Цитохимические методы преследуют отождествление химических и ферментных веществ в клетках, используя для этого цветные реакции. Цитохимические препараты сохраняют клеточную структуру, что допускает выявление клеток и внутриклеточную локализацию исследувмого составного. Вот почему в гематологии отдается предпочтение не биохимическим, трудоемким, разрушающим клеточную структуру о относящимся к весьма разнородной клеточной популяции, а цитохимическим способам.
Цитохимия доказала, что среди морфологически одинаковых клеток имеются существенные химические и ферментативные различия.
Гликоген (реакция ШИК) (PAS) - метод Гочкисс - Мак Минус
Принцип ШИК-реакции . Полисахариды выявляются путем реакции, окисляющей спиртные группы, которые преобразуются в альдегидные группы, и отождествления последних путем цветной реакции реагентом Шифф.
Реагенты для ШИК-реакции : 1. Закрепляющий смесь спирт-формалин: 9 частей абсолютного этилового спирта +1 часть 40% формалина; сохранять при температуре +4°.
2. Периодння кислота, 1% водный раствор. Раствор бесцветный. Хранить в бутылке из коричневого стекла, в темноте, при лабораторной температуре. Пожелтевший раствор неприменим.
3. Реагент Шиффа. Развести 1 г основного фуксина в 200 мл дистилированной воды при температуре кипения. Болтать 5 минут, охладить до температуры 50°, профильтровать и добавить 20 мл нормальной соляной кислоты. Охладить до 25°, добавить 2 г метабисульфита натрия или калия, которые полностью обеспечивают раствор. Раствор должен простоять сутки в условиях темноты и холода (+4°). Затем добавить 2 г активированного угля, поболтать 1 мин. и профильтровать.
Полученный фильтрат прозрачный и бесцветный. Допускается слегка желтоватый оттенок; если раствор розовеет, становится неприменимым. Хранить при температуре +4° в герметически закрытой бутылке из коричневого стекла.
4. Зеленый светлый -1% водный раствор.
5. Диастаз: неразжиженная слюна человека или 0,1% раствора амилолитического-диастатического фермента в физиологическом солевом растворе.
Техника проведения ШИК-реакции
1) 10-тиминутное закрепление мазков смесью спирт-формалин; промывание дистилированной водой;
2) окисление 1% раствором периодной кислоты, 10 мин.; промывание дистилированной водой;
3) окраска реагентом Шиффа в накрытой посуде, в условиях темноты и холода, в течение 2 часов; промывание проточной водой;
4) контрастная окраска 1% зеленым-светлым в течение 1 минуты; промывание проточной водой.
Контрольный закрепленный мазок подвергается инкубации диастазом, 60 мин. в условиях комнатной температуры для выборочного удаления гликогена. После промывания дистилированной водой подвергается обработке по обычному методу.
Оценка результатов ШИК-реакции
Гликоген , окрашенным в багряно красный- цвет, представляется в виде зерен или рассеянный. Для контроля реакции используются зрелые гранулоциты мазка. Помимо гликогена ШИК положительную реакцию дают и другие вещества углеводной природы, такие как, муцин, мукопротеины, цереброзиды, фибрин. Дифференциация гликогена от этих составных осуществляется путем предварительной обработки диастазом, после чего гликоген более не окрашивается.
В гранулоцитах гликоген находится в рассеянном виде уже на стадии промиелоцита и начинает увеличиваться по мере созревания. В нормальных условиях лимфоциты отрицательны или в 20% из них могут находиться несколько мелких зерен гликогена. Моноциты отрицательные либо имеют тонкую зернистость.
Интенсивность окраски определяется полуколичественно. В реакция ШИК отражается в виде гликогенного показателя, или среднего показателя реакции (Астальди). Нормальный показатель гликогена колеблется в пределах от 0,10 до 0,30. Обычно лишь у патологических лимфоцитов наблюдается степень нагрузки более 3.
Значилось метода ШИК-реакции
:
а) При постановке дифференциального диагноза отдельных цитологических видов острой лейкемии:
- Миелобласты и промиелоуиты ШИК-отрицательные или приобретают слабую диффузную окраску. Тела Ауера дают положительную реакцию, которая ослабевает после переваривания со слюной.
