ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA – inglise keel) astus praktilise meditsiini ellu eelmise sajandi 60ndatel aastatel. Tema lähteülesandeks oli histoloogiline uurimine teaduslikel eesmärkidel, mis piirdus elusorganismi rakkude antigeense struktuuri otsimise ja tuvastamisega.
ELISA meetod põhineb spetsiifiliste (AT) ja seotud antigeenide (AG) interaktsioonil antigeen-antikeha kompleksi moodustumisega, mis tuvastatakse ensüümi abil. See asjaolu viis teadlased mõttele, et seda meetodit saab kasutada diagnostilistel eesmärkidel, et tuvastada eri klassidesse kuuluvad spetsiifilised immunoglobuliinid, mis on seotud konkreetse infektsiooni immuunvastusega. Ja see oli läbimurre kliinilises laboratoorses diagnostikas!
Meetodit hakati aktiivselt kasutama alles 80ndate alguses ja seejärel peamiselt spetsialiseeritud asutustes. Esimesed ELISA analüsaatorid tarniti vereülekandekeskustesse ja -jaamadesse, nakkus- ja suguhaiglatesse, kuna Aafrika mandril sündinud hirmuäratav AIDS ilmus koos meiega silmapiirile ja ühines kohe "vanade" nakkustega, nõudis viivitamatuid meetmeid diagnoosimiseks ja teda mõjutavate terapeutiliste ravimite otsimine.
ELISA meetodi ulatus
Ensüümi immuunanalüüsi võimalused on tõeliselt ulatuslikud. Nüüd on raske ette kujutada, kuidas saab hakkama ilma selliste uuringuteta, mida kasutatakse sõna otseses mõttes kõigis meditsiiniharudes. Tundub, et ELISA saab onkoloogias hakkama? Tuleb välja, et saab. Ja palju. Analüüsi võime leida teatud tüüpi pahaloomulistele kasvajatele iseloomulikke markereid on kasvaja varajase avastamise aluseks, kui seda oma väiksuse tõttu veel muul viisil ei tuvastata.
Kaasaegne kliiniline laboratoorne diagnostika (CDL) omab lisaks kasvajamarkeritele märkimisväärset ELISA paneelide arsenali ning kasutab neid erinevate patoloogiliste seisundite (infektsioossed protsessid, hormonaalsed häired) diagnoosimiseks ja farmaatsiaravimite jälgimiseks, et teha kindlaks nende mõju patsiendi seisundile. keha ja, muide, mitte ainult inimene. Praegu on veterinaarteenistuses laialdaselt kasutusel ensüümimmunoanalüüs, sest ka "meie väiksemad vennad" on vastuvõtlikud paljudele haigustele, mida nad mõnikord väga põevad.
Seega ELISA võimaldab oma tundlikkuse ja spetsiifilisuse tõttu veenist võetud vereproovist määrata:
- Hormonaalne seisund (kilpnäärme ja neerupealiste hormoonid, suguhormoonid);
- Viirusliku ja bakteriaalse infektsiooni esinemine (HIV, B ja C, klamüüdia, süüfilis ja paljud muud patogeensete mikroorganismide põhjustatud haigused);
- Nakkusprotsessi algatanud mikroorganismide elutegevuse jäljed, mis lõppesid edukalt ja liikusid selle patogeeni suhtes immuunvastuse moodustumise staadiumisse. Sellised jäljed ehk antikehad jäävad paljudel juhtudel verre ringlema kogu eluks, mis kaitseb inimest uuesti nakatumise eest.
Mis on IF-i olemus?
Ensüümi immuunanalüüsi meetod võimaldab määrata mitte ainult patogeeni enda olemasolu (kvalitatiivne analüüs), vaid ka selle kvantitatiivset sisaldust patsiendi vereseerumis.
Viiruse või bakteri doos mõjutab oluliselt nakkusprotsessi kulgu ja selle tulemust, seetõttu on kvantitatiivsel analüüsil oluline roll erinevate vormide ja staadiumite haiguste diagnoosimisel ja ravimisel.
Teades aga ensüümiga seotud immunosorbentanalüüse kui ELISA meetodit, ei mõtle me isegi sellele, kuidas see suudab katta nii suure hulga meie planeedil elavaid mikroorganisme, millest paljud kujutavad otsest ohtu inimeste tervisele ja elule ning loomad. Fakt on see, et ELISA-l on palju võimalusi (mittekonkureeriv ja konkureeriv - otsene ja kaudne), millest igaüks lahendab oma probleemi ja võimaldab seega sihipärast otsingut.
Ühe või teise klassi immunoglobuliinide tuvastamiseks kasutatakse traditsioonilist 96 süvendiga polüstüreenpaneeli (tabletti), mille süvendites on tahkes faasis kontsentreeritud adsorbeerunud rekombinantsed valgud. Vereseerumiga süvendisse sattunud antikehad või antigeenid leiavad "tuttava" objekti ja moodustavad sellega kompleksi (AG - AT), mis ensüümkonjugaadiga fikseerituna avaldub süvendi värvi muutusena. tulemuste lugemisel.
Ensüüm-immunoanalüüs viiakse läbi teatud spetsiifilisusega testimissüsteemidega, mis on valmistatud spetsiaalsetes laborites ja varustatud kõigi vajalike reageerivate komponentidega. Uuringuid saab läbi viia seibide ("seibide") ja lugemisspektrofotomeetrite abil, kus enamik on seotud käsitsitööga. Täisautomaatsetel masinatel, vabastades laborandi monotoonsest tilgutamisest, pesemisest ja muudest rutiinsetest ülesannetest, on loomulikult kiirem ja mugavam töötada, kuid mitte kõik laborid ei saa endale sellist luksust lubada ja jätkata tööd vanaviisi - poolautomaatsetel seadmetel.
ELISA tulemuste tõlgendamine on laboridiagnostika arsti pädevuses, samas kui peaaegu kõikidele immunokeemilistele reaktsioonidele omast omadust anda valepositiivseid või valenegatiivseid vastuseid võetakse tingimata arvesse.
Video: kaasaegne ensüümi immuunanalüüs
ELISA tulemused süüfilise näitel
ELISA sobib kõikide vormide tuvastamiseks ja lisaks kasutatakse seda sõeluuringutes. Analüüsiks kasutatakse patsiendi tühja kõhuga veeniverd. Töös kasutatakse teatud spetsiifilisusega plaate (AT klassid A, M, G) või totaalseid antikehi.
Arvestades, et süüfilise antikehad toodetakse kindlas järjestuses, saab ELISA abil hõlpsalt vastata küsimusele, millal infektsioon toimus ja millises etapis protsess on, ning saadud tulemuste dekodeerimise saab esitada järgmisel kujul:
- IgM näitab nakkusprotsessi kestust (võib ilmneda krooniliste põletikuliste haiguste ägenemise ajal);
- IgA teatab, et infektsioon juhtus rohkem kui kuu aega tagasi;
- IgG näitab, et infektsioon on täies hoos või hiljutine ravi, mis on anamneesi kogumisel hõlpsasti tuvastatav.
Süüfilise testimisel jäävad negatiivsed süvendid (ja negatiivne kontroll) värvituks, positiivsel (nagu positiivsel kontrollil) on aga testi ajal lisatud kromogeeni värvimuutuse tõttu erekollane värv. Kuid värvi intensiivsus ei ühti alati kontrolliga, see tähendab, et see võib olla veidi kahvatum või kergelt kollakas. Need on kahtlased tulemused, mis reeglina kuuluvad uuesti läbivaatamisele, võttes kohustuslikult arvesse spektrofotomeetril saadud kvantitatiivseid näitajaid, kuid üldiselt on värvus otseselt võrdeline immuunkomplekside (seotud antigeenid ja antikehad) arvuga. üksteisele).
Ensüümide immuunanalüüsidest põnevaim – HIV-i ELISA
Analüüs selle kohta, võib-olla rohkem kui teistel, pakub huvi laiale elanikkonnarühmale, sest veel ei saa kindlalt väita, et paljud sotsiaalsed probleemid (prostitutsioon, narkomaania jne) on kadunud. Kahjuks ei mõjuta HIV mitte ainult neid inimühiskonna kihte, nakatuda võib erinevatel asjaoludel, mis ei ole seotud seksuaalse lolluse või uimastitarbimisega. Aga kui on vajadus HIV-testi järele, siis ei tasu karta, et kõik ümberkaudsed saavad sellise labori külastamisest teada. Nüüd on HIV-nakatunud isikud seadusega kaitstud ning kahtlused võivad pöörduda anonüümsetesse kontoritesse, kus saab probleemi lahendada, kartmata avalikustamist ja hukkamõistu.
