פוליאקובה אולגה ניקולייבנה
שיפור האבחון המוקדם
שחפת של בעלי חיים
06.02.02 - מיקרוביולוגיה וטרינרית, וירולוגיה, אפיזוטולוגיה,
מיקולוגיה עם מיקוטוקסיקולוגיה ואימונולוגיה
A V T O R E F E R A T
מועמד למדעי הווטרינריה
נובוצ'רקסק - 2011
העבודה בוצעה במוסד המדעי הממלכתי
מחקר וטרינרי אזור צפון קווקז
המכון של האקדמיה הרוסית למדעי החקלאות
יועץ מדעי:דוקטור למדעי הווטרינריה, פרופסור
דובובוי בוריס לברנטיביץ'
יריבים רשמיים:דוקטור למדעי הווטרינריה Popov M.A.
דוקטור למדעי הווטרינריה,
פרופסור חבר חבוזוב I.P.
ארגון מוביל: GNU אזורי אזורי מדעי הכספי
מכון וטרינרי מחקר
האקדמיה החקלאית הרוסית
בפגישה של מועצת הדוקטורט D 006.106.01 במוסד המדעי הממלכתי בצפון קווקז מחקר אזורי מכון וטרינרי של האקדמיה הרוסית למדעי החקלאות.
346421, אזור רוסטוב, נובוצ'רקסק, הכביש המהיר רוסטוב, 0
ניתן למצוא את עבודת הגמר בספריית המוסד המדעי הממלכתי במכון וטרינרי למחקר אזורי צפון קווקז של האקדמיה הרוסית לחקלאות - 346421, אזור רוסטוב, נובוצ'רקסק, כביש מהיר רוסטוב, 0.
מזכיר מדעי
מועצת עבודת גמר, ד.ב.ס. א.מ. ארמקוב
תיאור כללי של העבודה
דחיפות הבעיה.המאבק בשחפת בבעלי חיים הוא בעיה מרכזית. לחיסול שחפת בעלי חיים יש לא רק משמעות וטרינרית, אלא גם כלכלית ואפידמיולוגית.
החשוב ביותר במערכת האמצעים נגד שחפת הוא גילוי בזמן של בעלי חיים נגועים והרחקתם מהעדר כמקור לגורם הסיבתי של שחפת.
בהקשר זה, בעת ביצוע אבחנה של שחפת, חשוב במיוחד להבדיל בין תגובות ספציפיות ולא ספציפיות למתן תוך עורי של טוברקולין.
אחת המשימות החשובות ביותר למניעת שחפת בחיות משק היא שיפור האבחון, שכן השיטות הקיימות אינן מספקות זיהוי של בעלי חיים חולים בשלב הראשוני של המחלה.
בעיית שיפור האבחון של שחפת בבעלי חיים מכוונת למצוא שיטה לאבחון פרה-קליני מוקדם של המחלה ולפתור מספר בעיות הקשורות לאבחנה מבדלת של שחפת, תגובות טוברקולין הנגרמות על ידי רגישות של הגוף על ידי מיקובקטריות לא טיפוסיות ומיני עופות. . לכן, יש צורך בשיטת אבחון, אשר בזמן הקצר ביותר האפשרי תסייע לזהות בעל חיים נגוע וחולה ולמנוע שחיטה בלתי מוצדקת ובלתי סבירה של בעלי חיים יצרניים במיוחד.
מטרת המחקר -לפתח שיטה לאבחון מוקדם של שחפת בבעלי חיים ובידול של תגובות ספציפיות ולא ספציפיות למתן טוברקולין תוך עורי.
השגת המטרה המיועדת בוצעה על ידי פתרון המשימות הבאות:
1) לקבוע את מינון העבודה של האלרגן;
2) לחקור את הספציפיות והפעילות של התגובה של תמוגה לויקוציטים (RLL) במבחנה עם אלרגנים: PPD-tuberculin ליונקים, PPD-tuberculin לציפורים ו-CAM;
3) לחקור את האפשרות של שימוש בתגובת תזוזה של לויקוציטים (RSLL) כדי להבדיל בין תגובות ספציפיות ולא ספציפיות בפרות המגיבות באופן חיובי לטוברקולין.
חידוש מדעי.פותחה שיטה לאבחון מוקדם של שחפת, המאפשרת לזהות בעל חיים נגוע תוך יום לאחר ההדבקה ולהבדיל בין תגובות ספציפיות לשחפת לבין לא ספציפיות. השימוש בתגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים עם PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM אפשרו לזהות רגישות לא ספציפית של הגוף הנגרמת על ידי מיקובקטריות לא טיפוסיות.
החידוש המדעי מאושר על ידי הפטנט על המצאה מס' 2366454 "שיטה לאבחון מוקדם של שחפת בבעלי חיים".
ההוראות העיקריות להגנה:
1. אבחון מוקדם של שחפת בבעלי חיים.
2. דיפרנציאציה של תגובות טוברקולין.
אישור עבודה.החומרים העיקריים של עבודת הגמר דווחו ונדונו בכנסים המדעיים והמעשיים השנתיים של הממסד החינוכי של המדינה הפדרלית להשכלה מקצועית גבוהה "Don State Agrarian University", המכון הווטרינרי למחקר אזורי צפון קווקז של האקדמיה הרוסית למדעי החקלאות בשנת 2006 -2010. ובכנסים מדעיים ומעשיים כלל-רוסים ובינלאומיים. מחצ'קלה, קאזאן, נובוצ'רקסק.
יישום תוצאות המחקר.תוצאות המחקר משמשות בהרצאות והעברת שיעורים מעבדתיים ומעשיים באפיזואטולוגיה במוסד החינוכי של המדינה הפדרלית של השכלה מקצועית גבוהה "אוניברסיטת מדינת אגרארית של דון", נבדק במעבדה הווטרינרית האזורית, Novocherkassk SBBZh, Rassvet SPK, Matveyevo- מחוז קורגן, Yuzhnoye OJSC, מחוז סלסקי ו-SPK "Sovetinsky", מחוז Neklinovsky, אזור רוסטוב.
פרסומים בנושא.בהתבסס על חומרי התזה, פורסמו 15 מאמרים מדעיים, שלושה מהם בפרסום בעל ביקורת עמיתים שהומלץ על ידי ועדת האישורים הגבוהים של הפדרציה הרוסית ופטנט של הפדרציה הרוסית לשיטת אבחון.
משמעות מעשית.החומר המדעי המתקבל מאפשר לזהות בעל חיים נגוע ביום הראשון שלאחר ההדבקה ולהבחין בין תגובות טוברקולין חיוביות לא ספציפיות הנגרמות על ידי מיקובקטריות לא טיפוסיות ועופות לבין אלו ספציפיות, שיש לה חשיבות מעשית רבה לשימור בעלי חיים עם לא. תגובות טוברקולין ספציפיות. RSLL מומלץ לאבחון רטרוספקטיבי של שחפת ואבחון דיפרנציאלי של תגובות ספציפיות ולא ספציפיות להחדרת PPD-טוברקולין ליונקים עם בדיקת שחפת תוך עורית.
מבנה והיקף העבודה.עבודת הגמר מוגשת על 153 עמודים של טקסט מחשב, מורכבת ממבוא, סקירת ספרות, מחקר משלו ודיונו בהם, מסקנות, הצעות מעשיות ורשימת הפניות. עבודת הגמר מכילה 28 טבלאות. רשימת הפניות כוללת 264 מקורות, בהם 58 מחברים זרים.
2. מחקר משלו
חומרים ושיטות מחקר.העבודה בוצעה במחלקה לאפיזוטולוגיה של הממסד החינוכי של המדינה הפדרלית להשכלה מקצועית גבוהה "האוניברסיטה האגררית של מדינת דון", בחווה החינוכית "Donskoye" (DonGAU, כפר פרסיאנובסקי), במעבדה של המוסד המדעי הממלכתי SKZNIVI , באזור התעשייה של העיר נובוצ'רקסק, בחוות מטווייבו-קורגנסקי, מחוזות נקלינובסקי וסלסקי של מחוז רוסטוב.
בעלי חיים (בקר, חזירים, כלבים וארנבות) נבחרו לניסויים, שבהם הפרמטרים הפיזיולוגיים וההמטולוגיים היו בטווח התקין. נוצרו חמש ניסויים וקבוצת ביקורת אחת של בעלי חיים. קבוצת הביקורת נוצרה לצורך השוואה עם קבוצת הניסוי כדי להוכיח את הספציפיות של התגובה. כל קבוצת ניסוי וביקורת כללה חמש חיות.
במהלך העבודה, נחקרו פרמטרים המטולוגיים של דם טרי (מספר לויקוציטים) והתגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים של בקר, חזירים, כלבים וארנבות.
בעלי החיים של קבוצות הניסוי חולקו לחמש קבוצות בהתאם למינון החיסון שניתן על מנת לקבוע את עוצמת התגובה. לאחר החיות של קבוצות הניסוי של מיקובקטריות חיות של חיסון BCG הוזרקו, ובעלי החיים של קבוצות הביקורת של החיסון נגד ברוצלוזיס יח' 82 נלקחו דם. דם מבעלי חיים בכל דגימה חולק לדגימות ניסוי ובקרה. דגימות בקרה - דם בתוספת תמיסת נתרן ציטראט 3.8% ותמיסת מלח פיזיולוגית, דגימות ניסוי - דם בתוספת תמיסה של 3.8% נתרן ציטראט עם PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM.
בדגימות הניסוי והביקורת, נספר מספר הלויקוציטים על מנת לקבוע לאחר מכן את אחוז תמוגת הלויקוציטים לפי הנוסחה.
בחירת מינון העבודה של האלרגנים בוצעה בדם של בעלי חיים שבהם הפרמטרים הפיזיולוגיים וההמטולוגיים היו בטווח התקין, תוך בחירת מינון שבו אחוז התמוגגות של לויקוציטים לא יעלה על 10. החיפוש המשוער אחר האלרגן היה במינון של 0.05 עד 0.15 מ"ל.
כדי להגדיר את התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים, נעשה שימוש בשיטה הקיימת לקביעת מספר הלויקוציטים בדם. מספר הלויקוציטים בדגימות הניסוי והביקורת נספר, ואחוז התמוגגות של לויקוציטים חושב באמצעות הנוסחה.
בבאר הניסוי של הטבליה המכילה 0.05 מ"ל של תמיסת נתרן ציטראט 3.8%, נוספו 0.1 מ"ל מדם הבדיקה ומינון עבודה של האלרגן של 0.05 מ"ל. באר הביקורת עם דם מולאה באותו נפח, אבל במי מלח במקום באלרגן.
דגימות דם עם טוברקולינים, CAM ותמיסת מלח פיזיולוגית הודגרו בתרמוסטט למשך שעתיים ב-+37 מעלות צלזיוס, מעת לעת רועדות קלות. לאחר מכן, כדי להשמיד אריתרוציטים, 0.02 מ"ל של דם נלקח מהביקורת ומשלוש בארות ניסוי והועברו לבארות של הצלחת המכילה 0.4 מ"ל של נוזל טורק. מספר הלויקוציטים נספר (בתא Goryaev) בכל הדגימות.