- Лимфобласты при острой лейкемии и лимфосаркоме дают резкую ШИК-положительную реакцию в виде зерен или крупных блоков гликогена.
- Эритробласты при эритремии и острой эритролейкемии дают резко положительную рассеянную или зернистую реакцию, в противоположность нормальным эритробластам, которые ШИК-отрицательные;
- Моноцитоидные б ласты непостоянно слабо положительные, с тонкой зернистостью.
б) В целях постановки диагноза и наблюдения за эффективностью лечения при хронической лимфатической лейкемии: завышенный показатель гликогена указывает на тяжелую форму заболевания и тяжкий прогноз.
Рост гликогена
в патологических лимфоцитах не характерное для лейкемии явление, оно объясняется ростом метаболической активности при любом виде лимфоидной пролиферации.
в) Для дифференциации клеток Гоше от иных макрофагов с накоплением.
Реакция Шика указывает на наличие или отсутствие необходимого уровня антитоксина в крови для защиты организма от дифтерии. В настоящее время эта реакция применяется реже в связи с внедрением в практику более чувствительных методов (РПГА).
Реакцию Шика проводят привитым против дифтерии детям с законченной вакцинацией и не менее чем с одной ревакцинацией. В возрасте 13 лет и старше реакцию можно ставить и с неизвестным прививочным анамнезом. Состояние противодифтерийного иммунитета проверяют не ранее чем через 6 месяцев после последней ревакцинации и не ранее двух месяцев после перенесенного острого заболевания.
Реакцию Шика ставят также в коллективах, неблагополучных по дифтерии, вновь прибывшим детям, когда нет сведений о прививках. Детям с отрицательной реакцией Шика дополнительные прививки не делают. Дополнительные прививки независимо от иммунной прослойки в коллективе проводят детям с положительной и сомнительной реакциями.
Результаты реакции Шика заносят в карту учета профилактических прививок (ф. 63) с указанием даты постановки и проверки реакции, серии токсина и института, изготовившего токсин.
Для постановки реакции Шика используют разведенный активный (негретый) дифтерийный токсин. В 0,2 мл содержится одна Шик-доза.
Для постановки реакции Шика должны применяться однограммовые (туберкулиновые), тщательно проверенные шприцы с точной градуировкой, не пропускающие жидкость между стенками шприца и его поршнем.
Категорически воспрещается постановка реакции Шика в помещениях, где в этот день проводилась ревакцинация против туберкулеза, а также использовать шприцы, иглы и прочий инструментарий, применявшиеся при иммунизации против туберкулеза.
Кожу на месте инъекции протирают ватой, смоченной 70 % этиловым спиртом. Токсин (0,2 мл) вводят внутрикожно в среднюю часть ладонной поверхности, как правило, левого предплечья. Введение производят медленно с известным напряжением, характерным для внутрикожного введения жидкости. Инъекцию делают под очень небольшим уклоном шприца к предплечью, почти параллельно поверхности кожи. Срез иглы должен целиком войти в кожу и просвечивать через эпидермис. На месте инъекции должен образоваться беловатый, хорошо ограниченный пузырек (папула) диаметром около I см, имеющий вдавление на месте волосяных мешочков («лимонная корочка»). Этот пузырек (папула) рассасывается через 10 - 15 мин. Если при введении токсина пузырек (папула) не образуется или слишком быстро исчезает, это указывает на то, что инъекция сделана неправильно, глубоко и токсин, попавший подкожно, может не вызвать реакции. Вследствие этого может быть получен неправильный результат.
Учет реакции производят через 72 или 96 ч. Результаты оценивают следующим образом:
а) реакция Шика положительная, если на месте введения токсина появляются краснота и инфильтрат. Степень реакции обозначается: « + » - если краснота имеет диаметр 1 -1,5 см, (+ + » - если 1,5 - 3 см, «+ + + » - если больше 3 см;
б) реакция Шика отрицательная, когда на месте введения токсина краснота и инфильтрат отсутствуют;
в) реакция Шика сомнительная, если краснота и инфильтрат при введении токсина либо выражены нечетко, либо при выраженной реакции диаметр красноты равен примерно 0,5 см (обозначается «±»).
