4.3.1. Hormoonide määramise meetodid
Praegu on kliinilises praktikas hormoonide määramiseks kõige enam kasutatavad meetodid:
radioimmuunne,
immunoradiomeetriline,
radioretseptor,
Keemilised meetodid ja teised.
Kuni 60ndate lõpuni oli ainus meetod hormoonide taseme määramiseks bioloogiline, mille põhiprintsiip oli, et teadmata koguses hormooni sisaldav proov viiakse bioloogilisse süsteemi (loom, organ, kude) ja hormooni tase selles bioloogilistes toimeühikutes määratakse hormooni raskusastmega. vastuseks. Seega stimuleerib prolaktiin annusest sõltuvalt tuvide struuma epiteeli kasvu, testosteroon stimuleerib ebaküpsetel ja kastreeritud rottidel eesnäärme kasvu.
Radioimmunoanalüüs(RIA) hormoonide määramine põhineb radioaktiivselt märgistatud ja märgistamata hormoonide konkureerival seondumisel spetsiifiliste antikehadega. Hormoon toimib antigeenina. RIA eelisteks on kõrge tundlikkus, kõrge spetsiifilisus, täpsus, reprodutseeritavus ja rakendamise lihtsus. Puuduseks on radioaktiivsete isotoopide kasutamine, mis määrab katsekomplektide piiratud säilivusaja.
Immunoradiomeetriline analüüs(IRMA) on RIA modifikatsioon, milles radioaktiivse märgisega märgitakse mitte antigeen (hormoon), vaid spetsiifilised antikehad.
Radioretseptori analüüs(PRA) – hormoonide vastaste antikehade asemel kasutatakse nende enda retseptoreid.
Lisaks radioaktiivsele märgisele saab hormonaalanalüüsis markeritena kasutada ensüüme ( seotud immunosorbentanalüüs) ja luminestseeruvad ained ( luminestsentsanalüüs).
Kasutades keemilised meetodid määrata hormoonide ja nende prekursorite metaboliite (näiteks norepinefriin ja adrenaliin, dopamiin, serotoniin uriinis). Vere hormoonide sisalduse määramine annab usaldusväärsemad ja täpsemad tulemused.
Biopsias või sektsioonimaterjalis toodetud hormoonide määramine.
4.3.2. Instrumentaalsed meetodid
Instrumentaalsed meetodid viivad lõpule endokriinsete näärmete haiguste diagnostilise otsingu. Kõige sagedamini kasutatavad: ultraheli (ultraheli), radiograafia, kompuutertomograafia (CT), magnetresonantstomograafia (MRI). Lisaks kasutatakse spetsiaalseid meetodeid, nagu angiograafia koos sisesekretsiooninäärmest voolava vere selektiivse proovi võtmisega hormoonide määramiseks, kilpnäärme, neerupealiste stsintigraafia (radioisotoopide uuring) ja luudensitomeetria.
Ultraheli protseduur Kõige sagedamini kasutatakse endokrinoloogias. Meetodi põhimõte seisneb selles, et piesokristalliga andur saadab inimese kehasse ultrahelilaineid ja seejärel tajub peegeldunud impulsse, muutes need elektrilisteks signaalideks, mis läbi võimendi sisenevad videomonitori. Ultraheli aitab määrata elundi suurust ja ehhostruktuuri, samuti teostada elundite punktsioonibiopsiat.
CT skaneerimine põhineb keha "lõigu" saamisel kudede neeldumisvõimet käsitlevate andmete arvutitöötluse teel, kui neid läbib kollimeeritud röntgenikiir. Kompuutertomograafides püütakse detektoritega kinni torust kiiratav kitsas röntgenkiir, mis läbib uuritavat kihti ja töödeldakse. Iga kangas neelab sõltuvalt tihedusest kiirgust erinevalt. Patoloogilise fookuse minimaalne suurus, mis määratakse CT abil, on vahemikus 0,2 kuni 1 cm.
Magnetresonantstomograafia(MRI) põhineb võimalusel muuta staatilises magnetväljas vesiniku prootonite resonants- ja relaksatsiooniprotsesse vastusena raadiosagedusliku impulsi rakendamisele. Pärast impulsi lõppemist naasevad prootonid oma algsesse olekusse, "välja heites" seadme poolt kinni püütud liigse energia. Kujutise konstrueerimine toimub erinevate punktide energiate erinevuse järgi. MRI-skannerid võimaldavad teha lõikeid paksusega 0,5–1 mm. MRI eelised on mitteinvasiivsus, kiirgusega kokkupuute puudumine, luukoe "läbipaistvus" ja pehmete kudede kõrge diferentseeritus.
Geneetiline analüüs
Molekulaarbioloogiline diagnostika on väga informatiivne meetod paljude endokriinsete haiguste diagnoosimiseks.
Kõik pärilikud haigused jagunevad kolme põhirühma: kromosoom-, geeni- ja päriliku eelsoodumusega haigused.
Kromosomaalsete endokriinsete haiguste diagnoosimiseks kasutatakse karüotüpiseerimise meetodit ja sugukromatiini uurimist (Downi, Shereshevsky-Turneri, Klaifelteri sündroomid). Geenimutatsioonide määramiseks kasutatakse laialdaselt sugupuude (sugupuu) koostamise meetodit.
Päriliku eelsoodumusega haiguste arengu määrab teatud pärilike tegurite (alleelide ja keskkonnategurite mutatsioonid või kombinatsioonid) koosmõju. Selle rühma haigustest on enim uuritud autoimmuunhaigusi, nagu suhkurtõbi, hüpokortisism, hüpo- ja hüpertüreoidism.
Lisaks haiguse eelsoodumusele võib genotüüp määrata selle prognoosi, tüsistuste arengut, samuti kasutatavate ravimeetodite efektiivsuse prognoosi.
Endokriinsüsteem ehk sisemise sekretsiooni süsteem koosneb endokriinsetest näärmetest, mille nimetus on see, et nad eritavad oma tegevuse spetsiifilisi saadusi – hormoone – otse keha sisekeskkonda, verre. Neid näärmeid on kehas kaheksa: kilpnääre, kõrvalkilpnääre ehk struuma (tüümus), hüpofüüsi, käbinääre (või käbinääre), neerupealiste (neerupealiste), kõhunääre ja sugunäärmed (joonis 67).
Endokriinsüsteemi üldine funktsioon taandub keemilise regulatsiooni rakendamisele kehas, ühenduse loomisele selle organite ja süsteemide vahel ning nende funktsioonide säilitamisele teatud tasemel.
Endokriinsete näärmete hormoonid on väga kõrge bioloogilise aktiivsusega ained, see tähendab, et nad toimivad väga väikestes annustes. Koos ensüümide ja vitamiinidega kuuluvad need nn biokatalüsaatorite hulka. Lisaks on hormoonidel spetsiifiline toime – osad mõjutavad teatud organeid, teised juhivad teatud protsesse organismi kudedes.
Endokriinnäärmed osalevad organismi kasvu- ja arenguprotsessis, selle elutähtsat aktiivsust tagavate ainevahetusprotsesside reguleerimises, keha jõudude mobiliseerimises, samuti energiaressursside taastamises ja selle uuendamises. rakud ja koed. Seega lisaks keha elutähtsa tegevuse närvilisele regulatsioonile (sealhulgas sportimisel) toimub endokriinne regulatsioon ja humoraalne regulatsioon, mis on omavahel tihedalt seotud ja viiakse läbi "tagasiside" mehhanismi järgi.
Kuna kehakultuur ja eriti sport nõuavad rasketes emotsionaalse ja füüsilise stressi tingimustes inimese erinevate süsteemide ja organite aktiivsuse üha täiuslikumat reguleerimist ja korrelatsiooni, on endokriinsüsteemi funktsiooni uurimine, kuigi see pole veel laialt levinud. praktika, hakkab järk-järgult võtma üha suuremat kohta sportlaste kompleksuuringutes.
Endokriinsüsteemi funktsionaalse seisundi õige hindamine võimaldab füüsiliste harjutuste ebaratsionaalse kasutamise korral tuvastada selles patoloogilisi muutusi. Ratsionaalse süstemaatilise kehakultuuri ja spordi mõjul seda süsteemi täiustatakse.
Endokriinsüsteemi kohanemist kehalise aktiivsusega ei iseloomusta mitte ainult endokriinsete näärmete aktiivsuse suurenemine, vaid peamiselt üksikute näärmete vaheliste suhete muutumine. Väsimuse tekkega pikaajalisel tööl kaasnevad ka vastavad muutused sisesekretsiooninäärmete aktiivsuses.
Inimese endokriinsüsteem, mis paraneb ratsionaalse treeningu mõjul, aitab kaasa keha kohanemisvõime suurenemisele, mis toob kaasa sportliku jõudluse paranemise, eriti vastupidavuse arendamisel.
Endokriinsüsteemi uurimine on keeruline ja seda tehakse tavaliselt haiglas. Kuid on mitmeid lihtsaid uurimismeetodeid, mis võimaldavad teatud määral hinnata üksikute endokriinsete näärmete funktsionaalset seisundit - anamnees, uurimine, palpatsioon, funktsionaalsed testid.
Anamnees. Andmed puberteediperioodi kohta on olulised. Naisi küsitledes selgitatakse välja menstruatsiooni alguse aeg, regulaarsus, kestus, rohkus, sekundaarsete seksuaaltunnuste kujunemine; meeste küsitlemisel - häälemurde ilmnemise aeg, näokarvad jne Vanematel inimestel - menopausi alguse aeg, s.o naistel menstruatsiooni katkemise aeg, meeste seksuaalfunktsiooni seisund.
Teave emotsionaalse seisundi kohta on hädavajalik. Näiteks kiired meeleolumuutused, ärrituvus, ärevus, millega tavaliselt kaasneb higistamine, tahhükardia, kaalulangus, väike palavik, väsimus, võivad viidata kilpnäärme funktsiooni suurenemisele. Kilpnäärme funktsiooni langusega täheldatakse apaatsust, millega kaasneb letargia, aeglus, bradükardia jne.
Kilpnäärme funktsiooni suurenemise sümptomid langevad mõnikord peaaegu kokku sümptomitega, mis ilmnevad sportlase ületreenimisel. Ajaloo sellele poolele tuleks pöörata erilist tähelepanu, kuna sportlastel on kilpnäärme funktsiooni suurenemise (hüpertüreoidismi) juhtumeid.
Uurige välja suhkurtõvega patsientidele iseloomulikud kaebused - suurenenud janu ja söögiisu jne.
Ülevaatus. Pöörake tähelepanu järgmistele tunnustele: üksikute kehaosade arengu proportsionaalsus pikkadel inimestel (kas esineb nina, lõua, käte ja jalgade ebaproportsionaalset suurenemist, mis võib viidata hüpofüüsi eesmise näärme hüperfunktsioonile - akromegaaliale), punnis silmad, silmade väljendunud sära (täheldatud hüpertüreoidismiga), näo turse (täheldatud hüpotüreoidismiga), samuti sellised nähud nagu kilpnäärme suurenemine, higistamine või kuiv nahk, rasva olemasolu (valdav rasva ladestumine alakõhus, tuharatele, reitele ja rindkeresse on iseloomulik rasvumisele, mis on seotud hüpofüüsi ja sugunäärmete talitlushäiretega, järsu kaalukaotusega (see juhtub türeotoksikoosi, hüpofüüsi haigustega - Simmondsi tõbi ja neerupealised - Addisoni tõbi). haigus).