לאחר מכן חושב האחוז של תמוגה לויקוציטים באמצעות הנוסחה:
RSLL = לק-לו * 100%
כאשר Lk ו-Lo הם המספר המוחלט של לויקוציטים בדגימות הדם הבקרה והניסוי בדגימה חד פעמית.
RSLL נחשב חיובי בשיעור של 10% או יותר.
בעת מודלים של תהליך השחפת, נוצרו שש קבוצות של בעלי חיים כדי לקבוע את הפעילות והספציפיות של התגובה: חמש ניסויים וביקורת אחת.
לכל קבוצת ניסוי ניתנה מנה מסוימת של מיקובקטריה חיה של חיסון BCG. בעלי חיים מקבוצת הביקורת קיבלו מנה אחת של חיסון נגד ברוצלוזיס. 82. בזמן המתן וכל 24 שעות, נלקח דם מבעלי חיים, מחולק לדגימות בתוספת של תמיסת נתרן ציטראט 3.8% ואבחון לקביעת אחוז תמוגה של לויקוציטים, כדי לחקור את הרגישות, הפעילות והספציפיות של תְגוּבָה.
בחוות של פרות שהגיבו לטוברקולין, הדם נבדק על ידי תגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים. הדם שנלקח חולק לדגימות ניסיוניות בתוספת PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים, CAM ודגימת ביקורת עם מי מלח. מספר הלויקוציטים בכל הדגימות נספר ומדד RSLL חושב.
לאחר לימוד התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים, בוצעה שחיטת בקרה ואבחון של פרות שהגיבו בצורה חיובית לטוברקולין ובדיקה וטרינרית ותברואתית שלאחר המוות של פגרים ואיברים פנימיים כדי לזהות שינויים פתואנטומיים האופייניים למחלה ולחקור. האטיולוגיה של בדיקות טוברקולין הגורמות לתגובות חיוביות בתגובות לא ספציפיות.
לקחנו בחשבון איזה שיעור של בדיקות טוברקולין חיוביות עולה בקנה אחד עם התוצאות של RSLL, עם שינויים פתואנטומיים האופייניים לשחפת. מה הפרופורציה של צירוף המקרים של בדיקות טוברקולין חיוביות, RSLL ושינויים פתואנטומיים שאינם רגילים לשחפת. כמה דגימות טוברקולין חיוביות תואמות ב-RSLL עם PPD-טוברקולין ליונקים, עם PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM. כמה בדיקות טוברקולין חיוביות עולות בקנה אחד עם אכינוקוקוזיס, שנקבעה במהלך הניתוח שלאחר המוות של פגרי הפרות שנהרגו למטרות אבחון.
3. תוצאות מחקר
3.1. קביעת מינון העבודה של PPD–טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים ו-KAM
מינון העבודה של אלרגנים אבחנתיים עובד על דם ציטראצית של בעלי חיים שבהם הפרמטרים הפיזיולוגיים וההמטולוגיים היו בטווח התקין. האלרגן שימש במינון של 0.05 מ"ל, 0.1 מ"ל ו-0.15 מ"ל, ונלקחה מי מלח פיזיולוגי באותם נפחים.
מינון העבודה לא אמור לגרום להרס של לויקוציטים ולרגישות לאלרגן, לאנטיגן ולתרופות אבחנתיות.
הטבלה מציגה את יחס הנפח של טוברקולינים ו-CAM עם דם ותמיסת נתרן ציטראט 3.8%.
בדגימות הניסוי והביקורת, נספרו מספר הלויקוציטים, ואחוז התמוגגות של לויקוציטים חושב באמצעות הנוסחה.
התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים (RLL) בכל דגימות הדם עם אלרגנים בבקר, חזירים וארנבות הגיעה ל-3%, בכלבים - עד 7%. לכן, חסכוני יותר להשתמש במינון של 0.05 מ"ל של האלרגן (טוברקולין או KAM) כמנת עבודה, מכיוון RSLL שלה היה נמוך יותר מאשר במינון של 0.15 מ"ל. וערכו היה כמעט זהה עבור PPD - טוברקולין ליונקים, PPD - טוברקולין לציפורים ו-CAM.
מינון העבודה של טוברקולינים ו-CAM עבור RSLL נלקח כ-0.05 מ"ל, מכיוון שהתברר שהוא חסכוני ולא גרם להרס של לויקוציטים.
שולחן 1.
קביעת מינון העבודה של טוברקולינים ו-CAM.
| № דגימות | פתרון של 3.8%. נתרן ציטראט | דָם | מבחנים ניסיוניים עם PPD ml., PPD pt. ו-KAM | דגימות בקרה עם מי מלח פיזיולוגי |
| 1 | 0,05 | 0,1 | 0,05 | 0,05 |
| 2 | 0,05 | 0,1 | 0,1 | 0,1 |
| 3 | 0,05 | 0,1 | 0,15 | 0,15 |
3.2. חקר הספציפיות והפעילות של התגובה של ספציפי
תמוגה של לויקוציטים
3.2.1. מחקר של הספציפיות והפעילות של RSLL בדם של גדול
בקר
הניסוי בוצע בחווה החינוכית "Donskoe", מחוז Oktyabrsky של אזור רוסטוב.
שלושים ראשי בקר צעירים בני ארבעה עד שישה חודשים נבחרו למחקר.
נוצרו חמש ניסויים וקבוצת ביקורת אחת של בעלי חיים. חמש בעלי חיים נלקחו לכל קבוצה.
לחיות מקבוצות הניסוי הוזרקו מיקובקטריות חיות מזן החיסון BCG במינוני חיסון: אחד, שלוש, חמש, שבע, עשר. שוורים מקבוצת הביקורת קיבלו מנה אחת של חיסון נגד ברוצלוזיס מיחידות. 82. לאחר מכן נלקח דם מכל החיות למחקר על ידי תגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים (RSLL).
חיסוני BCG הרגישים על ידי מיקובקטריה בגוף, לויקוציטים רוכשים רגישות מוגברת לאנטיגן, וכאשר הם נפגשים מחוץ לגוף (במבחנה) עם אלרגן דומה, הם עוברים ליזה.
ביום מתן החיסון BCG לבעלי חיים, מספר הלויקוציטים (בממוצע לקבוצה) מחוץ לגוף בדגימות דם בעת אינטראקציה עם PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM היה כמעט זהה, מה שמעיד על היעדר לויקוציטים רגישים על ידי BCG mycobacteria.
24 שעות לאחר כניסת חיסון ה-BCG, ירד מספר הלויקוציטים (ממוצע לקבוצה) בדגימות דם מחוץ לגוף עם PPD-טוברקולין ליונקים כתוצאה מהתמוגגות שלהם שנגרמה מאינטראקציה של תאים רגישים עם האלרגן. עם הכנסת מנה חיסונית אחת של חיסון BCG לשוורים, מספר הלויקוציטים היה 9.0 10 9
/l (טבלה מס' 2), שלוש מנות - 8.6 10 9
/l, חמש מנות - 8.7 10 9
/l, שבע מנות - 8.6 10 9
/l, עשר מנות - 7.1 10 9
/l (עמ'
בדגימות דם עם מי מלח, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM, מספר הלויקוציטים עלה לאחר 24 שעות בהשפעת חיסון BCG על הגוף. במחקר של דגימות דם עם מי מלח מחוץ לגוף מבעלי חיים שהוזרקו להם מנה בודדת של חיסון BCG, מספר הלויקוציטים (ממוצע בקבוצה) היה 10.5 10 9
/l, שלוש מנות - 10.2 10 9
/l, חמש מנות - 10.9 10 9
/l, שבע מנות - 12.0 10 9
/l, עשר מנות - 12.0 10 9
/ ל. אחוז תמוגה של לויקוציטים בדגימות דם עם PPD-טוברקולין עבור ציפורים ו-CAM נעדר. העלייה קשורה לתגובת הגוף לחיסון שניתן ומלווה בלייקוציטוזיס. לויקוציטים בעלי רגישות ל-BCG אינם מקיימים אינטראקציה במבחנה עם אלרגן שאינו קשור. זה מצביע על הספציפיות של RSLL.
בכל קבוצות הניסוי של בעלי חיים, מספר הלויקוציטים בדגימות דם עם מי מלח פיזיולוגי, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM הגיע לרמה המקסימלית לאחר 48 שעות. מספר הלויקוציטים (בממוצע לקבוצה) בדגימות המכילות מי מלח פיזיולוגי, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM היה 11.3 10 עם הכנסת מנה חיסונית אחת של BCG 9 /l, שלוש מנות - 11.6 10 9 /l, חמש מנות - 12.1 10 9 /l, שבע מנות - 13.3 10 9 /l, עשר מנות - 14.5 10 9 / ל. ואחרי 72 שעות זה לאט לאט התחיל לרדת.
שולחן 2.
מספר הלויקוציטים ואינדיקטורים של RSLL בדם של בקר שעבר רגישות עם מנה אחת של חיסון BCG.
| זמן לאחר החדרת mycobacteria חי BCG (שעות) | מספר לויקוציטים | מספר לויקוציטים | RSLL% |
||||
| עם | עם PPDml. | עם | עם | עם PPDml. | עם PPDpt. | עם KAM |
|
| בזמן הרגישות | 9.2±0.10 | 9.1±0.07 | 9.2±0.09 | 9.1±0.06 | 1 | 0 | 1 |
| 24 | 10.5±0.10 | 9.0±0.11 | 10.5±0.11 | 10.5±0.07 | 14 | 0 | 0 |
| 48 | 11.3±0.17 | 8.2±0.17 | 11.1±0.04 | 11.1±0.06 | 27 | 2 | 2 |
| 72 | 10.9±0.06 | 8.4±0.09 | 10.8±0.10 | 10.9±0.06 | 23 | 1 | 0 |
| 96 | 10.7±0.07 | 8.7±0.04 | 10.6±0.04 | 10.7±0.07 | 19 | 1 | 0 |
| 120 | 10.2±0.05 | 8.9±0.07 | 10.1±0.04 | 10.0±0.03 | 13 | 1 | 2 |
| 144 | 9.7±0.09 | 9.0±0.08 | 9.6±0.08 | 9.5±0.04 | 7 | 1 | 2 |
| 168 | 9.1±0.04 | 9.2±0.03 | 9.1±0.03 | 9.1±0.04 | -1 | 0 | 0 |
Μ ± m - ערך ממוצע ± טעות של הממוצע האריתמטי
עם עלייה במינון החיסון של BCG, מספר הלויקוציטים הרגישים בדגימות דם עולה, וכאשר הם מקיימים אינטראקציה חוץ גופית עם PPD-טוברקולין עבור יונקים, הם נהרסים, כתוצאה מכך, אחוז התמוגה של לויקוציטים עולה.
לאחר 48 שעות במבחנה בדגימות דם עם PPD–טוברקולין ליונקים, חלה ירידה במספר הלויקוציטים כתוצאה מתמוגה. עם הכנסת מנה חיסונית אחת של BCG לבעלי חיים, מספר הלויקוציטים במפגש חוזר עם האלרגן במבחנה (בממוצע עבור הקבוצה) היה 8.2 10 9 /l, שלוש מנות - 8.0 10 9 /l, חמש מנות - 7.9 10 9 /l, שבע מנות - 7.7 10 9 /l, עשר מנות - 7.5 10 9 / ל. התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים במבחנה נקבעה עבור מנה חיסונית אחת לכל בעל חיים - 27%, שלוש מנות - 31%, חמש מנות - 35%, שבע מנות - 42%, עשר מנות - 48%. לאחר 72 שעות, תמוגה לויקוציטים הגיעה ל-23% במנה חיסונית אחת לכל בעל חיים, 28% בשלוש מנות, 31% בחמש מנות, 37% בשבע מנות ו-41% בעשר מנות.