Противопоказания к постановке реакции Шика: спазмофилия, эпилепсия, гнойничковые заболевания, контакт с больными вирусным гепатитом, бронхиальная астма.
Реакция Шика может оказать помощь в дифференциальной диагностике между атипичной дифтерией и другими заболеваниями с сопутствующим носительством дифтерийных палочек (в тех случаях, где реакция Шика ставится до введения противодифтерийной сыворотки).
Исследования в течение последних двух лет диагностического значения пробы Шика в титрационной методике по В. И. Иоффе, с 1/40, 1/10, 1/5 DLM дифтерийного токсина (1, 4 и 8 кожных доз), привели к выводу, что определение высоты иммунитета помогает в дифференциальной диагностике.
У большинства носителей токсигенных дифтерийных палочек определяется напряженный антитоксический иммунитет, выражающийся отрицательными реакциями не только на одну, но и на 4 и 8 кожных доз токсина (К. В. Блюменталь).
У некоторых больных дифтерией, у которых удалось до введения сыворотки определить состояние иммунитета по реакции Шика, последняя оказалась положительной на одну кожную дозу.
Таким образом, если при сомнительной клинической картине и обнаружении токсигенных дифтерийных палочек реакция Шика в обычной постановке (1/40 DLM токсина) дает положитлеьный результат, более обоснованно предположение о дифтерии.
Реакция агглютинации может также помочь в дифференциальной диагностике, так как при заболевании дифтерией отмечается закономерное нарастание антител в крови ко 2 — 3-й неделе от начала болезни, в то время как, по данным авторов, сопутствующее носительство не дает заметного нарастания антител в указанные сроки.
В заключение следует сказать, что отказ от диагноза дифтерии при обнаружении дифтерийных палочек во всех случаях должен быть достаточно обоснован убедительными клиническими данными.
Учитывая, что при дифференциальной диагностике в подобных случаях нередко возникают большие трудности, особенно для участкового врача, рекомендуется направление этих больных в диагностические отделения. При отсутствии диагностических коек диагноз дифтерии может быть снят только после консультации с опытным врачом.
«Дифтерия у детей», М.Е.Сухарева, К.В.Блюменталь
Обнаружение BL при типичной клинической картине фолликулярной ангины, когда нагноившиеся фолликулы, как просяные зерна, просвечивают из-под слизистой миндалины, также легко может быть расценено как сопутствующее носительство, ибо островки дифтерийных налетов всегда располагаются на поверхности слизистой. Хронический тонзиллит нередко сопровождается более или менее длительным носительством дифтерийных палочек и в силу этого часто приходится дифференцировать атипичную дифтерию…
Несложна для опытного врача диагностика грибковой ангины (вызываемой leptotrix) с сопутствующим носительством дифтерийных палочек, так как клиническое проявление микоза глотки по существу не имеет никакого сходства с дифтерийным процессом; но, повидимому, одни и те же причины, чаще всего хроническое поражение носоглотки, способствуют одновременно и длительной вегетации грибка, и носительству дифтерийных палочек. Более сложна дифференциальная диагностика…
Люда П., 8 лет, поступила в больницу им. И. В. Русакова 9 сентября 1960 г. с диагнозом «дифтерия зева?». Девочка правильно иммунизирована против дифтерии, очень часто болеет ангиной. Заболела 5 сентября, температура 37,5°, головная боль, умеренная боль в горле. 6 — 7-го сентября температура в пределах 38 — 39°, плохое самочувствие, боль в горле держалась….
