на антигена. Проучването за скрининг на IB се използва като тест за проверка на ХИВ инфекцията 5-7 седмици след ELISA. Методът IB се основава на използването на електрофореза за разделяне на антигени на имунодефицитни вируси. Процесът на разделяне на антигените позволява да се открият специфични имуноглобулини за всеки специфичен антиген на HIV инфекцията.
Имуноблотинг се използва, когато ензимен имуноанализ за HIV инфекция покаже фалшиво положителен или фалшиво отрицателен резултат два пъти подред. Подозрението може да възникне при липса или, обратно, наличие на характерни симптоми на HIV инфекция. Въпреки че и тук може да има различни вариации.
Тълкуване на резултатите от ELISA за HIV инфекция
В случай, че ELISA plus се потвърди от IB скрининга като положителен, няма съмнение, че пациентът има вирус на имунна недостатъчност в тялото. Но ако, например, IFF е положителен за ХИВ и имуноблотът е отрицателен, тогава те заключават, че инфекцията е „минус“, т.е. че отсъства.
Само в такава ситуация пациентът все още се изпраща за допълнителен преглед, за да се изключи със сигурност вируса на имунната недостатъчност.
И с ензимно-свързан имуносорбентен анализ за ХИВ от 4-то поколение „минус“ и положителен имуноблотинг е възможно друга инфекция да присъства в тялото. Възможно е човек да има някакво автоимунно заболяване, онкологичен процес, понякога псориазисът на кожата или ставите дава фалшиво положителни резултати както на ELISA, така и на IB.
Друг вариант, когато ензимен имуноанализ за ХИВ инфекция показва резултат „минус“ и имуноблот също с „минус“ стойност, човек може само да се радва тук поради липсата на вируса на имунната недостатъчност. Но ако има специфични признаци, присъщи на HIV инфекцията или ако човек е в близък контакт с HIV позитивен пациент. Тогава ще е необходимо да се проведе допълнителна диагностика, например полимеразна верижна реакция (PCR). Освен това, при съмнителни индикатори „минус“ или „плюс“, на пациента се препоръчва да вземе отново кръв след 4 и за предпочитане 6 месеца.
Нормата и отклонението на броя на Т-лимфоцитите при HIV инфекция:
- Нормата на Т-клетките е от 1000 до 2900 µl.
- СПИН ранен 500 до 200 µl.
- СПИН късно по-малко от 200 µl.
Болестта е по-лесна за предотвратяване, отколкото за лечение - това е добре известна мъдрост. След разпространението на свободния морал в обществото се появиха голям брой различни венерически болести. ХИВ инфекциите и СПИН все още се класифицират като нелечими болести. Начинът на предаване е предимно по полов път и по кръвен път. Невъзможно е да се защити сто процента от едно заболяване. Има много непредвидени ситуации, дори и за хората, които водят морален и чист начин на живот. В ситуация на повишен риск от заразяване с ХИВ и други опасни инфекции кръвната диагностика е безценна.
Във връзка с