לאחר 72 שעות, התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים ירדה בכל קבוצות הניסוי של בעלי חיים.
מספר הלויקוציטים בדם של בקר בימים הבאים (יום 3-7) ירד והגיע לערך ההתחלתי (מצוין ביום החיסון בחיסון BCG) עם הכנסת מנה אחת, שלוש ביום ה-6 ( 144 שעות), חמש, שבע מנות ביום 7 (168 שעות) ועשר מנות ביום 8 (192 שעות).
בדגימות הדם של שוורים המכילים PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM, האינדיקטורים של RSLL בכל ימי הניסויים היו שליליים, לא הייתה תמוגה של לויקוציטים. התוצאות מצביעות על הספציפיות של התגובה.
אחוז גדול של תמוגת לויקוציטים נצפה בדגימות דם של בעלי חיים המכילים PPD-טוברקולין ליונקים, ואחוז תמוגת לויקוציטים בדגימות דם המכילות PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM לא עלה על 3%, כלומר, הוא היה מתחת ל- סף נחשב. מאז לויקוציטים רגישים על ידי BCG mycobacteria נהרסים במבחנה בהשפעת אלרגן קשור ספציפי.
הפעילות של RSLL מאופיינת בעובדה שעם עלייה במינון של מיקובקטריות חיות של החיסון pcs. BCG מ-0.05 מ"ג ל-0.50 מ"ג לכל בעל חיים, מספר הלויקוציטים הרגישים עולה ואחוז תמוגת הלויקוציטים עולה.
עם עלייה באחוז תמוגה של לויקוציטים, בהתאם למינון החיסון המנוהל BCG, נצפתה עוצמה ומשך התגובה של תמוגה לויקוציטים ספציפיים.
ביצעו מחקרים עם הכנסת חיסון חיסון מיקובקטריה. BCG בשוורים אפשרו לקבוע את הספציפיות והפעילות של התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים, הנחוצה לאבחנה מבדלת של תגובות ספציפיות לאלרגן אחר, התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים עם PPD-טוברקולין ליונקים, PPD -טוברקולין לציפורים ו-CAM היה שלילי, שכן מספר הלויקוציטים בדגימות דם ניסיוניות עם טוברקולינים ו-CAM, כמו גם בדגימות ביקורת עם מי מלח פיזיולוגי, היה כמעט זהה.
היעדר תגובת תמוגה לויקוציטים בבעלי חיים מחוסנים עם חיסון נגד ברוצלוזיס יח' 82 עם PPD-טוברקולין ליונקים מעיד גם על הספציפיות של תגובת תמוגה לויקוציטים, שכן דגימות דם מכילות לויקוציטים שעברו רגישות על ידי אלרגן אחר שאינו קשור.
3.2.2. מחקר של הספציפיות והפעילות של RSLL בדם של חזירים
עם הצגת חיסון BCG של mycobacteria חי
לצורך הניסוי נבחרו 30 ראשי חזרזירים בני שלושה חודשים השייכים לאזרחי העיר נובוצ'רקסק.
חזרזירים חולקו לחמש קבוצות של 5 ראשים כל אחת, אשר הוזרקו תת עורית עם מנה אחת, שתיים, שלוש, ארבע וחמש מנות חיסון של חיסון BCG.
מספר הלויקוציטים (בממוצע לקבוצה) בחזירים ביום החדרת מיקובקטריה של חיסון BCG בכל הדגימות נע בין 10.7 ל-10.9 10 9 /שקר. היה בגבולות הפיזיולוגיים.
24 שעות לאחר הכנסת החיסון בדגימות דם עם מי מלח, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM, מספר הלויקוציטים היה בערך זהה. עם הכנסת מנה חיסונית אחת 11.8 - 11.9 10 9 , שתי מנות 13.2 10 9 , שלוש מנות 14.8 - 14.9 10 9 , ארבע מנות 15.4 - 15.5 10 9 , חמש מנות 15.8 - 15.9 10 9 , כי לויקוציטים רגישים אינם מגיבים עם מי מלח ועם אלרגנים שאינם קשורים, ואין תמוגה של לויקוציטים.
בדגימות דם של חזרזירים מחוסנים BCG, למרות לויקוציטוזיס בגוף, במבחנה בדגימות דם, בעת אינטראקציה עם PPD-טוברקולין ליונקים, מספר הלויקוציטים החל לרדת לאחר 24 שעות כתוצאה מתמוגגת של תאים רגישים עם מפגש אלרגן קשור. עם הכנסת מנה חיסונית בודדת של חיסון BCG לחזרזירים, מספר הלויקוציטים במבחנה (בממוצע לקבוצה) היה 10.5 10 9
/l, שתיים, שלוש, ארבע מנות - 10.0 10 9
/l, חמש מנות - 9.9 10 9
/l (עמ'
לאחר 48 שעות, מספר הלויקוציטים בדגימות דם עם PPD-טוברקולין ליונקים במבחנה הגיע לערך מינימלי. אז גדל מספר הלויקוציטים. תמוגה של לויקוציטים הייתה 33%, 41%, 47%, 52%, 55%, בהתאמה, לפי המינונים שניתנו. לאחר 48 שעות, האחוז הגבוה ביותר של תמוגה לויקוציטים צוין בדגימות הניסוי.
בדגימות דם המכילות מי מלח פיזיולוגי, PPD-טוברקולין לעופות ו-CAM, מספר הלויקוציטים עלה והגיע לערכו המקסימלי 48 שעות לאחר הכנסת חיסון BCG לחזרזירים. עם עלייה במינון של חיסון BCG שניתן, עלה מספר הלויקוציטים בדגימות דם המכילות מי מלח, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM, כלומר, עלייה במינון של BCG mycobacteria לוותה בעלייה בלויקוציטוזיס ב הגוף, לפיכך, מספר הלויקוציטים בדגימות דם עם אלרגנים לא ספציפיים גדל (דגימות ניסוי) ועם מי מלח פיזיולוגי (דגימת ביקורת). לאחר מכן (לאחר 72 שעות) נצפתה ירידה במספר הלויקוציטים בדגימות דם אלו.
בחזירים מחוסנים, ערכי RSLL חיוביים בדגימות דם עם PPD-טוברקולין ליונקים זוהו 24-120 שעות לאחר מתן מנה אחת, שתיים, שלוש, ארבע מנות ו-24-144 שעות לאחר חמש מנות חיסון של חיסון BCG.
בניסויים שנערכו על חזרזירים, מספר הלויקוציטים בדגימות דם המכילות PPD-טוברקולין לציפורים ו-RAM היה דומה לזה שבדגימות עם מי מלח. RSLL בדגימות דם עם PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM היה שלילי, מה שמאשר את הספציפיות של RSLL עם PPD-טוברקולין ליונקים.
בחזירים מחוסנים בחיסון נגד ברוצלוזיס, יח'. 82, מספר הלויקוציטים בדגימות דם עם טוברקולין ומלח היה כמעט זהה, לכן, RSLL עם PPD - טוברקולין ליונקים, PPD - טוברקולין לציפורים ו-CAM היה שלילי, בגלל לויקוציטים שעברו רגישות על ידי אלרגן אחר אינם מגיבים עם מלוחים ואלרגנים לא קשורים ואין תמוגה של לויקוציטים. זה מצביע על הספציפיות של התגובה.
3.2.3. חקר הספציפיות והפעילות של RSLL בדם של כלבים
עם הצגת חיסון BCG של mycobacteria חי
הניסויים בוצעו בכלבים השייכים לאזרחי העיר נובוצ'רקאסק, אזור רוסטוב.
יצרו חמש קבוצת ניסוי וקבוצת ביקורת אחת של בעלי חיים. כל קבוצה כללה 5 כלבים.
אחת (0.05 מ"ל), שתיים (0.1 מ"ל), שלוש (0.15 מ"ל), ארבע (0.2 מ"ל) וחמש (0.25 מ"ל) מנות חיסון של חיסון BCG הוזרקו תת עורית לכלבים לצורך המחקר. לבעלי חיים מקבוצת הביקורת הוזרקה מנה אחת של חיסון נגד ברוצלוזיס. 82.
ביום מתן החיסון BCG, מספר הלויקוציטים בכל קבוצות דגימות הדם במבחנה היה כמעט זהה.
24 שעות לאחר החדרת מיקובקטריות BCG לבעלי חיים, כאשר הדם קיים אינטראקציה עם מי מלח פיזיולוגי מחוץ לגוף, מספר הלויקוציטים (בממוצע עבור הקבוצה) היה 6.1 10 9/ליטר עם הכנסת מנת חיסון אחת של חיסון BCG, וכן 6.9 10 עם שתי מנות 9 /ליטר, שלוש מנות - 7.4 10 9 /ליטר, ארבע מנות - 7.7 10 9 /ליטר, חמש מנות - 8.3 10 9 /ליטר. בדגימות דם עם PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM, התקבלו נתונים קרובים לאלו שבדגימות דם עם מי מלח. זוהתה לויקוציטוזיס, מכיוון שהגוף מגיב להחדרת חיסון BCG, ולוקוציטים רגישים אינם מקיימים אינטראקציה עם אנטיגנים לא קשורים.
במחקר נוסף, נמצא כי לאחר 48 שעות הגיע מספר הלויקוציטים (ממוצע קבוצתי) בדגימות דם חוץ גופיות המכילות מי מלח פיזיולוגי לרמתו המקסימלית, עם הכנסת מנה חיסונית בודדת של החיסון - 6.2·10 9 /l ; שתי מנות - 7.4·10 9 /ליטר; שלוש מנות - 8.5·10 9 /ליטר; ארבע מנות - 9.5·10 9 /ליטר; חמש מנות - 10.8 10 9 /ליטר. מספר הלויקוציטים בדגימות דם המכילות מי מלח היה גדול פי שניים או יותר ממספר הלויקוציטים ביום מתן החיסון. ואז מספר הלויקוציטים החל לעלות. הכחדת התגובה קשורה לייצור נוגדנים תקינים על ידי מערכת החיסון.
בממוצע לקבוצה, מספר הלויקוציטים בדגימות דם עם PPD-טוברקולין ליונקים יורד ומגיע למינימום לאחר 48 שעות עם הכנסת מנה בודדת של BCG - 4.6 10 9 /ליטר; שתי מנות - 3.8·10 9 /ליטר; שלוש מנות - 3.4·10 9 /ליטר; ארבע מנות - 3.3·10 9 /ליטר; חמש מנות - 3.1 10 9 /ליטר. תמוגה של לויקוציטים בדגימות דם עם PPD-טוברקולין ליונקים היה הגדול ביותר והסתכם ב-26% עם מנה אחת של BCG, 49% עם שתי מנות, 60% עם שלוש מנות, 65% עם ארבע מנות ו-71% עם חמש מנות. מינונים. ככל שהמינון של חיסון ה-BCG הניתן גבוה יותר, כך גדל אחוז התמוגגות של לויקוציטים. עם החדרת מינונים גדולים של הפתוגן לגוף, מתרחשת אלרגיה חמורה ויותר לויקוציטים רגישים נהרסים כאשר הם נתקלים באנטיגן קשור (ספציפי), כפי שניתן לראות מניסויים ב-RSLL מחוץ לגוף.