HIV-nakkuse diagnoosimiseks kasutatav ensüümi immuunanalüüs on üks esmaseid standarduuringuid, mis aga nõuavad eritingimusi, kuna teema on väga tundlik.
HIV-i ELISA-d on mõttekas teha pärast seksuaalset kontakti, vereülekannet, muid nakkusega kaasnevaid meditsiinilisi protseduure ja inkubatsiooniperioodi lõpus (“seronegatiivne aken”), kuid tuleb meeles pidada, et see periood ei ole konstantne. See võib lõppeda 14–30 päeva pärast või võib kesta kuni kuus kuud, seega loetakse keskmiseks väärtuseks intervall 45–90 päeva. HIV-i puhul loovutatakse verd samamoodi nagu teiste infektsioonide puhul – veenist tühja kõhuga. Tulemused valmivad sõltuvalt materjali kogunemisest laborisse ja töökoormusest (2 kuni 10 päeva), kuigi enamik laboreid annab vastuse samal või järgmisel päeval.
Mida võib HIV-i tulemustest oodata?
HIV-nakkuse ELISA abil tuvastatakse kahe viiruse tüübi antikehad: HIV-1 (sagedamini Venemaal ning teistes Euroopa ja Aasia riikides) ja HIV-2 (sagedamini Lääne-Aafrikas).
HIV ELISA ülesandeks on otsida G-klassi antikehi, mis tuvastatakse kõigis testsüsteemides, kuid hilisemal perioodil, ning klassi A ja M antikehi, mis tuvastatakse uue põlvkonna rekombinantsete testide komplektidel, mis võimaldavad tuvastada antikehi kõige varem. etapid (inkubatsiooniperiood on seronegatiivne aken). ELISA-st võib oodata järgmisi vastuseid:
- Esmane positiivne tulemus: verd kontrollitakse uuesti sama tüüpi, kuid võimalusel erineva seeria testisüsteemiga ja teise isiku poolt (laborant);
- Korduv (+) hõlmab patsiendilt uue vereproovi võtmist, mille uuring sarnaneb esmase analüüsiga;
- Järgmise positiivse tulemuse kohta tehakse võrdlusanalüüs, mille käigus kasutatakse väga spetsiifilisi testikomplekte (2-3 tk.);
- Mõlema (või kolme) süsteemi positiivne tulemus saadetakse immunoblotanalüüsile (sama ELISA, kuid tehakse eraldi eriti kõrge spetsiifilisusega testikomplektidega).
Järeldus HIV-nakkuse kohta tehakse ainult immunoblotanalüüsi põhjal. Vestlus nakatunud inimesega toimub täielikus konfidentsiaalsuses. Meditsiinisaladuste avaldamine Venemaal ja ka teistes riikides on kriminaalkorras karistatav.
Erilist populaarsust on saavutanud ka klamüüdia ja tsütomegaloviiruse analüüsid ensüümi immuunanalüüsi abil, kuna need võimaldavad teil määrata nakatumise aja, haiguse staadiumi ja ravimeetmete tõhususe.
Sissejuhatuse käigus on võimalik jälgida ka erinevate klasside antikehade ilmumist. nakkustekitaja poolt põhjustatud patoloogilise seisundi erinevates faasides:
- IgM-i saab tuvastada juba seitse päeva pärast nakatumist;
- IgA näitavad, et infektsioon on kehas elanud rohkem kui kuu;
- IgG kinnitab klamüüdia diagnoosi, aitab jälgida ravi ja määrata selle efektiivsust. Tuleb märkida, et G-klassi antikehad jäävad ja ringlevad organismis olenemata haiguse kestusest, mistõttu tuleb analüüsi õigeks tõlgendamiseks arvestada kontrollväärtustega (normidega), mis viis, on iga CDL-i jaoks erinevad: võttes arvesse testimissüsteemi kaubamärki ja komplekti kuuluvate reaktiivide spetsiifilisust. Normväärtused sisestatakse ELISA tulemuse kõrval olevasse vormi.
Mis puutub, siis siin on see veidi erinev: M-klassi antikehad ilmuvad umbes pooleteise kuu jooksul, see tähendab, et positiivne tulemus (IgM +) muutub esmase infektsiooni faasis või latentse infektsiooni taasaktiveerumisel ja püsib 4 kuud kuni kuus kuud.
G-klassi antikehade olemasolu on iseloomulik esmase ägeda infektsiooni või taasinfektsiooni tekkele. Analüüs väidab, et viirus on olemas, kuid ei anna teavet nakkusprotsessi staadiumi kohta. Samal ajal tekitab raskusi ka IgG tiitri normi määramine, kuna see sõltub täielikult konkreetse inimese immuunseisundist, mille aga määrab G-klassi immunoglobuliinide tuvastamine. Arvestades antikehade sellist käitumist, CMVI diagnoosimisel, muutub vajalikuks hinnata klassi G antikehade võimet suhelda CMV-ga, et seda hiljem “neutraliseerida” (AT aviidsus). Haiguse algstaadiumis seondub IgG viiruse antigeenidega väga halvasti (madal aviidsus) ja alles siis hakkavad nad aktiivsust näitama, seetõttu võime rääkida antikehade aviidsuse suurenemisest.
Ensüüm-immuunanalüüsi eelistest võime rääkida pikka aega, sest see meetod on suutnud lahendada palju diagnostilisi probleeme, kasutades ainult venoosset verd. Pole vaja pikki ootamisi, muresid ja probleeme uurimistööks materjali võtmisega. Lisaks täiustatakse jätkuvalt ELISA testimissüsteeme ja päev, mil test annab tulemuse 100% usaldusväärsuse, pole enam kaugel.
Video: Moskva Riikliku Meditsiiniülikooli õppefilm. Sechenov ELISA põhitõdedest
HIV on meie põlvkonna nuhtlus. Millised meetodid on olemas HIV diagnoosimiseks, põhjalik teave HIV-i ELISA testi kohta. Kuidas võtta, kuidas analüüsi tulemusi tõlgendada.
Inimese immuunpuudulikkuse viirus on meie põlvkonna üks kardetumaid infektsioone.
HIV-l on meie immuunsüsteemile hävitav mõju, ja kui haiguse kulgu õigel ajal ei peatata, siis võib muutuda omandatud immuunpuudulikkuse sündroomiks. HIV levib partnerite vahetu kontakti kaudu seksuaalvahekorra ajal läbi mehe ja naise suguelundite. Teine nakkuse põhjus võib olla viiruse sisenemine vere kaudu. See juhtub mittesteriilsete instrumentide kasutamise, nakatunud vereülekande ja isegi põlvkondade kaupa: lapsele, kes on saanud nakatunud ema rinnaga toitmise ajal.
Siiani on teadlased üle maailma pead murdnud uue põlvkonna AIDSi ravivate ravimite loomise üle, kuid hoolimata teaduse suurest arengutempost levib inimese immuunpuudulikkuse viirus jätkuvalt üle kogu planeedi.
ELISA - HIV diagnoosimise meetod
20. sajandi põlvkonna teadlased töötasid HIV diagnoosimiseks välja mitu meetodit, millest kõige olulisemat peetakse seotud immunosorbentanalüüs. HIV-i ELISA-d hakati läbi viima suhteliselt hiljuti - üheksakümnendate alguses. Aja jooksul on meetod lihvitud, omandanud uusi detaile. Nüüd on ELISA meetodi usaldusväärsus üks kõrgemaid - umbes 98%. Seetõttu kasutatakse seda meetodit üha sagedamini.
ELISA on esimene test, millega patsient HIV-i testimisel kokku puutub. ELISA meetod määrab antikehade olemasolu veres. Kui test tuvastab veres antikehade olemasolu, on viirus olemas. Selle testi kohta käivat teavet peavad aga toetama muud analüüsid, nagu immuunblotanalüüs (IB) ja uusima põlvkonna meetod, polümeraasi ahelreaktsioon (PCR).
Antikehad on spetsiaalsed valguühendid, mida toodavad plasmarakud pärast reaktsiooni organismi sattunud infektsioonile (antikehad hakkavad moodustuma 1-2 kuud pärast nakatumist).
