Антиглобулиновый тест. Прямая и непрямая реакция Кумбса. Аутоимунные гемолитические анемии. Проба Кумбса Как подготовиться к пробе кумбса

Антиглобулиновый тест, предназначенный для выявления неполных антиэритроцитарных антител, был предложен Кумбсом, Морантом, Рейс в 1945 г. и получил в дальнейшем название пробы Кумбса . Суть данного метода заключается в том, что антиглобулиновая сыворотка, содержащая антитела к иммуноглобулинам человека, при реакции с эритроцитами, сенсибилизированными неполными антителами, приводит к их агглютинации.

В зависимости от того, фиксированы ли антитела на поверхности эритроцитов или находятся в свободном состоянии в плазме крови, применяется прямая или непрямая проба Кумбса.

Прямая проба Кумбса ставится в тех случаях, когда есть основания предполагать, что исследуемые красные кровяные клетки уже in vivo подверглись сенсибилизации соответствующими антителами, т.е. первая фаза реакции — фиксация антител на поверхности эритроцитов — произошла в организме и последующее добавление антиглобулиновой сыворотки вызывает агглютинацию сенсибилизированных клеток.

С помощью непрямой пробы Кумбса выявляют неполные антитела, присутствующие в исследуемой сыворотке. В данном случае реакция протекает в два этапа. Первый этап — инкубация тест-эритроцитов с исследуемой сывороткой, во время которой происходит фиксация на эритроцитарной поверхности антител, содержащихся в исследуемом образце сыворотки. Второй этап — добавление антиглобулиновой сыворотки.

До настоящего времени проба Кумбса широко применяется в лабораторной практике для диагностики иммунопатологических состояний, в частности при аутоиммунных гемолитических анемиях, характеризующихся деструкцией эритроцитов вследствие связывания клеточной мембраны с антителами и (или) компонентами системы комплемента. С его помощью выявляют присутствие на эритроцитарной мембране Ig G (обычно Ig G1 и Ig G3), которые могут активировать комплемент, а иногда и комплемента (С3d). Однако в остром периоде заболевания в связи с разрушением эритроцитов, на которых фиксировалось большое количество антител, при гемолитическом кризе, а также при недостаточном количестве антител при хроническом течении болезни может отмечаться отрицательная прямая проба Кумбса .

Необходимо подчеркнуть, что непрямая проба Кумбса остается наилучшим методом индивидуального подбора трансфузионных сред, так как позволяет наиболее точно установить индивидуальную совместимость донора и реципиента по эритроцитарным антигенам.

Дополнительное выполнение прямого антиглобулинового теста на наличие аутоантител рекомендуется при обследовании всех реципиентов органов и тканей в предтрансплантационном периоде и реципиентов гемопоэтических стволовых клеток также и после трансплантации .

Кроме иммуногематологии и трансфузиологии антиглобулиновые пробы широко применяются при диагностике целого ряда патологических состояний: при гематологических заболеваниях, включая лимфопролиферативные, при системных заболеваниях соединительной ткани, болезни Шегрена, хроническом активном гепатите и др.

Активно используются пробы Кумбса в медицинской генетике и судебной медицине для определения поверхностных эритроцитарных антигенов.

Проба Кумбса относится к достаточно трудоемким методам исследования, требующим особой тщательности в выполнении. При ее использовании встречаются некоторые затруднения, связанные, в частности, с интерпретацией слабоположительных реакций. Известно, что ложные слабоположительные или отрицательные реакции при выполнении проб Кумбса могут быть следствием недостаточно эффективной отмывки эритроцитов, нейтрализации антиглобулинового реагента следами сыворотки, а также контакта с необезжиренной поверхностью, на которой может фиксироваться антиглобулин, теряя при этом свою активность . Еще один недостаток пробы Кумбса — нестойкость антиглобулинового реагента, получение и хранение которого имеют определенные особенности, что также делает затруднительной количественную оценку реакции гемагглютинации с антиглобулиновой сывороткой.

Кроме того, исследования, проведенные А. Holburn , D. Voak et al. , показали, что причиной ложноотрицательных результатов может быть чрезмерное встряхивание при ресуспендировании взвеси эритроцитов. Ошибочные результаты при выполнении антиглобулиновых тестов могут также обусловливаться присутствием в антиглобулиновом реагенте примеси антикомплементарных антител, в частности к С3d-, С3c-, С4c- и С4d- компонентам комплемента, которые адсорбируются на поверхности тест-эритроцитов в процессе инкубации и создают видимость положительного результата .

Указанные недостатки легко устраняются при тщательной отмывке исследуемых образцов и контроле за условиями проведения реакции.

В последнее десятилетие для сокращения времени проведения непрямой пробы Кумбса и повышения ее чувствительности используют изотонический раствор с низкой ионной силой (LISS) .

Неоспоримым преимуществом антиглобулиновых проб, по мнению ряда авторов, является их высокая чувствительность, значительно превосходящая разрешающую способность альтернативных методов исследования, которые используются для выявления неагглютинирующих антител .

Нами было проведено сравнение разрешающей способности методов исследования сывороток крови на наличие неполных антител с применением полиглюкина, желатина и антиглобулиновой сыворотки . В ходе исследования был осуществлен контроль титров неполных анти-D-антител в 140 образцах сывороток крови изоиммунных доноров с применением желатинового, полиглюкинового и непрямого антиглобулинового тестов. Постановка данных методов осуществлялась в соответствии с общепринятыми методиками .