נמצא כי לאחר 72 שעות עלה מספר הלויקוציטים (בממוצע לקבוצה) בדגימות דם עם PPD-טוברקולין ליונקים, ובדגימות עם מלוחים עם PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM ירד. אחוז התמוגגות של לויקוציטים לאחר 72 שעות בדגימות דם עם PPD–טוברקולין ליונקים הוא 23% במנה חיסונית אחת, 39% בשתי מנות, 50% בשלוש מנות, 60% בארבע מנות ו-64% בחמש מנות.
אינדיקטורים חיוביים של תגובת לויקוציטים ספציפית (RSLL) בדגימות דם המכילות PPD-טוברקולין ליונקים צוינו עם הכנסת מנה אחת של חיסון BCG לאחר 24-96 שעות, שתי מנות - לאחר 24-120 שעות, שלוש מנות - 24- 120 שעות, ארבע מנות 24-168 שעות, חמש מנות 24-240 שעות.
הפעילות של התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים מאופיינת בעובדה שעם עלייה במינון המנוהל של מיקובקטריות חיות של החיסון PCs. BCG בעל חיים מגביר את קצב ה-RSLL ואת משך הרגישות של לויקוציטים.
התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים בדגימות דם של קבוצות ניסוי המכילות PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM הייתה שלילית ותנודה עד 3%.
בכלבים שחוסנו במנה בודדת של חיסון נגד ברוצלוזיס, התגובה הספציפית של תמוגת לויקוציטים בדגימות דם עם PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM הייתה שלילית. מספר הלויקוציטים בדגימות דם ניסיוניות ובקרה עם טוברקולינים, CAM ומלח פיזיולוגי היה כמעט זהה, מה שמעיד על הספציפיות של תגובת תמוגה לויקוציטים, שכן לויקוציטים רגישים בדגימות דם אינם מקיימים אינטראקציה עם אנטיגנים לא קשורים.
3.2.4. מחקר של הספציפיות והפעילות של RLLS בדם ארנב
עם הצגת חיסון BCG של mycobacteria חי
לצורך התנהגות הניסויים, נבחרו 15 ארנבות וחולקו לשלוש קבוצות.
לאחר הכנסת חמש, עשר מנות של חיסון mycobacterium BCG לארנבות מקבוצות הניסוי ומנה אחת של חיסון נגד ברוצלוזיס. 82 בעלי חיים מקבוצת הביקורת נלקחו דם וחולקו לדגימות.
המחקר מצא שביום מתן החיסון, מספר הלויקוציטים בכל הקבוצות היה 7.9-8.8·10 9 /ליטר.
בדגימות דם מארנבות שחוסנו בחמש מנות של חיסון חיסון מסוג Mycobacteria BCG, עם מי מלח בזמן מתן החיסון, המספר הממוצע של לויקוציטים בקבוצה היה 8.8·10 9/ליטר. לאחר מכן מספר הלויקוציטים גדל ולאחר 24 שעות הוא היה 11.3·10 9 /ליטר, ולאחר 48 שעות הוא מגיע לרמה מקסימלית של 16.1·10 9 /ליטר. זאת בשל עלייה בפעילות התפקודית של האיברים ההמטופואטיים, הנגרמת על ידי כניסת אנטיגנים לגוף - BCG mycobacteria.
כאשר דם קיים אינטראקציה מחוץ לגוף עם PPD-טוברקולין עבור יונקים, התוכן הנמוך ביותר של לויקוציטים נצפתה לאחר 24 שעות. התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים לאחר 24 שעות היא 58%, לאחר 48 שעות - 71.4%, 72 שעות - 70.5%. האחוז המקסימלי של תמוגה לויקוציטים נרשם לאחר 48 שעות, ואז אחוז תמוגת לויקוציטים ירד. RSLL חיובי עם PPD-טוברקולין עבור יונקים נצפה לאחר 24 - 96 שעות.
מספר הלויקוציטים בדגימות דם עם PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM היה דומה לזה שבדגימות דם עם מי מלח. התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים עם PPD-טוברקולין עבור ציפורים ו-CAM הייתה שלילית (מ-1% ל-1%), מה שמעיד על הספציפיות של התגובה, שכן לויקוציטים רגישים אינם מקיימים אינטראקציה עם אלרגנים זרים.
מחקרים קבעו כי עם הכנסת עשר מנות של מיקובקטריות חיות של חיסון BCG, לאחר 24 ו-48 שעות, המספר הקטן ביותר של לויקוציטים במבחנה היה בדגימות דם עם PPD-טוברקולין ליונקים. לא ניתן לייחס ירידה במספר הלויקוציטים בדגימות דם עם אנטיגן PPD-טוברקולין הומוגנית ליונקים, שכן למעשה התמוגגות של לויקוציטים התרחשה מחוץ לגוף והלוקוליזה נגרמת על ידי הרס מוגבר של לויקוציטים רגישים בעת חשיפה ל- אלרגן ספציפי.
נקבע כי באינטראקציה של דם עם PPD-טוברקולין ליונקים, אחוז התמוגגות של לויקוציטים לאחר 24 שעות היה 56%, לאחר 48 שעות - 72%, לאחר 72 שעות - 41%.
ואז מספר הלויקוציטים החל לעלות והתאים לנורמה לאחר 672 שעות.
בדגימות דם עם מי מלח, כאשר ניתנו עשר מנות של חיסון BCG, מספר הלויקוציטים החל לעלות לאחר 24 שעות. המספר הגבוה ביותר של לויקוציטים במבחנה נרשם 96 שעות לאחר מתן החיסון BCG. לאחר מכן מספר הלויקוציטים ירד לאט והתאים לנורמה (מספר הלויקוציטים ביום מתן החיסון) לאחר 672 שעות.
עם עלייה במינון של חיסון מיקובקטריה חיה יחידות. BCG, מספר לויקוציטים רגישים עולה, אחוז תמוגה של לויקוציטים ומשך התגובה עולה, זה מאפיין את פעילות התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים.
התוצאות בדגימות דם עם PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM היו כמעט זהות לדגימות דם המכילות מי מלח פיזיולוגי, לכן, לא היה RSLL, מה שמעיד על הספציפיות של התגובה, שכן לויקוציטים אינם מגיבים עם אלרגנים זרים.
במתחסנים במנה בודדת של חיסון נגד ברוצלוזיס, יח'. 82 ארנבות RSLL עם PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים, CAM היה שלילי, מכיוון שלא היו לויקוציטים רגישים לאלרגנים אלו - אבחונים בדם. מספר הלויקוציטים בדגימות דם המכילות טוברקולין ותמיסת מלח פיזיולוגית היה כמעט זהה בבעלי חיים.
חוסר תגובת תמוגה לויקוציטים בדגימות דם מבעלי חיים מחוסנים עם חיסון נגד ברוצלוזיס. 82 המכיל PPD-טוברקולין ליונקים מעיד על הספציפיות של התגובה, שכן אבחונים - אלרגנים אינם מגיבים עם לויקוציטים רגישים של אלרגן אחר.
3.3. מחקר של האפשרות להשתמש ב-RSLL כדי להבדיל בין תגובות לא ספציפיות בפרות שהגיבו בחיוב
עבור טוברקולין
3.3.1. מחקר של RSLL דם בפרות שהגיבו בחיוב
עבור טוברקולין באזור Matveevo-Kurgan
אבחנה של שחפת על ידי תגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים (RSLL) בתנאי ייצור בוצעה ב-SEC "Dawn" של מחוז Matveyevo-Kurgan, אזור רוסטוב.
ביום 27.11.06 בוצעה במשחטה של ש.פ.ק. רסבט, שחיטת בקרת ועדת אבחון של שבע פרות המגיבות לטוברקולין, ולאחר מכן בוצעה בדיקה וטרינרית ותברואתית שלאחר המוות.
לפני השחיטה, דם נלקח מפרות כדי לחקור את התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים (RSLL).
המחקר מצא כי בשלוש (43%) פרות, התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים עם PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM הייתה שלילית, כלומר. אחוז תמוגת לויקוציטים היה 1% - 4%.
בארבע פרות (57%), תמוגה של לויקוציטים בדגימות דם עם PPD-טוברקולין ליונקים היה 27%, 29%, 36%, 71%, בעוד RSLL עם PPD-טוברקולין לציפורים ועם CAM היה שלילי.
בבדיקה וטרינרית ותברואתית שלאחר המוות של שבע פרות המגיבות לטוברקולין, רק לארבע (57%) היה RLLS חיובי בדגימות דם עם PPD–טוברקולין ליונקים. לשניים (29%) מהם היו שינויים בבלוטות הלימפה האופייניות לשחפת: האחת בתת-הלסת, השנייה בבלוטות הלימפה העל-עורקיות. בפגרים של שתי פרות שנשחטו (29%) עם תגובה חיובית לבדיקת טוברקולין ואינדיקטורים חיוביים ל-RLLS, שינויים פתואנטומיים האופייניים לשחפת לא זוהו חזותית באיברים הפנימיים ובבלוטות הלימפה. זה נובע מההדבקה האחרונה של בעלי חיים בגורם הסיבתי של שחפת, כך שעדיין לא נוצרו שינויים פתולוגיים. בנוסף, נמצא כי שתי פרות (29%) בעגל עמוק (7-8.5 חודשי הריון) ואחת (14%) - עם אנדומטריטיס חריפה.
בשבע פרות (100%) עם בדיקת טוברקולין חיובית, RSLL בדגימות עם PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM שלילית, בגלל רגישות אינה נגרמת על ידי חיידקי עופות ומיקוביות לא טיפוסיות.
3.3.2. מחקר על ידי תגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים בדם
בפרות במחוז סלסקי שהגיבו בצורה חיובית לטוברקולין
בתנאי ייצור, האבחנה של שחפת RSLL בוצעה ב- Yuzhnoye JSC, מחוז סלסקי, אזור רוסטוב.
ב-24 באוגוסט 2009 בוצעה במפעל לעיבוד הבשר של מחוז פשנוקופסקי, שחיטת בקרת ועדה ואבחון של 32 פרות שהגיבו לטוברקולין, ולאחר מכן נערכה בדיקה וטרינרית ותברואתית.
לפני השחיטה, דם נלקח מפרות לצורך מחקר בתגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים (RSLL). תוצאות מחקרים על מספר הלויקוציטים ואינדיקטורים של RSLL בפרות עם תגובה בולטת לטוברקולין מוצגות בטבלה מס' 3.
מתוך 32 הפרות שהגיבו לטוברקולין תוך-עורי, רק שמונה (25%) RLLS היו חיוביים כאשר דגימות דם יצרו אינטראקציה עם PPD, טוברקולין ליונקים. אחוז התמוגה בפרות היה 19%, 20%, 23.1%, 23.8%, 24.5%, 30.2%, 31%, 32.7%.