Lisaks tehakse uurimise käigus kindlaks juuksepiir kehal, kuna karvakasv sõltub suurel määral sugunäärmete, kilpnäärme, neerupealiste ja hüpofüüsi hormonaalsetest mõjudest. Naistele iseloomulik juuste olemasolu meestel võib viidata sugunäärmete funktsiooni puudumisele. Naiste meessoost juuksepiir võib olla hermafroditismi ilming - mõlemale soole iseloomulike tunnuste esinemine ühel isendil (sellistel isikutel ei ole lubatud sportida).
Liigne karvakasv kehal ja jäsemetel ning naistel ja näol (vuntsid ja habe) võimaldab kahtlustada neerupealise koore kasvajat, kilpnäärme ületalitlust jne.
Palpatsioon. Kõigist sisesekretsiooninäärmetest saab otse palpeerida (nagu ka uurida) kilpnääret ja meessoost sugunäärmeid; günekoloogiline läbivaatus - naissoost sugunäärmed (munasarjad).
funktsionaalsed testid. Endokriinsete näärmete funktsiooni uurimisel kasutatakse palju selliseid teste. Spordimeditsiinis on olulisemad funktsionaalsed testid, mida kasutatakse kilpnäärme ja neerupealiste uurimisel.
Funktsionaalsed testid kilpnäärme funktsiooni uurimisel põhinevad selle näärme poolt reguleeritud ainevahetusprotsesside uurimisel. Kilpnäärmehormoon - türoksiin stimuleerib oksüdatiivseid protsesse, osaledes erinevat tüüpi ainevahetuse (süsivesikute, rasvade, joodi metabolismi jne) reguleerimises. Seetõttu on kilpnäärme funktsionaalse seisundi uurimise peamiseks meetodiks põhiainevahetuse (täielikus puhkeseisundis inimese poolt tarbitud energia hulk kilokalorites) määramine, mis sõltub otseselt kilpnäärme talitlusest. ja selle poolt eritatava türoksiini kogust.
Põhiainevahetuse väärtust kilokalorites võrreldakse Harris-Benedicti tabelite või nomogrammide järgi arvutatud õigete väärtustega ja väljendatakse protsendina õigest väärtusest. Kui uuritava sportlase põhiainevahetus ületab ettenähtud ühe rohkem kui + 10%, viitab see kilpnäärme hüperfunktsioonile, kui alla 10% - selle alatalitlusele. Mida suurem on ülejäägi protsent, seda rohkem väljendub kilpnäärme hüperfunktsioon. Märkimisväärse hüpertüreoidismi korral võib põhiainevahetuse kiirus olla suurem kui +100%. Põhiainevahetuse kiiruse langus enam kui 10% võrra võrreldes õigega võib viidata kilpnäärme alatalitlusele.
Kilpnäärme talitlust saab uurida ka radioaktiivse joodi abil. See määrab kilpnäärme võime seda omastada. Kui 24 tunni pärast jääb kilpnäärmesse üle 25% manustatud joodi, viitab see selle funktsiooni suurenemisele.
Funktsionaalsed testid neerupealiste funktsiooni uurimisel annavad väärtuslikke andmeid. Neerupealistel on kehale mitmesugune mõju. Neerupealise säsi, mis vabastab hormoone – katehhoolamiine (adrenaliin ja norepinefriin), suhtleb sisesekretsiooninäärmete ja närvisüsteemi vahel, osaleb süsivesikute ainevahetuse reguleerimises, hoiab veresoonte toonust ja südamelihaseid. Neerupealiste koor eritab aldosterooni, kortikosteroide, androgeenseid hormoone, millel on oluline roll kogu organismi elus. Kõik need hormoonid osalevad mineraalide, süsivesikute, valkude ainevahetuses ja paljude kehas toimuvate protsesside reguleerimises.
Intensiivne lihastöö parandab neerupealise medulla talitlust. Selle suurenemise astme järgi saab hinnata koormuse mõju sportlase kehale.
Neerupealiste funktsionaalse seisundi, vere keemilise ja morfoloogilise koostise (kaaliumi ja naatriumi hulk vereseerumis, eosinofiilide arv veres) ja uriini (17-ketosteroidide määramine jne) määramiseks. uuritakse.
Treenitud sportlastel on pärast nende valmisoleku tasemele vastavat koormust mõõdukas neerupealiste funktsiooni tõus. Kui koormus ületab sportlase funktsionaalseid võimeid, on neerupealiste hormonaalne funktsioon alla surutud. See määratakse spetsiaalse vere ja uriini biokeemilise uuringuga. Neerupealiste funktsiooni puudulikkusega muutub mineraalide ja vee ainevahetus: vereseerumis väheneb naatriumi tase ja suureneb kaaliumi hulk.
Ilma kõigi endokriinsete näärmete täiusliku ja kooskõlastatud funktsioonita on võimatu saavutada kõrgeid sporditulemusi. Ilmselt on erinevad spordialad seotud erinevate endokriinsete näärmete töö ülekaaluka tõusuga, sest iga näärme hormoonidel on spetsiifiline toime.
Vastupidavuse kvaliteedi arendamisel on põhiroll hormoonidel, mis reguleerivad kõiki peamisi ainevahetuse liike, kiiruse ja jõu omaduste kujunemisel on oluline adrenaliini taseme tõus veres.
Kaasaegse spordimeditsiini kiireloomuline ülesanne on uurida sportlase endokriinsüsteemi funktsionaalset seisundit, et selgitada selle rolli sooritusvõime parandamisel ja patoloogiliste muutuste ärahoidmisel nii endokriinsüsteemis endas kui ka teistes süsteemides ja organites (alates endokriinsüsteemi talitlushäired mõjutavad kogu keha).
Endokriinsüsteemi uurimise meetod koosneb anamneesi võtmisest, patsiendi uurimisest, palpatsioonist, auskultatsioonist, laboratoorsetest ja instrumentaalsetest uuringumeetoditest, nii üld- kui ka erimeetoditest.
Kliinilise läbivaatuse jaoks on oluline tingimus endokriinsete organite uurimise järjestuse järgimine: ajuripats, kilpnääre, kõrvalkilpnääre, kõhunääre, neerupealised, sugunäärmed.
Anamneesi kogumisel ja uurimisel pööratakse tähelepanu konkreetse endokriinnäärme patoloogiale iseloomulike kaebuste ja sümptomite olemasolule või puudumisele patsiendil. Endokriinsete näärmete kahjustusele viitavad kaebused ja sümptomid on väga erinevad, kuna hormoonidel on suur mõju lapse ainevahetusele, füüsilisele ja vaimsele arengule, lapse erinevate organite ja süsteemide funktsionaalsele seisundile.
Endokriinsete näärmete patoloogiaga patsiendid võivad kurta suurenenud ärrituvuse, ärrituvuse, rahutu une, higistamise, naha värvimuutuse, juuste ja küünte kasvu halvenemise, janu jms üle.
Hüpofüüsi eesmise osa eosinofiilsete rakkude hüperfunktsiooniga patsiendid võivad kaevata hiiglasliku (üle 190–200 cm) kasvu (gigantismi), ebaproportsionaalselt pikkade jäsemete, sõrmede ja varvaste (akromegaalia) üle. Samuti võib täheldada jämedaid näojooni, prognaatilisust, suuri hammastevahesid, selgroolülide intensiivsest kasvust tingitud liigset lülisambaküfoosi. Esineb ka ülavõlvide suurenemist, selgelt väljendunud lihaseid, kuid iseloomulik on lihasnõrkus.
Hüpofüüsi basofiilsete rakkude hüperfunktsiooniga võivad vanemad kaevata kehakaalu märkimisväärse suurenemise, tüdrukute näokarvade (hirsutism), kasvupeetuse üle, mis lõpuks määratakse kindlaks patsiendi uurimisel.
Hüpofüüsi puudulikkuse puhul on tüüpilisteks kaebusteks ja sümptomiteks pikkuse langus (normiga üle 25%), näoilmete ja "lapselike" näojoonte muutus, lihaste kehv areng, hilinenud või puuduv puberteet, väikesed suguelundid, naha marmorsus, külmad jäsemed. Nende sümptomite kombinatsioon rasv-seksuaalsete häiretega (keha alumine osa) on võimalik hüpotalamuse-hüpofüüsi piirkonna hävitava kahjustusega.
Kilpnäärme ületalitluse korral võivad esineda kaebused kehakaalu languse, ärrituvuse, liigse erutuse ja liikuvuse, emotsionaalse ebastabiilsuse, südamepekslemise, peopesade niiskuse suurenemise ja üldise higistamise, naha sügeluse, kuumatunde (palaviku), valu südame piirkonnas. , pisaravus, valutunne silmades. Uurimisel saate tuvastada sõrmede värisemist, silmalaugude turset, suletud silmalaugude värisemist (Rosenbachi sümptom), silmalaugude pilgutamist (Stellwagi sümptom), ühe- või kahepoolset eksoftalmust, silmade konvergentsi halvenemist, mis on tingitud silma sisemise sirglihase parees (Mobiuse sümptom), valge sklera triip iirise kohal alla vaadates (Grefe'i sümptom), üles vaadates
(Kocheri sümptom), valge sklera iirise ümber avatud silmadega (Delrymple'i sümptom), "hirmunud", säravate silmade fikseeritud pilk.
Tervete laste kaela uurimisel, eriti puberteedieas, on näha kilpnäärme laine. Kui kilpnäärme asendis on asümmeetria, näitab see sõlmede olemasolu. Hüpertüreoidismiga lapsel võib täheldada kilpnäärme I astme suurenemist - maakitsuse suurenemist, mis on märgatav allaneelamisel; II aste - maakitsuse suurenemine
ja osakesed; III aste - "paks kael" (joonis 44); IV aste - väljendunud tõus (struuma, muudab järsult kaela konfiguratsiooni) (joon. 45); V aste - tohutu suurusega struuma.
Tuleb märkida, et erinevalt teistest kaelal paiknevatest moodustistest on kilpnääre neelamisel hingetoruga segunenud.
Kilpnäärme alatalitlusega patsientidel võib esineda varane mahajäämus füüsilises ja vaimses arengus, hiline ja vale hammaste tulek, süljeeritus, kare ja kähe hääl, norskamine hingamisel, huvi vähenemine keskkonna vastu, letargia.
Haiget last uurides võib täheldada näo luude arengu mahajäämust, sadula nina, makroglossiat, halli nahka, pundunud nägu, väikseid silmi, paksud huuled, rabedaid küüsi, hõredaid juukseid peas, lühikest kaela, jäsemeid, sõrmed (luu kasvu pikkus on piiratud, laius puudub).
Kõrvalkilpnäärmete hüperfunktsioon toob kaasa söögiisu vähenemise või isegi isutus, iiveldus, oksendamine, kõhukinnisus, luuvalu, lihasnõrkus, luumurrud, janu, polüdipsia, polüuuria, depressioon, mäluhäired.
Hüpoparatüreoidismiga patsientide anamneesis märgitakse suurt kehakaalu sündimisel, nabanööri jääkide aeglast mahalangemist, kroonilist kõhulahtisust, mis sageli muutub kõhukinnisuseks, arengupeetust, fotofoobiat, krampe, liigset erutust, larüngospasmi. Uurimisel võivad ilmneda valikulised sümptomid: silmalaugude spasm, konjunktiviit, läätse hägustumine, hammaste lagunemine, õhukesed küüned, juuste pigmentatsioonihäired.