Было установлено, что по своей разрешающей способности методы выявления сенсибилизации эритроцитов анти-D-антителами располагаются следующим образом: наиболее чувствительный — непрямая проба Кумбса, затем желатиновый тест и наименее информативный — полиглюкиновый. Полученные в этой серии опытов результаты в полной мере соответствуют литературным данным, что позволяет сделать вывод о достаточно высоком уровне чувствительности проб Кумбса, позволяющем с большой степенью достоверности идентифицировать присутствие в организме антиэритроцитарных антител, не вызывающих агглютинации красных кровяных клеток.

Тем не менее, при постановке проб Кумбса в практике встречаются случаи, когда неполные антитела не выявляются, хотя клиническая картина заболевания или предшествующая иммунизация указывает на возможное их присутствие. В таких случаях можно предположить, что количества антител недостаточно для того, чтобы они преципитировались антителами антиглобулиновой сыворотки.

Сделанный вывод подтвержден собственным экспериментом, в котором с помощью метода аналитического микроэлектрофореза клеток было установлено наличие на тест-эритроцитах анти-D-антител, не определяемых в непрямой пробе Кумбса. В этой серии опытов антиглобулиновая сыворотка добавлялась к эритроцитам, предварительно инкубированным с сыворотками, полученными из крови иммунизируемых доноров, в период антителогенеза в ходу, т.е. в период, когда известными методами, в том числе пробой Кумбса, антитела в них не определялись.

В проведенных исследованиях доказательством присутствия неполных антител на поверхности эритроцитов служило статистически значимое изменение величины электрофоретической подвижности сенсибилизированных красных кровяных клеток после добавления антиглобулиновой сыворотки. Необходимо отметить, что в последующем у всех иммунизированных доноров в непрямой пробе Кумбса в сыворотке крови определялись анти-D-антитела.

Gillerand et al. также показали, что для антиглобулиновых тестов характерен определенный порог чувствительности: положительный результат отмечается лишь тогда, когда на поверхности одного эритроцита фиксируются не менее 500 молекул Ig G.

Кроме того, в литературе приводятся данные в пользу того, что возможный отрицательный результат пробы Кумбса может быть связан с низкой аффинностью антител, сенсибилизирующих эритроциты, вследствие чего они легко элюируют с поверхности красных кровяных клеток в процессе отмывания .

С учетом вышесказанного можно сделать вывод, что в ряде случаев отрицательный результат пробы Кумбса еще не есть доказательство отсутствия фиксированных на поверхности эритроцитов антител.

Известно, что реакции Кумбса обладают высокой специфичностью и позволяют обнаружить большинство разновидностей неполных антител. Однако, как показывают некоторые экспериментальные данные, антиглобулиновые пробы могут оказаться положительными и при неиммунологических состояниях. E. Muirhead et al. на второй день после введения фенилгидразина собакам наблюдали положительную пробу Кумбса. Столь быстрое появление положительной реакции свидетельствует против ее иммунологической природы и, скорее, связано с неспецифической адсорбцией белка на поверхности эритроцитов.

M. Williams et al. установили, что клавулановая кислота также может быть причиной положительной реакции, что, по мнению авторов, связано с неспецифической адсорбцией плазменных белков на эритроцитарной поверхности. Аналогичный эффект наблюдался и при лечении цефалоспориновыми антибиотиками .

Авторы вышеприведенных исследований подчеркивают неиммунологический характер полученных положительных результатов проб Кумбса и настаивают на том, что указанные вещества способны вызывать модификацию мембран красных кровяных клеток, в результате которой эритроциты могут адсорбировать белки (в частности, альбумин), в норме присутствующие в плазме крови и не обладающие свойствами антител. Кроме того, возможно, именно ксенобиотик, адсорбируясь на клеточной поверхности, служит связующим звеном между мембраной клетки и белками плазмы.

Для правильного толкования результатов постановки антиглобулиновых проб следует учитывать и количественное соотношение между молодыми и зрелыми эритроцитами в периферической крови. Было установлено, что ретикулоциты, выделенные из организма в период усиленной регенерации эритрона, могут агглютинироваться антиглобулиновой сывороткой .

Положительный результат прямого антиглобулинового теста отмечается и при различных патологических состояниях, сопровождающихся нарушениями иммунной системы, воспалительными процессами, ведущими к неспецифической адсорбции антител разной специфичности на мембранах эритроцитов. Это дает основание полагать, что молекулы Ig G не взаимодействуют со специфическими антигенами эритроцитов, а только фиксируются на поверхности исследуемых клеток .

Следует учитывать, что при постановке пробы Кумбса в случаях заболеваний, характеризующихся развитием диспротеинемии или появлением парапротеинов, положительный результат обусловлен присутствием на поверхности эритроцитов белков, не обладающих свойствами антител , что также свидетельствует о недостаточной специфичности антиглобулиновых проб относительно природы выявляемого с их помощью белка.

Таким образом, как показали многочисленные исследования , положительные результаты прямого и непрямого антиглобулиновых тестов не являются абсолютным доказательством наличия антител, поскольку положительные реакции могут наблюдаться и при различных патологических состояниях, не связанных с изосенсибилизацией или аутосенсибилизацией организма. Поэтому только сопоставление результатов нескольких иммуносерологических методов с клинической картиной заболевания позволяет в полной мере судить о развивающемся патологическом процессе.

Положительный непрямой антиглобулиновый тест при отрицательной прямой пробе обычно указывает на присутствие в исследуемой сыворотке аллоантител в свободном состоянии, связанное с предшествующими переливаниями крови или беременностями.