מחקרים מצאו כי בדגימות עם PPD-טוברקולין לציפורים בשמונה (25%) בעלי חיים, תמוגה לויקוציטים הייתה 14.3%, 15.8%, 20.1%, 21%, 23.1%, 23.8%, 27.3%, 34.5%.
לשבע (22%) פרות היה RLLS חיובי עם CAM. RSLL הסתכם ב-19%, 20%, 23.2%, 23.8%, 24.6%, 28.6%, 33.3%.
מתוכם, שש (19%) פרות נצפו בעלות RLSL חיובי הן עם PPD-טוברקולין ליונקים והן PPD-טוברקולין לציפורים. שתי פרות (6.3%) נמצאו חיוביות ל-PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM. בשמונה עשרה (56%) בעלי חיים שהגיבו למתן טוברקולין תוך עורי, התגובה הספציפית של תמוגת לויקוציטים הייתה שלילית בכל דגימות הדם.
בדיקה שלאחר המוות של הפגרים והאיברים הפנימיים של 32 פרות מגיבות טוברקולין הראתה שמתוך שמונה (25%) פרות עם RLLS חיובי בדגימות דם עם PPD-טוברקולין ליונקים, רק לאחת (3%) היו שינויים בלימפה הלועית. צמתים האופייניים לשחפת, שניים (6%) - אכינוקוק בכבד, שלושה (9%) - הריון, שניים (6%) - הריון ואכינוקוק בכבד.
מתוך 32 פרות שהגיבו לטוברקולין תוך עורי, ל-14 (44%) היו שלפוחיות אכינוקוקיות בכבד ואחת (3%) בריאות. במקרה אחד (3%) נמצאה מורסה מוגלתית בכבד. 20 ראשים (63%) היו בהריון, מתוכם ארבע (13%) פרות היו חולות באכינוקוקוזיס, ולאחת (3%) היו שינויים שחפתים בבלוטות הלימפה הלועיות.
שולחן 3
מספר הלויקוציטים, אינדיקטורים ל-RSLL ושינויים פתואנטומיים בפרות במחוז סלסקי שהגיבו בחיוב לטוברקולין.
| № | מס' מלאי | מספר הלויקוציטים באינטראקציה של דם עם | RSLL, % | שינויים פתולוגיים, הריון |
|||||
| Fiz פִּתָרוֹן | PPD - T עבור ml. | PPD - T ליום ו'. | ל | PPD - T עבור ml. | PPD - T ליום ו'. | ל |
|||
| 1 | 5948 | 5,2 | 3,5 | 5,2 | 5,2 | 32,7 | 0 | 0 | רחוב 7 חודשים, שינויים האופייניים לשחפת בגפה הלועית. צמתים |
| 2 | 5070 | 5,8 | 4,0 | 3,8 | 5,8 | 31,0 | 34,5 | 0 | רחוב 3 חודשים |
| 3 | 5625 | 6,3 | 4,4 | 5,0 | 6,3 | 30,2 | 20,1 | 0 | אכינוקוקוזיס של הכבד. |
| 4 | 4533 | 4,9 | 3,7 | 4,9 | 4,9 | 24,5 | 0 | 0 | אכינוקוקוזיס של הכבד. |
| 5 | 5926 | 10,5 | 8,0 | 8,0 | 8,0 | 23,8 | 23,8 | 23,8 | רחוב 3 חודשים, אכינוקוקוזיס בכבד. |
| 6 | 5602 | 6,5 | 5,0 | 5,0 | 6,5 | 23,1 | 23,1 | 0 | רחוב 8 חודשים |
| 7 | 5631 | 9,5 | 7,6 | 8,0 | 9,5 | 20 | 15,8 | 0 | רחוב 3 חודשים |
| 8 | 5563 | 10,5 | 8,5 | 8,3 | 7,5 | 19 | 21 | 28,6 | רחוב 3 חודשים, אכינוקוקוזיס בכבד. |
| 9 | 5916 | 5,5 | 5,0 | 4,0 | 4,4 | 9,1 | 27,3 | 20 | אכינוקוקוזיס של הכבד. |
| 10 | 5567 | 5,6 | 5,6 | 5,6 | 4,3 | 0 | 0 | 23,2 | רחוב 6 חודשים, אכינוקוקוזיס בכבד. |
| 11 | 5632 | 6,6 | 6,6 | 6,6 | 4,8 | 0 | 0 | 24,6 | אכינוקוקוזיס של הכבד. |
| 12 | 3016 | 4,2 | 4,2 | 3,6 | 4,2 | 0 | 14,3 | 0 | אכינוקוקוזיס של הכבד. |
| 13 | 5077 | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 3,0 | 0 | 0 | 33,3 | רחוב 6 חודשים |
| 14 | 5923 | 5,8 | 5,8 | 5,8 | 4,7 | 0 | 0 | 19 | רחוב 8 חודשים |
| 15 | 5578 | 6,2 | 6,0 | 6,2 | 6,2 | 3,2 | 0 | 0 | אכינוקוקוזיס של הכבד. |
| 16 | 6626 | 5,1 | 5,1 | 5,1 | 5,1 | 0 | 0 | 0 | אכינוקוקוזיס של הכבד. |
| 17 | 5573 | 5,3 | 5,0 | 5,3 | 5,3 | 7 | 0 | 0 | רחוב 7 חודשים, אכינוקוקוזיס בכבד. |
| 18 | 5599 | 6,5 | 5,9 | 6,5 | 6,5 | 9,2 | 0 | 0 | אכינוקוקוזיס של הכבד. |
| 19 | 5660 | 4,8 | 4,8 | 4,8 | 4,5 | 0 | 0 | 6,3 | אכינוקוקוזיס של הריאות. |
| 20 | 5664 | 6,2 | 6,2 | 6,2 | 6,0 | 0 | 0 | 3,2 | אכינוקוקוזיס של הכבד. |
| 21 | 5538 | 5,4 | 4,9 | 5,3 | 5,4 | 9,3 | 1,8 | 0 | אכינוקוקוזיס של הכבד. |
| 22 | 7406 | 5,5 | 5,5 | 5,5 | 5,5 | 0 | 1,8 | 0 | רחוב 7 חודשים |
| 23 | 5137 | 6,4 | 5,9 | 6,4 | 6,4 | 7,8 | 0 | 0 | רחוב 7 חודשים |
| 24 | 5241 | 15,5 | 15,5 | 15,5 | 15,0 | 0 | 0 | 3,2 | רחוב 5 חודשים |
| 25 | 5946 | 10,0 | 10,0 | 10,0 | 9,8 | 0 | 0 | 2 | תהליך מוגלתי בכבד. |
| 26 | 5176 | 5,0 | 5,0 | 4,9 | 4,8 | 0 | 2 | 4 | רחוב 8 חודשים |
| 27 | 5668 | 5,0 | 5,0 | 4,8 | 5,0 | 0 | 4 | 0 | רחוב 8 חודשים |
| 28 | 4506 | 5,3 | 5,3 | 5,3 | 5,3 | 0 | 0 | 0 | St.4 חודשים |
| 29 | 6514 | 7,1 | 7,1 | 7,1 | 7,1 | 0 | 0 | 0 | רחוב 3 חודשים |
| 30 | 5027 | 6,5 | 6,5 | 6,5 | 6,5 | 0 | 0 | 0 | רחוב 6 חודשים |
| 31 | 6063 | 5,5 | 5,5 | 5,5 | 5,5 | 0 | 0 | 0 | St.6 חודשים |
| 32 | 4922 | 6,8 | 6,8 | 6,8 | 6,8 | 0 | 0 | 0 | רחוב 7 חודשים |
מתוך שמונה פרות שנשחטו בהן RSLL היה חיובי בדגימות דם עם PPD–טוברקולין ליונקים, רק לאחת (12.5%) היו שינויים בבלוטות הלימפה הרטרו-לועיות האופייניות לשחפת. בשבע (87.5%) בעלי חיים שנשחטו עם RSLL חיובי, לא נמצאו שינויים פתואנטומיים באיברים הפנימיים ובבלוטות הלימפה האופייניים לשחפת, מה שכנראה נובע מההדבקה האחרונה של פרות אלו בגורם הסיבתי של שחפת, ושינויים פתואנטומיים. עדיין לא נוצר.
לשבע (21%) מתוך 32 פרות שהגיבו לטוברקולין הייתה תגובה חיובית בדגימות דם עם CAM, אשר קשורה לזיהום בגוף עם מיקובקטריות לא טיפוסיות.
תגובה חיובית בדגימות דם עם PPD-טוברקולין לציפורים נצפתה בשמונה (25%) בעלי חיים שנשחטו, זאת עקב הדבקה של פרות במיקובקטריה של עופות (M. avium).
זוהו בעלי חיים עם בדיקה חיובית עבור טוברקולין, שנגועות במספר סוגים של מיקובקטריות. לכן, בארבע (12.5%) פרות, תגובה חיובית הייתה בדגימות עם PPD-טוברקולין ליונקים ו-PPD-טוברקולין לציפורים, באחת (3.1%) - עם PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM, בשניים (6.3% ) - עם PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים ו-KAM.
מתוך 32 הפרות שהגיבו בחיוב למתן תוך עורי של טוברקולין, ב-18 פרות (56%), RLLS בדגימות עם PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM היה שלילי, הקשור למחלות אחרות (אכינוקוקוזיס). וכו'). ) והריון.
מחקרים בקטריולוגיים של החומר הפתולוגי לשחפת נתנו תוצאות שליליות.
3.3.3. מחקר של RSLL של דם של פרות במחוז נקלינובסקי,
חיובי עבור טוברקולין
בתנאי ייצור, האבחנה של שחפת על ידי תגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים בוצעה ב-SEC "Sovetinsky", מחוז Neklinovsky, אזור רוסטוב.
שמונה פרות בחווה שהצליחה בעבר נבדקו חיוביות עבור טוברקולין.
6 בספטמבר 2009 בוצעה שחיטת בקרה ואבחון של פרות המגיבות באופן חיובי לטוברקולין. במהלך הנתיחה שלאחר המוות, לא זוהו חזותית שינויים פתולוגיים באיברים הפנימיים ובבלוטות הלימפה. בדיקה בקטריולוגית של החומר הפתולוגי לשחפת במעבדה האזורית ברוסטוב נתנה תוצאות שליליות.
לפני השחיטה, נלקח דם מפרות שהגיבו לטוברקולין כדי לבצע תגובת תזוזה ספציפית של לויקוציטים (RSLL).
נמצא שמתוך שמונה פרות עם בדיקות טוברקולין חיוביות, רק שתי RLLS היו חיוביות כאשר דגימות דם קיימו אינטראקציה עם PPD-טוברקולין עבור יונקים. אחוז תמוגת לויקוציטים בפרות הוא 10% ו-16%.
בשלוש פרות, התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים הייתה חיובית עם PPD-טוברקולין עבור ציפורים. תמוגה של לויקוציטים בבעלי חיים היה 26%, 20%, 20%.
בדגימות דם המכילות RAM, התקבלו תוצאות שליליות של RSLL. אחוז תמוגה לויקוציטים נע בין 0% ל-2%.
בשלוש פרות (37.5%) שהגיבו לטוברקולין, RSLL היה שלילי בכל הדגימות.
