Diagnostilised laboratoorsed uuringud psühhiaatrias on suunatud patsiendi somaatilise seisundi hindamisele, tema jälgimisele ravi ajal, samuti psüühikahäireid põhjustavate somaatiliste haiguste väljaselgitamisele. Enamik psühhiaatrias kasutatavatest laborimeetoditest ei erine üldsomaatilise meditsiini omadest. Siiski on mitmeid spetsiifilisi meetodeid, mille abil on võimalik etioloogiline diagnoos "in vitro" suure täpsusega panna. Nende hulka kuuluvad süüfilise diagnoosimiseks kasutatavad kolloidreaktsioonid, oligofreenia aminohapete metabolismi häirete tuvastamine, narkootiliste ainete sisalduse määramine bioloogilises keskkonnas ja psühhotroopsete ravimite taseme määramine veres ravi jälgimiseks.
I. Psühhoaktiivsete ainete sisalduse määramine uriinis.
Seda kasutatakse psühhoaktiivsete ainete ühekordse tarvitamise fakti tuvastamiseks ning korduva määramise korral nende kuritarvitamise ja patsiendi sõltuvuse tuvastamiseks. Aeg, mille jooksul saab neid aineid pärast viimast annust tuvastada, ulatub mitmest tunnist kuuni. Ligikaudne aeg, mille jooksul ravimit uriinis tuvastatakse, on toodud tabelis:
|
Ained |
Aeg |
|
Alkohol | |
|
Barbituraadid |
24 h (mittepika toimega) 3 nädalat (pikaajaline toime) |
|
Bensodiasepiinid | |
|
6-8 tundi (metaboliidid - 2-4 päeva) |
|
|
Marihuaana |
3 päeva - 4 nädalat (olenevalt kasutamise sagedusest) |
|
Metakvaloon | |
|
Fenüültsüklidiin | |
|
propoksüfeen | |
II. Tserebrospinaalvedeliku peamised reaktsioonid.
Pandey reaktsioon
Määramise meetod põhineb CSF hägususe määra määramisel, kui see lisatakse 15% karboolhappe lahusele. Mõni tilk Pandey reaktiivi ja 1-2 tilka CSF-i kantakse slaidile. Nende segamisel ilmneb erineva raskusastmega hägusus (olenevalt CSF-s sisalduva valgu kogusest). Tulemus määratakse 2 minuti pärast tumedal taustal. Hägususe astet tähistavad plussid (+, ++, +++, ++++) või (SI-süsteemi järgi) numbrid (1,2,3).
diagnostiline väärtus. Annab üldise ettekujutuse valgusisaldusest tserebrospinaalvedelikus, mis ei ole spetsiifiline globuliinitest.
Nonne-Appelli reaktsioon.
Määramise meetod põhineb globuliinide sadestamisel ammooniumsulfaadi küllastunud lahusega. Võrdne kogus CSF-i kantakse kihiti katseklaasi, mis sisaldab 0,5-1,0 ml reaktiivi. 2 minuti pärast ilmub lahuste piirile valge rõngas. Seejärel raputatakse toru ja määratakse hägususaste, väljendades seda plussidega. Hägusus ilmneb juba 0,033 g/l valgusisalduse juures.
diagnostiline väärtus. Annab suhtelise ettekujutuse globuliinide normaalsest või patoloogilisest sisaldusest, mille arv on eriti suurenenud degeneratiivsete ja krooniliste põletikuliste haiguste korral.
Lange reaktsioon(kolloidse kullaga)
Määramise meetod. Kui kloorkulla väga dispergeeritud kolloidsele lahusele lisatakse patoloogilist tserebrospinaalvedelikku, toimub koagulatsioon, osakesed sadestuvad ja lahuse värvus muutub. Igasse kümnesse tuubi, mis sisaldavad CSF-i erinevates lahjendustes (1:10, 1:20, 1:40 jne), lisatakse 2,5 ml kolloidlahust. Tulemust täheldatakse päeva pärast. Normaalse tserebrospinaalvedeliku korral jääb lahuse värvus kõikides katseklaasides punaseks (võimalik on selle intensiivsuse kerge langus 3.-5. katseklaasis). Patoloogilistes tingimustes muutub värvus, värvimuutust hinnatakse numbritega 0 - punane, 1 - punane-violetne, 2 - violetne, 3 - sinine-violetne, 4 - sinine, 5 - sinine, 6 - valge.
diagnostiline väärtus. Esineb normaalseid, degeneratiivseid (värvimuutus rea vasakus pooles – täheldatud süüfilise, kasvajate, hulgiskleroosi korral), põletikulist (värvimuutus rea paremas pooles – täheldatud meningiidi korral) ja segatüüpi kõverusi (värvimuutus). rea vasakus ja keskmises osas täheldatakse segatud meningo-parenhümaalsete kahjustustega).
Nimmepiirkonna CSF peamised füüsikalised ja keemilised parameetrid: värvitu, läbipaistev, pH = 7,4-7,6, üldvalk - 0,22-0,33 g/l, albumiinid - 46,6-52,8‰, globuliinid - 53,4-47,2‰, fibrinogeen - 0,0019-0,0030 g/l, .0-3 -3 mmol/1 uurea. l, glükoos - 2,5-4,44 mmol / l, kolesterool - 0,002-0,011 mmol / l, üldlämmastik - 11,4-15,7 mmol / l, jääklämmastik - 8,6-13,6 mmol / l.
III. Psühhotroopsete ravimite sisalduse määramine plasmas. See on praktiline nendel juhtudel, kui terapeutilise toime korral on plasmas sisalduva ravimi sisalduse ja "terapeutilise akna" vahel peaaegu lineaarne seos, st kontsentratsioonivahemik, mille juures ravimil on suurim väärtus. terapeutiline toime. Kasutatakse liitiumipreparaatide ja mõnede tritsükliliste antidepressantide jaoks meeleoluhäirete ravis.
Liitiumisisalduse määramine: veri võetakse 12 tundi pärast viimast ravimi sissevõtmist (tavaliselt hommikul pärast õhtust manustamist); määramiste sagedus ravi alguses - 1-2 korda nädalas, pärast annuse määramist - 1 kord kuus. Bipolaarse afektiivse häire säilitusraviks on vajalik kontsentratsioon 0,6-1,0 mg-ekv / l, maniakaalsete seisundite leevendamiseks - 1,0-1,5 mg-ekv / l.
Tritsüklilised antidepressandid: "terapeutiline aken" imipramiini (melipramiini) jaoks - 200-250 ng / ml, trüptisool (amitriptüliin) - 120-250, nortriptüliin - 50-150, desipramiini (petülüül) - 125-250 ng / ml.
… paralleelselt süüfilise üldise esinemissageduse suurenemisega suureneb ka neurosüüfilise juhtude osakaal.Süüfilise ravi ja ennetamise juhiste kohaselt tuleb varajase ja hilise latentse süüfilisega patsientidel enne ravi alustamist läbi viia tserebrospinaalvedeliku uuring närvisüsteemi kliiniliste kahjustuste, samuti varjatud ja hilise vormide korral. neurosüüfilisest.