Проба Кумбса часто бывает положительной при обострении пароксизмальной ночной гемоглобинурии; позитивная проба Кумбса с анти-С3 и анти-С3dg является маркером холодовой агглютининовой болезни .

В случаях, когда велик риск развития гемолитической болезни новорожденных, большое значение для постановки диагноза (чаще всего во время беременности) и при необходимости динамического наблюдения за появлением и изменением титра антител имеют результаты прямого и непрямого антиглобулиновых тестов . Чаще всего гемолитическая болезнь новорожденных связана с несовместимостью матери и плода по антигену D, реже — по антигенам системы АВ0 и еще реже — по другим антигенам (С, с, К и др.). Образующиеся при этом антитела, будучи, как правило, неполными антителами класса Ig G, четко выявляются в непрямом антиглобулиновом тесте. При данном заболевании большое значение имеют правильно установленные титр и специфичность выявленных антител, поскольку существует определенная корреляция между уровнем антиэритроцитарных антител в крови беременной женщины и возможным прогнозом тяжести гемолитической болезни .

Непрямая проба Кумбса также необходима в клинической практике в целях обеспечения проведения безопасной трансфузионной терапии . Ее выполнение является обязательной составляющей иммуногематологических исследований доноров и различных категорий реципиентов, а также плановых обследований всех пациентов лечебно-профилактических учреждений, которым может потребоваться переливание крови и ее компонентов.

Непрямой антиглобулиновый тест применяется в следующих случаях:

Для более точного установления резус-принадлежности (антиген D) при нечетких результатах определения резус-фактора другими методами (полиглюкиновый, желатиновый и др.);

Для выявления слабых эритроцитарных антигенов (системы Келл, Даффи, Кидд, Льюис и др.) и антител к этим антигенам;

Для обнаружения и идентификации аллоиммунных антиэритроцитарных антител, включая антитела, вызывающие гемолитические посттрансфузионные реакции;

Для определения наличия иммунных антител системы АВ0 при трансфузионных гемолитических осложнениях;

В качестве пробы на совместимость при индивидуальном подборе переливаемой крови и ее компонентов.

Таким образом, проба Кумбса является важным диагностическим тестом, применяемым в различных областях медицины (гематология, акушерство, ревматология, трансфузиология, клинико-лабораторная диагностика и др.). Знание особенностей постановки пробы Кумбса поможет повысить достоверность полученных результатов и будет способствовать правильной трактовке лабораторных данных.

Литература

1. Антитела. Методы / под ред. Д. Кэтти. — М.: Мир, 1991.

2. Байрамалибейли И.Э., Рагимов А.А., Гаджиев А.Б . // Трансфузионная терапия анемий: учеб. пособие для врачей. — М.: Практ. медицина, 2005. — С. 105—106.

3. Волкова О.Я., Фрегатова Л.М., Левченко Л.Б. // Трансфузиология. — 2006. — №2 . — С. 39—62.

4. Донсков С.И. // Группы крови системы Rhesus: теория и практика. — М.: ВИНИТИ РАН, 2005. — С. 180—186, 195.

5. Иммуносерология (нормативные документы) / сост. А.Г. Башлай, С.И. Донсков. — М.: ВИНИТИ РАН, 1998.

6. Исследование системы крови в клинической практике / под ред. Г.И. Козинца, В.А. Макарова. — М.: Триада-Х, 1997.

7. Левин В.И . К механизму эритродиереза и эритропоэза в период острой постгеморрагической анемии: автореф. дис. …канд. мед. наук. — Минск, 1968.

8. Рагимов А.А., Байрамалибейли И.Э . // Основы диагностики, профилактики и лечения анемий. — М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002. — С. 204—209.

9. Чумакова Е.Д . // Актуальные проблемы гематологии и трансфузиологии: м-лы VI съезда гематологов и трансфузиологов Республики Беларусь, Минск, 24—25 мая 2007 г. / под ред. А.И. Свирновского, М.П. Потапнева. — Минск: РНПЦ гематологии и трансфузиологии, 2007. — С. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R . // Lancet. — 1945. — Vol. 2. — P. 15.

11. Freedman J . // J. Clin. Pathol. — 1979. — Vol. 32. — P. 1014—1018.

12. Holburn A.M . Quality Control. Methods in Hematology /ed. I. Cavill. — Edinburg: Churchill Livingstone, 1982. — Vol. 4. — P. 34—50.

13. Khan S. // CMAJ. — 2006. — Vol. 175, N 8. — P. 919.

14. Komatsu F. // Nippon Rinsho. — 2005. — Vol. 63 (suppl. 7). — P. 719—721.

15. Komatsu F. // Nippon Rinsho. — 2005. — Vol. 63 (suppl. 7). — P. 716—718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F. // New Engl. J. Med. —1976. — Vol. 277. — P. 123—125.

17. Muirhead E.E., Groves M., Brian S . // J. Lab. Clin. Med. —1954. — Vol. 44. — P. 902—903.

18. Rosse W.F. // Hosp. Prac. — 1995. — N 105.

19. Voak D., Downie D., Moore B. et al. //Biotests Bull. — 1986. — Vol. 1. — P. 41—52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. Cell Washing machines for antiglobulin tests. Replicate testing — a new method demonstrating the inefficiency of one widely used machine — the Sorvall CW1-AF2: report to the DHSS Technical Branch, February 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C. P . et al. //Antimicrobial Agents and Chemotherapy. —1985. — P. 125—127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H . // CMAJ. — 2006. — Vol. 174, N 3. — P. 305—307.

Медицинские новости. - 2008. - №3. - С. 33-36.