HIV-i põhjused
Arst kirjutab teile saatekirja analüüsiks, kui olete kokku puutunud HIV-i nakatunud inimesega või on olemas nakatumisoht. HIV-nakkuse ohus olevate inimeste põlvkondade hulka kuuluvad:
- läbite ühe kuu jooksul süstimisravi;
- seksuaalsuhted ilma spetsiaalsete kaitsevahenditeta;
- seksuaalse kontakti ajal levivate nakkuste kandjad;
- patsiendid pärast vereülekannet või süstimist, et avastada vere hüübimise põhjus kaheksakümnendatel.
Kui kahtlete oma HIV-staatuses ja hirme seoses nakatumisvõimalusega, on soovitatav koheselt abi otsida igast meie riigi raviasutusest põhjaliku HIV-testi tegemiseks. Analüüside tulemused saadakse kuu jooksul. HIV-i nakatumise riskirühma kuuluvatel inimestel on soovitatav käia sõeluuringul iga 4 kuu järel.
Kuidas analüüsi teha
HIV-i vereanalüüsi tegemiseks pole spetsiaalset ettevalmistust, kuid see on parem järgige lihtsaid reegleid:
- parem on mitte süüa õhtul, vaid võtta analüüs hommikul tühja kõhuga;
- ei ole soovitatav koormata keha füüsilise tööga;
- sööge tervislikku toitu, hoiduge mõnda aega sigarettidest ja alkoholist;
- valede testinäitajate välistamiseks ei tohiks te pärast tõsiste haiguste ravi analüüsi teha.
Patendi RU 2515051 omanikud:
Leiutis käsitleb biotehnoloogia ja meditsiini valdkonda. ELISA testisüsteem inimese seerumis (plasmas) inimese immuunpuudulikkuse viiruse 1. tüüpi (HIV-1), sealhulgas HIV-1 rühma O, nakatumise tõenäolise aja määramiseks. Testimissüsteem sisaldab inimese immuunpuudulikkuse viiruse 1. tüüpi antigeenidel põhinevat immunosorbenti (env HIV-1 ja HIV-1 rühm O), proovi lahjenduslahust (RRS) ja tuvastamisreaktiive (konjugaadid, kromogeen/substraat). Leiutis käsitleb ka meetodit inimese seerumis (plasmas) inimese immuunpuudulikkuse viiruse tüüp 1 (HIV-1), sealhulgas HIV-1 rühma O nakatumise tõenäolise ajastuse määramiseks, uurides patsiendi vereseerumit kirjeldatud ELISA abil. testimissüsteem. MÕJU: leiutis võimaldab kiiresti ja lihtsalt määrata HIV-nakkuse tõenäolise ajastuse. 2 n.p. f-ly, 4 tab., 2 pr.
LEIUTIS on seotud biotehnoloogia ja meditsiini valdkonnaga. Ja seda saab kasutada inimese seerumis (plasmas) inimese immuunpuudulikkuse viiruse tüüp 1 (HIV-1), sealhulgas HIV-1 rühma O, nakatumise tõenäolise ajastuse määramiseks.
HIV-nakkuse levik on tänapäeva maailmas endiselt tõeline probleem. Kuna õigeaegne ja kvaliteetne diagnostika on tõeline vahend HIV-nakkuse ala vähendamiseks, on kaasaegse ühiskonna oluline ülesanne tõhusa testimissüsteemi väljatöötamine, mis suudab kindlaks teha nakatumise tõenäolise kestuse.
Tehnika taseme analüüs on näidanud mitmete erinevate autorite poolt välja pakutud meetodite ja testide olemasolu HIV-nakkuse staadiumide määramiseks erinevate meetodite abil. Tuntud näiteks molekulaargeneetiline test, mis põhineb perifeerse vere viiruskoormuse määramisel polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) abil (Kravchenko A.V., Serebrovskaya L.V., Golokhvostova E.L. jt. Timasid kombinatsioonis Chividi ja inviraasiga kompleksravis HIV-nakkusega patsientidest - Epidemioloogia ja nakkushaigused - 1998. - Nr 5 - lk 51-52). Tuntud meetod HIV-nakkuse staadiumite hindamiseks (Clinical Immunology and Allergology, toim. G. Lolor Jr. - M.: Practice, 2000. - S. 585-587), mis seisneb seerumi β 2 - taseme määramises. mikroglobuliin. Kirjeldatakse meetodit HIV-nakkuse staadiumite diagnoosimiseks (V.V. Pokrovsky et al. "HIV-nakkuse kliiniline diagnoos ja ravi". - M.: GOU VUNMC RF, 2001. - P. 11), mis seisneb absoluutarvu määramises. CD4+ lümfotsüütide perifeerses veres. Tuntud on ka HIV-nakkuse staadiumite diagnoosimise meetod, mis põhineb asjaolul, et patsiendi vereseerumi uurimisel ensüümseotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) abil määratakse esialgse vereseerumi proovi optiline tihedus (OD), mis peegeldab taset. HIV-spetsiifiliste antikehade ja esialgse seerumiproovi OD, inkubeeriti 10 minutit 100 μl 3,5 M naatriumisotiotsüanaadi lahusega. Kui OP väheneb 40% või vähem, diagnoositakse A-staadium - generaliseerunud lümfadenopaatia, OP-i langusega vahemikus 40-60% - B-staadium - bakteriaalne angiomatoos, orofarüngeaalne kandidoos jne ning vähenenud lümfadenopaatia. OP 60% või rohkem – etapp C – AIDS (RU 2251701).
Seega näitas tehnika taseme analüüs, et ükski olemasolevatest allikatest ei saa olla väidetava leiutise lähim analoog, kuna kõik need dokumendid on seotud HIV-nakkuse staadiumi määravate meetodite ja testidega ning ükski kirjeldatud allikatest sisaldab tehnilisi otsuseid, mille eesmärk on määrata kindlaks nakatumise tõenäoline ajavahemik. Nõudeldud leiutis käsitleb testimissüsteemi, mis määrab HIV-nakkuse tõenäolise kestuse. Tehnika taseme analüüsimisel sarnaseid probleemi lahendamisele suunatud lahendusi ei leitud.
Käesolev leiutis käsitleb reaktiivide komplekti "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" inimese seerumis (plasmas) inimese immuunpuudulikkuse viiruse tüüp 1 (HIV-1), sealhulgas HIV-1 rühma O, nakatumise tõenäolise aja määramiseks. ). Test on ette nähtud HIV-positiivsete proovide täiendavaks testimiseks immuunblotanalüüsi positiivse tulemusega. Immuunblotis on võimalik uurida ebamäärase või negatiivse uuringutulemusega proove, milles kinnitatakse HIV RNA ja/või HIV-1 p24 antigeeni olemasolu.
Käesolev leiutis käsitleb ka meetodit selle reaktiivide komplekti "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" kasutamiseks inimese immuunpuudulikkuse viiruse tüüp 1 (HIV-1), sealhulgas HIV-1 rühma O, nakatumise tõenäolise ajastuse määramiseks. seerumis (plasmas) inimese veres.
Vaadeldava leiutise tehniline tulemus on inimese immuunpuudulikkuse viiruse tüüp 1 (HIV-1), sealhulgas HIV-1 rühma O, nakatumise tõenäolise ajastuse kindlaksmääramine, testi lihtsus, mis võimaldab taotletud leiutist kasutada HIV-nakkuse leviku dünaamika epidemioloogiline seire, serokonverterite dünaamika tuvastamine teatud populatsioonis (sugu-vanus, elanikkonna sotsiaalsed rühmad), samuti HIV-nakkuse juhtude ja koldete epidemioloogilisel uurimisel.
Kavandatava tehnilise lahenduse olemus seisneb selles, et HIV-1-ga nakatumise tõenäolise perioodi määramine toimub testimissüsteemi abil, mis sisaldab inimese immuunpuudulikkuse viiruse tüüp 1 (env HIV-1) antigeenidel põhinevat immunosorbenti. ja HIV-1 rühm O), lahjenduslahuse proovid (RRS) ja tuvastamisreaktiivid (konjugaadid, kromogeen/substraat). Uuritavaid proove testitakse natiivselt ja lahjendatakse proovilahjendis. Katsetulemuste järgi jagatakse proovid "varajaseks" ja "hiliseks". "Varased" proovid - tõenäoline nakatumise periood on nakatumise hetkest kuni 9 kuud, "hilised" proovid - tõenäoline nakatumise periood on nakatumise hetkest 9 või enam kuud. Proovi kuulumist "varajase" või "hilise" hulka hinnatakse lahjendatud proovi optilise tiheduse (OD) languse protsentides lahjendamata proovi suhtes.
Need näited illustreerivad leiutise konkreetseid teostusi ega ole mõeldud taotleja õiguste piiramiseks. Kõik võimalikud leiutise variandid, sealhulgas need, mida selles jaotises ei ole loetletud, kuuluvad taotleja õiguste ulatusse.