Registrist kustutamise ajal viiakse läbi likoroloogilised uuringud:
(1 ) patsiendid, kelle ravi alustati varase ja hilise neurosüüfilise tõttu;
(2 ) isikud, kellel kliinilise ja seroloogilise kontrolli käigus ilmnevad teatud närvisüsteemi kahjustuse kliinilised ilmingud (äge süüfiline meningiit, meningovaskulaarne süüfilis, süüfiline meningomüeliit, tabes dorsalis, süüfiline igemepõletik, süüfilise neuriit ja polüneuriit, süüfilise kahjustus nägemisnärvid, kuulmisnärvide süüfilise kahjustus, süüfiline meningomüeliit, progresseeruv halvatus);
(3 ) isikud, kellel on seroloogiline resistentsus, mis püsib kliinilise ja seroloogilise vaatlusperioodi lõpuks.
Uurimiseks mõeldud tserebrospinaalvedelik saadakse lumbaalpunktsiooni teel III ja IV või IV ja V nimmelülide vahel, kasutades pikki õhukesi punktsioonnõelu (läbimõõt 0,4–0,8 mm ja pikkus 10–12 cm). 3-4 ml vedelikku kogutakse kahte steriilsesse katseklaasi (mitte rohkem kui 8-10 ml). Tuleb jälgida, et vedelik välja voolaks ja kanüül langeks (20-40 tilka minutis). Kui vedelik voolab pärast torni nõelast eemaldamist joana välja, tuleb toru koheselt madalale sügavusele tagasi sisestada, et reguleerida vedeliku väljavoolu kiirust.
Kui esimesed tserebrospinaalvedeliku tilgad on määrdunud verega, tuleb nõela asendit muuta (nihutada sügavamale või pisut välja tõmmata). Seejärel kogutakse selge vedelik teise katseklaasi (osa tserebrospinaalvedelikust koos vere seguga ei uurita).
Pärast punktsiooni töödeldakse torkekohta 3-5% joodi tinktuuriga ja kantakse steriilne side. Tüsistuste vältimiseks asetatakse patsient voodile kõhuga allapoole (voodi jalaots tõstetakse 20-30 cm). 3-4 tunni pärast lastakse tal külili keerata. Voodipuhkust jälgitakse 24-48 tundi. Patsiendil soovitatakse pärast punktsiooni 6-8 tunni jooksul juua palju vedelikku ja olla näljane.
Saadakse üks portsjon tserebrospinaalvedelikku (3-4 ml). kliinilisse ja biokeemilisse laborisse tsütoosi, valgusisalduse, globuliini (Pandi, Nonne-Appelt, Weichbrodt või Takata-Ara) ja kolloidsete (Lange või parafiin) reaktsioonide uurimiseks.
Mitte-Apeli reaktsioon. Ammooniumsulfaadi küllastunud lahuse abil moodustub valgutsükkel reaktiivi kokkupuute piiril tserebrospinaalvedelikuga. Pärast maha raputamist ja sellest tulenevalt vedelike segunemist tekib erineva intensiivsusega opalestsents või hägusus. Nonne-Apeli reaktsiooni hinnatakse nelja punkti süsteemi järgi: nõrgalt positiivne (+) - opalestsents on kergelt märgatav, mõõdukalt positiivne (++) - kerge hägusus, positiivne (+++) - väljendunud hägusus ja järsult positiivne (+ +++) - intensiivne hägusus . Ross-Jones muutis seda reaktsiooni mõnevõrra. Ta tegi ettepaneku mitte segada tserebrospinaalvedelikku ammooniumsulfaadi küllastunud lahusega, vaid valada see pipeti ülaosast ettevaatlikult tilkhaaval kontsentreerituma reagendi peale. Veelgi enam, tserebrospinaalvedelik valmistatakse erineva lahjendusastmega. 3 minuti pärast määratakse vedelike ja ammooniumsulfaadi lahuse kokkupuutepinnal moodustunud ringi hägususaste. Opalestsentsrõngas moodustub, kui valgusisaldus tserebrospinaalvedelikus on kontsentratsioonil 3 g/l.
Pandey reaktsioon sadestub mitte ainult globuliinid, vaid ka kõik tserebrospinaalvedeliku valgud. See seisneb selles, et kellaklaasile, mis asetatakse tumedale taustale, kantakse 10-15 tilka 10% karboolhappe lahust, seejärel üks tilk tserebrospinaalvedelikku. Reaktsioon on väga tundlik ja selle määrab 3 minuti pärast vedeliku ja reaktiivi kokkupuutepunktis tekkinud hägususe intensiivsus.
Weinbrochti reaktsioon Seda toodetakse nii, et 7 osale tserebrospinaalvedelikku lisatakse 3 osa 0,1% hõbenitraadi lahust ja seejärel loksutatakse. Samal ajal tekib erineval määral hägusust, mille järgi hinnatakse valguliste ainete (mitte ainult globuliinide) sisaldust.
Takata-ara reaktsioon. kolloidne reaktsioon. Sublimaadi- ja fuksiinilahuste lisamisel aluselisele vedelale täheldatakse tavaliselt lillat värvi segu. Kui vedelik muutub selgeks ja moodustub sade, nimetatakse reaktsiooni metasüüfiliseks (progresseeruv halvatus), punaseks värvumisel meningiidiks.
Lange reaktsioon põhineb patoloogiliselt muutunud tserebrospinaalvedeliku võimel kolloidsete lahustega segamisel muuta lahuse dispersiooni ja seeläbi selle värvi; tavalise tserebrospinaalvedelikuga lahuse lillakaspunane värvus ei muutu. Patoloogias eristatakse mitut tüüpi värvimuutuste kõveraid. Esimene tüüp on paralüütiline: järk-järgult suureneva tserebrospinaalvedeliku lõhenemisastmega katseklaasides ilmneb värvimuutus ainult esimeses 5 katseklaasis, mille normaalne normaliseerumine on üsna järsk. Selline reaktsiooni kulg on iseloomulik progresseeruvale paralüüsile. Teistele neurosüüfilise vormidele on iseloomulikum süüfilise hammas - mõõdukas värvimuutus 2-5 katseklaasis. Teist tüüpi kõver on meningiit (äge meningiit): värvuse muutust täheldatakse alates 2. või 3. torust, saavutab maksimumi 6. ja 7. torus, misjärel see järsult normaliseerub. Teiste kesknärvisüsteemi haiguste korral on Lange reaktsioon üsna tüüpiline ja seda ei saa kasutada diagnostilise abivahendina.
Teine portsjon likööri (3-4 ml) saadetakse seroloogilisse laborisse Wassermani reaktsiooni uurimiseks kardiolipiini ja treponemaalsete antigeenidega, RIF ja RIBT.
Wassermani reaktsioon(komplemendi fikseerimise reaktsioon, RSK) treponemaalse ja kardiolipiini antigeenidega kasutatakse süüfilise diagnoosi kinnitamiseks haiguse aktiivsete ilmingute korral, süüfilisega patsiendiga tihedas kontaktis olnud inimeste uurimiseks, latentse (varjatud) tuvastamiseks. ) süüfilis, ravi efektiivsus. Psühhiaatria- ja neuroloogiahaiglate patsientide läbivaatamisel. Doonorid ja rasedad naised, sealhulgas isikud, kes on suunatud raseduse kunstlikule katkestamisele.