Внимание! Статья адресована врачам-специалистам. Перепечатка данной статьи или её фрагментов в Интернете без гиперссылки на первоисточник рассматривается как нарушение авторских прав.

– антиглобулиновая проба, направленная на выявление в резус-отрицательной крови неполных антиэритроцитарных антител к резус-фактору – специфическому белку, который находится на поверхности эритроцитов резус-положительной крови. Существует два вида данного теста: прямой – выявление антител на поверхности эритроцитов, непрямой – выявление антител в сыворотке крови. Прямая проба осуществляется при диагностике и мониторинге лечения заболеваний крови: гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденных и других. Непрямая проба выполняется для оценки совместимости крови донора и реципиента при переливании, а также для определения наличия и риска резус-конфликта при планировании и ведении беременности. Материалом для теста Кумбса является венозная кровь, исследование проводится методами на основе реакции агглютинации. В норме обе пробы дают отрицательный результат. Анализ выполняется в течение одного дня.

Тест Кумбса – клиническое исследование резус-отрицательной крови, направленное на обнаружение антител к резус-фактору. Проба используется для выявления риска развития резус-конфликта и гемолитических реакций. У каждого человека поверхность эритроцитов содержит определенный набор антигенов или агглютиногенов – соединений различной природы, по наличию или отсутствию которых судят о группе крови и резус-факторе. Существует множество видов антигенов, в медицинской практике наибольшее практическое значение имеют агглютиногены A и B, определяющие группу крови, и агглютиноген D – резус-фактор. При положительном резус-факторе на внешней мембране эритроцитов определяются антигены D, при отрицательном – нет.

Тест Кумбса, который также называют антиглобулиновой пробой, направлен на выявление в крови неполных антиэритроцитарных антител к системе резус-фактора. Антитела к резус-фактору – специфические иммуноглобулины, которые вырабатываются в резус-отрицательной крови при попадании в нее эритроцитов с агглютиногенами D. Это может произойти при смешении крови плода и беременной, при гемотрансфузиях , проведенных без предварительного типирования крови. Тест Кумбса существует в двух вариантах – прямой и непрямой. При выполнении прямого теста Кумбса выявляются антитела, закрепленные на поверхности эритроцитов. Исследование используется для установления причины гемолитической реакции. Непрямой тест Кумбса направлен на выявление антиэритроцитарных антител в плазме крови. Он необходим для определения совместимости крови донора и реципиента или матери и плода, позволяет предупредить развитие резус-конфликта и последующего гемолиза эритроцитов.

Кровь для проведения обоих вариантов теста Кумбса берется из вены. Анализ выполняется методом агглютинации с использованием антиглобулиновой сыворотки. Результаты исследования находят применение в гематологии при выявлении причин гемолитических реакций, в хирургии и реаниматологии при проведении гемотрансфузий, в акушерстве и гинекологии при мониторинге беременностей у женщин с резус-отрицательной кровью.

Показания

Прямой тест Кумбса, выявляющий антитела, закрепленные на поверхности эритроцитов, назначается при гемолитических реакциях (разрушении эритроцитов) различного происхождения. Исследование показано при первичной аутоиммунной гемолитической анемии , посттрансфузионной гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденного , гемолизе эритроцитов, вызванном аутоиммунными, опухолевыми или инфекционными заболеваниями, а также приемом лекарственных средств, например, хинидина, метилдопы, прокаинамида. Непрямой тест Кумбса, определяющий антитела в плазме крови, используется для предупреждения развития резус-конфликта. Он показан пациентам при подготовке к гемотрансфузиям, а также беременным с отрицательным резус-фактором при условии, что будущий отец ребенка имеет положительный резус-фактор.

С целью определения резус-совместимости тест Кумбса не назначается пациентам с резус-положительной кровью. В этих случаях на поверхности эритроцитов уже имеются антигены, выработка антител не может быть спровоцирована гемотрансфузией или попаданием крови плода в кровоток беременной. Также исследование не показано беременным женщинам, если оба родителя имеют отрицательный резус-фактор – передающийся по наследству рецессивный признак. Ребенок в таких парах всегда имеет резус-отрицательную кровь, иммунологический конфликт с матерью невозможен. При гемолитических патологиях антиглобулиновая проба не используется с целью контроля успешности терапии, так как результаты не отражают активность процесса разрушения эритроцитов.

Ограничением теста Кумбса является трудоемкость процедуры исследования – для получения достоверных результатов необходимо соблюдение температурных и временных режимов, правил подготовки реагентов и биоматериала. К преимуществам теста Кумбса относится его высокая чувствительность. При гемолитической анемии результаты этого анализа остаются положительными, даже если показатели гемоглобина , билирубина и ретикулоцитов нормализуются.

Подготовка к анализу и забор материала

Материалом для выполнения теста Кумбса является венозная кровь. Специальных требований ко времени проведения процедуры забора крови и к подготовке пациента нет. Как и при любом исследовании рекомендуется выдержать перерыв после приема пищи не менее 4 часов, а в последние 30 минут отказаться от курения, физических нагрузок, избегать эмоционального напряжения. Также стоит заранее обсудить с врачом необходимость отмены принимаемых лекарств – некоторые препараты могут исказить результаты теста Кумбса. Кровь берут с помощью шприца из локтевой вены, реже из вены на тыльной стороне кисти. В течение нескольких часов материал доставляется в лабораторию.