Обнаружение дифтерийных палочек в посеве из зева или носа при типичной клинической картине гриппозного крупа или крупа при катаре верхних дыхательных путей не может являться решающим доводом в пользу дифтерийной этиологии крупа. В таких случаях необходима идентификация выделенных микробов, однако вполне возможно носительство BL в зеве или носу, сопутствующее недифтерийному крупу. Приводим выписку из истории…
Боря Б., 8 лет, поступил в дифтерийно-диагностическое отделение больницы им. И. В. Русакова 27 сентября I960 г. с диагнозом «дифтерия зева?». Мальчик правильно иммунизирован против дифтерии. Повторно болеет ангинами. Заболел 24. IX, температура 39,5°, озноб, боль в горле. 25. IX ребенок осмотрен врачом: температура оставалась высокой, отмечена яркая гиперемия зева, желтоватые, рыхлые, но довольно обширные…
Токсины (от греческого toxikоn - яд), вещества бактериального происхождения, способные угнетать физиологические функции, что приводит к заболеванию или гибели животных и человека. По химической природе все токсины - белки или полипептиды. В отличие от других органических и неорганических ядовитых веществ, токсины при попадании в организм вызывают образование антител.
При некоторых инфекционных заболеваниях (дифтерия, скарлатина) для определения напряженности иммунитета и восприимчивости детей используются внутрикожные пробы с применением соответствующих разведенных токсинов. Положительная реакция (местное воспаление кожи в области введения токсина) обусловливается ядовитым действием токсина на ткани кожи. Отрицательный результат реакции объясняется нейтрализацией введенного в кожу токсина соответствующим антитоксином, содержащимся в иммунном организме в достаточном для этого количестве.
Токсины получают из токсигенных штаммов микробов (дифтерийная палочка или скарлатинозный стрептококк) методом посева на жидкую питательную среду (мартеновский бульон) с последующей фильтрацией через бактериальные фильтры. Из полученных токсинов готовят диагностические токсины Шика (дифтерийный) и Дика (скарлатинный). Токсины вводят внутрикожно, в количестве 0,2 мл (Шика) и 0,1 мл (Дика), в среднюю часть внутренней поверхности предплечья.
Анатоксины - фильтраты бульонных культур токсигенных микроорганизмов, утратившие благодаря специальной обработке токсичность, но сохранившие в значительной степени антигенные и иммуногенные свойства исходных токсинов.
При введении в организм человека или животных анатоксины вызывают образование антитоксического иммунитета, это свойство и позволяет применять их для профилактики тех инфекционных заболеваний, в основе которых лежит действие экзотоксинов, выделяемых возбудителями, а также для гипериммунизации животных - продуцентов антитоксических сывороток.
Независимо от вида анатоксина его иммуногенность и антигенность определяются соответствующими свойствами исходного токсина. Поэтому в лабораториях, изготавливающих эти препараты, уделяется большое внимание созданию оптимальных условий для токсинообразования.
Для получения токсинов высокой силы необходимы штаммы, отличающиеся особенно выраженной способностью к токсинообразованию в искусственных условиях. Этими свойствами обладают далеко не все штаммы токсигенных бактерия. Для производственных целей пользуются штаммами, адаптированными к искусственным средам и стойко сохраняющими способность к токсинообразованию.
Культуры токсинообразователей сохраняются либо в высушенном состоянии, либо на средах оптимальных для данного вида бактерий. Перед употреблением для засева массовых партий штаммы пассируются на среде, используемой для получения токсина.
При прочих равных условиях сила токсинов определяется качеством питательной среды, поэтому лаборатории уделяют внимание приготовлению питательных сред. Сырье, химикалии и другие ингредиенты, входящие в состав среды, подвергаются самому тщательному контролю в биохимических лабораториях производственных институтов.
Для токсинообразования применяются жидкие питательные среды, в состав которых входят мясная вода и продукты пептического (бульон Мартена, среда Рамона) или триптического (среда Попе) переваривания мяса.
Процесс гидролиза мяса контролируется определением общего и аминного азота и коэффициента расщепления белка, который вычисляется из отношения аминного азота к общему. Используются также безмясные казеиновые, полусинтетические среды.
В питательную среду, предназначенную для токсинообразования, добавляются углеводы (глюкоза, мальтоза или смесь их). При сбраживании углеводов освобождается большое количество энергии, необходимой для процессов синтеза, происходящих в развивающейся культуре. Добавление углеводов резко повышает силу образующихся в среде токсинов.