Uurimiseks võetakse verd 5-7 ml kubitaalveenist steriilse nõelaga. Imikutel võetakse verd ajalisest veenist või kanna sisselõigetest. Vereproovid võetakse rangelt tühja kõhuga. Ja jätke see puhastesse kuivadesse katseklaasidesse 2-3 tunniks toatemperatuurile hüübima. CSR-i ja spetsiifiliste reaktsioonide määramine toimub dermatoveneroloogiliste asutuste seroloogilistes laborites.
RSK põhimõte seisneb selles, et süüfilisehaigete vereseerumis leiduvatel reagiinidel on võime siseneda erinevate antigeenidega ühenditesse. Saadud kompleksid sorteerivad reaktsiooni sisestatud komplemendi. Reagiini-antigeeni-komplemendi kompleksi näitamiseks kasutatakse hemolüütilist süsteemi (oina erütrotsüütide segu hemolüütilise seerumiga). Kompleksi juuresolekul sadestuvad erütrotsüüdid. Mis on palja silmaga märgatav. Hemolüüsi raskusastet näitab arst klahvidega: järsult positiivne 4+, positiivne 3+, nõrgalt positiivne 2+ või 1+ ja negatiivne. Lisaks nende reaktsioonide kvalitatiivsele hindamisele on olemas ka kvantitatiivne hindamine, mis on oluline süüfilise teatud etappide diagnoosimisel ja ravi efektiivsuse jälgimisel.
Praegu on antigeenidena soovitatav kasutada kordilipiili antigeeni (kolesterooli ja letsitiiniga rikastatud pulli südame ekstrakt) ja triponemaalset antigeeni (apatogeensete kultuurtreponeemide ultrahelisuspensioon). Komplemendi sidumise reaktsioon kardiolipiini ja treponemaalsete antigeenidega muutub positiivseks 2–4 nädala pärast, suureneb järk-järgult ja saavutab maksimumi (1:160–1:320 ja üle selle) sekundaarse värske süüfilise korral. Seejärel reaginide tiiter järk-järgult langeb ja sekundaarse korduva süüfilise korral ei ületa tavaliselt 1:180 - 1:120. tertsiaarse süüfilisega patsientide seas annavad need reaktsioonid positiivse tulemuse ainult 70%.
Tuleb rõhutada, et CSR-id ei ole rangelt süüfilisele spetsiifilised ja võivad mõnel juhul anda valepositiivseid (mittespetsiifilisi) tulemusi, need võivad olla saadud tehniliste vigade tõttu (täielik hemolüüs, mittesteriilne vereproovide võtmine, labori ebapiisav kvalifikatsioon). assistendid). Vale reaktsioone täheldatakse pidalitõve, malaaria, mõnikord situatsiooniliste haiguste, kasvajate, tuberkuloosi, maksahaiguste, ravimite võtmise ajal ja ka raseduse ajal. Menstruatsiooni ajal jne. Ei ole soovitatav verd uurida esimesel nädalal pärast vaktsineerimist, vigastusi, kirurgilisi sekkumisi, palavikuga esimese 2 nädala jooksul pärast sündi, vastsündinutel esimese 10 elupäeva jooksul, sest. füüsikalis-keemilised muutused vereseerumis nendes tingimustes võivad olla sarnased süüfilisega patsientidel täheldatutele.
REEF põhinevad fluorestseeruvate antikehade määramise kaudsel meetodil. Selle reaktsiooni antigeen on tapetud kultiveeritud kahvatute treponeemide suspensioon, mis on kinnitatud alusklaasidele, millele kantakse test ja liigivastased fluorestseeruvad seerumid. RIF-i tulemused määratakse fluorestsentsmikroskoobi all, hinnates preparaadis oleva treponema luminestsentsi. Positiivse tulemuse korral on treponeemidel kollakasroheline helendus, mille astet tähistavad plussid 1+ kuni 4+, negatiivse tulemuse korral treponeemid ei helenda. RIF on praegu installitud mitmes modifikatsioonis (RIF - abs, RIF - 200).
RIBT, mille pakkus välja 1949. aastal R. Nelson ja M. Meyer, põhineb kahvatu treponema immobiliseerimisel patsiendi vereseerumi antigeenide poolt komplemendi juuresolekul. RIBT antigeenina kasutatakse süüfilisega nakatunud küülikutelt saadud kahvatu elustreponema suspensiooni. Immobiliseeritud treponeemid loendatakse mikroskoobi all. Reaktsioonide tulemusi hinnatakse protsendina 0 kuni 20% - negatiivne, 21 kuni 31% - kahtlane, 31 kuni 50% - nõrgalt positiivne, 51 kuni 100% - positiivne. RIBT muutub positiivseks süüfilise a esmase perioodi lõpus ja jääb selliseks selle haiguse kõigil perioodidel ja mõnikord isegi pärast täielikku süüfilisevastast ravi. RIBT võib anda valepositiivseid tulemusi, kui testitav seerum sisaldab treponeemilisi aineid (antibiootikumid - penitsilliin, tetratsükliin), mis põhjustavad kahvatu treponema mittespetsiifilist immobilisatsiooni. Seetõttu on selle reaktsiooni verd võimatu uurida varem kui 2 nädalat pärast antibiootikumide kasutamise lõppu.
Spetsiifiliste seroloogiliste reaktsioonide (RIF ja RIBT) läbiviimiseks võetakse kubitaalveenist tühja kõhuga verd koguses 5-10 ml. Pärast steriliseerimist pestakse süstalt ja nõela isotoonilise naatriumkloriidi lahusega ning veri valatakse kuiva katseklaasi RIF-testimiseks ja steriilsesse katseklaasi RIB-testimiseks. Süüfilise spetsiifiliste seroloogiliste reaktsioonide väljaselgitamine toimub naha- ja suguelundite asutuste spetsialiseeritud laborites.
Likvoroloogilise uuringu tulemusi hinnatakse Robustovi skaala järgi, millele on lisatud uusimad andmed RIF-i ja RIBT-i kohta tserebrospinaalvedelikuga. Selle klassifikatsiooni järgi on süüfilisega patsientidel tserebrospinaalvedelikus neli muutust.
I kraad- väikesed üksikud või kombineeritud muutused tserebrospinaalvedelikus.
Muutused tserebrospinaalvedelikus loetakse ebaoluliseks, kui: tsütoos üle 8 raku 1 mm3 kohta, valk üle 0,33%, Nonne-Apelt reaktsioonid (++), Pandey reaktsioon (+++), Lange reaktsioon rohkem kui kaks või üks kolmik. , RV nõrgalt positiivne, RIF positiivne.
Kui tuvastatakse üks neist muutustest, räägivad nad üksikutest muutustest tserebrospinaalvedelikus, kui kaks, siis need kombineeritakse. kõige sagedamini tuvastatakse need enne ravi primaarse ja sekundaarse süüfilise, vaskulaarse neurosüüfilisega patsientidel, mõnel hiljuti neurosüüfilise ravi lõpetanud patsientidel, samuti mõnel patsiendil pärast vaatlusperioodi.