При выполнении прямого теста Кумбса к сыворотке крови пациента добавляется антиглобулиновая сыворотка. Через некоторое время смесь исследуется на наличие агглютинатов – они образуются, если на эритроцитах есть антитела. При положительном результате определяется агглютинирующий титр. Непрямой тест Кумбса состоит из большего количества этапов. Сначала антитела, находящиеся в сыворотке, в ходе инкубации фиксируются на введенных эритроцитах. Затем к образцу добавляется антиглобулиновая сыворотка, через некоторое время определяется наличие и титр агглютинатов. Сроки выполнения анализа – 1 день.

Нормальные результаты

В норме результат прямой теста Кумбса отрицательный (-). Это означает, что в крови нет антител, связанных с эритроцитами, и они не могут быть причиной гемолиза. Нормальный результат непрямого теста Кумбса тоже отрицательный (-), то есть антитела к резус-фактору в плазме крови отсутствуют. При подготовке к гемотрансфузии для реципиента это означает совместимость с кровью донора, при мониторинге беременности – отсутствие резус-сенсибилизации матери, низкий риск развития иммунологического конфликта. Физиологические факторы, такие как особенности питания или физической активности, не могут повлиять на результат пробы. Поэтому если результат положительный, необходима консультация врача.

Диагностическое значение анализа

Положительный результат теста Кумбса выражается качественно, от (+) до (++++), либо количественно, титрами от 1:16 до 1:256. Определение концентрации антител на эритроцитах и в сыворотке крови выполняется в обоих видах пробы. При положительном результате прямого теста Кумбса на внешней мембране эритроцитов выявляются антитела, которые приводят к разрушению этих клеток крови. Причиной может стать переливание крови без предварительного типирования – посттрансфузионная гемолитическая реакция, а также эритробластоз новорожденного, гемолитическая реакция вследствие применения лекарств, первичная или вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия. Вторичное разрушение эритроцитов может быть вызвано системной красной волчанкой , синдромом Эванса, макроглобулинемией Вальденстрема, пароксизмальной холодовой гемоглобинурией , хроническим лимфолейкозом , лимфомой, инфекционным мононуклеозом , сифилисом , микоплазменной пневмонией .

Положительный результат непрямого теста Кумбса указывает на наличие в плазме антител к резус-фактору. На практике это означает, что произошла резус-сенсибилизация, существует возможность развития резус-конфликта после вливания крови донора, во время беременности. Для предупреждения осложнений беременности женщины с положительным результатом теста Кумбса ставятся на специальный учет.

Лечение отклонений от нормы

Тест Кумбса относится к изосерологическим исследованиям. Его результаты позволяют выявить гемолитическую реакцию, а также определить совместимость крови донора и реципиента, матери и плода, чтобы предупредить развитие резус-конфликта. Если результат пробы положительный, то необходимо обратиться за консультацией к лечащему врачу – акушеру-гинекологу, гематологу, хирургу .

Или растворенных в плазме.

Синонимы: антиглобулиновый тест, Coombs test, AGT, indirect/direct antiglobuline test, IAT, NAT, DAT, indirect/direct Coombs test

Проба Кумбса – это

анализ, с помощью которого выявляют иммунизированность и антитела к эритроцитам.

Виды пробы Кумбса

прямая проба Кумбса – определяет антитела зафиксированные на поверхности эритроцитов. Проводится при подозрении на аутоиммунную гемолитическую анемию , гемолиз при аутоиммунных заболеваниях, после приема лекарств (метилдопа, пенициллин, хинин), после переливания крови и гемолитической болезни новорожденных .

Эритроциты были сенсибилизированы in vivo – к ним уже прочно прикреплены антитела, а добавление антиглобулиновой сыворотки (анти-IgG) вызывает склеивание сенсибилизированных клеток, что и видно невооруженным глазом.

непрямая проба Кумбса – выявляет антиэритроцитарные антитела в плазме крови, выполняют перед переливанием крови и при беременности .

Антиэритроцитарные антитела - разновидность аутоантител, т.е. антител против собственных же тканей. Аутоантитело возникает при патологической реактивности иммунной системы на некоторые препараты, например, на высокие дозы пенициллина.

Эритроциты на своей поверхности содержат различные химические структуры (гликолипиды, сахариды, гликопротеины и протеины), в медицине именуемые антигенами . Человек наследует от родителей определенную карту антигенов на каждой красной клетке крови.

Антигены объединены в группы и подле этого кровь делят на несколько групп - по системе AB0, резус, Келл, Левис, Кидд, Даффи . Самые известные и значимые в работе врача - AB0 и резус-фактор (Rh).

Система AB0

Резус-принадлежность человека определяется наличием именно этих антигенов. Особо важный антиген эритроцитов – антиген D. Если он присутствует, то говорят о резус-положительной крови RhD, а если его нет – о резус-отрицательной Rhd.

Если к антигенам эритроцитов присоединится соответствующее антитело, то эритроцит разрушается – гемолизирует .

Показания к проведению прямого антиглобулинового теста

первичная аутоиммунная гемолитическая анемия
гемолитическая анемия при аутоиммунных, опухолевых, инфекционных заболеваниях
лекарственная аутоиммунная гемолитическая анемия
посттрансфузионная гемолитическая анемия (дни - месяцы)
гемолитическая болезнь новорожденного (несовместимость по одной из групп крови)

Показания к проведению непрямого антиглобулинового теста

перед переливанием крови
при беременности резус-отрицательной женщины

Аутоиммунная гемолитическая анемия

Аутоиммунная гемолитическая анемия (первичная) – классическое аутоиммунное заболевание с неизвестными причинами. Предполагают нарушение в процессе взаимодействия на уровне иммунной системы, что ведет к восприятию собственных эритроцитов как чужих. Клетки продуцируют антитела класса IgG (реагируют при t 37°C) и/или IgM (при t 40°C), присоединяясь к поверхности эритроцита запускают ряд ферментов (систему комплемента) и «продырявливают» стенку эритроцита, что приводит к его разрушению – гемолизу .