Diabeedi kahtluse korral tuleb välja selgitada, kas lapsel on suurenenud söögiisu (polüfaagia), janu (polüdipsia) ja sagenenud urineerimine (polüuuria). Samal ajal võib täheldada suhkurtõve nn väiksemaid sümptomeid - neurodermatiit, periodontaalne haigus, furunkuloos, sügelus suguelundite piirkonnas. Hilisemates staadiumides väheneb ketoatsidoosi tõttu söögiisu, lapsed väsivad kiiresti, õpivad halvemini, suureneb loidus ja nõrkus. Esineb öine ja päevane enurees, kerge uriin, misjärel jäävad linale tärkliseplekid, jalgade paresteesia, nägemisteravus langeb, peopesadele võivad tekkida ksantoomid.
Imikutel tuleb tähelepanu pöörata madalale sünnikaalule, kehakaalu langusele (hüpotroofiale), püodermale, sagedasele infusioonile.
Adrenogenitaalne sündroom on neerupealiste koore kaasasündinud viriliseeriva hüperplaasia ilming. Anamneesis ja patsiendi uurimisel määratakse pseudohermafroditism (kliitori, suurte häbememokkade suurenemine, anomaalia ureetra arengus, sarnane hüpospadiaga). Tulevikus on meessoost kehatüüp, hirsutism, madal hääl, akne. Poistel võib olla makrogenitoosoomia (2-3-aastaselt), ebaloomulik enneaegne seksuaalne areng. Mõlemast soost lastel võib täheldada suurt kasvu, suurenenud lihasjõudu, kiirendatud luustiku küpsemist. Raskematel juhtudel esinevad adrenogenitaalse sündroomi tunnused koos soolade kadumisega (Debre-Fibigeri sündroom). Ülaltoodud haiguse ilmingutega kaasneb kaalulangus, kehakaalu aeglane tõus ja eksikoos. Harva täheldatakse hüpertermiat ja hüpertensiooni.
Patsientidel, kellel on kinnitatud neerupealiste koore hüpofüüsi hüperplaasia, diagnoositakse Itsenko-Cushingi tõbi. Itsenko-Cushingi sündroomi korral toodavad neerupealised üle kortisooli (vähemal määral aldosterooni ja androgeene). Sellised patsiendid kurdavad ja uurimisel on kasvupeetus, "kõhnad" käed, näoilmete muutus ja kuukujuline nägu, selle nahk on lillakaspunane. Tüve ja jäsemete nahk on kuiv, arvukate atroofilise päritoluga purpur-tsüanootiliste venitusarmidega. Võite jälgida hüpertrichoosi, aknet, püodermat, mükoosi. Tüdrukutel omandavad sekundaarsed seksuaalomadused vastupidise arengu, menstruatsiooni tsüklilisus on häiritud. Hilisemates staadiumides võivad ilmneda kaebused alatoitumise või lihaste atroofia, suguelundite alaarengu ja kõrge vererõhu kohta.
Ebapiisava kroonilise kuluga neerupealiste funktsiooniga (kortisooli, aldosterooni ja androgeenide tootmise vähenemine) on patsientidel Addisoni tõvele iseloomulike tunnuste klassikaline triaad - adünaamia, pigmentatsioon, hüpotensioon. Patsiendid kurdavad nõrkust, väsimust, liikuvuse vähenemist, söögiisu vähenemist. Iseloomulik on soolesulgus. Tekivad kaalulangus, unisus, lihasnõrkus. Mõnedel patsientidel on haiguse esimeseks ilminguks naha ja suuõõne limaskestade pruun pigmentatsioon (melanotsüüte stimuleeriva hormooni liigse tootmise tõttu hüpofüüsi poolt). Pigmentatsioon ulatub kaelale, küünarnuki liigestele, kõhu valgele joonele, suguelunditele, kõvale suulaele, põskede sisepinnale. Neerupealiste ägedate kahjustuste korral kurdavad patsiendid tugevat nõrkust, valu kõhuõõnes, oksendamist, kõhulahtisust.
Uuringu väga oluline element on lapse seksuaalse arengu hindamine. Selleks uurivad tüdrukud hoolikalt piimanäärmeid ja häbemekarvade kasvu, poistel peenise ja munandite arengut, samuti häbemekarva kasvu astet. Identifitseeritud sekundaarsed seksuaalomadused ja nende areng tuleks kindlaks määrata vastavalt JMTanneri poolt 1962. aastal välja pakutud klassifikatsioonile. Nii tüdrukutele kui poistele.
Enneaegse seksuaalse arenguga lastel (kuni 8 aastat tüdrukutel ja kuni 10 aastat poistel) hõlmab sümptomite kompleks märkimisväärset kasvu kiirenemist, luude luude luustumise fookuste varajast tekkimist, enneaegset sünostoosi, mille tagajärjel. keha ei saavuta täielikku arengut. Vaimsed võimed vastavad vanusenõuetele. Spermatogenees ilmneb varakult poistel ja menstruatsioon tüdrukutel, suguelundite suurenemine ja karvasus. Üldise apaatia ja letargia taustal võib täheldada seksuaalset erutuvust. Nüstagmi, ptoosi, ebanormaalset kõnnakut ei täheldata sageli.
Patsiendi anamneesis ja uurimisel hüpogonadism (seksuaalse arengu hilinemine 2 aastat või kauem), tõeline günekomastia, eunuhhitaoline kehaehitus (kitsas rindkere, karvadeta, ebaproportsionaalselt pikad jalad, väga vähe näokarvu, günekomastia, ümberpööratud nibud, ebapiisav sekundaarsete sootunnuste kujunemine). Sellised lapsed kasvavad pikaks, neil on kõrge hääl, kõri, lihaste, suguelundite ebapiisav areng, sekundaarsed seksuaalomadused.
Palpatsioon on oluline endokriinsete näärmete kahjustuste diagnoosimiseks. Kuid mitte kõik näärmed pole palpatsiooniks saadaval.
Palpatsioon toimub üldtuntud reeglite järgi (soojad, puhtad käed, arsti ja patsiendi õige asend, ilma võõrasteta; patsiendile tarbetuid kannatusi põhjustamata uuritakse esmalt pinnapealselt ja seejärel sügavamalt).
Kilpnäärme istmuse palpatsioon viiakse läbi parema käe pöidla, nimetissõrme ja keskmise sõrme libisevate liigutustega rinnaku käepidemest ülespoole.
Kilpnäärme parema ja vasaku sagara palpeerimiseks on vaja mõlema käe II-V painutatud sõrmed viia üle tagumiste servade ja pöial üle sternocleidomastoid lihase esiservade. Pärast seda palutakse lapsel juua lonks, mille jooksul kilpnääre liigub koos kõriga. Samal ajal määratakse elundi pind, konsistents, liikuvus, suurus ja valulikkus.
Kilpnäärme paremat ja vasakut sagarat palpeeritakse ilma valuta pehmete, õrnade ja sileda pinnaga moodustiste kujul.
Palpatsiooni abil selgitatakse välja seksuaalhäirete tunnused, eelkõige välissuguelundite palpeerimisel, nende suurus, vähenemise (suurenemise) astet, munandite arvu munandikotis, nende tihedust ja lokaliseerimist. krüptorhidismi korral määratakse munandit. Hinnatakse nahaaluse rasvakihi paksust, naha temperatuuri jäsemetel, lihaste toonust ja tugevust ning nende konsistentsi. Sageli palpeeritakse endokriinsete näärmete patoloogiaga patsientidel suurenenud maks, määratakse selle valu.
Endokriinsüsteemi haigustega laste löökpillid võivad määrata hüperparatüreoidismiga luuvalu, hüpogonadismiga südame suhtelise igavuse vähenemise, suhkurtõvega maksa suurenemise ja tüümuse struuma, mis on määratud ülalpool. rinnaku käepide.
Türotoksikoosiga patsientide auskultatsioonil on kuulda veresoonte müra üle näärme pinna; nõrgenenud südamehääled ja süstoolne müra selle tipus koos neerupealiste puudulikkusega.
Endokriinsüsteemi haiguste diagnoosimiseks on vaja kasutada spetsiaalseid laboriuuringuid, nimelt hormoonide sisalduse määramist erinevates bioloogilistes vedelikes.
Nende hormoonide taseme määramise põhjal on võimalik teha järeldus vastavate endokriinsete näärmete talitlushäirete olemuse kohta.
Endokriinsed haigused on kõikvõimalikud hormonaalsed häired, mis kõige sagedamini tekivad kilpnäärme ja kõhunäärme talitlushäiretest, samuti süsteemsete haiguste tagajärjel. Just endokriinsete haiguste hulka kuulub ka II tüüpi suhkurtõbi, mille haigestumisjuhtude arv on viimastel aastatel pidevalt kasvanud ja muutumas tõeliselt ähvardavaks. Kõik endokriinsüsteemi haigused põhjustavad organismis keerulisi häireid, mis vähendavad elukvaliteeti ja hävitavad inimese tervist.
Plaanilised endokriinsüsteemi uuringud:
Kuna diabeedi tekke tõenäosus aastatega suureneb, sõltub kontrolltestide sagedus ja vajadus vanusest.
Kuni 45. eluaastani tehakse hormonaalsete häirete kahtluse korral (arsti juhiste järgi) vereanalüüs glükoosi määramiseks.
Pärast 45. eluaastat tuleks veresuhkru analüüsi teha vähemalt iga kolme aasta järel.
Igas vanuses, kui teil on diabeedi oht, peate seda regulaarselt tegema.
Rohkem endokriinsüsteemi haigustest ja riskiteguritest -.
Vere glükoosi test
Sihtmärk. Glükoosi (suhkru) tase veres näitab, kui õigesti toimub süsivesikute ainevahetus organismis hormooninsuliini osalusel. Normaalse glükoositaseme ületamine viitab hüperglükeemiale (üks II tüüpi diabeedi näitajatest), langus alla normi viitab hüpoglükeemiale (tõend energiapuudusest).
Tee. Klassikalisel juhul võetakse glükoosi jaoks verd tühja kõhuga: viimase (õhtuse) söögikorra ja vereproovi võtmise vahele peab jääma vähemalt 8-10 tundi. Ka sel perioodil ei tohi juua magusaid jooke, alkoholi, juua võib ainult vett ja nõrka magustamata teed. Samuti võetakse arsti ettekirjutuse järgi koormuse all glükoosi jaoks verd: sel juhul võetakse esmalt tühja kõhuga kontrollvereproov, seejärel joob inimene magusat lahust ja temalt võetakse uuesti verd - mitu. korda kahe tunni jooksul. See võimaldab teil jälgida veresuhkru taseme tõusu ja reguleerimise dünaamikat.
järeldused. Normaalne veresuhkru tase on 3,3-5,5 mmol/l. Mida lähemal on teie skoor ülemisele piirile, seda murettekitavam on tulemus. Kõrgenenud veresuhkru tase ei viita mitte ainult suhkurtõve tekkimise võimalusele, vaid ka mitmetele muudele häiretele, nagu pankreatiit, tsüstiline fibroos ja pankrease düsfunktsioon. Isegi tõsine stress võib põhjustada vere glükoosisisalduse tõusu.
Hormoonide vereanalüüs
Sihtmärk. Kilpnäärme, kõhunäärme, reproduktiivsüsteemi, neerupealiste, hüpofüüsi poolt toodetavate hormoonide iseloomulik tunnus on üldine mõju organismile. Seega, kui tekib mingi hormonaalne tasakaalutus, võivad tagajärjed olla väga mitmekesised – alates diabeedi tekkest kuni reproduktiivfunktsiooni, naha jms probleemideni. Hormoonide analüüs võimaldab teil määrata erinevate hormoonide taset veres, võrrelda seda normiga ja teha vastavad järeldused.