II aste- olulised muutused CSF-s koos RV ja RIBT negatiivsete tulemustega.
Esineb valkude ja rakkude dissotsiatsiooni (tsütoos on normaalses vahemikus või veidi suurenenud, valgu kogus on järsult suurenenud, globuliinide kolloidsed reaktsioonid on positiivsed) või raku-valgu dissotsiatsioon (pleotsütoos ja valgusisalduse kerge tõus, Pandey ja Nonne-Appelt reaktsioon on nõrgalt positiivne või negatiivne).
Selliseid muutusi leitakse sagedamini süüfilise meningiidi, meningovaskulaarse süüfilise erinevate kliiniliste vormidega patsientidel.
III aste- äkilised muutused tserebrospinaalvedelikus (rakk-valk või valk-rakk dissotsiatsioon, globuliinireaktsioonid on sagedamini positiivsed) ja RV, RIBT ja RIF positiivsed tulemused.
See määratakse kaugelearenenud varajase varjatud või ägeda varajase süüfilise meningiidi, meningovaskulaarse süüfilise, hilise mesenhümaalse neurosüüfilise ja mõnel tabes dorsalisega patsientidel.
IV aste- paralüütilist tüüpi muutused tserebrospinaalvedelikus: kõrge pleotsütoos või kõrge valgusisaldus, globuliinireaktsioonid, RV, RIF, RIBT on positiivsed, Lange kõver on paralüütilist tüüpi.
Sellised muutused tserebrospinaalvedelikus on kõige iseloomulikumad progresseeruva halvatuse, taboparalüüsiga patsientidele, vähemal määral - seljaaju ja veelgi vähemal määral - hilise mesenhümaalse neurosüüfilisega patsientidele.
Tserebrospinaalvedeliku uurimine, tserebrospinaalvedelik on üks levinumaid teste, mida edukalt kasutatakse mitmesuguste neuroloogiliste haiguste esinemise tuvastamiseks.
Pandy reaktsioon on tserebrospinaalvedeliku uurimise meetod, mida kasutas esmakordselt Ungari neuroloog ja vaimse tervise spetsialist Kalman Pandy 1910. aastal. Sellest ajast alates on seda meditsiinis laialdaselt kasutatud, kuna see võimaldab täpselt ja usaldusväärselt tuvastada seljaaju või aju patoloogiliste protsesside esinemist.
Tehnika omadused
Pandey reaktsioon on uurimismeetod, mis võimaldab määrata globuliinide (valkude) kõrgenenud taset tserebrospinaalvedelikus.
Karboolhapet kasutatakse keemilise reagendina. Karboolhappe ja tserebrospinaalvedeliku kokkupuutel moodustuvad hägususalad, samas kui hägususe intensiivsus sõltub otseselt tserebrospinaalvedelikus leiduvate valkude hulgast.
Tavaliselt on inimese tserebrospinaalvedelik läbipaistev. Tserebrospinaalvedeliku hägusus tekib leukotsüütide, globuliinide, erütrotsüütide kontsentratsiooni suurenemisega selles, erinevate mikroorganismide esinemisega. Nende elementide suurenenud kontsentratsioon viitab põletikulistele protsessidele, aju- või seljaaju patoloogiatele ja veresoonte häiretele.
Uuringu läbiviimine ja tulemuste tõlgendamine
Lumbaalpunktsiooni tulemusena võetakse tserebrospinaalvedelik, mis on reaktsiooni lähteaineks. 
Uurimiseks kasutatakse nõgusat klaasi, mille alla asetatakse must paber. Reagendina kasutatakse karboolhappe lahust, mis on valmistatud järgmises vahekorras: 1 osa kristalliseerunud karboolhapet 15 osa destilleeritud vee kohta.
1 ml tilgutatakse alusklaasi keskossa. kontsentreeritud karboolhapet, kantakse tilk CSF-i reaktiivi keskele või äärtele. Võimalik on tilgutada 2 tilka CSF-i, kuid oluline on jälgida 1 tilga tserebrospinaalvedeliku osakaalu: 1 ml. lahendus.
Kui Pandey reaktsioon tserebrospinaalvedelikus on positiivne, moodustub kahe vedeliku kokkupuutepunktides hägususala, mille intensiivsus sõltub valkude hulgast tserebrospinaalvedelikus.
Reaktsiooni raskusastet tõlgendatakse ristide abil. Niisiis, üks "1+" rist tähendab nõrka opalestsentsi ja on kas normi variant või näitab globuliinide madalat sisaldust tserebrospinaalvedelikus (veidi rohkem kui 0,2 g / l).
Tulemuseks "2+" on märgatav opalestsents ja "3+" on mõõdukas hägusus. "4+" tähendab tugevat hägusust, mis näitab globuliinide hulga märkimisväärset suurenemist tserebrospinaalvedelikus.
Pandey test on sarnane Nonne-Apelti reaktsiooniga, ainsa erinevusega, et Pandey reaktsiooni läbiviimiseks on vaja väiksemat kogust CSF-i.
Mida näitab positiivne vastus?
Kõrgenenud globuliinide tase tserebrospinaalvedelikus võib olla mädase, tuberkuloosi tagajärg või viidata hiljutisele ajuoperatsioonile, abstsessile või. Samal ajal, mida rohkem "riste" testi tulemuste põhjal täheldatakse, seda rohkem väljenduvad muutused, häired selja- või ajus.
Kui tserebrospinaalvedelikus on vere lisandeid, on Pandey test alati positiivne. Sellepärast täheldatakse vaskulaarsüsteemi hemodünaamiliste häiretega positiivset reaktsiooni.
Hemodünaamika rikkumine toob kaasa asjaolu, et veresoonte seinad muutuvad kergesti läbilaskvaks ja valgukomponendiga vereplasma siseneb tserebrospinaalvedelikku. Pandi test on positiivne.
Pandey reaktsioon on kvalitatiivne test, mis näitab valgu suurenenud kontsentratsiooni olemasolu tserebrospinaalvedelikus. Diagnoosi selgitamiseks ja globuliinide hulga selgemaks määramiseks veres kasutatakse muid informatiivsemaid ja kaasaegsemaid uurimismeetodeid.
hemorraagiline bilirubinarhia ( ksantokroomia) on põhjustatud vere sattumisest vedelikku, mille lagunemine viib tserebrospinaalvedeliku värvumiseni roosaks, seejärel oranžiks, kollakaks, kollaseks, rikkalikult kollaseks. Lisaks võib liköör olla kohvikollane, pruun ja pruun. Need CSF-i värvuse variandid on tingitud erütrotsüütide hemoglobiini ja hemoglobiini erinevate vormide lagunemissaadustest. Ksantokroomne värvus ilmneb kollatõvega; veresoonterikas ja tserebrospinaalvedeliku ruumi lähedal paiknevad ajukasvajad; tsüstid; subarahnoidaalne penitsilliini suurte annuste manustamine; vastsündinutel on see värvus olemuselt füsioloogiline.
punane värv(erütrokroomia) annab tserebrospinaalvedelikule muutumatut verd, mis võib ilmneda trauma, hemorraagia tagajärjel.