Симптомы гемолитической анемии

усталость, общая слабость, раздражительность
одышка
боль в животе, тошнота
темный цвет мочи
боли в спине
желтушное окрашивание кожи и слизистых оболочек
увеличение печени, селезенки
снижение количества эритроцитов и гемоглобина в общем анализе крови

Положительный результат прямой пробы Кумбса на 100% подтверждает диагноз аутоиммунной гемолитической анемии, доказывая ее аутоммунное происхождение. Одновременно отрицательный результат - не дает возможностиснять диагноз.

Вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия и положительная проба Кумбса могут быть при следующих заболеваниях:

системная красная волчанка
синдром Эванса
макроглобулинемия Вальденстрема
пароксизмальная холодовая гемоглобинурия
хронический лимфолейкоз
лимфомы
инфекционный мононуклеоз
инфицирование микоплазмой пневмонии
сифилис

Положительность антиглобулинового теста при данных заболеваниях не служит диагностическим критерием, а является одним из симптомов заболевания.

Гемолитическая болезнь новорожденного

Причина гемолитической болезни новорожденных - несовместимостьгрупп крови у матери и плода, в большинстве случаев по системе резус, в одиночных - по системе АВ0, казуистично - по другим антигенам.

Резус-конфликт развивается, если у резус-отрицательной женщины плод унаследовал от отца резус-положительную кровь.

Заболевание у новорожденного развивается только в том случае, если мать уже выработала антитела к соответствующим антигенам, что бывает после предыдущих беременностей, родов , абортов, переливания несовместимой крови. Наиболее частая причина запуска синтеза антител к антигенам эритроцитарной оболочки - роды (фето-материнское кровотечение). Первые роды в основном проходят без осложнений, но вот последующие - чреваты гемолитической болезнью новорожденного в первые дни после рождения.

Симптомы гемолитической болезни новорожденного

желтушность кожи
анемия
бледность кожи и слизистых
увеличение печени и селезенки
нарушения дыхания
отек всего тела
возбуждение и постепенное угнетение центральной нервной системы

Анемия после переливания крови

Непрямую пробу Кумбса проводят перед переливанием крови для оценки совместимости, а прямую пробу Кумбса - после него при подозрении на посттрансфузный гемолиз, т.е. при наличии симптомов, таких как лихорадка, озноб, поливость (читай ниже). Цель анализа – выявить антитела к перелитым эритроцитам, которые связались с эритроцитами получившего кровь и являются причиной посттрансфузного гемолиза, а также преждевременного удаления донорских эритроцитов из кровообращения у реципиента (того, кто получил кровь).

Симптомы гемолитической реакции после переливания крови

повышение температуры тела
сыпь на коже
боли в спине
красная окраска мочи
тошнота
головокружение

Расшифровка пробы Кумбса

Стоит напомнить, что принципиальные правила расшифровки прямого и непрямого антиглобулинового теста одинаковы. Единственное отличие - расположение антител - в крови или уже на красной клетке крови - на эритроците.

если прямая проба Кумбса отрицательна – это значит что на эритроцитах не «сидит» антитело и причину симптомов нужно искать дальше и провести непрямую пробу Кумбса
если положительный результат пробы Кумбса выявлен после переливания крови, инфекций, лекарств – положительность может длится до 3 месяцев (время жизни эритроцитов 120 дней - 3 месяца)
положительный результат антиглобулинового теста при аутоиммунном заболевании может длится месяцы и даже годы

Нормы пробы Кумбса

прямая проба Кумбса - отрицательно
непрямая проба Кумбса - отрицательно

Качественно положительный результат измеряется в количестве плюсов от одного до четырех (+, ++, +++, ++++), а количественно в цифровом виде - 1:16, 1:256 и т.д.

4 факта о пробе Кумбса

предложена впервые в Кэмбридже в 1945 году
порог чувствительности - не менее 300 фиксированных молекул антител на одном эритроците
число антител запускающих гемолиз - индивидуально для каждого человека (от 16-30 до 300)
динамика других лабораторных показателей гемолитической анемии (гемоглобин, билирубин, ретикулоциты) может нормализоваться, а проба Кумбса останется на том же уровне

Недостатки антиглобулинового теста

нельзя определить силу связывания антигена с антителом
неизвестно количество связанных антител
не определяет вид антитела
положительность пробы Кумбса не поможет определить ее причину
0,5% здоровых людей имеют положительную пробу Кумбса без каких-либо признаков гемолитической анемии
не подходит для контроля успешности лечения, поскольку не укажет активность гемолиза эритроцитов

На тарелку или предметное стекло наносятся пипетками (разными!) по 1-й крупной капле сыворотки О(I), А(II), В(III). Заметив время, чистой стеклянной палочкой или чистым углом предметного стекла капли сывороток соединяются с каплями крови. Определение длится 5 минут, покачивая тарелку, затем к каждой смеси капель добавляют по 1-й капле физраствора и оценивают результаты. Лучше, если сыворотка будет 2-х различных серий. Результаты групп крови должны совпадать в обеих сериях сыворотки.