Помимо углеводов для токсинообразования необходимы в минимальных дозах некоторые металлы. Токсинообразование дифтерийной палочки тормозится избытком железа в среде в равной мере как и отсутствием его. При наличии в среде оптимальных количеств железа токсинообразование резко усиливается.
Токсинообразование осуществляется в полную меру при определенном рН среды. Между тем в процессе роста культуры значение рН изменяется и может достигнуть таких показателей, которые будут тормозить образование токсина.
Для устранения этого в среды добавляются буферные вещества, поддерживающие нужное значение рН. Одним из таких веществ, обладающих свойствами буфера, является уксусно-кислый натр, который добавляется в бульон в количестве 0,5-0,75 %.
В зависимости от биологических особенностей микроба-токсинообразователя применяются разные условия выращивания и, в частности, регулируется аэрация среды. Дифтерийная палочка образует токсин в условиях максимальной аэрации, наоборот, столбнячная палочка и другие токсигенные анаэробы в кислороде не нуждаются. В соответствии с этим в первом случае культура выращивается в тонком слое среды с большой поверхностью соприкосновения с воздухом, во втором - среда наливается высоким слоем и в нее добавляются различные адсорбенты кислорода (вата, сухие эритроциты).
Температура выращивания и длительность его варьируют для разных микробов. Общей для процесса токсинообразования является необходимость безукоризненной регулировки температуры в термостате. Колебания температуры отрицательно сказываются на силе токсина. Поэтому термостаты, в которых происходит токсинообразование, снабжаются точными терморегуляторами.
В каждом отдельном случае длительность выращивания культуры определяется интенсивностью токсинообразования на данной серии среды. Для решения вопроса о времени прекращения культивирования производят определение силы токсина и рН среды в разные сроки выращивания.
Когда сила токсина достигает максимума, производят отделение его от микробных тел, это производится путем фильтрации через специальные бактериальные фильтры (анаэробные микроорганизмы) или обычные бумажные (дифтерийная палочка).
Перевод токсических фильтратов в анатоксин осуществляется путем длительного воздействия на них формалина при температуре 39-40 °С. Формалин соединяется свободными аминогруппами аминокислот, полипептидов и белков токсина, в связи с чем, утрачивает свои ядовитые свойства. Переход токсина в анатоксин происходит в течение 3-4 недель. Для правильного анатоксинообразования имеет значение рН токсина. Наиболее благоприятной является нейтральная или слабощелочная реакция среды.
Анатоксины характеризуются полной безвредностью для животных. Однако при неполном обезвреживании в них могут сохраняться остатки токсина, которые вызывают в чувствительном организме поздние повреждения. Поэтому при проверке безвредности анатоксинов наблюдение за животными ведут в течение длительного времени. Безвредность анатоксинов необратима. Никакие воздействия не приводят к восстановлению утраченной токсичности.
Анатоксины сохраняют почти в полной мере антигенные свойства токсинов. Это может быть проверено различными методами в пробирке (реакция флокуляции, реакция связывания анатоксина) и в опытах на животных, у которых введение анатоксина вызывает образование соответствующих антитоксинов и создание антитоксического иммунитета.
Анатоксины отличаются стойкостью; они переносят повторное замораживание и оттаивание, противостоят действию высокой температуры и стабильны при длительном хранении.
Анатоксины содержат помимо специфических белков также балластные вещества, от которых они могут быть освобождены разными методами. Они основаны на способности анатоксинов осаждаться при насыщении нейтральными солями, солями тяжелых металлов, кислотами (соляной, трихлоруксусной, метафосфорной), а также в присутствии этилового и метилового спирта при низкой температуре. Эти методы используются в настоящее время для получения очищенных концентрированных анатоксинов.
Анатоксины адсорбируются на различных нерастворимых веществах (фосфорные соли, гидроокись алюминия), это используется для приготовления сорбированных анатоксинов, которые отличаются замедленной всасываемостью в организме, в результате чего можно получить более напряженный иммунитет.