Immunosorbendina kasutatakse rekombinantseid antigeene, mis sisaldavad immunodominantseid env piirkondi HIV-1 ja HIV-1 rühma O. Konjugaat-1 on segu rekombinantsetest HIV-1 gp41 ja HIV-1 gp41 rühma O antigeenidest, mis on konjugeeritud biotiiniga. Esimeses etapis inkubeeritakse uuritavaid proove, kontrollproove ja nende lahjendusi 1:101, samuti PRS-i konjugaat-1-ga. Positiivsetes testi- ja kontrollproovides esinevad spetsiifilised antikehad seonduvad mikroplaadi süvendites adsorbeeritud antigeenidega ja biotiiniga konjugeeritud antigeenidega ning moodustavad stabiilseid komplekse. Üleliigsed proovid ja konjugaat-1 eemaldatakse pesemisega. Järgmises etapis lisatakse süvenditesse mädarõika peroksidaasiga konjugeeritud streptavidiin (konjugaat-2). Konjugaat-2 seondub süvendis oleva antigeeni-antikeha-antigeeni kompleksiga. Liigne konjugaat-2 eemaldatakse pesemisega ja seejärel lisatakse süvenditesse kromogeen/substraat. Seotud konjugaat-2-ga süvendid omandavad sinise värvuse, mis muutub stopplahuse lisamisel kollaseks. Tulemused registreeritakse spektrofotomeetriga.
Immunosorbendina kasutatakse rekombinantseid antigeene, mis sisaldavad HIV-1 ja HIV-1 rühma O immunodominantseid env piirkondi. Kasutatakse ühte konjugaati - mädarõika peroksidaasiga konjugeeritud rühma O rekombinantsete HIV-1 gp41 ja HIV-1 gp41 antigeenide segu. . Analüüsi ajal inkubeeritakse proove, kontrolle ja nende lahjendusi, samuti PPC-d konjugaadiga plaadi antigeeniga kaetud süvendites. Saadud stabiilne kompleks pärast liigse proovi ja konjugaadi eemaldamist ilmneb kromogeeni/substraadi lisamisel. Sel juhul tekib sinine värvus, mis muutub stopplahuse lisamisel kollaseks. Tulemused registreeritakse spektrofotomeetriga.
Uuritud proovide kuuluvust "varajaseks" või "hiliseks" hinnatakse OD languse % järgi proovi lahjendamisel, mis arvutatakse valemiga:
%. P R S O P
kus OPsr. RRS - OP RRS keskmine väärtus (arvutatud mitmest OP RRS väärtusest).
Uuritud proove tuleks pidada "varajaseks": kui OD langus on > 40%.
Uuritud proove tuleks pidada "hiliseks": kui OD on ≤40%.
Näide OD languse % arvutamisest proovi lahjendamisel on toodud tabelis 1.
Tulemuste salvestamiseks ja töötlemiseks on mugav kasutada Exceli programmi. Selle rakenduse kasutamine võimaldab teil arvutusi teha automaatselt. Testitulemuste töötlemise programm on komplekti lisatud kettal või leiab selle ettevõtte kodulehelt.
Testi väljatöötamisel ja hindamisel kasutati serokonversioonipaneelide proove (BBI, Inc., Zeptometrix, USA) ja HIV-positiivseid vereseerumi (plasma) proove, millel oli kindlaksmääratud tõenäolised nakatumistingimused. Serokonversioonipaneelide abil kindlaks tehtud inimese immuunpuudulikkuse viiruse tüüp 1 (HIV-1), sealhulgas HIV-1 rühma O nakatumise kestuse õige määramise tõenäosus on seerumiproovide põhjal 100% (andmed on esitatud tabelis 2). tinglikult kindlaks määratud nakkusperioodiga isikutest (n=129) on 94% (tabelid 3, 4; osaandmed).
| tabel 2 | ||
| Serokonversioonipaneelide abil määratud HIV-positiivsete seerumi/plasma proovide testitulemused | ||
| Serokonversiooni paneel | Päevad esimesest verevõtust | Testi tulemus "DS-IFA-HIV-AT-TERM" |
| BBI PRB 914 | 31 | "vara" |
| BBI PRB 916 | 35 | "vara" |
| BBI PRB 925 | 49 | "vara" |
| BBI PRB 929 | 28 | "vara" |
| BBI PRB 930 | 10 | "vara" |
| BBI PRB 931 | 42 | "vara" |
| BBI PRB 934 | 11 | "vara" |
| BBI PRB 941 | 25 | "vara" |
| BBI PRB 942 | 14 | "vara" |
| BBI PRB 944 | 16 | "vara" |
| BBI PRB 947 | 20 | "vara" |
| BBI PRB 951 | 19 | "vara" |
| BBI PRB 952 | 21 | "vara" |
| BBI PRB 955 | 14 | "vara" |
| BBI PRB 965 | 21 | "vara" |
| BBI PRB 966 | 51 | "vara" |
| BBI PRB 968 | 35 | "vara" |
| BBI PRB 969 | 77 | "vara" |
| ZMC HIV 6243 | 33 | "vara" |
| ZMC HIV 6247 | 30 | "vara" |
| ZMC HIV 9014 | 31 | "vara" |
| ZMC HIV 9017 | 35 | "vara" |
| ZMC HIV 9018 | 33 | "vara" |
| ZMC HIV 9021 | 57 | "vara" |
| ZMC HIV 9022 | 29 | "vara" |
| ZMC HIV 9032 | 55 | "vara" |
| ZMC HIV 9077 | 104 | "vara" |
| ZMC HIV 9079 | 95 | "vara" |
| ZMC HIV 12008 | 42 | "vara" |
Test "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" hindas võimalust uurida vereseerumi (plasma) proove, mis sisaldasid erinevate alatüüpide HIV-1 antikehi, sealhulgas HIV-1 rühma O: võrdluspaneel QCS 42-28-327 - 03R (GISC) (alatüübid A, B, C) (välja arvatud HIV-2 antikehi sisaldav proov nr 24), 1. rahvusvaheline HIV-vastane võrdluspaneel (NIBSC kood: 02/210) (alatüübid A, B, C, E) (v.a HIV-2 antikehi sisaldav proov nr 5), seerumi (plasma) proovid, mis sisaldavad HIV-1 rühma O antikehi (nr 1342, K00175, K00259; BioMex). Tulemused viitavad võimalusele uurida „DS-ELISA-HIV-AT-TERM“ testis erinevatesse alatüüpidesse, sealhulgas O rühma HIV-1 kuuluvaid HIV-1 antikehi sisaldavaid vereseerumi (plasma) proove.
Reaktiivide komplekti "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" spetsiifilisus määrati doonorivere seerumite (n=352) proovide uurimisel, mis näitasid ELISA analüüsis negatiivset tulemust. Spetsiifilisus oli 100%. Lisaks testiti 255 vereseerumi proovi (ELISA analüüsis negatiivne):
■ 167 vereseerumi proovi rasedalt ja nakkushaigustega patsientidelt;
■ 128 vereseerumi proovi erinevate mittenakkushaigustega patsientidelt.
Spetsiifilisus oli 100%.
Saadud andmed näitavad väljatöötatud testimissüsteemi "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" kõrget efektiivsust inimese immuunpuudulikkuse viiruse tüüp 1 (HIV-1), sealhulgas HIV-1 rühma O, nakatumise tõenäolise ajastuse määramisel. seerum (plasma) inimese veri.
1. ELISA testisüsteem inimese seerumis (plasmas) inimese immuunpuudulikkuse viiruse tüüp 1 (HIV-1), sealhulgas HIV-1 rühma O, nakatumise tõenäolise ajastuse määramiseks, mida iseloomustab see, et see sisaldab viiruse antigeenidel põhinevat immunosorbenti inimese immuunpuudulikkuse tüüp 1 (env HIV-1 ja HIV-1 rühm O), proovi lahjenduslahus (RRS) ja tuvastamisreaktiivid, mis on konjugaadid, kromogeen/substraat.