Оценка результатов изогемагглютинации:

изогемагглютинация. При положительной реакции в смеси появляются мельчайшие красные зернышки склеивающихся эритроцитов. Зернышки сливаются в более крупные зерна, а последние в хлопья. Сыворотка почти обесцвечивается;

при отрицательной реакции смесь в течение 5 мин остается равномерно окрашенной в розовый цвет и никаких зернышек не обнаруживается;

при работе с 3-я сыворотками групп О(I), А(II), В(III) возможны 4 комбинации реакций:

если все 3 сыворотки дали отрицательную реакцию, то есть смесь равномерно окрашена в розовый цвет - это О(I) группа крови;
если отрицательную реакцию дала только сыворотка группы А(II), а сыворотки О(I) и В(III) дали положительную реакцию, то есть появились зерна - это А(II) группа крови;
сыворотка группы В(II) дала отрицательную реакцию, а сыворотки группы О(I) и А(II) дали положительную - это В(III) группа крови.

все 3 сыворотки дали положительные реакции - испытуемая кровь АВ(IV) группы. В этом случае проводится исследование с сывороткой АВ(IV) группы.

Обратите внимание! Капли исследуемой крови должны быть в 5-10 раз меньше капель сыворотки.

Ошибки изогемагглютинации.

Невыполнение агглютинации, где она должна быть и наличие агглютинации, где ее быть не должно. Это может быть при слабом титре сыворотки плюс плохая агглютинация эритроцитов.

Наличие агглютинации, где ее быть не должно - это псевдоагглютинация, когда кучки эритроцитов образуют "монетные столбики". Покачивание тарелки или добавление физраствора их разрушают.

Панагглютинация, когда сыворотка склеивает все эритроциты, в то числе и своей группы крови. К 5-й минуте признаки агглютинации исчезают.

Имеется еще так называемая холодовая панагглютинация, когда склеивание эритроцитов происходит из-за низкой температуры воздуха (ниже 15 °С) в помещении.

Во всех этих случаях проводят либо повторную реакцию, либо по стандартным эритроцитам.

Определение резус-принадлежности крови

Для определения резус-принадлежности, т. е. выявления в крови людей наличия или отсутствия антигенов системы резус используют стандартные сыворотки (реагенты) анти-резус, различные по специфичности, т. е. содержащие антитела по отношению к различным антигенам этой системы. Для определения антигена Rh 0 (D) чаще всего применяют сыворотку антирезус с добавлением 10% раствора желатина или используют стандартный реагент анти-резус, приготовленный заранее с 33% раствором полиглюкина. Для получения более точных результатов исследования, а также для выявления антигенов других серологических систем используют пробу Кумбса (она очень чувствительна также при определении совместимости переливаемой крови). Для исследования используют кровь нативную или приготовленную с каким-либо консервантом. В этом случае кровь следует отмывать от консерванта десятикратным объемом изотонического раствора хлорида натрия.При определении резус-принадлежности - Rh 0 (D) следует применять два образца сыворотки или реагента анти-резус двух различных серий и одновременно использовать для контроля стандартные эритроциты, полученные из крови от резус-положительных (Rh +) и резус-отрицательных (Rh -) лиц. При определении других изоантигенов должны соответственно применяться контрольные эритроциты, в которых содержится или отсутствует тот антиген, против которого направлены антитела в стандартной сыворотке.

Неполные тепловые агглютинины являются наиболее частой разновидностью антител, способных вызывать развитие аутоиммунных гемолитических анемий. Эти антитела относятся к IgG, редко - к IgM, IgA.

ПРОБА КУМБСА

Проба Кумбса: введение. Проба Кумбса - метод лабораторной диагностики, основанный на реакции гемагглютинации.

Основной метод диагностики аутоиммунных гемолитических анемий - проба Кумбса. В основе ее лежит способность антител, специфичных к иммуноглобулинам (особенно к IgG) или компонентам комплемента (особенно СЗ), агглютинировать эритроциты, покрытые IgG или СЗ.

Связывание IgG и СЗЬ с эритроцитами наблюдается при аутоиммунной гемолитической анемии и лекарственной иммунной гемолитической анемии. Прямая проба Кумбса. Прямая проба Кумбса применяется для выявления антител или компонентов комплемента, фиксированных на поверхности эритроцитов. Она проводится следующим образом:

Для получения антител к человеческим иммуноглобулинам (антиглобулиновой сыворотки) или комплементу (антикомплементарной сыворотки) животное иммунизируют человеческой сывороткой, иммуноглобулинами или комплементом человека. Полученную от животного сыворотку очищают от антител к другим белкам.

Эритроциты больного отмывают физиологическим раствором для полного удаления сыворотки, которая нейтрализует антитела к иммуноглобулинам и комплементу и может стать причиной ложноотрицательного результата.

Если на поверхности эритроцитов фиксированы антитела или компоненты комплемента, добавление антиглобулиновой или антикомплементарной сыворотки вызывает агглютинацию эритроцитов.

Прямую пробу Кумбса применяют в следующих случаях:

Аутоиммунный гемолиз.

Гемолитическая болезнь новорожденных.

Лекарственная иммунная гемолитическая анемия.

Гемолитические трансфузионные реакции. Непрямая проба Кумбса. Непрямая проба Кумбса позволяет обнаружить антитела к эритроцитам в сыворотке. Для этого сыворотку больного инкубируют с донорскими эритроцитами группы 0, а затем проводят прямую пробу Кумбса.

Непрямую пробу Кумбса применяют в следующих случаях:

Определение индивидуальной совместимости крови донора и реципиента.

Выявление аллоантител, включая антитела, вызывающие гемолитические трансфузионные реакции.

Определение поверхностных эритроцитарных антигенов в медицинской генетике и судебной медицине.

Подтверждение однояйцовости близнецов при трансплантации костного мозга.