Tume-kirss või tume-pruuni värvi võimalik hematoomide ja tsüstidest tserebrospinaalvedeliku allaneelamise korral.
Tserebrospinaalvedeliku hägusus sõltub rakuliste elementide (erütrotsüüdid, leukotsüüdid, koe rakulised elemendid), bakterite, seente arvu olulisest suurenemisest ja valgusisalduse suurenemisest. CSF on kirjeldatud kujul: täiesti läbipaistev, opalestseeruv, kergelt hägune, hägune, järsult hägune CSF.
fibriini kile Tavaliselt ei sisalda CSF praktiliselt fibrinogeeni. Fibrinogeeni ilmumine tserebrospinaalvedelikus on tingitud kesknärvisüsteemi haigustest, mis põhjustavad BBB rikkumist. Fibrinoosse kile moodustumist põhjustab in vitro fibrinogeeni muundumine fibriiniks. Väga suure fibrinogeenisisaldusega tserebrospinaalvedelikus moodustub fibriinne kile, mis näeb välja nagu õrn kile katseklaasi seintel, kotike, mis sisaldab tserebrospinaalvedelikku koos rakuliste elementidega.
Valgu suurenemine tserebrospinaalvedelikus see võib olla tuberkuloosse, mädase, seroosse meningiidi, hemodünaamiliste häiretega, pärast ajuoperatsiooni, ajukasvaja, poliomüeliit, ajukahjustus koos subarahnoidaalse hemorraagiaga, nefriit ureemiaga. Ägeda põletiku korral suurenevad α-globuliinid, kroonilise põletiku korral β- ja γ-globuliinid. Valgu suurenemine tserebrospinaalvedelikus mitmesugustes patoloogilistes protsessides sõltub hemodünaamilistest häiretest ajuveresoontes, mis viib nende seinte läbilaskvuse suurenemiseni ja vereplasma valgumolekulide sisenemiseni tserebrospinaalvedelikku. Valk määratakse reaktsioonil 3% sulfosalitsüülhappega.
Positiivsed Pandey ja Nonne-Apeli reaktsioonid viitavad globuliinifraktsiooni sisalduse suurenemisele ja kaasnevad hemorraagiad ajus, ajukasvajad, erineva päritoluga meningiit, progresseeruv halvatus, seljaaju, hulgiskleroos. Segu tserebrospinaalvedelikuga annab alati positiivseid globuliinireaktsioone.
Glükoosi kontsentratsioon tserebrospinaalvedelikus erinevate haiguste korral kajastub tabelis. 3-13. Hüpoglükoarhia põhjuseks on suurenenud glükolüüs, halvenenud transport läbi hematoentsefaalbarjääri, rakkude, eriti leukotsüütide suurenenud glükoosi kasutamine.
Pleotsütoos- rakkude arvu suurenemine tserebrospinaalvedelikus. Kerge pleotsütoos on võimalik süüfilise, spetsiifilise meningiidi, arahnoidiidi, entsefaliidi, hulgiskleroosi, epilepsia, kasvajate korral. Ägeda mädase meningiidi, abstsessi korral täheldatakse massilist pleotsütoosi. Tserebrospinaalvedeliku uuringu tulemused erinevat tüüpi meningiidi korral on toodud tabelis. 3-15.
Lümfotsüütilist pleotsütoosi täheldatakse operatsioonijärgsel perioodil neurokirurgiliste operatsioonide, kroonilise ajukelmepõletiku (tuberkuloosse meningiidi), viirusliku, süüfilise, seente meningoentsefaliidi korral. Mõõdukas pleotsütoos koos lümfotsüütide ülekaaluga on võimalik patoloogilise protsessi lokaliseerimisega ajukoe sügavustes.
Muutumatuid neutrofiile täheldatakse, kui värske veri siseneb tserebrospinaalvedelikku ajuoperatsioonide ajal ägeda põletikuga; muutunud neutrofiilid - koos põletikulise protsessi nõrgenemisega. Muutumatute ja muutunud neutrofiilide kombinatsioon viitab põletiku ägenemisele. Suure neutrofiilse pleotsütoosi terav ilmumine on võimalik, kui abstsess tungib CSF-i ruumidesse. Poliomüeliidi korral on haiguse alguses ülekaalus neutrofiilid, seejärel lümfotsüüdid.
Eosinofiilid tuvastatakse subarahnoidaalsete hemorraagiate, toksiliste, reaktiivsete, tuberkuloossete, süüfiliste, epideemilise meningiidi, ajukasvajate korral.
Plasmarakke leidub entsefaliidi, tuberkuloosse meningiidi, haavade aeglase paranemise korral pärast operatsiooni.
Makrofaagid tuvastatakse normaalses tsütoosis pärast verejooksu ja põletikulises protsessis. Tserebrospinaalvedelikus võib selle kanalisatsiooni ajal postoperatiivsel perioodil avastada suurt hulka makrofaage. Nende puudumine pleotsütoosis on halb prognostiline märk. Makrofaagid, mille tsütoplasmas on rasvapiiskad (granuleeritud pallid), esinevad aju tsüstidest pärinevas vedelikus ja mõnedes kasvajates.
Epiteelirakud määratakse membraanide neoplasmidega, mõnikord põletikulise protsessiga.
Pahaloomuliste kasvajate rakke võib leida aju tserebrospinaalvedelikus koos vähi ja melanoomi metastaasidega ajukoores, subkortikaalsetes piirkondades, väikeajus; blastrakud - neuroleukeemiaga.
Erütrotsüüdid tekivad tserebrospinaalvedelikus intrakraniaalsete hemorraagiate korral (sel juhul ei ole oluline mitte niivõrd nende absoluutarv, kuivõrd suurenemine korduval uurimisel).
119. Pandey ja Nonne – Apelt reaktsioonid
Pandey reaktsiooni läbiviimise reagendina kasutatakse selget supernatantvedelikku, mis saadakse 100 g vedela karboolhappe tugeval loksutamisel 1000 ml destilleeritud veega. Sademe ja selge vedeliku (reaktiivi) saamiseks asetatakse see segu esmalt 3-4 tunniks termostaati ja seejärel hoitakse 2-3 päeva toatemperatuuril.
Asetage kell või klaasklaas tumedale paberile ja kandke sellele 2-3 tilka reaktiivi, seejärel 1 tilk tserebrospinaalvedelikku. Kui tilk muutub häguseks või piki selle perifeeriat tekib filamentne hägusus, loetakse reaktsioon positiivseks.
Nonne-Apelti reaktsiooni läbiviimiseks on vaja puhtaid katseklaase, ammooniumsulfaadi küllastunud lahust, destilleeritud vett ja tumedat paberit. Ammooniumsulfaadi küllastunud lahus valmistatakse järgmiselt: 0,5 g keemiliselt puhast neutraalset ammooniumsulfaati pannakse 1000 ml kolbi, seejärel valatakse 100 ml 95 °C-ni kuumutatud destilleeritud vett, loksutatakse, kuni sool on täielikult lahustunud ja jäetakse. mitu päeva toatemperatuuril. 2-3 päeva pärast lahus filtreeritakse ja määratakse pH. Reaktsioon peab olema neutraalne.