Tee. Hormoonide jaoks võetakse verd tühja kõhuga veenist: 10 tundi enne vereproovi võtmist ei tohi süüa ega juua, samuti tuleks hoiduda füüsilisest tegevusest ja jõulisest tegevusest tööl. Kui võtate mingeid ravimeid, eriti hormonaalseid, pidage nõu oma arstiga ja määrake nendest ajutise loobumise viis, et mitte ennast kahjustada ja saada usaldusväärseid testitulemusi.
järeldused. Hormoonide vereanalüüsi tulemus on hormoonide (testosteroon, östrogeen, progesteroon, prolaktiin, luteiniseeriv hormoon, kilpnäärmehormoonid jne) loetelu ja nende tase teie veres. Kui üks väärtustest ei sobi normi, võime rääkida rikkumisest. Kuid järeldusi saab teha ainult arst, sest olulised pole mitte ainult individuaalsed väärtused, vaid ka nende kombinatsioon.
Kilpnäärme ja neerupealiste ultraheliuuring
Sihtmärk. Endokriinsete näärmete - kilpnäärme ja neerupealiste - ultraheliuuring võimaldab tuvastada organite endi tervise rikkumisi, mis põhjustasid hormonaalset tasakaalustamatust. Ultraheli tehakse hormonaalsete häirete põhjuste väljaselgitamisel, samuti juhtudel, kui kahtlustatakse muutusi näärmetes (kilpnäärme sõlmed).
Tee. Ultraheli tehakse ultraheliaparaadiga: spetsialist asetab anduri kilpnäärme või neerupealiste piirkonda ning saab monitorile pildi saades visuaalselt hinnata organi seisundit ja rikkumiste olemust. . Hinnatakse näärmete kuju, suurust, kõrvalekallete ja deformatsioonide olemasolu, samuti kasvajaid. Samuti võetakse arvesse lümfisõlmed ja vereringesüsteem.
järeldused. Analüüsi tulemuseks on ultraheli pilt ja selle visuaalne tõlgendus normi suhtes. Reeglina võimaldab endokriinsete näärmete ultraheliuuring suure täpsusega tuvastada neoplasmide esinemist elundites ja nähtavaid muutusi nende struktuuris. Pildianalüüsi teostab eranditult arst.
Vene Föderatsiooni Föderaalne Haridusamet
GOU VPO Baškiiri Riiklik Ülikool
bioloogia osakond
Biokeemia osakond
Kursuse töö
Endokriinsüsteemi uurimise meetodid normaalsetes ja patoloogilistes tingimustes
Lõpetatud:
OZO 5. kursuse üliõpilane
A-rühm
Usachev S. A.
Ufa 2010
Sisu
Sissejuhatus………………………………………………………………………………4
1. Endokriinsüsteemi uurimismeetodite ülevaade
normis ja patoloogias…………………………………………………………… 6
1.1. Lühike ajalooline ülevaade………………………………………………6
1.2. Endokriinsüsteemi uurimise kaasaegsete meetodite ülevaade..12
1.3. Kaasaegsed meetodid endokriinsüsteemi uurimiseks
näide kilpnäärme uuringust……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
2. Endokriinsüsteemi uurimismeetodite probleemid ja väljavaated
süsteemid……………………………………………………………………………45
Järeldus……………………………………………………………………………..58
Kasutatud kirjanduse loetelu………………………………………………59
Töös kasutusele võetud lühendite loetelu
AOK – antikehi moodustavad rakud
AG - antigeen
ACTH - adrenokortikotroopne hormoon
HPLC – kiire vedelikkromatograafia
GI - kompenseeriv hüperinsulineemia
DNA - desoksüribonukleiinhape
LC – vedelikkromatograafia
ELISA - ensüümi immuunanalüüs
IR - insuliiniresistentsus
CT - kompuutertomograafia
LH - luteiniseeriv hormoon
MS - metaboolne sündroom
MRI - magnetresonantstomograafia
PCR - polümeraasi ahelreaktsioon
RIA - radioimmunoanalüüs
DHRT – hilinenud tüüpi ülitundlikkusreaktsioon
DM 2 – 2. tüüpi suhkurtõbi
TSH - kilpnääret stimuleeriv hormoon
T4 - türoksiin
T3 - trijodotüroniin
TBG – türoksiini siduva globuliini test
Ultraheli - ultraheli
FIA – fluorestseeruv immuunanalüüs
CFD – värviline Doppleri kaardistamine
KNS – kesknärvisüsteem
kilpnääre - kilpnääre
Sissejuhatus
Viimaste aastate peenemate, tundlikumate ja spetsiifilisemate hormoonide määramise meetodite ning muude endokriinsüsteemi tervise ja haiguste uurimise meetodite väljatöötamise tulemusena on kliiniline endokrinoloogia ja biokeemia muutunud suures osas kunstiliigist haruks. rakenduskeemiast, füsioloogiast, füüsikast ja geneetikast. See edu sai võimalikuks tänu paljude uusimate ja kõrgtehnoloogiliste meetodite kasutuselevõtule endokriinsüsteemi uurimiseks, erinevate kõrgelt puhastatud polüpeptiidhormoonide, steroidide, vitamiinide ja nende derivaatide eraldamiseks ning järgnevaks bioloogiliseks ja biokeemiliseks iseloomustamiseks. väikesed polüpeptiidid ja aminohapped, mis liigitatakse hormoonideks, samuti kõrge spetsiifilise aktiivsusega hormoonide radioaktiivselt märgistatud aatomite tootmine.
Teema asjakohasus:
Praegu, elusorganismi kõige varjatumate ja salapärasemate nähtuste mõistmise lävel, on kõige olulisem ülesanne leida kõige usaldusväärsemad, ligipääsetavamad ja kõrgtehnoloogilised uurimismeetodid. Uus nanotehnoloogiate ja kõrgelt spetsialiseerunud avastuste ajastu hakkab andma oma panust bioloogilisse keemiasse, mis on pikka aega kasutanud mitte ainult keemilise analüüsi meetodeid, vaid kõigi füüsika, arvutiteaduse, matemaatika ja muude teaduste harude kaasaegseimaid tehnoloogiaid. Aeg dikteerib inimkonnale oma tingimused – tundma sügavamalt, tundma põhjalikult, leidma normaalsetes ja patoloogilistes tingimustes elusorganismis toimuvate protsesside põhjus. Uute uurimismeetodite otsimine ei lõpe ja teadlasel pole lihtsalt aega seda teadmiste valdkonda üldistada, süstematiseerida, tõsta esile seda, mida ta hetkel vajab. Lisaks ei leidnud ma endokriinsüsteemi uurimise probleemi uurides piisavalt täielikku üldistavat käsiraamatut sellel teemal. paljud teadlased, eriti biokeemikud, seisavad silmitsi sellise probleemiga nagu kaasaegsete meetodite otsimine ja süstematiseerimine endokriinsüsteemi uurimiseks normaalsetes ja patoloogilistes tingimustes. See on tingitud eelkõige sellest, et iga päev ilmub uusi kirjandusallikaid, uusi uurimismeetodeid, kuid puudub ühtne uurimismeetodite juhend, mis süstematiseeriks andmeid meetodite kohta. Just neil põhjustel on minu valitud teema aktuaalsus väga kõrge.
Eesmärk:
Süstematiseerida andmed endokriinsüsteemi uurimismeetodite olukorra kohta tänapäeva maailmas normaalsetes ja patoloogilistes tingimustes.
Ülesanded:
- Tee teemast ajalooline ülevaade.
Peegeldada kaasaegseid teadmisi endokriinsüsteemi uurimismeetodite kohta ilma uurimismeetodite ja -tehnikate üksikasjaliku kirjelduseta.
Kirjeldage uurimismeetodeid ühe endokriinse näärme näitel.
Tuua esile tänapäevaste endokriinsüsteemi uurimismeetodite probleemid ja väljavaated normaalsetes ja patoloogilistes tingimustes.
1. Endokriinsüsteemi uurimismeetodite ülevaade normaalsetes ja patoloogilistes tingimustes
1.1. Lühike ajalooline ülevaade
Endokriinsüsteemi uurimine ja endokrinoloogia ise on teaduse ajaloos suhteliselt uued nähtused. Endokriinsüsteem oli kuni 20. sajandi alguseni inimkeha ligipääsmatu osa. Enne seda ei suutnud teadlased endokriinsete moodustiste saladusi lahti harutada, kuna nad ei saanud isoleerida ja uurida vedelikke, mida nad eritavad ("mahlad" või "saladused"). Teadlased ei ole leidnud ühtegi "mahla" ega spetsiaalseid väljaheidete kanaleid, mille kaudu tekkiv vedelik tavaliselt välja voolab. Seetõttu oli sisesekretsiooninäärme funktsioonide uurimiseks ainsaks meetodiks osa või kogu organi ekstsisioon.
Teadlased - ajaloolased väitsid, et idas olevad endokriinsüsteemi organid olid tuntud isegi iidsetel aegadel ja nimetasid neid lugupidavalt "saatuse näärmeteks". Ida ravitsejate arvates olid need näärmed nähtamatutesse kanalitesse (tšakratesse) voolava ja inimese elujõudu toetava kosmilise energia vastuvõtjad ja transformaatorid. Usuti, et "saatuse näärmete" hästi koordineeritud tööd võivad kurja saatuse käsul aset leidvad katastroofid häirida.
Haiguse, tõenäoliselt diabeedi mainimine sisaldub 1500 eKr Egiptuse papüüruses. Struuma ja kastreerimise tagajärjed loomadel ja inimestel kuuluvad esimeste kliiniliste kirjelduste hulka haigustest, mille endokriinset olemust hiljem tõestati. Endokriinsete haiguste vanu kliinilisi kirjeldusi tehti mitte ainult läänes, vaid ka Vana-Hiinas ja Indias.
Kui korraldame õigeaegselt olulised avastused paljudes endokrinoloogia valdkondades, peegeldab saadud pilt miniatuurselt kogu bioloogia ja meditsiini ajalugu. Pärast antiikajal ja keskajal tehtud fragmentaarseid kliinilisi vaatlusi edenesid need teadused äärmiselt aeglaselt. 19. sajandi teisel poolel toimus kiire hüpe paljude meditsiinivaldkondade arengus nii kliiniliste uuringute kvaliteedi kui ka haiguste mehhanismide mõistmise osas. See protsess oli tingitud ajalooliste põhjuste seoste keerukusest.
Esiteks tõi tööstusrevolutsioon kaasa kapitali kuhjumise, mida kasutati paljude teaduste, peamiselt keemia ja bioloogia arendamiseks.