2. Meetod inimese seerumis (plasmas) inimese immuunpuudulikkuse viiruse tüüp 1 (HIV-1), sealhulgas HIV-1 rühma O, nakatumise tõenäolise ajastuse määramiseks, mis põhineb erinevatel antikehade tasemetel, sõltuvalt nakkuse kestusest. , sealhulgas uuritava proovi eraldamine kaheks osaks ja ühe osa lahjendamine; patsiendi vereseerumi proovi mõlema (natiivse ja lahjendatud) osa uurimine, kasutades lõikes 1 kirjeldatud ensüümi immuunanalüüsi testimissüsteemi; looduslike ja lahjendatud proovide optilise tiheduse (OD) määramine ja RRS; OP RRS keskmise väärtuse arvutamine; lahjendatud proovi OD protsentuaalse languse arvutamine lahjendamata proovi suhtes vastavalt valemile
%. P R S O P
samal ajal peetakse tõenäolist nakatumise perioodi "varaseks", kui OD langus on > 40%, ja "hiliseks" - kui OD langus on 40%.
Sarnased patendid:
Leiutis käsitleb arvutimeetodit, mis kasutab biokeemilisi andmebaase uute valguühendite väljatöötamiseks. Projekteerimise teostab operaator spetsiaalselt kirjutatud PROTCOM-programmi abil, mis põhineb valgu pentafragmentide andmebaasi kasutamisel.
Leiutis käsitleb biotehnoloogia valdkonda ja käsitleb meetodit O-glükosüülitud valkude tuvastamiseks proteoomiliseks ja fosfoproteoomiliseks analüüsiks valmistatud rakuhomogenaatides.
Leiutis käsitleb biotehnoloogia ja immunoloogia valdkonda. Esitatakse monoklonaalne antikeha ja selle antigeeni siduvad osad, mis seonduvad spetsiifiliselt makrofaagide migratsiooni inhibeerimisfaktori (MIF) C-terminaalse või keskse piirkonnaga.
Leiutis käsitleb molekulaarbioloogia ja meditsiinidiagnostika valdkonda. Pakutakse välja meetod amüloidseisundis valkude tuvastamiseks, mille käigus saadakse pärmikultuuri või imetajakoe lüsaadi proov, proovile lisatakse ioonset detergenti, amüloidi kujul olevad valgud kontsentreeritakse tselluloosatsetaatmembraanile. ja need tuvastatakse aptameeride, nende konjugaatide või valkude amüloidivormi suhtes spetsiifiliste antikehade abil.
Leiutis käsitleb biotehnoloogiat, eriti ensüümi immunoanalüüse, ning on meetod TORCH-rühma infektsioonide määramiseks kasutatavate ensüümi immuunanalüüsi testsüsteemide integreeritud kontrollproovide saamiseks.
Leiutis käsitleb meditsiini, nimelt günekoloogiat, ja seda saab kasutada laktobatsillide probiootilisi tüvesid sisaldavate preparaatide individuaalseks valikuks efektiivseks intravaginaalseks raviks.
AINE: rühm leiutisi on seotud sensor-analüsaatori reaktiivi koostisega, mis on kohandatud analüüdi kontsentratsiooni määramiseks vedelas proovis, meetoditega analüüdi kontsentratsiooni määramiseks vedelas proovis ja meetodiga analüsaatori rakendamiseks. anduri reaktiivi koostis substraadile siiditrüki abil.
AINE: Leiutiste rühm on seotud veterinaarmeditsiiniga ja käsitleb adjuvantkompositsioone, mis sisaldavad Quil A või selle puhastatud fraktsiooni, kolesterooli, dimetüüldioktadetsüülammooniumbromiidi (DDA), polüakrüülhappe (CARBOPOL) ja CpG ja/või N-(2-deoksü-2) kombinatsiooni. -L-leutsüülamino-p-D-glükopüranosüül)-N-oktadetsüüldodekaanamiidatsetaat; meetod selliste adjuvantkompositsioonide valmistamiseks ja selliste adjuvantkompositsioonide kasutamine immunogeensetes ja vaktsiinikompositsioonides erinevate antigeenidega.
Käesolev leiutis käsitleb biotehnoloogia ja meditsiini valdkonda. Pakutakse välja meetod vähemalt ühe kasvajavastase ühendi suhtes resistentse kasvaja pinnal ekspresseeritud kasvajaantigeeni vastu suunatud antikeha ja selle funktsionaalsete fragmentide loomiseks, mis põhineb purustatud homogenaadi ja/või suspensiooni ja/või suspensiooni immuniseerimiseks. või sellistest kasvajatest saadud rakulüsaat. Arvesse võetakse ka leiutisekohase meetodi kasutamist monoklonaalsete antikehade ja nende funktsionaalsete fragmentide, selle meetodiga saadud monoklonaalsete antikehade, mis kodeerivad nende nukleiinhappeid, ekspressioonivektorit, peremeesrakku ja meetodit nende abil antikehade tootmiseks. , samuti hübridoomid, mis on võimelised neid antikehi sekreteerima, antikehade ja nende funktsionaalsete fragmentide kasutamine ravimite valmistamiseks, kasvajavastane koostis ja selle kasutamine ravimina. See leiutis võib leida täiendavat rakendust resistentsete kasvajate ravis. 16 n. ja 26 z.p. f-ly, 7 ill., 4 pr., 6 tab.
Leiutis käsitleb biotehnoloogia ja meditsiini valdkonda. ELISA testisüsteem inimese vereseerumis inimese immuunpuudulikkuse viiruse 1. tüüpi, sealhulgas O-rühma HIV-1 nakatumise tõenäolise ajastuse määramiseks. Testimissüsteem sisaldab inimese immuunpuudulikkuse viiruse 1. tüüpi antigeenidel põhinevat immunosorbenti, lahust proovide lahjendamiseks ja reaktiivide tuvastamiseks. Leiutis käsitleb ka meetodit inimese vereseerumis 1. tüüpi inimese immuunpuudulikkuse viirusega, kaasa arvatud rühm O HIV-1, nakatumise tõenäolise ajastuse määramiseks, uurides patsiendi vereseerumit, kasutades kirjeldatud ensüümi immuunanalüüsi süsteemi. MÕJU: leiutis võimaldab kiiresti ja lihtsalt määrata HIV-nakkuse tõenäolise ajastuse. 2 n.p. f-ly, 4 tab., 2 pr.
A.P. OBRYADINA, T.I. ULANOVA
LLC "Teadus- ja tootmisühing "Diagnostikasüsteemid",
Nižni Novgorod
ENSÜÜMI IMMUUNTESTISÜSTEEMID "DS-ELISA-HBeAg" ja "DS-ELISA-anti-HBe" ÄGEDA JA KROONILISE B-HEPATIIT B-HEPATIIT KONKREETSEKS DIAGNOOSIKS NING TULEMUSTE ENNUSTAMISEKS
B-hepatiit on viiruslik nakkushaigus, mida iseloomustab raske
põletikuline maksahaigus. Umbes 1% surmajuhtumitest leiab aset aastal
haiguse äge periood, 4-10% juhtudest muutub krooniliseks
protsessi võimaliku moodustumise järgneva maksatsirroosi ja esmane
hepatokartsinoomid.
Vaatamata ägeda B-hepatiidi esinemissageduse langustrendile on jätkuvalt kujunemas epidemioloogiliselt ohtlik patsientide rühm, kellel diagnoositakse krooniline viirushepatiit esmakordselt, ning rühm haigusetekitaja kandjaid. Ebasoodne prognoos on endiselt seotud B-hepatiidi kõrge esinemissagedusega nii fertiilses eas elanikkonna kui ka noorukite seas.
Seetõttu on B-hepatiidi ravi, ennetamise ja diagnoosimise küsimused praegu eriti aktuaalsed. Praegu kasutatakse selle nakkuse markerite tuvastamiseks laialdaselt ensüümi immuunanalüüsi meetodeid. HBV kõige olulisemad seroloogilised markerid on e-antigeen (HBeAg) ja e-antigeeni vastased antikehad (anti-HBe). HBeAg on seotud kõrge vereinfektsiooniga, mis näitab B-hepatiidi viiruse (HBV) aktiivset replikatsiooni. On kindlaks tehtud, et kõrged HBeAg tiitrid vastavad kõrgele DNA polümeraasi aktiivsusele ja neid kombineeritakse alati täielike Dane osakeste tuvastamisega. Kui HBeAg sisaldav seerum satub terve inimese verre, on nakatumise oht mitu suurusjärku suurem kui pärast serokonversiooni.
Ägeda B-hepatiidi korral tuvastatakse HBeAg veres nakkusprotsessi varases staadiumis juba haiguse esimeste kliiniliste ilmingute korral, nädal hiljem HBsAg ilmnemisest. Tsüklilise kulgemisega ägedat B-hepatiiti (AHB) iseloomustab HBeAg lühiajaline tsirkulatsioon. Varsti, ikteriaalse perioodi 2-3 nädala jooksul, ilmub anti-HBe, mis võimaldab ennustada haiguse soodsat tulemust.