Для проведения биологической пробы кровь начинают переливать по возможности быстро (желательно струйно). После переливания 25 мл крови трубка системы пережимается зажимом. Затем делается пауза на 3 мин, во время которой ведется наблюдение за состоянием реципиента. Для постановки биологической пробы кровь по 25 мл вводится трижды. По окончании пробы (после переливания первых 75 мл крови дробными дозами по 25 мл с интервалами 3 мин) система регулируется на необходимую скорость переливания. При переливании больному более одного флакона крови необходимости извлекать иглу из вены. В этом случае из пробирки флакона, в котором кончилась кровь, игла извлекается и вводится в следующий флакон. Трубка системы (резиновая или пластмассовая) пережимается в этот момент зажимом. Если во время переливания крови возникает необходимость внутривенного введения реципиенту какого-либо другого препарата, это осуществляют путем прокалывания резиновой трубки системы. Проколы пластикатовой трубки недопустимы, так как они не спадаются. После каждой гемотрансфузии за больным необходимо наблюдение для выявления и своевременного устранения возможных осложнений, в том числе аллергических реакций. Через 2 часа после окончания гемотрансфузии следует измерить температуру тела. При повышении ее измерение необходимо повторять в последующие 4 часа через каждый час. Не меньшее значение имеет наблюдение за мочеотделением и составом мочи, которое дает возможность установить наличие токсической посттрансфузионной реакции. Наступление олигурии и анурии после переливания крови, наличие в моче форменных элементов крови и белка являются прямым указанием на развитие посттрансфузионного гемолиза.

Реакция Кумбса

Реакция Кумбса - антиглобулиновый тест для определения неполных антиэритроцитарных антител. Тест Кумбса используется для выявления антител к резус-фактору у беременных женщин и определения гемолитической анемии у новорождённых детей с резус-несовместимостью, влекущей разрушение эритроцитов . Данный метод был предложен английским врачом Робертом Кумбсом в 1945 году, в связи с чем впоследствии получил название «реакция Кумбса».

Прямая реакция Кумбса

Антитела , находящиеся на поверхности эритроцитов, могут быть как в статичном, так и в свободном состоянии в плазме крови . В зависимости от состояния антител проводится прямая или непрямая реакция Кумбса. Если есть основания для предположения, что антитела зафиксированы на поверхности эритроцитов, проводится прямой тест Кумбса. В этом случае тест проходит в один этап - добавляется антиглобулиновая сыворотка. Если на поверхности эритроцитов присутствуют неполные антитела, происходит агглютинация эритроцитов.

Непрямая реакция

Непрямая реакция Кумбса протекает в 2 этапа. Сначала необходимо искусственно осуществить сенсибилизацию эритроцитов. Для этого эритроциты и исследуемую сыворотку крови инкубируют, что вызывает фиксацию антител на поверхности эритроцитов. После чего проводится второй этап теста Кумбса - добавление антиглобулиновой сыворотки.

Примечания

Wikimedia Foundation . 2010 .

Смотреть что такое "Реакция Кумбса" в других словарях:

РЕАКЦИЯ КУМБСА - (Coombs test) метод определения резусантител на поверхности эритроцитов, которые вызывают осаждение глобулинов в сыворотке крови. Данный тест используется для диагностики гемолитической анемии у младенцев с резус несовместимостью, у которых… … Толковый словарь по медицине

Метод определения резусантител на поверхности эритроцитов, которые вызывают осаждение глобулинов в сыворотке крови. Данный тест используется для диагностики гемолитической анемии у младенцев с резус несовместимостью, у которых наблюдается… … Медицинские термины

- (антиглобулиновал проба) метод обнаружения естественно или искусственно связанных с клетками (обычно с эритроцитами) неполных Ат с помощью антиглобулиновой с ки (А. с.). А. с., преципитируя неполные Ат, включает в этот процесс клетки носители,… … Словарь микробиологии

КУМБСА РЕАКЦИЯ - (по имени британского иммунолога R. R. A. Coombs, род. в 1921, синоним – антиглобулиновая проба) – серологическая реакция, основанная на агглютинации эритроцитов неполными ауто– и изоантителами в присутствии антиглобулиновой сыворотки. При… … Энциклопедический словарь по психологии и педагогике

РЕАКЦИЯ ТРАНСФУЗИОННАЯ ГЕМОЛИТИЧЕСКАЯ - мед. Трансфузионная гемолитическая реакция (ТГР) гемолиз эритроцитов реципиента или донора (редко), возникающий при переливании крови и её компонентов. Реакции могут быть иммунной или неиммунной природы. Этиология и патогенез Иммунные реакции… … Справочник по болезням

- (R. R. A. Coombs, род. в 1921 г., англ. иммунолог) серологическая реакция, основанная на агглютинации эритроцитов неполными ауто и изоантителами в присутствии антиглобулиновой сыворотки; применяется в трансфузиологии, судебной медицине, а также… … Большой медицинский словарь

КУМБСА РЕАКЦИЯ - Кумбса реакция, серологическая реакция, позволяющая обнаружить неполные антитела, фиксированные на поверхности эритроцитов или содержащиеся в плазме крови. К. р. основана на применении антиглобулиновой сыворотки, получаемой путём гипериммунизации … Ветеринарный энциклопедический словарь

КУМБСА РЕАКЦИЯ - Используется для обнаружения моновалентных или так называемых неполных антител, в частности для анализа групп крови свиней и некоторых других животных … Термины и определения, используемые в селекции, генетике и воспроизводстве сельскохозяйственных животных

См. Кумбса реакция. (