Teine revolutsioon, mis toimus 19. sajandi teisel poolel ja millel oli fundamentaalne tähtsus mitte ainult endokrinoloogia, vaid ka meditsiini ja bioloogia arengus, oli katseloomade modelleerimise esilekerkimine. Claude Bernard ja Oskar Minkowski demonstreerisid kontrollitud ja reprodutseeritavate katsete läbiviimise võimalust laboris. Ehk siis loodi looduse "ristuuringu" võimalus. Ilma nende pioneeride tööta jääksime ilma suuremast osast endokrinoloogia valdkonna kaasaegsetest teadmistest. Kõigi nende ainete, mida nimetatakse hormoonideks, uurimine algas katsetega tervete loomadega (ja sageli eelnesid sellele haigete inimeste vaatlused). Neid aineid nimetati aineks "X" või faktoriks "?". Endokrinoloogia "Kochi" postulaadid nägid ette järgmise tööjärjekorra:
1. Väidetava näärme eemaldamine. Pärast endokriinsete näärmete eemaldamist tekib häirete kompleks, mis on tingitud selles näärmes toodetavate hormoonide regulatiivse toime kadumisest. Operatsiooni invasiivsuse tõttu võib endokriinse näärme kirurgilise eemaldamise asemel kasutada nende hormonaalset funktsiooni häirivate kemikaalide kasutuselevõttu. Näiteks alloksaani manustamine loomadele häirib pankrease β-rakkude tööd, mis viib suhkurtõve tekkeni, mille ilmingud on peaaegu identsed pärast pankrease ekstirpatsiooni täheldatud häiretega. üks
2. Operatsiooni bioloogiliste mõjude kirjeldus. Näiteks oletus, et kõhunäärmel on endokriinsed funktsioonid, leidis kinnitust I. Meringi ja O. Minkowski (1889) katsetes, mis näitasid, et selle eemaldamine a. koerad põhjustab rasket hüperglükeemiat ja glükosuuriat; loomad surid 2-3 nädala jooksul. pärast operatsiooni raske suhkurtõve sümptomite taustal. Seejärel leiti, et need muutused tekivad kõhunäärme saarekeste aparaadis toodetava insuliini puudumise tõttu.
3. Nääreekstrakti sissejuhatus.
4. Tõendid selle kohta, et ekstrakti manustamine kõrvaldab näärme puudumise sümptomid.
5. Toimeaine eraldamine, puhastamine ja identifitseerimine.
Teise maailmasõja ajal kogunes endokrinoloogia vallas suur hulk andmeid, millest paljud olid teaduse edasise arengu seisukohalt fundamentaalse tähtsusega. Pärast sõda, seoses paljude uute meetodite esilekerkimisega, toimus uurimise tempos enneolematu kiirendus. Ja nüüd, tehniliste ja loominguliste jõudude järsu sissevoolu tulemusena, kasvab publikatsioonide arv nii endokrinoloogias kui ka kõigis muudes biomeditsiiniliste teadmiste aspektides muljetavaldava kiirusega. See tähendab pidevat uute andmete voogu, mis nõuab vanade ideede perioodilist läbivaatamist nende valguses. 2
20. sajandit tähistas hormoonide teaduse ehk endokrinoloogia sünd. Sõna "hormoon" võttis 1905. aastal kasutusele Briti füsioloog, professor Ernst Starling Londoni Kuninglikus Arstide Kolledžis peetud loengus. Selle moodustasid kaks Cambridge'i ülikooli professorit kreekakeelsest sõnast hormao, mis tähendab "kiiresti liikuma panema", "tõsta" või "ergastama". Starling kasutas seda, et kirjeldada sisesekretsiooninäärmete kaudu verre erituvaid "keemilisi kandjaid" ehk sisesekretsiooninäärmeid (endon – sisemine + krino – toota), näiteks munandid, neerupealised ja kilpnääre, aga ka välistest näärmetest. , eksokriinsed (ekso - välised) näärmed nagu sülje- ja pisaranäärmed. See uus teadus arenes väga kiiresti, erutades mitte ainult arstide, vaid ka ühiskonna meelt.
Reeglina läbib mis tahes hormooni uurimise ajalugu neli etappi.
Esiteks avaldab see mõju, mida nääre sekreteeritav saladus kehale tekitab.
Teiseks töötatakse välja meetodid sisemise sekretsiooni ja selle mõju määramiseks organismile. Esiteks tehakse seda bioloogiliste testide abil, et teha kindlaks hormooni mõju organismile, milles see puudub. Hiljem kehtestatakse selliseks mõõtmiseks keemilised meetodid.
Kolmandaks isoleeritakse hormoon näärmest ja isoleeritakse.
Ja lõpuks, neljandaks, selle struktuuri määravad keemikud ja see sünteesitakse. 3
Tänapäeval tekib teadlastel, kes alustavad vaatlustega kogu organismi tasandil, töö edenedes aina rohkem küsimusi, kuni nad püüavad algset probleemi molekulaarsel tasandil lahendada. Siin võtab endokrinoloogilised uuringud üle biokeemia ja selle haru, molekulaarbioloogia (endokrinoloogia).
Niipea, kui ilmuvad uued morfoloogilised, keemilised, elektrofüsioloogilised, immunoloogilised ja muud meetodid, leiavad need endokrinoloogias väga kiire rakenduse. Näiteks 30-40ndatel kasutati steroidide uurimiseks väga keerulisi meetodeid. See tõi kaasa suuri edusamme steroidhormoonide struktuuri ja biosünteesi mõistmisel. 1940ndate lõpus ja 1950ndatel ilmnenud radioaktiivsete isotoopide kasutamise võimalus avardas meie teadmisi jooditsükli paljudest aspektidest, vahepealsest ainevahetusest, ioonide transpordist jne. Uurida sisesekretsiooninäärme funktsionaalset aktiivsust, selle võimet püüda verd ja koguneda teatud ühend. Näiteks on teada, et kilpnääre omastab aktiivselt joodi, mida seejärel kasutatakse türoksiini ja trijodotüroniini sünteesiks. Kilpnäärme hüperfunktsiooni korral suureneb joodi kogunemine, hüpofunktsiooni korral täheldatakse vastupidist efekti. Joodi akumuleerumise intensiivsust saab määrata radioaktiivse isotoobi 131I kehasse viimisega, millele järgneb kilpnäärme radioaktiivsuse hindamine. Radioaktiivse märgisena võib kasutusele võtta ka ühendeid, mida kasutatakse endogeensete hormoonide sünteesiks ja mis sisalduvad nende struktuuris. Seejärel on võimalik määrata erinevate elundite ja kudede radioaktiivsust ning seeläbi hinnata hormooni jaotumist organismis, samuti leida selle sihtorganid.
Hiljem kasutati polüakrüülamiidgeelelektroforeesi ja autoradiograafia kombinatsiooni loovalt paljude valkude, sealhulgas hormooniretseptorite uurimiseks. Samaaegselt nende muljetavaldavate edusammudega keemias osutus histokeemiliste, immunohistokeemiliste ja elektronmikroskoopiliste meetodite kasutamine veelgi viljakamaks.
Endokrinoloogid kasutasid kohe pärast nende ilmumist kõiki kromatograafia variante – kolonn-, õhukesekihiline, paber-, mitmemõõtmeline, gaas-vedelik (massispektromeetriaga või ilma), kõrgjõudlusega vedelik. Need võimaldasid saada olulist teavet mitte ainult peptiidide ja valkude aminohappejärjestuse, vaid ka lipiidide (eriti prostaglandiinide ja nendega seotud ainete), süsivesikute ja amiinide kohta.
Molekulaarbioloogiliste uurimismeetodite arenedes rakendavad endokrinoloogid neid kiiresti hormoonide toimemehhanismide uurimiseks. Praegu kasutatakse rekombinantse DNA meetodit mitte ainult sel eesmärgil, vaid ka valguhormoonide tootmiseks. Tõepoolest, on raske nimetada biokeemilist või füsioloogilist meetodit, mida endokrinoloogid ei kasutaks. neli
1.2. Ülevaade endokriinsüsteemi uurimise kaasaegsetest meetoditest
Endokriinse patoloogia kahtlusega patsientide uurimisel kasutatakse lisaks anamneesi kogumisele, patsiendi uurimisele ja kaebamisele järgmisi diagnostilisi meetodeid: üldised laboratoorsed meetodid (kliinilised ja biokeemilised), hormonaalsed uuringud, instrumentaalsed meetodid, molekulaargeneetilised meetodid.
Enamikel juhtudel hormonaalne uuring sellel pole võtit, vaid diagnoosi kinnitav väärtus. Paljude endokriinsete haiguste diagnoosimiseks ei kasutata üldse hormonaalset uuringut (diabeet insipidus ja suhkurtõbi); mõnel juhul on hormonaalsel uuringul diagnostiline väärtus ainult koos biokeemiliste parameetritega (kaltsiumitase kilpnäärme ületalitluse korral).
Hormonaalne uuring võib paljastada konkreetse hormooni tootmise vähenemise, tõusu ja selle normaalse taseme (tabel 1). Kliinilises praktikas kõige sagedamini kasutatavad hormoonide määramise meetodid on erinevad modifikatsioonid. radioimmuunne meetod
. Need meetodid põhinevad asjaolul, et radioaktiivse märgisega märgistatud hormoon ja uuritavas materjalis sisalduv hormoon konkureerivad omavahel spetsiifiliste antikehadega seondumises: mida rohkem seda hormooni bioloogilises materjalis sisaldub, seda vähem märgistatud hormoonmolekule seonduvad, kuna hormoone siduvate saitide arv proovis on pidevalt. Rohkem kui 20 aastat tagasi pakkusid Berson ja Yalow välja radioimmuunanalüüsi meetodi insuliini määramiseks.
See meetod põhines nende tähelepanekul, et insuliiniga ravitud diabeedihaigete perifeerses veres on valk (hiljem tõestati, et see on globuliin), mis seob 131I märgistatud insuliini. Nende leidude olulisust ja sellele järgnenud radioimmunoanalüüsi väljatöötamist insuliini tuvastamiseks tõstab esile Nobeli preemia andmine Yalowile ja Bersonile.
Varsti pärast nende teadlaste esimesi aruandeid töötasid teised laborid välja ja kirjeldasid sobivaid meetodeid teiste hormoonide määramiseks. Need meetodid kasutavad kas antikehi või seerumivalke, mis seovad spetsiifilist hormooni või ligandit ja kannavad radioaktiivset methormooni, mis konkureerib bioloogilises proovis sisalduva standardhormooni või hormooniga.
Põhimõte radioretseptori meetod
on sisuliselt sama mis radioimmunoanalüüs, ainult hormoon seondub antikehadega seondumise asemel spetsiifilise hormooni retseptoriga plasmamembraanil või tsütosoolil. Enamiku polüpeptiidhormoonide spetsiifilised retseptorid asuvad rakkude plasmamembraani välispinnal, bioloogiliselt aktiivsete steroidide, aga ka türoksiini ja trijodotüroniini retseptorid aga tsütosoolis ja tuumades. Radioretseptori testi tundlikkus on madalam kui radioimmunoanalüüsil ja enamikul bioloogilistel meetoditel in vitro süsteemides. Oma retseptoriga suhtlemiseks peab hormoon olema sobiva konformatsiooniga, st olema bioloogiliselt aktiivne. Võimalik on olukord, kus hormoon kaotab võime seostuda oma retseptoriga, kuid jätkab koostoimet radioimmunoanalüüsi süsteemis olevate antikehadega. See lahknevus peegeldab tõsiasja, et antikehad ja retseptorid "tunnevad ära" hormoonmolekuli erinevad osad.
Hormonaalseks analüüsiks on välja pakutud mitmeid radioretseptori meetodeid. Tavaliselt saadakse teatud hormoonile spetsiifiline organi kude ja sellest eraldatakse standardsete tehnikate abil retseptorid. Sette isoleeritud plasmamembraani retseptorid on suhteliselt stabiilsed, kui neid hoitakse temperatuuril alla -20 °C. Plasmamembraanidest või tsütosoolist eraldatud ja ligandidega mitteseotud polüpeptiidide ja steroidhormoonide solubiliseeritud retseptorid osutuvad aga ebastabiilseteks, mis väljendub nende võime vähenemises spetsiifilisi hormoone siduda, isegi kui neid hoiti külmutatuna. suhteliselt lühike aeg.