Благодаря своей безвредности, высокой антигенности и иммуногенности, анатоксины являются ценнейшими средствами профилактики и терапии ряда заболеваний.
В настоящее время получены анатоксины: дифтерийный, столбнячный, ботулинический, стафилококковый, дизентерийный, из токсинов, продуцируемых возбудителями газовой гангрены, а также из змеиного яда.
Аллергены бактериальные или инфекционные представляют собой взвесь убитых микробных клеток или извлеченных из них различных фракций и применяются в качестве диагностических препаратов для выявления повышенной чувствительности организма к возбудителям инфекционных заболеваний.
Бактериальные экзотоксины (дифтерийный, скарлатинозный), используются для кожных проб при определении антитоксического иммунитета к этим заболеваниям.
Аллергические кожные пробы применяются с целью диагностики при многих инфекционных заболеваниях, сопровождающихся аллергической перестройкой организма. В зависимости от способа введения аллергена кожные пробы могут быть аппликационные - при определении чувствительности к некоторым лекарственным, химическим веществам; скарификационные - при определении чувствительности к бытовым, пыльцевым, эпидермальным аллергенам и внутрикожные - при определении чувствительности к бактериальным и грибковым аллергенам.
Диагностическое значение реакций организма на аллергены различно в течение инфекционного процесса. В начале инфекционного процесса положительная реакция свидетельствует только о зараженности определенным возбудителем и состоянии аллергии к нему и не может расцениваться как диагностическая. В разгар заболевания аллергическая проба учитывается как диагностическая. После некоторых инфекционных болезней остается аллергия к соответствующему возбудителю в течение нескольких лет, обнаружение которой свидетельствует о перенесенной инфекции. При положительной реакции на аллерген, учитываемой через 20 минут, а затем через 24 и 48 часов (редко 7 суток), ощущается чувство жжения на месте введения препарата, появляется покраснение, отек, может быть везикула.
Аллергены, применяемые с диагностической целью, разнообразны по химической природе и методам получения.
Ниже приводится описание некоторых диагностических препаратов, вошедших в широкую практику.
1. Туберкулин. В настоящее время выпускаются три препарата для проведения аллергических туберкулиновых проб:
альттуберкулин Коха, сухой очищенный туберкулин (РРД) и очищенный туберкулин в стандартном разведении.
Альттуберкулин Коха (АТК)-желтовато-коричневая жидкость, получаемая в результате выпаривания до 1/10 первоначального объема 5-6-недельной культуры микобактерий, выращенной на глицериново-мясо-пептонном бульоне. Старый туберкулин Коха содержит продукты жизнедеятельности и распада микобактерий и питательную среду. Препарат должен содержать не менее 90000 ТЕ (туберкулиновых единиц) в 1 мл.
Сухой очищенный туберкулин (РРД)- (Derivatum protei nos purificatum tuberculini mammalinii) представляет собой белковый препарат, полученный из фильтрата культуры микобактерий туберкулеза осаждением химическими веществами с последующей очисткой. В 1 мл очищенного сухого туберкулина содержится 50000 ТЕ. Препарат применяется для внутрикожных проб по Манту, подкожной пробы Коха и других тестов.
Очищенный туберкулин в стандартном разведении (РРД-2) приготовлен из порошка-туберкулина разведением его в растворителе (твин-80), обеспечивающим стабилизацию биологической активности препарата - 2 или 5 ТЕ в 0,1 мл.
Применяется только для постановки внутрикожных проб по Манту.
Преимуществом очищенных туберкулинов является их большая чувствительность и стандартность.
Туберкулиновая диагностика проводится с целью определения инфицированности населения, особенно детей и подростков, туберкулезом; при отборе людей, подлежащих прививкам против туберкулеза; определения эффективности вакцинации и т. д.
При массовой туберкулиновой диагностике применяют внутрикожную пробу Манту, используя очищенный туберкулин в стандартном разведении.
При отсутствии у обследуемого человека инфицированности микобактериями туберкулеза наблюдается отрицательная реакция; при размере инфильтрата 2-4 мм - проба сомнительная, поэтому реакцию следует повторить через 3-4 недели. Если инфильтрат более 5 мм - реакция расценивается как положительная.