Katseklaasi valatakse 0,5-1 ml saadud lahust ja piki katsuti seina lisatakse ettevaatlikult sama kogus tserebrospinaalvedelikku. 3 minuti pärast hinnake tulemust. Valkja rõnga ilmumine näitab positiivset reaktsiooni. Seejärel raputatakse katseklaasi sisu, määratakse hägususaste, võrreldes seda destilleeritud vett sisaldava katseklaasiga. Reaktsiooni tulemusi hinnatakse musta paberi taustal.
120. Bordet-Jangu reaktsioon
Väärtuslik diagnostiline test kroonilise gonorröa avastamiseks inimestel, kes põevad urogenitaalsüsteemi kroonilisi põletikulisi haigusi. Kirjanduse andmetel avastatakse selle meetodi õigel kasutamisel kuni 80% bakterioskoopilise või bakterioloogilise meetodiga avastamata gonorröa juhtudest.
Bordet-Jangu reaktsioon võib olla tingitud varasemast haigusest või gonovatsiini kasutamisest diagnostiliseks (immunobioloogiline provokatsioonimeetod), aga ka terapeutiliseks (urogenitaalsüsteemi krooniliste põletikuliste protsesside ravi naistel Bakšejevi järgi). eesmärk. Seetõttu on enne selle läbiviimist vaja hoolikalt koguda anamnees,
Samuti võib reaktsioon olla valepositiivne piima sissetoomisel, pürogenaali kasutamisel meditsiinilistel eesmärkidel.
Seetõttu ei ole positiivne Bordet-Jangu reaktsioon gonokokkinfektsiooni olemasolu vaieldamatu tõend, nii nagu negatiivne ei saa olla tõend gonorröa puudumise kohta. Kuid selle positiivsed tulemused pikka aega peaksid suunama arsti otsima gonokokkinfektsiooni koldeid kehas.
Antigeenina kasutatakse tapetud gonokoki kultuuri, mis sisaldab 3-4 miljardit mikroobikeha 1 ml kohta. Gonokoki antigeen säilitatakse formaldehüüdi lahusega ja valatakse 1-5 ml ampullidesse. Avamata ampullid sobivad 6 kuud, avatuna säilivad 2-3 päeva steriilses katseklaasis külmkapis temperatuuril 3-5°C,
Borde-Zhangi komplemendi sidumise reaktsioon viiakse läbi sarnaselt Wassermani reaktsiooniga (vt nr 121). Gonokoki antigeen lahjendatakse isotoonilise naatriumkloriidi lahusega vastavalt ampulli etiketil näidatud tiitrile. Reaktsioon viiakse kõige sagedamini läbi 2,5 ml mahus, seetõttu lisatakse igasse katseklaasi 0,5 ml lahjendatud 1: 5 testitavale seerumile 0,5 ml lahjendatud antigeeni. Ülejäänud 1,5 ml on 1 ml hemolüütilist süsteemi ja 0,5 ml komplemendi.
Reaktsioon loetakse positiivseks, kui uuritavas seerumis esineb erineval määral hemolüüsi viivitust. Kontrollrühmas (tervete inimeste vereseerum) täheldatakse täielikku hemolüüsi.
121. Wassermani reaktsioon
Süüfilisega patsientide vereseerumis on reagiine ja antikehi. Reaginidel on võime siseneda kardiolipiini antigeeniga ühenditesse. Spetsiifilised Treponema pallidum'i vastased antikehad kombineeritakse spetsiifiliste antigeenidega. Saadud antigeen-antikeha kompleksid sorbeeritakse reaktsioonile lisatud komplemendi poolt. Näidustus tehakse hemolüütilise süsteemi sisseviimisega (lamba erütrotsüüdid + hemolüütiline seerum).
Et reaktsioon toimuks:
a) isotooniline naatriumkloriidi lahus;
b) ultraheliga töödeldud treponemaali (säilitatakse külmkapis +4 °C juures) ja kardiolipiini (säilitatakse toatemperatuuril) antigeenid;
c) komplement, mis on 5-10 terve merisea südame punktsiooniga saadud vereseerum. Säilib külmkapis kuni 2 kuud
konserveerimine 4% boorhappe lahusega ja 5% naatriumsulfaadi lahusega;
d) hemolüsiin - hemolüütiline küüliku vereseerum, mis on immuniseeritud erineva tiitriga lamba erütrotsüütidega (säilitatakse külmkapis temperatuuril 4 ° C);
e) lamba erütrotsüüdid, mis on saadud kägiveeni punktsiooniga. Veri kogutakse steriilsesse klaashelmestega purki (segamiseks), loksutatakse 15 minutit. Fibriini trombid eraldatakse filtrimisega läbi steriilse marli. Defibrineeritud verd võib külmkapis hoida kuni 5 päeva.
Mõnikord on vaja lambaverd pikemalt säilitada ja seetõttu konserveeritakse seda spetsiaalse säilitusainega (6 g glükoosi, 4,5 g boorhapet, 100 ml isotoonilist naatriumkloriidi lahust), mida keedetakse veevannis. 20 minutit päevas 3 päeva jooksul 100 ml defibrineeritud lambavere jaoks on vaja 15 ml säilitusainet. Sel viisil säilitatud defibrineeritud verd säilitatakse külmkapis.
Põhikatsele eelneb mitu etappi.
Patsiendilt võetakse kubitaalveenist 5-10 ml verd ja töödeldakse seerumit. Lastel võib verd võtta temporaalveenist või kanna sisselõikest. Punktsioon tehakse steriilsete instrumentide, süstla ja nõelaga
eelnevalt pestud isotoonilise naatriumkloriidi lahusega.
Uuringu jaoks võetakse veri tühja kõhuga; 3-4 päeva enne uuringut on patsiendil keelatud kasutada ravimeid, digitaalise preparaate ja alkoholi.
Te ei tohiks läbi viia uuringuid kõrgenenud kehatemperatuuriga patsientidel, pärast traumat, operatsiooni, anesteesiat, hiljutisi nakkushaigusi, naistel menstruatsiooni ajal, rasedatel (raseduse viimase 10 päeva jooksul), sünnitusel (esimese 10 päeva jooksul). päeva pärast sünnitust) ja ka vastsündinuid (esimese 10 elupäeva jooksul).
Saadud veri steriilses katsutis asetatakse 15-30 minutiks termostaadi temperatuurile 37 °C. Saadud tromb eraldatakse katseklaasi seintest steriilse klaaspulgaga ja asetatakse üheks päevaks külmkappi. Eraldatud läbipaistev seerum (trombi kohal) imetakse Pasteuri pipetiga, kasutades kummist pirni, või valatakse ettevaatlikult teise steriilsesse katsutisse ja inaktiveeritakse 30 minutit veevannis temperatuuril 56 °C. Sel viisil katse jaoks valmistatud seerum säilib külmkapis kuni 5-6 päeva.
Antigeenid lahjendatakse vastavalt etiketil näidatud meetodile ja tiitrile.