Anti-HBe ringleb veres 2-5 aastat, harvem mitu kuud.
HBeAg-antiHBe serokonversiooni algus tähistab aktiivsuse järsku langust
nakkusprotsess. HBeAg tuvastamine patsientide veres pärast 2-kuulist haigust näitab patoloogilise protsessi kroonilisust. Sel juhul võib anti-HBe moodustuda mitu aastat pärast HBcAg-vastaste antikehade ilmnemist või seda ei tuvastata üldse.
Anti-HBe ilmnemisel võib olla ebasoodne prognostiline väärtus
äge periood HBV rasketes vormides, mis vastab mutatsioonile pre-core tsoonis
HBV "e-" tüve moodustumine.
eesmärk see töö oli väga tundliku ja spetsiifilise väljatöötamine
ELISA testisüsteemid HBeAg ja anti-HBe tuvastamiseks ning nende põhiomaduste hindamiseks.
Materjalid ja meetodid.
1. Ensüüm-immunoanalüüsi testsüsteem "DS-ELISA-HBeAg". Kehtiv testi algus
on polüklonaalsed kitse antikehad rekombinantse HBeAg vastu, mida toodab NPO Diagnostic Systems, Nižni Novgorod, adsorbeeritud tahkele faasile, ja konjugaat, mis on polüklonaalsed kitse antikehad rekombinantse HBeAg vastu, märgistatud mädarõika peroksüdaasiga, toodetud NPO Diagnostic Systemv Nizhny Novgorod, Nizhny Novgorod. Analüüsiskeem on üheetapiline "võileib".Kokku reaktsiooniaeg on 1,5 tundi. Seerumiproovi analüüsitakse lahjendamata kujul.
2. ELISA testisüsteem "DS-ELISA-anti-HBe". Testi aluseks on
rekombinantne HBeAg (AHBV 102), mida toodab NPO Diagnostic Systems,
Nižni Novgorod, adsorbeeritud tahkele faasile ja mädarõika peroksüdaasiga anti-IgG konjugaat, toodetud firmas Sorbent Service, Moskva. Reaktsioon toimub kahes etapis. Testseerum lisatakse immobiliseeritud antigeenile lahjenduses 1/10 ning pärast inkubeerimist ja seondumata komponentide eemaldamist tuvastatakse spetsiifilised immunokompleksid, kasutades mädarõika peroksidaasiga märgistatud hiire monoklonaalseid antikehi inimese IgG vastu.
3. Väljatöötatud testsüsteemide hindamiseks kasutati 2178 seerumiproovi
veri. Neist 480 proovi olid tervetelt doonoritelt. 1680 proovi esindavad
on vereseerumi proovid, mis sisaldavad erinevaid B-hepatiidi viiruse markereid.
Aja jooksul saadi 18 proovi ägeda viirushepatiidi B kliinilise diagnoosiga patsientidelt. Varem testiti kõiki proove HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc, kasutades Nižni Novgorodis NPO Diagnostic Systems toodetud testisüsteeme: "ELISA-HBsAg / m", "DS-ELISA-HBeAg", " DS-ELISA-anti-HBe", "ELISA-anti-HBc".
4. Töötatud testsüsteemide võrdlev hindamine viidi läbi kasutades
kaubanduslik ravim "Monolisa HBe", tootja BIO-RAD, Prantsusmaa;
Tulemused ja arutlus. NPO "Diagnostic Systems" on välja töötanud 2 uut diagnostikakomplekti: "DS-ELISA-HBeAg" ja "DS-ELISA-anti-HBe". Testisüsteem "DS-ELISA-HBeAg" on loodud B-hepatiidi viiruse e-antigeeni tuvastamiseks inimvere seerumis (plasmas) ensüümi immuunanalüüsi abil ja seda saab kasutada spetsiifiliseks diagnoosimiseks, nakkusprotsessi aktiivsuse määramiseks. , ennustades B-hepatiidi raskust ja tulemust.
Testisüsteem "DS-ELISA-anti-HBe" on loodud B-hepatiidi viiruse e-antigeeni vastaste IgG antikehade tuvastamiseks inimese seerumis (plasmas) ja seda saab
kasutatakse nakkusprotsessi käigu ennustamiseks ja B-hepatiidi ravi jälgimiseks.
Uute testide spetsiifilisuse uurimiseks hinnati jaotust
sisaldavate ja mittesisaldavate vereseerumi proovide optiline tihedus (OD).
HBeAg või anti-HBe. Kasutati tervete doonorite vereseerumi proove ja B-hepatiidi viiruse erinevate markerite jaoks valitud vereseerumi proove.
vereülekandejaamad. Uuringu tulemused näitasid kahe populatsiooni olulist eraldumist. HBeAg-d mittesisaldavate seerumiproovide OD väärtused jäid vahemikku 0,011–0,111 ja HBeAg-d sisaldavate seerumiproovide põhipiik jäi vahemikku 2,186–3,186 (joonis 1a).
Joonis 1a. Sisaldavate ja mittesisaldavate seerumiproovide OD jaotusHBeAgtestimissüsteemis "DS-ELISA-HBeAg»
Piik, mis vastab madala OD-ga (0,3–0,6) seerumite rühmale, on tõenäoliselt seerumiproovid, mis on võetud nakkusprotsessi varases staadiumis.
Juba inkubatsiooniperioodil registreeritakse regulaarselt HBsAg ja HBeAg patsientide veres, mis kinnitab nende potentsiaalset epidemioloogilist ohtu.
Anti-HBe-d mittesisaldavate seerumiproovide optilise tiheduse vahemik
oli vahemikus 0, 002 kuni 0, 122 ja anti-HBe sisaldavate seerumiproovide peamine OD oli vahemikus 2, 431 kuni 3, 231 (joonis 1b).
Riis. 1b. Anti-H-d sisaldavate ja mittesisaldavate seerumiproovide OD jaotusOle, testisüsteemis "DS-ELISA-anti-HBeAg»
Uuriti anti-HBe positiivsete proovide OD jaotuse tunnuseid.
seerum, mis sisaldab ( n=78) ja ei sisalda HBsAg ( n=56). 
Riis. 2a. HBe-positiivseid seerumiproove, mis sisaldavadHBsAgtestimissüsteemis "DS-ELISA-anti-HBe».
Joonis 2b. OP anti-HBe-positiivsed seerumiproovid, mis ei sisalda HBsAgkatsesüsteemis "DS-ELISA-anti-HBe».
87% anti-HBe-positiivsete seerumiproovide, mis ei sisaldanud HBsAg, optiline tihedus oli vahemikus 0,41 kuni 0,81 (joonis 2b). Samal ajal oli ainult 14% HBsAg sisaldavatest anti-HBe-positiivsetest seerumiproovidest OD selles vahemikus (joonis 2a). On teada, et HBsAg-le negatiivse reaktsioonivõimega hilise taastumise faasis väheneb järk-järgult HBeAg-vastaste antikehade tiitrid (joonis 2b). Seetõttu on võimalik, et anti-HBe-positiivsete proovide domineeriv kontsentratsioon vastas OD-le alla 0, 8.
Saadud andmed näitavad positiivsete ja eraldamise usaldusväärsust
negatiivsed vereseerumi proovid olenemata haiguse staadiumist. Testsüsteemide "DS-ELISA-HBeAg" ja "DS-ELISA-antiHBe" tundlikkuse ja spetsiifilisuse uuring viidi läbi võrreldes testiga "Monolisa HBe" ("BIORAD", Prantsusmaa) (tabel 1).
Tabel 1
Tundlikkuse ja spetsiifilisuse võrdlevad omadused
testimissüsteemid DS-ELISA-HBeAg ja DS-ELISA-antiHB
| Indeks | HBeAg määratlus | Anti-HBe määratlus |
||
| MTÜ "DS", DS-ELISA-HBeAg | BIO-RAD, "Monolisa HBe" | MTÜ "DS", DS-ELISA-antiHBe | BIO-RAD, |
|
| Kogus uurinud proovid | 67 | 67 | 32 | 32 |
| Ilmnes positiivne proovid | 47 | 47 | 16 | 16 |
| Ilmnes negatiivne proovid | 20 | 20 | 16 | 16 |
Tabelis 1 näidatud andmed näitavad tulemuste 100% vastavust.