בשתי פרות שנשחטו (25%) עם בדיקת טוברקולין חיובית ואשר נתנה RSLL חיובי בדגימות דם עם PPD-טוברקולין ליונקים, לא אותרו שינויים פתואנטומיים באיברים הפנימיים ובבלוטות הלימפה, זאת בשל הזיהום האחרון של בעלי חיים עם הגורם הסיבתי של שחפת, ולכן עדיין לא נוצרו שינויים פתולוגיים.
תגובה חיובית בדגימות דם עם PPD-טוברקולין לציפורים נצפתה בשלוש בעלי חיים (37.5%) שהגיבו בחיוב למתן תוך עורי של טוברקולין, בהם לא נמצאו שינויים פתואנטומיים האופייניים לשחפת, אשר ניתן להסביר על ידי זיהום של פרות עם מיקובקטריה של עופות (M. avium).
אם הרגישות אינה נגרמת על ידי Mycobacterium tuberculosis, כלומר האטיולוגיה של הרגישות שונה, אז התוצאות של RLLS בדגימות דם עם PPD-טוברקולין ליונקים יהיו שליליות.
האפשרות להשתמש בשיטה לאבחון מוקדם של שחפת במבחנה על תאי דם ישירות בתנאים המעשיים של חוות תתרום לשימוש נרחב באלרגנים בעלי אופי שונה כאמצעי לאבחנה מבדלת של תגובות טוברקולין ספציפיות ולא ספציפיות.
4. מסקנות
1. מינון העבודה לתגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים בדגימה של 0.1 מ"ל מדם הבדיקה ו-0.05 מ"ל של תמיסת נתרן ציטראט 3.8% היא 0.05 מ"ל עבור PPD-טוברקולינים ו-CAM.
2. בבעלי חיים שעברו רגישות על ידי החדרת מיקובקטריה חיים של חיסון BCG לגוף החי, התגלה RLLS חיובי מחוץ לגוף 24 שעות לאחר הכנסת החיסון עם אלרגנים - PPD-טוברקולין ליונקים.
3. עלייה במינון המיקובקטריות החיות של זן החיסון BCG לבעל חיים מלווה בעלייה במדד RSLL ומשך התגובה, מה שמעיד על עלייה בלויקוציטים רגישים ופעילות התגובה של תמוגה ספציפית. של לויקוציטים.
4. בדגימות דם עם מי מלח פיזיולוגי, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM בחיות מחוסנות עם חיידקים חיים של חיסון BCG ובדגימות דם עם מי מלח, PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM מחוסנים בחיסון מזן 82, כמות הלויקוציטים הייתה זהה, כלומר, התקבל RSLL שלילי, המעיד על הספציפיות של התגובה, שכן לויקוציטים רגישים אינם מגיבים עם אלרגנים זרים.
5. בתגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים, ניתן להשתמש באלרגנים רבים, המאפשרים להבדיל בין תגובות לא ספציפיות לטוברקולין.
6. שיטת RSLL המוצעת על ידינו משלימה ומשפרת את מכלול האבחון והאבחון המבדל הקיים של שחפת בבעלי חיים.
5. הצעות מעשיות
1. התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים מאפשרת לזהות בעל חיים נגוע ביום הראשון לאחר ההדבקה, לכן יש לה חשיבות מעשית רבה לאבחון מוקדם של שחפת.
2. אנו ממליצים להשתמש בתגובת תמוגה לויקוציטים הספציפית לאבחון דיפרנציאלי לכל החיים של תגובות ספציפיות ולא ספציפיות למתן PPD-טוברקולין ביונקים, אשר תבהיר את האבחנה של שחפת ותמנע שחיטה לא מוצדקת ובלתי סבירה של בריאים בעלי תפוקה גבוהה. חיות.
1. דובובוי, ב.ל. חדש באבחון מבדל של שחפת של בעלי חיים חקלאיים / ב.ל. Oak, O.N. Solovieva, N.V. Ulko // אוסף מאמרים מדעיים "אבחון, מניעה וטיפול במחלות זיהומיות של חיות משק" - Persianovskiy, 2000.-S.8-12.
2. דובובוי, ב.ל. שיטה לאבחון מוקדם של שחפת בבקר RSLL / B.L. Oak, O.N. פוליאקובה // רפואה וטרינרית של חיות בית.-קזאן.-№3, 2006.–S. 54-56.
3. דובובוי, ב.ל. חפש אבחון מוקדם של שחפת בבעלי חיים / B.L. Oak, O.N. פוליאקובה // כנס בינלאומי מדעי ומעשי "בעיות עיקריות, מגמות וסיכויים לפיתוח בר קיימא של ייצור חקלאי".-Makhachkala.-T.2, 2006.-S.68-69.
4. דובובוי, ב.ל. מחקרים על הספציפיות והפעילות של RSLL באבחון שחפת בבקר / B.L. Oak, O.N. פוליאקובה // נתיב פיתוח חדשני של המכלול האגרו-תעשייתי - הכיוון העיקרי של המחקר המדעי לחקלאות.-פרסיאנובסקי.-2007.-עמ' 67-69.
5. פוליאקובה או.נ. אבחון מוקדם של שחפת חזירים / Polyakova O.N., Dubovoy B.L.// הליכים של הכנס הבין-אזורי "טכנולוגיות אינטנסיביות בגידול חזירים: בעיות ופתרונות." Persianovskiy.-2007.-p.124-125.
6. פוליאקובה או.נ. RSLL בפרות שהגיבו פעמיים בחיוב לבדיקת טוברקולין תוך-עורית / O.N. פוליאקובה, ב.ל. דובובה, נ.א. Solovyov// הליכים של הכנס המדעי והמעשי הכל-רוסי "בעיות בפועל של אבחון תפקודי ומורפו-פונקציונלי של מחלות בעלי חיים".-Novocherkassk.-2007.-S.179-180.
7. פוליאקובה או.נ. חקר השינויים בפעילות של טוברקולין-PPD עבור יונקים RSLL / O.N. פוליאקובה, ב.ל. Dubovoy // הליכים של הוועידה המדעית והמעשית הכל-רוסית "בעיות בפועל של הפתולוגיה של מורפולוגיה ואונקולוגיה של בעלי חיים".–Novocherkassk.-2007.-P.74-75.
8. פוליאקובה או.נ. התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים באבחון של שחפת של בעלי חיים / O.N. פוליאקובה // הליכי הכנס המדעי-מעשי הכל-רוסי "בעיות, משימות ודרכי תמיכה מדעית בפרויקט הלאומי העדיפות" פיתוח ה-AIC.
9. פוליאקובה או.נ. חקר תגובות לא ספציפיות לטוברקולין בבקר / O.N. פוליאקוב // עלון האוניברסיטה החקלאית הממלכתית של סרטוב על שם נ"י ואבילוב. - מס' 6, 2008. - עמ' 50-53.
10. דובובוי, ב.ל. אבחנה מבדלת של שחפת בבקר על ידי תגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים / B.L. Oak, O.N. פוליאקובה // הליכים של הכנס המדעי-מעשי הכל-רוסי "שיפור התפוקה של חיות משק ועופות על בסיס הישגים חדשניים." -נובוצ'רקסק.-2009.-עמ' 3-7.
11. דובובוי ב.ל. שיטה לאבחון מוקדם של שחפת בבעלי חיים / ב.ל. Oak, O.N. פוליאקובה, א.י. Klimenko, A.V. קובלנקו, ל.פ. מירונובה // המצאות. דגמים שימושיים. עלון רשמי מס' 25, 2009.-עמ' 2.
12. פוליאקובה או.נ. אבחון דיפרנציאלי של תגובות תוך-עוריות ל-PPD-טוברקולין ליונקים (Tml) בפרות / O.N. פוליאקובה, ב.ל. דובובוי, V.V. Moseychuk // הליכים של הכנס הבינלאומי המדעי והמעשי "שילוב של מדע, חינוך, ביטחון תזונתי של הפדרציה הרוסית".-Persianovsky.-T. No. 3, 2010.-S.
13. דובובוי, ב.ל. אבחון שחפת על ידי בידול של תגובות טוברקולין תוך עוריות חיוביות בבקר / B.L. Oak, O.N. פוליאקובה, V.I. דוברלין, V.V. Moseychuk, G.V. Goryacheva // הליכים של הוועידה המדעית והמעשית הכל-רוסית "בעיות בפועל של תמיכה וטרינרית בגידול בעלי חיים רוסי".-Novocherkassk.-2010.-P.10-13.
14. פוליאקובה או.נ. התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים באבחון דיפרנציאלי של שחפת / O.N. פוליאקובה, ב.ל. דובובוי // הליכים של הוועידה המדעית והמעשית הכל-רוסית "בעיות בפועל של תמיכה וטרינרית בגידול בעלי חיים רוסי." - נובוצ'רקסק.–2010.-P.8-9.
15. דובובוי, ב.ל. אבחון של תגובות טוברקולין לא ספציפיות הנגרמות על ידי מיקובקטריות לא טיפוסיות ועופות /B.L. Dubovoy, O.N. Polyakova // רפואה וטרינרית של הקובאן. - קרסנודר. - מס' 1, 2011. - ס' 21-23.
16. Polyakova, O.N. קביעת הגורמים לתגובות טוברקולין לא ספציפיות עם PPD-tuberculin לציפורים ו-CAM מחוץ לגוף / O.N. פוליאקובה, ב.ל. אלון // וטרינריה של הקובאן. - קרסנודר. - מס' 1, 2011. - ס' 8-10.
רשימת קיצורים:
BCG - חיסון יבש BCG הוא מיובש חי Mycobacterium tuberculosis זן BCG.
CAM הוא קומפלקס של מיקובקטריות לא טיפוסיות.
PPD עבור ml. - נגזרת מטוהרת חלבון ליונקים, היא חלק חלבון מטוהר המבודד מנוזל התרבות של הגורם הגורם לשחפת, בהתאמה, ממין הבקר, הגדל על מצע מזין סינתטי.
PPD לשישי. - נגזרת מטוהרת חלבון לציפורים, היא חלק חלבון מטוהר המבודד מנוזל התרבות של הגורם הגורם לשחפת, בהתאמה, ממין העופות, הגדל על מצע מזין סינתטי.
RSLL היא תגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים.
פוליאקובה אולגה ניקולייבנה
שיפור באבחון מוקדם של שחפת של בעלי חיים.
A V T O R E F E R A T
עבודת גמר לתואר
מועמד למדעי הווטרינריה 
חתום להדפסה בתאריך 14.01.11 הדפסה מבצעית
גיליון הדפסה קונבנציונלי כרך 1. הזמנה מס' 198/1 תפוצה 100 עותקים.
מפעל הוצאה לאור ודפוס
LLC "MP Book", רוסטוב-על-דון,
הכביש המהיר טגנרוג, 106
ההמצאה מתייחסת לתחום הביוטכנולוגיה. חומר: השיטה כוללת זיהוי של בעלי חיים המגיבים לטוברקולין בחוות משגשגות ובחצרות על ידי בדיקות אלרגיות מתוכננות. מבעלי חיים המגיבים בצורה חיובית לטוברקולין, הדם נבדק על ידי תגובת לויקוציטים ספציפיים (RSLL) באמצעות PPD ליונקים, PPD לציפורים ו-CAM כדיאגנוסטיקום לטוברקולינים. השיטה מאפשרת להבדיל בין תגובות חיוביות ספציפיות ללא ספציפיות לבדיקת טוברקולין ולאבחן שחפת בשלב מוקדם של המחלה. 4 ו.פ. f-ly, 7 כרטיסיות.