Valmistage hemolüütiline süsteem. Selleks tsentrifuugitakse reaktsiooniks vajalikus koguses defibrineeritud verd või lamba erütrotsüüte, plasma eraldatakse ettevaatlikult ja sadet pestakse 5-6 mahuosa isotoonilise naatriumkloriidi lahusega, kuni supernatant muutub täielikult värvituks. Settetest valmistatakse kolmekordse tiitri järgi 3% erütrotsüütide suspensioon isotoonilises naatriumkloriidi lahuses.
Hemolüütilise seerumi lahus ja lamba erütrotsüütide suspensioon segatakse kiiresti ja asetatakse 30 minutiks termostaadi.
Kuivkomplement lahjendatakse isotoonilise naatriumkloriidi lahusega vahekorras 1:10, normaalne inaktiveeritud inimese seerum - 1:5.
Komplementi tiitritakse 30 katsutisse, mis asetatakse 10 katsutist koosnevasse riiulisse 3 reas. Kahes reas tiitritakse see kahe antigeeni juuresolekul, kolmandas - isotoonilise naatriumkloriidi lahusega. Viis katseklaasi on kontrollkatseklaasi: kaks vastava kahe antigeeni jaoks ja üks komplemendi, hemolüütilise seerumi ja isotoonilise naatriumkloriidi lahuse kontrollimiseks hemotoksilisuse jaoks; täitke need järgmiselt:
Reaktiivid, ml | Katseklaaside rida |
||||
3% lamba erütrotsüütide suspensioon | |||||
hemolüütiline seerum, lahjendatud kolmekordse tiitriga | |||||
Täiendus 1:10 | |||||
Tiitriga lahjendatud triponemaalne antigeen | |||||
Tiitriga lahjendatud kardiolipiini antigeen | |||||
Isotooniline naatriumkloriidi lahus | |||||
Torud asetatakse 45 minutiks termostaadi, misjärel neid kontrollitakse. Hemolüüs ei tohiks olla üheski katseklaasis.
Komplement lahjenduses 1:10 valatakse riiuli 1. rea 10 katseklaasi annustes: 0,1, 0,16, 0,2, 0,24, 0,3, 0,36, 0,4, 0,44, 0,5 ja 0,55 ml. Lisage iga katseklaasi sisule kuni 1 ml isotoonilist naatriumkloriidi lahust ja segage hoolikalt. Igast katsutist kantakse 0,25 ml segu 2. ja 3. rea vastavatesse katseklaasidesse. Katseklaasidega resti loksutatakse, 0,5 ml hemolüütilist süsteemi lisatakse 3. katseklaaside reale, loksutatakse uuesti ja asetatakse 45 minutiks termostaadi temperatuurile 37 °C. Kõigisse 30 katseklaasi valatakse 0,25 ml isotoonilise naatriumkloriidi lahusega vahekorras 1:5 lahjendatud tavalist inimese vereseerumit.
Antigeen I (treponemaalne ultraheli), lahjendatud tiitriga isotoonilise naatriumkloriidi lahusega, lisatakse 0,25 ml 10 esimese rea katseklaasi; antigeen II (kardiolipiin samas lahjenduses ja samas koguses) - 2. rea 10 katseklaasis. 3. rea 10 katseklaasi valatakse 0,25 ml isotoonilist naatriumkloriidi lahust, ülejäänud 0,25 ml. Pärast termostaadis inkubeerimist lisatakse 0,5 ml hemolüütilist süsteemi 20 katseklaasi (1. ja 2. rida), loksutatakse ja asetatakse uuesti 45 minutiks termostaadi.
45 minuti pärast määratakse komplemendi töödoos, see tähendab selle tiiter, mille soodustus on vahemikus 15-20%.
Komplemendi tiitrit peetakse selle minimaalseks koguseks, mis põhjustab oina erütrotsüütide täielikku hemolüüsi antigeeni ja normaalse inimese vereseerumi juuresolekul.
Peamine kogemus on see, et iga testitud inaktiveeritud seerum, mis on lahjendatud isotoonilise naatriumkloriidi lahusega vahekorras 1:5, valatakse kolmes katseklaasis 0,25 ml-sse. Lisage esimesse katsutisse 0,25 ml antigeeni I, teise 0,25 ml antigeeni II ja kolmandasse (kontroll) 0,25 ml isotoonilist naatriumkloriidi lahust. Lisage kõikidesse katseklaasidesse 0,25 ml tööannuseni lahjendatud komplementi. Kõik katseklaasid asetatakse 45 minutiks termostaadi, seejärel lisatakse neile 0,5 ml hemolüütilist süsteemi, loksutatakse ja asetatakse 45-50 minutiks termostaadi. Katse tulemus registreeritakse pärast täieliku hemolüüsi algust kontrollkatseklaasides.
Reaktsiooni tulemusi hinnatakse plussidega: hemolüüsi täielik viivitus (tugevalt positiivne reaktsioon) ++++, oluline (positiivne reaktsioon) +++, osaline (nõrgalt positiivne reaktsioon) ++, ebaoluline (kahtlane reaktsioon) - ±, hemolüüsi hilinemine puudub (negatiivne reaktsioon) - .
Wassermani reaktsiooni kvantitatiivse meetodi abil viiakse katse läbi isotoonilise naatriumkloriidi lahusega lahjendatud seerumi mahu vähenemise.
Wassermani reaktsiooni peamise kogemuse läbiviimise skeem
Koostis (ml). Kogumaht 1,25 ml | torude arv |
||
Testseerum inaktiveeritakse, lahjendatakse 1:5 Antigeen I (treponemaalne), lahjendatud tiitri järgi Antigeen II (kardiolipiin), lahjendatud tiitriga Isotooniline naatriumkloriidi lahus Komplement, lahjendatud vastavalt tööannusele | |||
Wassermani reaktsiooni kliinilist tähtsust on raske üle hinnata. Seda tehakse kõigile patsientidele enne ravi algust, kuid see on eriti oluline latentse süüfilise, siseorganite ja närvisüsteemi kahjustuste korral.
Wassermani reaktsiooni tulemused iseloomustavad ravi kvaliteeti, mis annab aluse ravipatsientide registreerimisest teatud aja jooksul.
Primaarse süüfilise korral on Wassermani reaktsioon tavaliselt positiivne 6. nädala lõpus alates nakatumise hetkest; sekundaarse värske süüfilise korral on see positiivne peaaegu 100% juhtudest, sekundaarse korduva - 98-100% juhtudest; kolmanda taseme aktiivne - 85%; tertsiaarne peidetud - 60% juhtudest.
Wassermani reaktsioon viiakse läbi kaks korda kõigile rasedatele, somaatiliste, närvi-, vaimsete ja nahahaigustega patsientidele, samuti elanikkonna määratud kontingentidele. Samal ajal tuleks reaktsiooni positiivseid ja nõrgalt positiivseid tulemusi käsitleda kriitiliselt, kuna need võivad olla raseduse lõpus ja pärast sünnitust, kilpnäärme ületalitluse, malaaria, pidalitõve, pahaloomulise kasvaja lagunemise, nakkushaiguste, kollagenooside jne korral. Seetõttu tuleks haiguste kliiniliste ilmingute esinemisel neid koos bakterioskoopia andmetega ennekõike arvesse võtta.