Viimasel ajal on enim kasutatud mitteradioaktiivseid meetodeid. Standardmeetodina erinevate ühendite määramiseks kliinilises keemias, immuunanalüüs
, mida iseloomustab hea tundlikkus, spetsiifilisus ja lai ulatus. Eelkõige kasutatakse hormoonide määramiseks immuunanalüüsi. Need meetodid hõlmavad järgmist:
- 1) ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA), tahke faasi ELISA tüüpi ELISA või homogeenne ELISA tüüpi EMIT.
- 2) fluorestsents-immunoanalüüs (FIA), mis põhineb fluorestsentsi võimendamise, summutamise või polarisatsiooni mõõtmisel või fluorestsentsi uurimisel ajalise eraldusvõimega.
- 3) bio- või kemoluminestsents-immunoanalüüs.
1) olema rakendatav nii valkude kahekohaliseks immunomeetriliseks analüüsiks kui ka hapteenide otseseks konkureerivaks analüüsiks sidumispõhimõttel.
2) omama määratud kontsentratsioonide sobivat tundlikkust, täpsust ja töövahemikku minimaalse tulemuste hajutamisega kogu vahemikus.
3) lihtne täiustada, et tundlikkust veelgi suurendada ja analüüsi lihtsustada.
Potentsiaalselt peaks metoodikat olema võimalik täiustada ja rakendada teiste ainete analüüsidele, laborivälistele ja valimatutele analüüsidele ning mitme aine samaaegseks määramiseks (nn mitme immuunanalüüs). Ideaalsed immuunanalüüsi meetodid vastavad suurel määral luminestsents- või fotoemissioonimeetoditele, mille puhul märgise tuvastamine toimub valguse emissiooni registreerimisega.
Luminestsents on valguse kiirgamine aine poolt elektrooniliselt ergastatud olekus. Luminestsentsi on mitut tüüpi, mis erinevad ainult nende energiaallikate poolest, mis viivad elektronid ergastatud olekusse, s.t. kõrgemale energiatasemele, nimelt:
1) radioluminestsents, milles vastava fluorofoori ergastamine saavutatakse pöördumatu radioaktiivse lagunemise käigus vabaneva energia neelamisega. Ergastatud fluorofoor kiirgab valgust, pöördudes tagasi põhiolekusse.
2) kemoluminestsents, mille puhul ergastus saavutatakse keemilise reaktsiooni (tavaliselt pöördumatu oksüdatsioonireaktsiooni) tulemusena. Kui keemiline reaktsioon viiakse läbi bioloogilistes süsteemides ensüümide toimel, siis tavaliselt kasutatakse sel juhul terminit bioluminestsents. Kui keemilise reaktsiooni algatab reagentide temperatuuri tõus, siis seda tüüpi luminestsentsi nimetatakse termokemoluminestsentsi, kui aga reaktsiooni algatab elektripotentsiaal, siis vastavat nähtust nimetatakse elektrokemoluminestsentsiks.
3) fotoluminestsents, mille puhul ergastuse põhjustavad infrapuna-, nähtava- või ultraviolettvalguse footonid. Fotoluminestsentsi saab veelgi jagada fluorestsentsideks, kui ergastatud molekul naaseb kiiresti oma algolekusse läbi singlettoleku, ja fosforestsentsi, kui ergastatud molekul naaseb kolmiku oleku kaudu algsesse olekusse. Fosforestsentsi emissioon laguneb palju aeglasemalt. Kiirgavatel valguskvantidel on suur lainepikkus. Fotoluminestsents erineb radio- ja kemoluminestsentsist selle poolest, et see on tavaliselt pöörduv ja seetõttu saab seda selles süsteemis korduvalt esile kutsuda (kuna ergastatud vaheühendi moodustumine ja sellele järgnev valguse emissiooniga inaktiveerimine ei too kaasa keemilisi transformatsioone).
Lisaks nendele meetoditele ei ole oma tähtsust täielikult kaotanud ka keemilised meetodid mitmete ainete (tavaliselt hormoonide metaboliitide ja nende lähteainete) määramiseks. Seda kasutatakse sageli valgufraktsioonide puhastamiseks ja hormoonide uurimiseks kromatograafia . Vedelikkromatograafiat kasutatakse laialdaselt kiire ja selektiivse analüüsimeetodina erinevate ainete eraldamiseks ja tuvastamiseks. Vedelikkromatograafia (LC) klassikalises versioonis (atmosfäärirõhul) ja kiire või HPLC kõrgendatud rõhul on optimaalne meetod keemiliselt ja termiliselt ebastabiilsete molekulide, kõrge molekulmassiga ainete, mille lenduvus on vähenenud, analüüsimiseks. liikuva faasi eriline roll: erinevalt gaasilisest eluendist ei täida LC-s mitte ainult transpordifunktsiooni. Liikuva faasi komponentide olemus ja struktuur reguleerivad eraldatavate ainete kromatograafilist käitumist. Vedelikkromatograafia kõige tüüpilisemate objektide hulka kuuluvad valgud, nukleiinhapped, aminohapped, värvained, polüsahhariidid, lõhkeained, ravimid, taimsed ja loomsed metaboliidid. Vedelikkromatograafia jaguneb omakorda vedelik-adsorptsiooniks (ühendite eraldumine toimub nende erineva võime tõttu adsorbeerida ja desorbeeruda adsorbendi pinnalt), vedelik-vedelikuks või jaotumiseks (eraldamine toimub erineva lahustuvuse tõttu liikuv faas - eluent ja statsionaarne faas, mis on füüsikaliselt adsorbeeritud või keemiliselt poogitud tahke adsorbendi pinnale), ioonivahetuskromatograafia, kus eraldumine saavutatakse analüüsitavate ioniseeritavate ainete pöörduva interaktsiooni tõttu sorbendi ioonrühmadega - ioonivaheti. Eriline koht vedelikkromatograafia meetodite kasutamisel meditsiinis on suurusvälistusel ehk geelkromatograafial ja afiinsusel ehk biospetsiifilisel. See LC versioon põhineb ainete segu eraldamise põhimõttel nende molekulmasside järgi. Suuruse välistamise (inglise keelest exclusion - erand; vananenud nimetus on sõel) kromatograafias eraldatakse ainete molekulid suuruse järgi nende erineva võime tõttu sorbendi pooridesse tungida. Liikuv faas on vedelik ja statsionaarne faas on sama vedelik, mis täitis sorbendi (geeli) poorid. Kui need poorid ei ole analüüdi molekulidele kättesaadavad, siis lahkub vastav ühend kolonnist varem kui väiksema molekuli suurusega. Molekulid või ioonid, mille suurus jääb geelipooride maksimaalse ja minimaalse läbimõõdu vahele, jagatakse eraldi tsoonideks. Suuruskromatograafia on viimasel kahel aastakümnel saanud eriti intensiivse arengu, millele aitas kaasa epiklorohüdriiniga ristseotud dekstraangeelide Sephadex kasutuselevõtt keemilises ja biokeemilises praktikas. Erinevat tüüpi Sephadexi saab kasutada erineva molekulmassiga kemikaalide fraktsioneerimiseks, mistõttu kasutatakse neid laialdaselt biopolümeeride, peptiidide, oligo- ja polüsahhariidide, nukleiinhapete ja isegi rakkude (lümfotsüüdid, erütrotsüüdid) eraldamiseks ja puhastamiseks tööstuslikus tootmises. mitmesugused valgupreparaadid, eelkõige ensüümid ja hormoonid. 5 Afiinsuskromatograafiat iseloomustab bioloogilistele interaktsioonidele omane äärmiselt kõrge selektiivsus. Sageli saab ühe kromatograafilise protseduuriga soovitud valku puhastada tuhandeid kordi. See õigustab afiinsussorbendi valmistamiseks kulutatud jõupingutusi, mis ei ole alati lihtne ülesanne, kuna on oht, et bioloogilised molekulid kaotavad oma võime spetsiifiliselt suhelda maatriksiga kovalentse kinnitumise ajal. 6
Endokriinsete näärmete funktsionaalse seisundi uurimisel kasutatakse järgmisi metoodilisi lähenemisviise:
1. Konkreetse hormooni algtaseme määramine.
2. Hormooni taseme määramine dünaamikas, võttes arvesse sekretsiooni ööpäevast rütmi.
3. Hormooni taseme määramine funktsionaalse testi tingimustes.
4. Hormooni metaboliidi taseme määramine.
Tabel 1. Endokriinsete haiguste patogenees 7
Kõige sagedamini kasutatakse kliinilises praktikas konkreetse hormooni baastaseme määramist. Tavaliselt võetakse verd hommikul tühja kõhuga, kuigi toidu tarbimine ei mõjuta paljude hormoonide tootmist. Paljude endokriinsete näärmete (kilpnäärme, kõrvalkilpnäärme) aktiivsuse hindamiseks piisab hormoonide baastaseme hindamisest. Hormooni baastaseme määramisel võivad tekkida teatud raskused sama hormooni mitme molekulaarse vormi vereringes. Esiteks puudutab see paratüreoidhormooni.
Enamik hormoone ringleb veres seotuna kandjavalkudega. Reeglina on vaba, bioloogiliselt aktiivse hormooni tase veres kümneid või sadu kordi madalam kui hormooni kogutase.
Enamiku hormoonide tasemetel on iseloomulik igapäevane dünaamika (tsirkadiaanse sekretsiooni rütm) ja väga sageli omandab see dünaamika kliinilise tähtsuse. Kõige olulisem ja illustreeriv selles osas on kortisooli tootmise dünaamika (joonis 1.1). kaheksa
Teised näited selles osas on prolaktiin ja kasvuhormoon, mille sekretsiooni rütmi määrab samuti une-ärkveloleku tsükkel. Paljude endokriinsete haiguste patogenees põhineb hormoonide tootmise igapäevase rütmi rikkumisel.
Lisaks ööpäevarütmile võib enamik bioloogilisi parameetreid peegelduda hormoonitasemes veres. Paljude hormoonide puhul sõltuvad võrdlusnäitajad suuresti vanusest (joonis 1.2) 9 , soost, menstruaaltsükli faasist.
Paljude hormoonide taset võivad mõjutada mitte ainult kaasuvad somaatilised haigused ja nende vastu võetavad ravimid, vaid ka sellised tegurid nagu stress (kortisool, adrenaliin), keskkonnaomadused (türoksiini tase erineva jooditarbimisega piirkondades), koostis. eelmisel päeval võetud toidust (C-peptiid) ja paljud teised.
Hüpofüüsist sõltuva (kilpnääre, neerupealiste koor, sugunäärmed) ja paljude teiste endokriinsete näärmete aktiivsuse hindamise aluspõhimõte on nn diagnostiliste hormoonide paaride määramine. Enamikul juhtudel reguleerib hormoonide tootmist negatiivse tagasiside mehhanism. Tagasiside võib toimuda samasse süsteemi kuuluvate hormoonide (kortisool ja ACTH) vahel või hormoonide ja selle bioloogilise efektori (paratüroidhormoon ja kaltsium) vahel. Lisaks ei tohiks paari moodustavate hormoonide vahel olla otsest koostoimet. Mõnikord vahendavad seda teised humoraalsed tegurid, elektrolüüdid ja füsioloogilised parameetrid (reniini-aldosterooni paari puhul neerude verevool, kaaliumisisaldus ja angiotensiin). Paari moodustavate näitajate isoleeritud hindamine võib viia eksliku järelduseni.
Vaatamata hormonaalanalüüsi meetodite paranemisele on funktsionaalsetel testidel endokrinopaatiate diagnoosimisel endiselt suur diagnostiline väärtus. Funktsionaalsed testid jagunevad stimuleerivateks ja supresseerivateks (supressiivseteks). Testide läbiviimise üldpõhimõte on, et sisesekretsiooninäärme puudulikkuse kahtluse korral määratakse stimulatsioonitestid, selle hüperfunktsiooni kahtluse korral aga supressiivsed testid.