On teada, et HBeAg ja anti-HBe kombineeritud näidustusel, eriti nende kvantitatiivsel hindamisel, on täiendav prognostiline väärtus. Anti-HBe tiitri kiire tõus iseloomustab aktiivset humoraalset immuunvastust ja praktiliselt välistab kroonilisuse ohu. Analüüsisime HBeAg/anti-HBe sisalduse muutust ägeda viirushepatiidi B kliinilise diagnoosiga patsientide vereseerumi proovides (tabel 2).
tabel 2
HBeAg/anti-HBe serokonversiooni dünaamika ägeda B-hepatiidiga patsientidel
| Uuritud haige | Vereproovi võtmise päev* | HBeAg | anti-HWe Ref./Opt. | Anti-HBc | anti- HBc IgM |
|
| 1 | 1,4+ | 2,1+ | + | + | + |
|
| 12 | 0,5- | 1,0+ | + | + | + |
|
| 21 | 0,3- | 1,3+ | + | + | + |
|
| 1 | 1,2+ | 1,2+ | + | + | + |
|
| 5 | 0,4- | 1,0+ | + | + | + |
|
| 13 | 0,2- | 2,5+ | + | + | + |
|
| 1 | 1,2+ | 0,6- | + | + | + |
|
| 21 | 0,2- | 4,6+ | + | + | + |
|
| 30 | 0,2- | 9,7+ | + | + | + |
|
| 1 | 2,1+ | 0,5- | + | + | + |
|
| 8 | 0,6- | 1,1+ | + | + | + |
|
| 28 | 0,3- | 2,8+ | + | + | + |
|
| 1 | 0,7- | 2,2+ | + | + | + |
|
| 8 | 0,3- | 2,2+ | + | + | + |
|
| 15 | 0,3- | 2,8+ | + | + | + |
|
| 38 | 0,2- | 3,0+ | + | + | + |
|
| 6 | 1 | 1,1+ | 4,4+ | + | + | + |
| 14 | 0,5- | 3,8+ | + | + | + |
* alates haiglasse sattumisest
Kõiki seerumiproove testiti seroloogiliste markerite olemasolu suhtes.
OGV: HBsAg, anti-HBc, anti-HBc IgM. Vaatlusperiood varieerus 13-38 päevani. Patsientidel nr 1, nr 2 ja nr 6 tuvastati anti-HBe juba HBeAg tiitri languse taustal. Patsientidel nr 3 ja nr 4 ilmnes anti-HBe pärast HBeAg kadumist vereseerumist vastavalt 21. ja 8. päeval. Patsiendi nr 5 vereseerumis HBeAg tuvastamise analüüs haiglasse sattumisel näitas negatiivset tulemust. Samal ajal registreeriti üleminek anti-HBe-le juba uuringu esimesel päeval.
Kõigil katsealustel ilmnes suundumus HBeAg-vastaste antikehade tiitri tõusu suunas
vereseerum, mis võimaldab ennustada kliinilise soodsa dünaamikat
OGV ilmingud ja kiire taastumine.
Uute testsüsteemide uurimine näitas nende kõrget diagnostilist usaldusväärsust. DS-ELISA-HBeAg" ja "DS-ELISA-antiHBe" võrdlemise tulemused näitasid 100% vastavust "Monolisa HBe" testiga.
B-hepatiidiga patsientide seerumiproovide uurimisel dünaamikas, testides
kinnitas kõrget tundlikkust ja spetsiifilisust.
Uuritavate proovide ja konjugaadi lühike inkubatsiooniaeg (1 h) võimaldab võimalikult lühikese ajaga määrata õige taktika ravimeetmete läbiviimiseks. Loodud testisüsteeme on lihtne seadistada, ökonoomne (HBeAg määramiseks kulub 50 µl seerumit ja anti-HBe määramiseks 10 µl seerumit). Testide kvaliteetsed omadused võimaldavad neid edukalt kasutada nakkusprotsessi kulgemise prognoosimisel ja käimasoleva B-hepatiidi ravi jälgimisel.
KIRJANDUS
1.Mayer K.P. Hepatiit ja hepatiidi tagajärjed / K.P. Mayer. – M., GEOTAR, Meditsiin, 1999.- C.720
2.Onishchenko G.G. Viirusliku hepatiidi levik kui oht riigi julgeolekule / G.G. Onishchenko, L.A. Dementieva // Mikrobioloogia ajakiri. –2003.-Nr 4.- Lk.93-99.
3.Sorinson S.N. Viiruslik hepatiit / S.N.Sorinson. - Peterburi, Teza, 1997.- 306 lk.
4. Baumeister M. B-hepatiidi viiruse e antigeenispetsiifilised epitoobid ja kaubanduslike anti-HBe immunoanalüüside piirangud / M. Baumeister // Journal of Medical Virology.- 2000.-N 60.- P.256-263.
5.Kane M. B-hepatiidi nakkuse tõrje globaalne programm / M. Kane// Vaktsiin. - 1995.-N131(lisa 1).- R.47-6. Shunichi laupumbes. B-hepatiidi viiruse tüved mutatsioonidega tuumpromootoris fulminantse hepatiidiga patsientidel / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Annals of Internal Medicine. - 1995.- N122.- R.241-248.
7. Ou J.-H. B-hepatiidi viiruse e antigeeni molekulaarbioloogia./ J.-H.Ou // Journal of Gastroenterology and Hepatology. - 1997.- nr 12 (lisa 1) - R. 178-187.
8.Tiollais P. B-hepatiidi viirus. / P.Tiollais, C.Pourcel, A.Dejean // Loodus. - 1985. - Lk.317, 489-495
Avaldatud: Zh. "Kliiniline laboridiagnostika" - 2005.-№6-S.-34-37
Vereproovide uurimine HIV-nakkuse tuvastamiseks ELISA abil on üks varasemaid ja usaldusväärsemaid diagnostikameetodeid. Ensüüm-immunoanalüüs on üks väheseid uuringuid koos PCR-iga, mis suure tõenäosusega kinnitab või lükkab ümber nii kohutava diagnoosi nagu HIV-nakkus või AIDS. Alates esimeste immuunpuudulikkuse viirusega nakatumise juhtude avastamisest Nõukogude Liidus ja see on 1983. Ravimit, mis selle nakkuse täielikult raviks, ega ka selle vastu vaktsiini pole leiutatud, kuid see protsess on aktiivses väljatöötamises. Vahepeal võimaldab ainult HIV-nakkuse varajane diagnoosimine patoloogilist protsessi kontrolli all hoida.
Infoekskursioon HIV-nakkuse kohta
Inimese immuunpuudulikkuse viirus on retroviirus, mis põhjustab haiguse aeglast kulgu. Immuunpuudulikkuse viirus, tungides kehasse, mõjutab peamiselt lümfoidkoe. Terve immuunsus toodab T-lümfotsüüte, et ära tunda äsja saabunud viirustekitajat. Seejärel andke infot antikehadele, milliste märkide järgi immuunpuudulikkuse viirus ära tunda ja hävitada. Immuunpuudulikkuse viiruse "äratundmise" protsess toimub CD4 retseptorvalkude abil. Kuid just selles etapis täheldatakse midagi kummalist, midagi, mis pole aastaid võimaldanud meil 20. sajandi katkust jagu saada.
CD4 immuunrakk puutub võõrkeha äratundmiseks kokku immuunpuudulikkuse viirusega. Sel hetkel kinnitub immuunpuudulikkuse viirus lümfotsüütide membraanile, ühineb retseptori kestaga ja viib immuunrakku kapsli oma geneetilise informatsiooni ja spetsiifiliste viirusvalkudega. Ja immuunpuudulikkuse viiruse arvutusse saadetud rakk nakatub nüüdsest ise. Kuid kõik juhtub kahjuks mitte ühe rakuga, vaid väga suures mahus. Inimese immuunsüsteem loob vastusena juba "endistele" ja nüüdseks nakatunud rakkudele uusi antikehi. Kuid immuunpuudulikkuse viirused püüavad vastavalt varem kirjeldatud skeemile ikka ja jälle kaitserakke.
Seega satub inimese immuunsus nõiaringi. Ainus viis keha aidata on läbi viia väga aktiivne retroviirusevastane infektsioon (HAART). Samuti minge üle täiesti tervislikule eluviisile ja toitumisele, mis vabastab tarbetust tööst suured immuunsusressursid. Teadlased üle maailma on ühendanud jõud ja viivad pidevalt läbi uuringuid, otsides tõhusat ravi HIV-nakkuse vastu.