2. Тулярин содержит убитые нагреванием при 70°С микроорганизмы в 3%-ном глицерине, применяется для внутрикожного введения при диагностике туляремии, начиная с 3-5-го дня болезни. Проба с тулярином применяется также для определения посгвакцинального иммунитета.
3. Бруцеллин - представляет собой фильтрат 3-недельной (убитой нагреванием) бульонной культуры всех трех видов бруцелл.
Препарат вводится строго внутрнкожно при диагностике бруцеллеза и при определении иммунитета у вакцинированных людей (кожная проба Бюрне).
4. Токсоплазмин - антигенный комплекс, полученный из экссудата брюшной полости мышей, зараженных внутри брюшинно возбудителем токсоплазмоза. Препарат не должен содержать жизнеспособных токсоплазм.
Токсоплазмин применяется для диагностики при заболеваниях, подозрительных на токсоплазмоз - при акушерской патологии, поражении глаз, лихорадках неясной этиологии и т. п.
5. Антраксин - препарат, содержащий белково-полисахаридно-нуклеиновый комплекс, полученный путем гидролиза сибиреязвенных бацилл. Антраксин используется для диагностики у больных сибирской язвы, для определения состояния аллергии у иммунизированных людей и у перенесших эту инфекцию. Аллергическая проба положительна уже в первые дни заболевания.
6. Дизентерии - является белковой фракцией двух возбудителей дизентерии шигелл Флекснера и Зонне и используется в качестве дополнительного средства диагностики при подозрении на дизентерийную этиологию желудочно-кишечного заболевания у людей всех возрастов.
7. Бактериальные аллергены из таких микроорганизмов как стафилококки, стрептококки, пневмококки, нейссерии катаральные, эшерихии, энтерококки, протеи, ложнодифтерийные палочки получают в виде очищенных термостабильных фракций фильтратов 5-6-суточной бульонной культуры (метод Андо-Вержиковского) или в виде нативных препаратов -инактнвированной взвеси бактерий, содержащей и продукты метаболизма. Очищенные бактериальные аллергены представляют собой извлеченные из микроорганизмов белки (до 83%) с небольшой примесью Сахаров и нуклеиновых кислот.
Препараты предназначены для выявления повышенной чувствительности организма к микроорганизмам, из которых они получены.
Бактериальные экзотоксины (дифтерийный и скарлатинозный) применяются для определения антитоксического иммунитета к дифтерии в реакции Шика и к скарлатине в реакции Дика.
Дифтерийный токсин готовят из очищенного экзотоксина, после двухлетней выдержки, разведением в глицерино-желатиновой смеси с таким расчетом, чтобы в 0,2 мл содержалось 1/40 Dim для морской свинки. Токсин вводят в дозе 0,2 мл строго внутрикожно в среднюю часть ладонной поверхности предплечья. При положительной реакции на токсин (т. е. при отсутствии антитоксического иммунитета у обследуемого), учитываемой через 72-96 часов, на месте введения появляется инфильтрат и эритема от 15 до 30 мм. Следовательно не обходимо дополнительное вакцинирование против дифтерии.
Детям с отрицательной реакцией Шика (при отсутствии местных изменений вследствие нейтрализации антитоксинами введенного токсина) дополнительных прививок не проводят.
Скарлатинозный токсин (эритрогенный) - термостабильный нуклеопротеоид стрептококка, консервированный фенолом (0,2%) или мертиолатом (в разведении 1: 10000). Скарла тинозный токсин дозируется в так называемых кожных дозах, причем за одну кожную дозу принимается такое количество токсина, которое при внутрикожном введении кролику вызывает воспаление (15-20 мм). Для определения напряженности иммунитета против скарлатины детям строго внутрикожно вводят скарлатинозный токсин в дозе 0,1 мл (одну кожную дозу для кролика). Учет реакции проводят через 18-24 часа.
Положительной реакцией, свидетельствующей об отсутствии иммунитета к скарлатине, считается образование в месте введения эритемы, размером от 20-30 мм и более при резко положительной реакции.