Samas on tegureid, mis võivad Wassermani reaktsiooni tulemuste tegelikku olemust moonutada: halvasti pestud laboriklaasid (katseklaasides happe ja leelise jäljed), uuringuteks võetud vere pikaajaline säilitamine, rasvade tarbimine. ja alkohol patsientide poolt enne uuringut, menstruatsiooni jne.
Kõigil juhtudel on soovitav läbi viia patsiendi igakülgne uuring, sealhulgas lisaks Wassermanni reaktsioonile ka RIBT (vt 122, 123, 124) jne.
122. Sachsi reaktsioon - Vitebsky (tsütokoolne)
Kasutatakse süüfilise tuvastamiseks. See põhineb sademe moodustumisel, kui patsiendi vereseerumi segatakse antigeeniga.
Antigeeni valmistamiseks puhastatakse mitme veisesüdame lihased kõõlustest, sidekirmetest, rasvast, hakitakse hakklihamasinas ja ekstraheeritakse 5-kordse mahuga 96% etanooliga 15 päeva jooksul igapäevase 20-minutilise loksutusega. Saadud ekstrakt aurutatakse veevannil portselantopsis vaakumis. Jäägile (helekollane lipoidide mass) lisatakse kuuma 96% etüülalkoholi koguses 1/3 ekstraheerimiseks võetud lihaste mahust.
Ekstrakti hoitakse 3 päeva toatemperatuuril, filtreeritakse (külmas vees) ja lisatakse 0,3-0,6% kristalse kolesterooli lahus, sõltuvalt positiivsete ja negatiivsete seerumitega tiitrimise tulemustest. Säilitage tsütokoolset antigeeni toatemperatuuril suletud ampullides või suletud katseklaasides.
Metoodika. 2 ml isotoonilisele naatriumkloriidi lahusele valatakse kiiresti 1 ml tsütokooli antigeeni ja jäetakse 15 minutiks toatemperatuurile, kuni tekivad helbed. Lisage 0,1 ml antigeenset emulsiooni 0,2 ml inaktiveeritud seerumile, loksutage 3 minutit ja jätke 30 minutiks seisma, seejärel lisage 1 ml isotoonilist naatriumkloriidi lahust.
Antigeeniga kontrolltuubi lisatakse 1,2 ml isotoonilist naatriumkloriidi lahust ja 0,1 ml antigeenset emulsiooni. Kontrollis ei tohiks olla helbeid. Reaktsiooni tulemusi arvestatakse visuaalselt või suurendusklaasiga ja näidatakse olenevalt välja kukkunud helveste hulgast plussidega (++++, +++, ++). Negatiivse reaktsiooni korral helbed puuduvad, kuid toru sisu võib olla kergelt opalestseeruv.
1931. aastal pakkusid P. Sachs ja E. Witebsky välja selle tehnika modifikatsiooni, mis seisneb antigeeni lahjendamises kahes faasis: 1 osale antigeenile lisatakse 2 osa isotoonilist naatriumkloriidi lahust, hoitakse toatemperatuuril 5 minutit. ja lisatakse veel 9 osa isotoonilist lahust naatriumkloriidi. Samuti soovitatakse antigeeni lahjendada 2% naatriumkloriidi lahusega, mis autorite sõnul suurendab reaktsiooni tundlikkust. Võimalik on ka reaktsiooni kvantitatiivne muutmine seerumi lahjendamisega (1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 jne).
Reaktsioon on üsna tundlik, võtab vähe aega (umbes 1 tund) ja selle tulemusi loetakse kohe.
123. Kahvatu treponema immobilisatsioonireaktsioon (RIBT)
Reaktsiooni abil süüfilisega patsientide vereseerumis tuvastatakse antikehad ja komplement, mis immobiliseerivad kahvatu treponema.
Primaarse süüfilise korral on RIBT valdavalt negatiivne, sekundaarne - positiivne 92–96% juhtudest, tertsiaarne - 92–100%, närvisüsteemi süüfilise ja kaasasündinud süüfilise korral - 86–89% juhtudest.
RIBT positiivseid tulemusi täheldati sarkoidi, erütematoosi, diabeedi, pahaloomuliste kasvajate, viirushepatiidi, maksatsirroosi, malaaria, pidalitõve, nakkusliku mononukleoosi ja mõnede troopiliste riikide haiguste (pint, yaws jne) puhul.
Antigeen on kahvatu treponema suspensioon, mis on võetud süüfilisega nakatunud küüliku munanditest, sisestades munandisse 0,75–1 ml kahvatu treponema suspensiooni isotoonilises naatriumkloriidi lahuses (50 isendit vaatevälja kohta).
Munandimaterjal tuleb võtta 6-8 päeva pärast looma nakatumist. Enne antigeeni võtmist küülik tapetakse veretustamise teel (südame- või unearteri punktsioon). Munandikude purustatakse ja täidetakse terve küüliku vereseerumiga, mis on lahjendatud isotoonilise naatriumkloriidi lahusega, loksutatakse -30 minutit ja seejärel tsentrifuugitakse 10 minutit (1000 pööret minutis). Supernatanti uuritakse mikroskoopiliselt. Igas vaateväljas peaks olema vähemalt 10-15 kahvatut treponeemi.
Komplement valmistatakse tavapärasel viisil merisigade verest.
RIBT jaoks vajate: 1,2 ml 0,2% želatiini lahust, 2,8 ml 5% albumiini lahust, 1,6 ml kahvatu treponema suspensiooni; keskmine pH - 7,2. Sellele segule lisatakse 0,15 ml komplementi (kokteili). Paralleelselt pannakse kaks proovi: aktiivsete (katse) ja reaktiivsete (kontroll) komplementidega.
Uuritud seerum kogutakse melangeuritesse kuni märgini “1” ning seejärel kogutakse kokteil kuni märgini “2” ning need suletakse steriilse kummirõngaga.
Samal ajal viiakse sarnane reaktsioon läbi ilmselgelt positiivsete ja ilmselgelt negatiivsete seerumitega.
Melangerid nummerdatakse ja asetatakse 18-20 tunniks termostaadi temperatuurile 35 ° C, seejärel eemaldatakse need paarikaupa termostaadist (katse - kontroll) ja sisu valatakse vastavatesse katseklaasidesse. Klaasklaasile kantakse 2 tilka: vasakul - kogemus, paremal - kontroll, kaetud katteklaasiga ja mikroskoobiga pimedas vaateväljas.
Esiteks uuritakse kontrolli tulemusi: määratakse liikuvate ja liikumatute kahvatute treponeemide protsent. Loendusvalem: X = (A - B) / A * 100, kus A on liikuvate kahvatute treponeemide arv kontrollis; B - mobiilsete kahvatute treponeemide arv katses.
Näide: (24–19) / 24 * 100 = 21%.
RIBT tulemuste hinnangud: alla 20% - negatiivne. 21-30% - kahtlane, 31-50% - nõrgalt positiivne, üle 50% - positiivne.