Koos veres sisalduvate hormoonide taseme hindamisega võib mõnel juhul nende uriiniga eritumise määramisel olla teatud diagnostiline väärtus. Nende uuringute diagnostiline väärtus, näiteks vaba kortisooli eritumise määramine, on oluliselt väiksem kui kaasaegsetel funktsionaalsetel testidel. Sarnaselt on nüüdseks peaaegu täielikult kadunud hormoonide metaboliitide eritumise testide kasutamine, ainsaks erandiks on katehhoolamiini metaboliitide määramine feokromotsütoomi diagnoosimiseks.
Viimastel aastatel on laialt levinud täielikult automatiseeritud hormonaaluuringute meetodid, mis võimaldavad vähendada selliste vigade arvu nagu vale vereproovide võtmine, säilitamine, kohaletoimetamine ja muud "inimtegurid".
Alates instrumentaalsed meetodid Uuringutes kasutatakse kõige sagedamini ultraheli (ultraheli), radiograafiat, kompuutertomograafiat (CT) ja magnetresonantstomograafiat (MRI). Lisaks kasutatakse endokrinoloogias spetsiaalseid meetodeid: angiograafia koos sisesekretsiooninäärmest voolava vere selektiivse proovi võtmisega, radioisotoopide uuring (kilpnäärme stsintigraafia), luudensitomeetria. Peamised endokriinsete näärmete uurimiseks kasutatavad instrumentaalsed meetodid on toodud tabelis 2.
Molekulaargeneetilise uurimise meetodid.
Viimastel aastakümnetel toimunud teaduse kiire areng ning molekulaarbioloogia, meditsiinigeneetika, biokeemia, biofüüsika valdkonna teadusuuringud, mis on tihedalt läbi põimunud mikrobioloogia, immunoloogia, onkoloogia, epidemioloogia jne valdkondadega, on toonud kaasa loomise ja aktiivse juurutamise praktikasse. Inimese genoomi, loomade, taimede, bakterite ja viiruste uurimiseks kasutatavate molekulaarbioloogiliste meetodite diagnostilised laborid. Neid meetodeid nimetatakse kõige sagedamini DNA-uuringuteks.
DNA uurimismeetodid võimaldavad varakult ja terviklikumalt diagnoosida erinevaid haigusi, õigeaegselt diferentsiaaldiagnostikat ja jälgida teraapia efektiivsust. DNA diagnostikameetodite aktiivne arendamine ja praktikasse juurutamine viitab sellele, et kaugel pole hetk, mil need meetodid kitsendavad oluliselt traditsioonilisemate diagnostiliste uuringute, nagu tsütogeneetika, ülesannete ulatust ja võivad need isegi praktilisest meditsiinist välja tõrjuda. teadusvaldkond.
Tabel 2. Peamised instrumentaalmeetodid
Endokriinsete näärmete uuringud 10
Praegu on DNA diagnostikas kaks suunda: nukleiinhapete hübridisatsioonianalüüs ja diagnostika polümeraasi ahelreaktsiooni abil.
Kohe võeti ka praktikasse PCR, mis võimaldas tõsta meditsiinilise diagnostika kvalitatiivselt uuele tasemele. Meetod on muutunud nii populaarseks, et tänapäeval on raske ette kujutada tööd molekulaarbioloogia valdkonnas ilma seda kasutamata. PCR-meetod on saanud eriti kiire arengu tänu rahvusvahelisele programmile "Inimese genoom". Loodud on kaasaegsed sekveneerimistehnoloogiad (DNA nukleotiidjärjestuste dešifreerimine). Kui lähiminevikus kulus 250 aluspaari (bp) DNA dešifreerimiseks nädal, siis kaasaegsed automaatsed sekvenaatorid suudavad määrata kuni 5000 aluspaari. päeva kohta. See omakorda aitab kaasa DNA nukleotiidjärjestuste kohta teavet sisaldavate andmebaaside märkimisväärsele kasvule. Praeguseks on välja pakutud erinevaid PCR modifikatsioone, kirjeldatud on kümneid erinevaid meetodi rakendusi, sealhulgas "pikk PCR", mis võimaldab kopeerida ülipikki DNA järjestusi. PCR avastamise eest pälvis K. V. Mullis 1993. aastal Nobeli keemiaauhinna.
Kõik geenidiagnostika lähenemisviisid võib jagada mitmeks põhirühmaks:
1. Teatud DNA segmentide tuvastamise meetodid.
2. Meetodid primaarse nukleotiidjärjestuse määramiseks DNA-s.
3. DNA sisalduse määramise ja rakutsükli analüüsi meetodid. üksteist
PCR võimaldab leida katsematerjalist väikese osa geneetilisest teabest, mis sisaldub mis tahes organismi DNA nukleotiidide spetsiifilises järjestuses, suure hulga teiste DNA lõikude hulgast ja korrutada seda mitu korda. PCR on rakus toimuva DNA sünteesi biokeemilise reaktsiooni "in vitro" analoog.
PCR on tsükliline protsess, mille igas tsüklis toimub sihtmärk-DNA kaksikahela termiline denaturatsioon, millele järgneb lühikeste oligonukleotiidpraimerite lisamine ja nende pikendamine DNA polümeraasi abil nukleotiidide lisamise teel. Selle tulemusena koguneb suur hulk algse sihtmärk-DNA koopiaid, mis on kergesti tuvastatavad.
PCR avastamise tulemuseks oli meetodi kohene praktiline kasutamine. 1985. aastal avaldati artikkel, mis kirjeldas PCR-i põhjal sirprakulise aneemia diagnoosimise katsesüsteemi. Alates 1986. aastast on PCR-ile pühendatud üle 10 000 teaduspublikatsiooni. PCR-i kasutamise väljavaated tunduvad rohkem kui muljetavaldavad. 12
Tsütokeemilised uurimismeetodid.
Need meetodid on kirjeldatud in vitro bioloogiliste testide variandid. Need on tavaliselt tundlikumad kui radioimmunoanalüüsi meetodid, kuid on palju tülikamad ja kulukamad ühe määramise kohta. Tsütokeemiliste bioloogiliste uuringute tulemused kvantifitseeritakse histoloogilistel lõikudel, kasutades spetsiaalset seadet - mikrodensitomeetrit.
Histoloogilised lõigud valmistatakse konkreetse hormooni suhtes spetsiifilistest sihtkudedest või rakkudest, mis on eelnevalt kokku puutunud standard- ja testhormooni erinevate kontsentratsioonidega. Densitomeetri abil skaneeritakse ala läbimõõduga 250–300 nm, et kvantifitseerida värvireaktsioon, mis on põhjustatud objekti redoksseisundi muutusest hormonaalse stimulatsiooni mõjul. Kvantitatiivseks analüüsiks kasutatakse nende muutuste suhtes tundlikke histoloogilisi värvaineid.
Esimene tsütokeemiline bioloogiline analüüsisüsteem töötati välja ACTH jaoks ja neerupealiste koor oli selles süsteemis sihtkude. Teised ACTH bioloogilise määramise meetodid on kas liiga tundlikud või nõuavad suuri plasmamahtusid. Seega on koe redoksseisundi tsütokeemiline määramine väärtuslik vahend hüpotalamuse-hüpofüüsi-neerupealise süsteemi normaalse ja muutunud funktsiooni analüüsimisel ACTH tasemete osas.
LH määramiseks töötati välja tsütokeemiline meetod, kuid olulisi raskusi tekkis erinevate määramiste tulemuste olulise kõikumise ja objekti muutuva tundlikkuse tõttu, mis võib-olla peegeldab teadaolevaid bioloogilisi lahknevusi erinevatel loomadel. Paratüreoidhormooni, ADH ja türeotropiini määramiseks on välja pakutud tundlikud spetsiifilised tsütokeemilised meetodid.
Seadmete edasise keerukuse tõttu, mis suurendab uuringute arvu ühes määratluses, saab seda meetodit laialdasemalt kasutada. See on eriti atraktiivne, kuna see ei nõua radioaktiivsete ühendite kasutamist. Tsütokeemilisi meetodeid kliinikus laialdaselt ei kasutata ja neid kasutatakse peamiselt tundliku meetodina teadusuuringutes. 13
1.3. Kaasaegsed meetodid endokriinsüsteemi uurimiseks kilpnäärme uurimise näitel
Oma töös, mis on piiratud ulatusega ja kaasaegsete endokriinsüsteemi uurimismeetoditega normaalsetes ja patoloogilistes tingimustes, kaalun endokriinnäärme uurimise näidet, mis on oluline kilpnäärmehaiguste suure levimuse tõttu Baškortostani Vabariigis. .
1. Ultraheliuuring.
Ultraheli võimaldab kontrollida üsna subjektiivseid palpatsiooniandmeid. Uurimiseks on optimaalsed andurid sagedusega 7,5 MHz ja 10 MHz. Praegu kasutatakse värvilist Doppleri kujutist kilpnäärme väikeste veresoonte visualiseerimiseks ning teabe edastamiseks suuna ja keskmise voolukiiruse kohta. Meetodi võimalused sõltuvad uuringut läbiviiva spetsialisti kogemusest ja kvalifikatsioonist. Meetodi põhimõte seisneb selles, et sagedaste impulssidega saadetav ultraheli tungib inimese elunditesse, peegeldub erineva ultrahelitakistusega meediumite vahelisel liidesel, on seadme poolt tajutav ning taasesitatud ekraanil ja ultraviolettpaberil. Meetod on kahjutu ja sellel pole vastunäidustusi (joonis 1.3).
Joon.1.3. Kilpnäärme ultraheli.
Nüüd kasutatakse laialdaselt ka keerulist ultraheli värviline Doppleri kaardistamine (CDC), (joonis 1.4). 14
Riis. 1.4. AIT kilpnäärme nodulatsiooniga CDI režiimis.
2. Kilpnäärme peennõela punktsioonibiopsia.
Kilpnäärme peennõela punktsioonbiopsia on ainus operatsioonieelne meetod struktuursete muutuste otseseks hindamiseks ja kilpnäärme moodustiste tsütoloogiliste parameetrite määramiseks. Peennõela punktsioonibiopsiaga adekvaatse tsütoloogilise materjali saamise efektiivsus suureneb oluliselt, kui näidatud diagnostiline protseduur viiakse läbi ultraheli kontrolli all, mis võimaldab tuvastada kilpnäärme enim muutunud piirkondi, samuti valida optimaalne punktsiooni suund ja sügavus. viisteist
3. Tsütoloogiline uuring.
Kilpnäärme moodustiste tsütoloogiline diagnoos põhineb teatud tunnuste kombinatsioonil, nagu saadud materjali hulk, selle rakuline koostis, rakkude ja nende struktuurirühmade morfoloogilised tunnused, määrdumise kvaliteet jne.
4. Radioisotoopide uuring (skaneerimine), stsintigraafia.
Radioisotoopide skaneerimine (skaneerimine) on skanneraparaadi abil kahemõõtmelise kujutise saamise meetod, mis kajastab radiofarmatseutilise preparaadi levikut erinevates organites.
Joon.1.6. Radioisotoopide skaneerimise tulemus
kilpnääre
Skaneerimine võimaldab teil määrata kilpnäärme suurust, radioaktiivse joodi kogunemise intensiivsust selles ja selle üksikutes osades, mis võimaldab hinnata nii kogu näärme kui ka fokaalsete moodustiste funktsionaalset seisundit (joonis 1.6).