ההמצאה מתייחסת לרפואה וטרינרית, בפרט לשיטות ביטוי לאבחון מבדל של שחפת הנגרמת על ידי סוגים שונים של מיקובקטריה.
ידוע כי בחוות משגשגות, האבחנה העיקרית לשחפת נקבעת בצורה מורכבת - אפיזוטולוגית, קלינית, אלרגית, פתולוגית ומעבדתית (1.)
שיטות האבחון המפורטות במקרים רבים אינן מאפשרות לבצע אבחנה סופית של שחפת תוך זמן קצר.
עבור מחקרים המוני in vivo על שחפת, נעשה שימוש במבחן אבחון אלרגי (2). עם זאת, הופעת תגובות לא ספציפיות המוניות לטוברקולין בבעלי חיים לא שחפתים אינה מאפשרת לאבחן שחפת בחוות משגשגות על סמך בדיקת טוברקולין חיובית (1; 2).
כדי להבדיל בין תגובות טוברקולין לא ספציפיות, מבוצעת בדיקה סימולטנית (אב-טיפוס) עם שני אלרגנים - PPD ליונקים והאלרגן KAM העשוי ממספר זנים של מיקובקטריה לא טיפוסית (2; 3; 4).
בדיקת אלרגיה סימולטנית משמשת לאבחון ראשוני של שחפת בבקר ובגורי גירה קטנים ובתרנגולות בחוות משגשגות ואם תגובות לטוברקולין נגרמות על ידי מיקובקטריות לא טיפוסיות וספרופיטים עמידים לחומצה (3).
הבעלים של פרות בעלות תנובה גבוהה חולקים על חוקיות השחיטה הבקרה והאבחונית של בעלי חיים שנתנו תגובה חיובית לבדיקת השחפת, ודורשים שיטות אבחון לכל החיים לבחינה מחדש של בעלי חיים פרודוקטיביים לשחפת. השימוש ב"שיטה לאבחון מוקדם של שחפת בבעלי חיים" המוצע על ידינו מבהיר סוגיה שנויה במחלוקת זו, שכן היא מאפשרת לנו לקבוע באופן חד משמעי את הספציפיות או אי הספציפיות של התגובה של האורגניזם החי למתן תוך עורי של טוברקולין ולבסוף לבצע אבחנה. .
יתרה מכך, בדיקה סימולטנית מותרת 30 ימים או יותר לאחר השחפת האחרונה של בעלי חיים, שאינה עומדת בדרישות של אבחון מוקדם (פרה-קליני) של שחפת בתקופת מחקר קצרה.
לפיכך, החסרונות של השיטות המוכרות לאבחון שחפת הם המורכבות, תקופות המחקר הארוכות וחוסר האפשרות לקבוע את סוג המיקובקטריה בימים הראשונים לאחר ההדבקה.
השיטה מבוססת על רגישות מוגברת המופיעה מיד של לויקוציטים למגע חוזר עם אנטיגן (אלרגן) מחוץ לגוף. מטרת ההמצאה היא לפתח שיטה חדשה. משימה זו מושגת באמצעות התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים (RSLL).
השיטה מתבצעת על ידי בחינת הדם של RSLL מבעלי חיים המגיבים בצורה חיובית לטוברקולין, שזוהה בחוות משגשגות ובחצרות על ידי מחקרים אלרגיים מתוכננים, תוך שימוש בטוברקולינים (PPD ליונקים, PPD לציפורים ו-CAM) כאבחון.
יתרה מכך, בעת אבחון שחפת בבקר, RSLL מתבצע עם PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים ו-KAM - אלרגן מורכב ממיקובקטריות לא טיפוסיות.
אבחון שחפת בחזירים מתבצע עם PPD-טוברקולין ליונקים ו-PPD-טוברקולין לציפורים.
PPD-טוברקולין ליונקים משמש לאבחון שחפת אצל כלבים וטורפים.
אבחון שחפת בארנבות ובבעלי חיים נושאי פרווה RSLL מתבצע עם PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM.
ארגון המחקר על שחפת RSLL
בניסויים על ארנבות, כלבים, חזירים ועגלים, נעשה שימוש בחיידקים חיים של זן החיסון BCG-1 לרגישות של האורגניזם החי במינוני חיסון: אחד (0.05 מ"ג), שניים (0.1 מ"ג), שלושה (0.15 מ"ג), חמישה (0.25 מ"ג) ועשרה (0.50 מ"ג).
המחקרים בוצעו בתנאי ניסוי על לויקוציטים בדם של חיות מחוסנות BCG שלמות ובתנאי ייצור - פרות שנתנו פעמיים תגובה חיובית לזריקה תוך-עורית של PPD-טוברקולין ליונקים, בחוות "שחר" ב-Matveevo-Kurgan. אזור.
המטרה העיקרית של המחקר היא להשתמש בתוצאות של RSLL לאבחנה מבדלת וקביעה של:
1) רגישות של לויקוציטים של האורגניזם החי על ידי mycobacteria של חיסון BCG;
2) זיהום של פרות שנתן תגובה חיובית כפולה של טוברקולין;
3) תגובות לא ספציפיות לטוברקולין במתן תוך עורי.
בניסוי נבחרו בעלי חיים שלמים בריאים מבחינה קלינית, ששימשו כבקרת רקע. קבוצות נוצרו על ידי בעלי חיים שבהם התקבלו ערכים יציבים של פרמטרים המטולוגיים (מספר לויקוציטים,% תמוגה וכו') במחקר פי 3 של דגימות דם.
לפחות שלוש חיות נלקחו לכל קבוצת ניסוי. מכל חיה נלקח דם, שחולק לדגימות בקרה וניסויים. בדגימת הביקורת נוספה לדם תמיסת נתרן כלוריד פיזיולוגית 0.9% ובדגימות הדם הניסיוניות - טוברקולינים - PPD ליונקים, PPD לציפורים ו-CAM.
כדי למנוע שגיאות בתשומת הלב של טכניקת ספירת האלמנטים שנוצרו וכדי להשיג ערכים ממוצעים אמינים של ערכי מדדי תגובת הדם, כל דגימה (ביקורת וניסויית) נבדקה בשלוש חזרות.
ההליך לביצוע מחקר על שחפת RSLL
חקר בעלי חיים לשחפת מתבצע תחילה בשיטת השחפת באופן ובתנאים שנקבעו ב"בקרה ואבחון אפיזוטיות של שחפת בבעלי חיים ממינים שונים" (2).
PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לציפורים ואלרגן מורכב ממיקובקטריה לא טיפוסית (CAM) נלקחים כאבחון.
בעדרים ללא שחפת, בקבוצות ובבעלי חיים בודדים, שיטת המחקר העיקרית היא בדיקת שחפת תוך עורית. אם מתגלים בעלי חיים המגיבים לטוברקולין, בעלי חיים מגיבים חיוביים מבודדים, לובשים רצועה ונלקח מהם דם למחקר בתגובה של תמוגה של לויקוציטים ספציפיים (RSLL) עם האבחון הבא:
בבקר נלקח דם נוגד קרישה ב-RSLL
א) תמיסת נתרן כלורי מלוחים (דגימת בקרה);
ד) PPD-טוברקולין לציפורים.
יחד עם זאת, בעלי חיים שנתנו תוצאות חיוביות של מחקר RSLL עם PPD-טוברקולין עבור יונקים נחשבות לשחפת.
בחזירים נלקח דם נוגד קרישה ב-RSLL
א) תמיסת מלח פיזיולוגית;
ב) PPD-טוברקולין ליונקים;
ג) PPD-טוברקולין לציפורים.
חזירים החיוביים ל-PPD-tuberculin RLSL של יונקים נחשבים לשחפת, בעוד אלו החיוביים ל-PPD-tuberculin RLL של עופות נחשבים נגועים במיקובקטריה של עופות;
בכלבים ובבעלי חיים קטנים אחרים, RSLL נלקח
א) מי מלח פיזיולוגי;
ב) PPD-טוברקולין ליונקים;
בארנבות נלקח דם נוגד קרישה ב-RSLL
א) תמיסת נתרן כלורי מלוחים;
ב) PPD-טוברקולין ליונקים;
ג) PPD-טוברקולין לציפורים;
יחד עם זאת, ארנבות שנתנו RLLS חיובי עם PPD-טוברקולין ליונקים נחשבים נגועים במיני הבקר של הגורם הגורם לשחפת, וב-PPD-טוברקולין לעופות - הנגועים במיני העופות של הפתוגן, ב-CAM - מיקובקטריות לא טיפוסיות רגישות ללא שחפת.
מטרת ההמצאה היא להפחית את זמן הגילוי של הגורם הסיבתי לשחפת בבעלי חיים ולקבוע את סוג המיקובקטריה שגרמה לרגישות.
השגת מטרה זו מבוססת על התופעה של רכישה מיידית לאחר החדרת הפתוגן על ידי תאים חיסוניים בעלי רגישות מוגברת של הגוף, המתגלה בחשיפה חוזרת מחוץ לגוף של אותו אנטיגן ללוקוציטים בדם. רגישות יתר לאחר זיהום היא תופעה תאית שבה תאי האפקטור המקיימים אינטראקציה עם טוברקולין מחוץ לגוף הם לויקוציטים בדם רגישים, השונה מ-Delayed-type hypersensitivity (HRHT) של הגוף, המתפתחת בבעלי חיים 2-3 שבועות לאחר ההדבקה עם הגורם הסיבתי של שחפת.
יישום השיטה
השיטה לאבחון מוקדם של שחפת בבעלי חיים מתבצעת כדלקמן. בבאר הטבליה המכילה 0.05 מ"ל מתמיסת 3.8% של נתרן ציטראט (הפרין, טרילון B או כל נוגד קרישה אחר) מוסיפים 0.1 מ"ל מדם הבדיקה ומינון עבודה של טוברקולין בנפח 0.05 מ"ל (מבחנות) . את צינורות הבקרה ממלאים באותו נפח עם מי מלח פיזיולוגי ללא טוברקולין. הדם בבארות הטבליה מודגרת למשך שעתיים ב-t=37°C, תוך ניעור כל 30 דקות. לאחר מכן, מבארות הביקורת והניסוי, 0.02 מ"ל של דם מועבר לבאר עם 0.4 מ"ל נוזל טורק (תמיסה של 3-5% של חומצה אצטית, בגוון בכמה טיפות של תמיסת מתילן כחול) כדי להשמיד אריתרוציטים ולהכתים את גרעינים של לויקוציטים. מספר הלויקוציטים נספר (בתא Goryaev) בכל הבארות ושיעורי התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים מחושבים (באחוזים) לפי הנוסחה
כאשר L ל ו-L בערך - המספר המוחלט של לויקוציטים בדגימות הבקרה והניסוי. RSLL נחשב חיובי בשיעור של 10% או יותר.