Mitte nii kaua aega tagasi viidi läbi katse CCR5 valguga, mis tagab teatud osa inimeste organismi kaasasündinud immuunsuse HIV-nakkuse vastu. Teadlased on allutanud inimvabatahtlike vereaine geeniteraapiale, et viia CCR5 T-abistajarakkudesse. Kõigil patsientidel põhjustas see retroviiruse DNA arvu tohutu vähenemise. Ja ühel patsiendil elimineeriti immuunpuudulikkuse viirus selle meetodiga täielikult. Selle eksperimendi põhjal võib siiski vaid ühel juhul oletada edukat võitu 20. sajandi kohutava katku üle.
Alates 2016. aastast on see tegevus oluliselt edasi liikunud. Immuunpuudulikkuse viiruse üheksakümneprotsendilise hävitamise kohta on saadud vapustavaid tulemusi lihaskoe eritatavate antikehade ründamise abil, jättes mööda kinnivõetud immuunsusest. Selleks siirdati eksperimentaalsete elusolendite lihaskoesse spetsiaalne geen, mis tootis HIV-nakkuse hävitamiseks samu tapjarakke. Kuid seda meetodit pole inimestel veel kasutatud, kuigi see on plaanis lähiaastatel.
Pealegi pole mõtet meelt kaotada. Ja parem on tuvastada immuunpuudulikkuse viirus võimalikult varakult, mida saab teha ELISA abil, kui oli nakatumisoht. Ja kui diagnoos kinnitatakse, säilitage oma immuunsus HAART-i abil, kuni HIV-nakkuse uus ravi on avalikustatud.
HIV-nakkuse diagnoosimine
HIV-nakkuse ELISA meetod on suunatud immuunpuudulikkuse viiruse antikehade tuvastamisele inimese vereproovist. Kehasse sattudes ei hakka retroviirused, sealhulgas HIV-nakkus, kohe aktiivselt haarama CD4 immuunrakke (T-lümfotsüüte). Kuid te ei tohiks oodata, kuni agressiivsed ained alustavad kehas surmavat tegevust. Pole saladus, et mis tahes haiguse korral ja HIV-nakkus pole erand, mida varem ravi alustatakse, seda tõhusam on ravi.
Kui rääkida inimese immuunpuudulikkuse viirusest, siis täieliku paranemise juhtumeid pole ametlikult registreeritud. Kuid see ei tähenda sugugi, et peate alla andma ja laskma haigusel kulgeda. HIV-nakkusega inimesed elavad kuni 75–80 aastat, eeldusel, et nad avastatakse algstaadiumis ja on pidevas säilitusravis.
HIV-nakkuse diagnoosimiseks mõeldud ensüümimmuunanalüüsi meetodi usaldusväärsus on umbes 97–99%. Kuid just see väike osa 1–3% võib anda ELISA abil HIV-nakkuse diagnoosimisel valepositiivse või valenegatiivse tulemuse. Nendel eesmärkidel kasutatakse ensüümi immuunanalüüsi näidustuste lõplikuks kinnitamiseks või ümberlükkamiseks analüüsi, mida nimetatakse immunoblotiks (IB).
Mis on HIV-nakkuse ELISA ja IB meetodid
Neljanda põlvkonna HIV-nakkuse ensüümi immuunanalüüs ei ole suunatud mitte ainult patogeensete rakkude otsimisele ja tuvastamisele, vaid ka nende arvu määramisele. Seetõttu ühendab üks ensüümi immunoanalüüs nii kvalitatiivse kui ka kvantitatiivse testimise. 4. põlvkonna ELISA meetod HIV-nakkuse tuvastamiseks kuue nädala jooksul alates eeldatava nakatumise hetkest näitab tulemuste 100% kõrget usaldusväärsust.
Ensüümi immuunanalüüs põhineb spetsiifiliste antikehade ja nendega seotud antigeenide koostoimel. Tänu spetsiaalsele ensüümile moodustub kombinatsioon “antigeen-antikeha”. Selle reaktsiooni läbiviimiseks HIV-nakkuse immunoglobuliinide tuvastamiseks asetatakse vereproov 96 süvendiga polüstüreenpaneelile, milles rekombinantsed valgud on tahkel kujul (sorbeeritud). Vereseerumiga anumast leitud antigeenid või antikehad tunnevad ära neile teadaoleva objekti ja moodustavad sellega ühendi “AT-AG”. Immuunpuudulikkuse 1. ja 2. tüüpi viiruste vastaste antikehade määramiseks kasutatakse ka HIV AG-AT DS IFF testi.
ELISA meetodi eelised 4. põlvkonna HIV-nakkuse korral:
- Kõrge töökindlus, üle 96%. Valed tulemused on sagedamini põhjustatud mitte analüüsist endast, vaid ebaõigest ettevalmistusest või hiljutisest hingamisteede haigusest.
- Immunoglobuliinide olemasolu ja arvukuse määramine.
- Võimalus jälgida HIV-ravi tulemusi.
- HIV-testi tulemuste saamise kiirus, mis on mitu tundi, kui seda tehakse diagnostikakeskuses.
- HIV-nakkuse nelja analüüs, mille immunoensümaatiline reaktiivsus on oluliselt kõrgem kui eelkäijatel, on immuunpuudulikkuse viiruse seroloogilise akna ajal informatiivne.
Immunoblotanalüüs on sõeluuring ja seda tehakse antigeeni tüübi määramiseks. IB-sõeluuringut kasutatakse HIV-nakkuse kontrolltestina 5–7 nädalat pärast ELISA-d. IB-meetod põhineb elektroforeesi kasutamisel immuunpuudulikkuse viiruste antigeenide eraldamiseks. Antigeenide eraldamise protsess võimaldab tuvastada spetsiifilisi immunoglobuliine iga konkreetse HIV-nakkuse antigeeni jaoks.
Immunoblotimist kasutatakse juhul, kui HIV-nakkuse ensüümi immuunanalüüsi test näitab kaks korda järjest valepositiivset või valenegatiivset tulemust. Kahtlus võib tekkida HIV-nakkuse iseloomulike sümptomite puudumisel või vastupidi. Kuigi ka siin võib esineda erinevaid variatsioone.
HIV-nakkuse ELISA tulemuste tõlgendamine
Juhul, kui ELISA pluss kinnitatakse IB-sõeluuringuga positiivseks, pole kahtlust, et patsiendi organismis on immuunpuudulikkuse viirus. Kuid kui näiteks IFF on HIV-i suhtes positiivne ja immunoblot on negatiivne, järeldavad nad, et nakkus on "miinus", see tähendab, et see puudub.
Vaid sellises olukorras saadetakse patsient ikkagi täiendavale uuringule, et immuunpuudulikkuse viirus kindlasti välistada.
Ja 4. põlvkonna "miinus" HIV-i ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi ja positiivse immunoblotanalüüsiga on võimalik, et kehas on veel üks infektsioon. Võimalik, et inimesel on mingi autoimmuunhaigus, onkoloogiline protsess, mõnikord annab naha või liigeste psoriaas nii ELISA kui ka IB valepositiivsed tulemused.
Teine variant, kui HIV-nakkuse ensüümimmuunanalüüs näitab “miinus” tulemust ja immunoblot ka “miinus” väärtusega, võib siinkohal vaid rõõmustada immuunpuudulikkuse viiruse puudumise pärast. Aga kui esineb spetsiifilisi HIV-nakkusele omaseid tunnuseid või kui inimene on HIV-positiivse patsiendiga tihedas kontaktis. Seejärel on vaja läbi viia ka täiendav diagnostika, näiteks polümeraasi ahelreaktsioon (PCR). Lisaks soovitatakse kahtlaste "miinus" või "pluss" näitajate korral patsiendil uuesti verd võtta 4 ja eelistatavalt 6 kuu pärast.
T-lümfotsüütide arvu norm ja kõrvalekalle HIV-nakkuse korral:
- T-rakkude norm on 1000 kuni 2900 µl.
- AIDS varakult 500 kuni 200 µl.
- AIDS hiline vähem kui 200 µl.
Haigust on lihtsam ennetada kui ravida – see kõik on üldtuntud tarkus. Alates vaba moraali levikust ühiskonnas on tekkinud suur hulk erinevaid suguhaigusi. HIV-nakkused ja AIDS on endiselt klassifitseeritud ravimatuteks haigusteks. Nakkusviis on peamiselt seksuaalne ja vere kaudu. Ühe haiguse eest on võimatu sada protsenti kaitsta. On palju ettenägematuid olukordi, isegi inimestele, kes juhivad moraalset ja puhast elustiili. Suurenenud HIV-i ja teiste ohtlike infektsioonide nakatumise riski olukorras on verediagnostika hindamatu väärtus.
Kokkupuutel