Stsintigraafia- funktsionaalse pildistamise meetod, mis seisneb kehasse viimisesradioaktiivsed isotoobidja kujutise saamine nende poolt kiiratava määramise teel kiirgust . Patsiendile süstitakse raadio indikaator - vektormolekulist ja radioaktiivsest markerist koosnev preparaat. Vektormolekuli neelab teatud keha struktuur (elund, vedelik). Radioaktiivne märgis toimib "saatjana": see kiirgab gammakiirgust, mille salvestab gammakaamera. Manustatavat radiofarmatseutilist preparaati kogus on selline, et selle kiirgav kiirgus on kergesti kinni haaratav, kuid sellel ei ole organismile toksilist mõju.
Kilpnäärme stsintigraafia jaoks on tehneetsiumi kõige sagedamini kasutatav isotoop 99m Tc-pertehnetaat. Joodi 131 kasutamine piirdub toimiva kilpnäärmevähi metastaaside tuvastamisega. Retrosternaalse ja hälbiva struuma, samuti mõnel juhul kaasasündinud hüpotüreoidismi (atüreoos, düstoopia, organisatoorsed defektid) diagnoosimiseks kasutatakse 123 joodi. 16
5. TSH ja kilpnäärmehormoonide taseme määramine.
TSH ja kilpnäärmehormoonide (vaba türoksiini ja trijodotüroniin) taseme uuring on näidustatud kõigile, kellel kahtlustatakse kilpnäärme patoloogiat. Praegu on otstarbekam viia läbi kilpnäärmehormoonide vabade fraktsioonide uuring koos TSH taseme määramisega.
6. Türeoglobuliini taseme määramine veres.
Suurenenud türeoglobuliini sisaldus veres on iseloomulik paljudele kilpnäärmehaigustele, see avastatakse ka 2-3 nädala jooksul pärast punktsioonibiopsiat, samuti 1-2 kuu jooksul pärast kilpnäärme operatsiooni.
7. Kaltsitoniini taseme määramine veres.
Patsientidel, kelle perekonnas on esinenud medullaarset kilpnäärmevähki (teise ja kolmanda tüübi hulgi endokriinse neoplaasia sündroom), on kohustuslik määrata kaltsitoniini tase veres. Kõigil muudel juhtudel ei ole kaltsitoniini määramine näidustatud.
Kaltsitoniini normaalne sisaldus veres ei ületa 10 pg / ml.Selle markeri tase on üle 200 pg / ml, mis on medullaarse kilpnäärmevähi kõige olulisem diagnostiline kriteerium.
8. Kilpnäärme funktsiooni test.
Kilpnäärme funktsiooni testid on vereanalüüsid, mida kasutatakse kilpnäärme töö hindamiseks. Need testid hõlmavad kilpnääret stimuleeriva hormooni (TSH), türoksiini (T4), trijodotüroniini (T3), türoksiini siduva globuliini (TBG), trijodotüroniini tõrva (T3RU) ja pikatoimelise kilpnäärme stimulaatori (LATS) testi.
Kilpnäärme funktsiooni teste kasutatakse:
- aidata diagnoosida kilpnäärme alatalitlust (hüpotüreoidism) ja kilpnäärme ületalitlust (hüpertüreoidism)
kilpnäärme aktiivsuse hindamine
kilpnäärme ravi vastuse jälgimine
TSH "käsib" kilpnäärmel eritada hormoone türoksiini (T4) ja trijodotüroniini (T3). Enne TSH-testide kasutamist kasutati standardseid vereanalüüse T4 ja T3 taseme mõõtmiseks, et teha kindlaks, kas kilpnääre töötab korralikult. Trijodotüroniini (T3) test mõõdab selle hormooni kogust veres. T3 esineb üldiselt väga väikestes kogustes, kuid sellel on oluline mõju ainevahetusele. See on kilpnäärmehormoonide aktiivne komponent.
Türoksiini siduva globuliini (TSG) test kontrollib selle aine taset veres, mis toodetakse maksas. GTD seondub T3 ja T4-ga, takistab hormoonide neerude kaudu verest väljapesemist ning vabastab need siis ja seal, kus neid organismi funktsioonide reguleerimiseks vaja läheb.
Trijodotüroniini vaigu absorptsioonitest (T3RU) mõõdab T4 taset veres. Selle testi laboratoorne analüüs võtab mitu päeva ja seda kasutatakse harvemini kui teste, mille tulemused on kiiremini kättesaadavad.
Pikatoimelise kilpnäärme stimulaatori test (LATS) näitab, kas veri sisaldab pikatoimelist kilpnäärme stimulaatorit. Kui veres on ebanormaalne, põhjustab LATS kilpnääret ebanormaalselt suures koguses hormoone tootma ja vabastama.
9. Arvuti-, magnetresonantstomograafia, transmissioonoptiline tomograafia.
CT ja MRI on väga informatiivsed mitteinvasiivsed meetodid kilpnääre visualiseerimiseks. Neid uuringuid tehakse aga praegu üsna harva asjakohaste seadmete kõrge hinna ja ligipääsmatuse tõttu. Lisaks kilpnäärme lokaliseerimise, selle kontuuride, kuju, suuruse, struktuuri, seose külgnevate kudedega, piirkondlike lümfisõlmede suuruse ja struktuuri hindamisele võimaldab CT määrata kilpnäärme moodustiste densitomeetrilist tihedust. Nii CT kui ka MRI on retrosternaalse struuma diagnoosimisel valikmeetodid. Kompuutertomograafia (CT) on röntgenuuringu meetod, mis põhineb röntgenkiirguse ebaühtlasel neeldumisel keha erinevates kudedes ja mida kasutatakse peamiselt kilpnäärme, kõhupiirkonna (maks, sapipõis, kõhunääre) patoloogiate diagnoosimisel. neerud, neerupealised jne)
Kompuutertomograafia võimaldab teil saada teavet mis tahes moodustumise konfiguratsiooni, suuruse, asukoha ja levimuse kohta, kuna see meetod eristab kõvasid ja pehmeid kudesid tiheduse järgi.
Magnetresonantstomograafia (MRI) on instrumentaalne diagnostiline meetod, mida kasutatakse endokrinoloogias hüpotalamuse-hüpofüüsi-neerupealiste süsteemi, luustiku, kõhuõõneorganite ja väikese vaagna seisundi hindamiseks.
MRI annab teavet luude konfiguratsiooni, moodustumise suuruse, asukoha ja levimuse kohta, kuna see meetod eristab kõvasid ja pehmeid kudesid tiheduse järgi.
MRI on viimastel aastatel muutunud üha olulisemaks hüpotalamuse-hüpofüüsi piirkonna patoloogiate diagnoosimisel ja sellest on saamas valikmeetod selle konkreetse piirkonna kahjustuste kahtlusega patsientide uurimisel (joonis 1.7).
Joon.1.7. MRI ettevalmistamine.
Magnetresonantstomograafia käigus liigub liikuv laud koos patsiendiga läbi "tunneli", mis tekitab elektromagnetvälja, mis omakorda tekitab kiirgust, mis võimaldab saada keha siseehitusest kolmemõõtmelist kujutist.
MRI-ga diagnoositud haigused:
- ? hüpofüüsi kasvajad (nt.prolaktinoom
, Itsenko-Cushingi tõbi)
- ? neerupealiste moodustised (nt Cushingi sündroom, aldosteroom, feokromotsütoom)
- ? osteoporoos
- ? ja jne.
- ? võimaldab teil saada 2-3 mm paksuseid viile mis tahes tasapinnal
- ? võime hinnata signaali olemuse järgi mitte ainult hariduse olemasolu, vaid ka selle sisemist struktuuri (hemorraagia, tsüstid jne).
- ? patsiendi kokkupuude ioniseeriva kiirgusega ja peaaegu täielik kahjutus, mis on oluline laste uurimisel, samuti vajadusel mitu korduvat uuringut.
Riis. 1.8. CTLM-süsteem on üks maailma esimesi optilisi jadatomograafe.
10. Kilpnäärme kasvajakoe immunohistokeemiline uuring.
Need viiakse läbi operatsiooni tulemusena saadud kilpnäärme kasvajate kudedes. Selle uuringu peamine eesmärk on prognostiline. Kilpnäärmekoes määratakse selliste ainete olemasolu nagu p53 (kasvaja kasvu supressor), CD44, Met (metastaaside eest vastutavad proteoglükaanid), PTC, ras-onkogeenid (kasvaja progresseerumist reguleerivad onkogeenid) jt. Kliinilises praktikas on kõige olulisem immunoreaktiivsuse tuvastamine lk 53, Met ja RTS kilpnäärmevähi kudedes. Nende markerite esinemine kasvajakoes on märk metastaatilise haiguse kiirest (2-5 kuu jooksul) arengust opereeritud patsiendil. Uuring on kallis ja nõuab spetsiaalset laborivarustust. Kasvajamarkerite määramine toimub praegu peamiselt spetsialiseeritud onkoloogilistes kliinikutes teatud näidustustel, nimelt juhul, kui patsiendil on kasvaja kordumise või metastaatilise haiguse (halvasti diferentseerunud kilpnäärmevähk, patsiendi vanus üle 55 aasta) prognostilised tunnused. , kasvaja invasioon ümbritsevatesse kudedesse jne). kaheksateist
11. Immunoloogilised meetodid.
Immunoloogilised meetodid hõlmavad peamiselt ensüümi immuunanalüüsi (ELISA). ELISA on meetod antigeenide või antikehade tuvastamiseks, mis põhineb antigeen-antikeha kompleksi määramisel järgmistel põhjustel:
- antigeeni või antikeha esialgne fikseerimine substraadile;
uuritava proovi lisamine ja fikseeritud antigeeni või antikeha sidumine sihtantigeeni või sihtantikehaga;
ensümaatilise märgisega märgistatud antigeeni või antikeha hilisem lisamine koos selle tuvastamisega, kasutades sobivat substraati, mis muudab oma värvi ensüümi toimel. Reaktsioonisegu värvuse muutus näitab sihtmolekuli olemasolu proovis Ensümaatiliste reaktsioonide produktide määramine uuritavate proovide uurimisel toimub võrdluses kontrollproovidega.
Kilpnäärmevastaste antikehade taseme uurimine - immunokeemiline luminestsentsmeetod. Uuriti kilpnäärmekoe antigeenide: türeoglobuliini, kilpnäärme peroksüdaasi ja TSH retseptorite vastaste antikehade levimust difuusse toksilise struuma ja endokriinse oftalmopaatiaga patsientidel. Selliste patsientide uurimine näitab TSH retseptori antikehade kõrget taset, mis türeostaatilise ravi ajal väheneb. 20 On näidatud, et TSH retseptori ja türeoglobuliini vastaste antikehade määramine peaks olema täiendava diagnostilise kriteeriumina uuringu käigus. 21
TSH retseptori antikehade määramise meetodid:
1. TBII määratlus
1.1. Radioretseptori meetod
1.1.1. Sea rTTG (TRAK) kasutamine
1.1.2. Kasutades inimese rTSH-d, mida ekspresseerivad CHO rakud (CHO-R)
1.1.3. Leukeemiarakkude poolt ekspresseeritud rTTH kasutamine (K562)
1.2. FACS
1.3. Immunosadestamine
2. Bioloogilised meetodid stimuleerivate (TSAb) ja blokeerivate (TBAb) antikehade tuvastamiseks
2.1. cAMP produktsiooni hindamine (määratud RIA poolt)
2.1.1. FRTL-5 rakkudes
jne.................