דוגמה 1. מנת עבודה של טוברקולינים
ערכת ניסויים לקביעת מינון העבודה של טוברקולינים (היחס בין נוגדי קרישה, דם וטוברקולין)
בסכימת הניסויים לקביעת מינון העבודה של טוברקולינים, הוכח כי יחסי הנפח של נוגד הקרישה והדם בדגימות נשארו זהים, ומינוני הטוברקולינים גדלו: 0.05; 0.1 ו-0.15 מ"ל
| שולחן 1 קביעת מינון העבודה של טוברקולינים (ממוצע קבוצתי) עבור בקר וחזירים ב-RSLL |
||||||||||||
| מינון של אנטיגן | בקר | חזירים | ||||||||||
| מספר הלויקוציטים במהלך האינטראקציה "במבחנה" (10 9// ליטר) | RSLL ב-% | מספר הלויקוציטים במהלך האינטראקציה "במבחנה" (10 9 / ליטר) | RSLL ב-% | |||||||||
| פתרון פיזי | PPD, ml. | קאם | ציפורים | PPD, ml. | קאם | ציפורים | פיזי. רר | PPD ml. | ציפורים | PPD ml. | ציפורים | |
| 0,05 | 9,5 | 9,6 | 9,4 | 9,5 | -1% | 1% | 0 | 9,3 | 9,2 | 9,4 | 1% | 1% |
| 0,1 | 9,5 | 9,5 | 9,4 | 9,4 | 0% | 1% | 1 | 8,6 | 8,7 | 8,7 | 1% | 1% |
| 0,15 | 9,3 | 9,0 | 9,1 | 9,2 | 3% | 2% | 1 | 8,7 | 8,4 | 8,8 | 3% | 2% |
כפי שניתן לראות מטבלאות 1 ו-2, RSLL בכל הדגימות אינו עולה על 3% בבקר, חזירים, 7.4% בכלבים ו-2% בארנבות, לכן חסכוני יותר להשתמש במינון של 0.05 מ"ל טוברקולין כתרופה. מנת עבודה, כי RSLL שלה היה נמוך יותר מאשר במינון של 0.15. והערך שלו היה כמעט זהה עבור הסל"ד של יונקים, RTP של ציפורים ו-CA.
לפיכך, מינון העבודה של טוברקולינים נקבע לפי הערך של 0.05 מ"ל עבור RSLL.
דוגמה 2. ספציפיות ופעילות של RSLL בדם של שוורים שחוסנו עם BCG-1
בניסויים על שוורים בני 4-6 חודשים, נחקרו הספציפיות והפעילות של RSLL. לשם כך הוזרקו לבעלי החיים מיקובקטריות חיות מזן החיסון BCG-1 במינוני חיסון: 0.05 מ"ג, 0.15 מ"ג, 0.25 מ"ג ו-0.50 מ"ג (מנה אחת, שלוש, חמש, עשר), ולאחר מכן נבדק הדם. ב-RSLL ביום החיסון וכל 24 שעות למשך 10 ימים (240 שעות).
מספר הלויקוציטים בדגימות דם עם PPD ליונקים נע בין 8.2 ל-9.1·10 9/ליטר. ראוי לציין כי בדגימות דם משוורים שחוסנו עם BCG, בעת אינטראקציה עם DAA ליונקים, נרשמה ירידה במספר הלויקוציטים 48-120 שעות לאחר מתן החיסון בהשוואה לדגימות אחרות, אך מספרם היה בטווח של טווח נורמלי.
באותן שעות לאחר החדרת מיקובקטריות חיות לדגימות דם עם תמיסה פיסיולוגית PPD לציפורים ו-CAM, מספר הלויקוציטים היה כמעט זהה ונע בין 9.2 ל-11.3·10 9 /ליטר, כלומר. מצא לויקוציטוזיס, שהיה חזק יותר, כך היה מינון החיסון גדול יותר של חיסון מיקובקטריה. BCG-1.
כפי שניתן לראות מטבלה 3, בדגימות דם עם PPD ליונקים, RSLL חיובי זוהה כבר 24 שעות לאחר רגישות של בקר עם חיסון BCG, בדגימות דם עם PPD לציפורים ו-CAM, האינדיקטורים ל-RSLL היו שליליים.
| שולחן 3 מדדי RSLL בבקר שעבר רגישות עם חיסון BCG עם טוברקולינים: DAA ליונקים, DAA לציפורים ו-CAM |
||||||||||||
| זמן לאחר החיסון, ח | ||||||||||||
| אחד (0.05 מ"ג) | שלושה (0.15 מ"ג) | חמישה (0.25 מ"ג) | עשר (0.50 מ"ג) | |||||||||
| PPD ml. | PPD ו' | קאם | PPD ml. | PPD ו' | קאם | PPD ml. | PPD ו' | קאם | PPD ml. | PPD ו' | קאם | |
| ביום הרגישות | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1,2 | 0 | 1 | 0 | 0 | 1 |
| 24 | 14 | 0 | 1 | 14,3 | 0 | 0 | 16,2 | 1 | 1 | 34,3 | 1 | 1 |
| 48 | 27 | 0 | 0 | 32,5 | 0 | 0 | 28,6 | 1 | 0 | 48,3 | 0 | 0 |
| 72 | 23 | 0 | 1 | 25,5 | 0 | 1 | 21,6 | -1 | 1 | 41,3 | -1 | 1 |
| 96 | 17 | 0 | 0 | 10,8 | 0 | 0 | 19,5 | 0 | 0 | 35 | 0 | 1 |
| 120 | 13 | 0 | 0 | 5 | 1 | 0 | 10,3 | 0 | 0 | 24,2 | 0 | 1 |
| 144 | 7 | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 | 6,3 | 0 | 1 | 20 | 1 | 1 |
| 168 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 2,4 | 0 | 1 | 15,1 | 0 | 1 |
| 192 | 1 | 0 | 0 | 1,2 | 0 | 1 | 8,6 | 0 | 1 | |||
| 216 | 0 | 0 | 0 | 6 | -1 | 1 | ||||||
| 240 | 0 | 0 | 0 | |||||||||
| - PPD ו'. - PPD לציפורים |
התוצאות שהתקבלו של המחקרים מצביעות על הספציפיות של RLLS. ניתן להשתמש ב-RSLL כדי לזהות בעלי חיים שעברו רגישות על ידי מיקובקטריה עם אנטיגנים הקשורים לטוברקולין.
הפעילות של RSLL מאופיינת בעובדה שעם עלייה במינון של מיקובקטריות חיות של החיסון pcs. BCG-1 מ-0.05 מ"ג ל-0.50 מ"ג לחיה מעלה את אינדקס RSLL.
לפיכך, נמצא שכאשר חוסנו במנת חיסון בודדת של BCG-1, השיעור הגבוה ביותר של RLLS עם PPD ליונקים היה 48-72 שעות לאחר ההזרקה (27-23%)
בעת רגישות לבקר עם שלוש מנות חיסון, נצפים גם ערכי RSLL חיוביים בו זמנית. האחוז המרבי של תמוגה מגיע ל-32.5% לאחר כניסת חיסון BCG.
עם הכנסתן של חמש מנות חיסון לבעלי חיים, התמוגגת של לויקוציטים הייתה ארוכה יותר ונטתה לעלות במדד. מגמה זו נצפתה בבירור במיוחד כאשר ניתנו 10 מנות חיסון של חיסון BCG לבעלי חיים, כאשר תמוגה של לויקוציטים 48 שעות לאחר הזרקת החיסון הגיעה ל-48.3% והייתה ארוכה יותר, כלומר. עם עלייה במספר מנות החיסון, אחוז הלויקוציטים שעברו רגישות עלה והדבר השפיע על האינדיקטורים של RSLL (טבלה 3).
תוצאות מדדי ה-RSLL, בהתאם למספר מנות החיסון של חיסון BCG-1, מצביעות על פעילות בולטת של ה-RSLL.
לפיכך, השיעור היומי הממוצע של RSLL עם PPD עבור יונקים במשך 120 שעות עם מנת חיסון אחת של mycobacterium BCG היה 18.8%, שלושה - 20.8%, חמישה - 19.24% ועשר - 32.2%. עם עשר מנות חיסון של BCG, השיעורים החיוביים של RLLS עם DAA ליונקים מתארכים לשבעה ימים.
ביצעו מחקרים עם זריקות של חיסון חיסון מיקובקטריה. BCG איפשר לקבוע את הספציפיות והפעילות של RSLL, הנחוצה לאבחנה מבדלת של תגובות ספציפיות ולא ספציפיות לטוברקולין.
דוגמה 3. מחקר לקביעת רגישות בחזירים הנגרמת על ידי החדרת מיקובקטריות חיות של חתיכת החיסון. BCG-1
בוצעו ניסויים על חזרזירים נגמלים משלוש קבוצות, אשר הוזרקו להם מנה אחת, שלוש וחמש מנות חיסון של חיסון BCG. מספר הלויקוציטים בחזירים רגישים עם מנה בודדת של חיסון BCG עם PPD של יונקים נע בין 7.2 ל-8.8 10 9/ליטר, ועם PPD מלוחים לציפורים, התנודות נעו בין 8.7 ל-14.3 10 9/ליטר. המספר הגבוה ביותר של לויקוציטים היה 48 שעות לאחר החיסון. אותו דפוס צוין עם הצגת שלוש וחמש מנות חיסון של חיסון BCG, כאשר מספר הלויקוציטים עם מי מלח ו-PPD עבור ציפורים לאחר 48 שעות הגיע ל-15.4 ו-18.6·10 9 /ליטר, בהתאמה. כתוצאה מכך, שיעור RSLL עם DAA עבור יונקים בחזירים שעברו רגישות לאחר 24 שעות עם מנת חיסון אחת היה 26.9%, שלושה - 28.9%, 5 - 38.1%. השיעור הגבוה ביותר של RSLL היה 48-72 שעות לאחר הרגישות והסתכם ב-46.6-49.7%; 41.5-46.7%; 49.7-55.4% לפי מינונים (טבלה 4).
| טבלה 4 מדדי RSLL בחזירים שעברו רגישות עם חיסון BCG עם טוברקולינים: DAA ליונקים, DAA לציפורים |
||||||
| זמן לאחר החיסון, ח | מספר מנות החיסון של חיסון BCG | |||||
| אחד (0.05 מ"ג) | שלושה (0.15 מ"ג) | חמישה (0.25 מ"ג) | ||||
| PPD ml. | ציפורים | PPD ml. | ציפורים | PPD ml. | ציפורים | |
| ביום הרגישות | -1 | 0 | 0,9≈1 | 0 | 0 | 1 |
| 24 | 26,9 | 1 | 28,9 | 1 | 38,1 | 0 |
| 48 | 49,65 | 1 | 46,7 | 1 | 55,4 | 0 |
| 72 | 46,61 | 0 | 41,5 | 1 | 49,7 | 1 |
| 96 | 34,45 | 0 | 26,9 | 1 | 19 | 0 |
| 120 | 17,82 | 0 | 20,9 | 1 | 13 | 0 |
| 144 | 1,15 | -1 | 7,8 | 0 | 6,4 | 1 |
| 168 | 0 | 0 | 1,8 | 1 | 1,8 | -1 |
| 192 | 0 | 1 | ||||
| - PPD ml. - PPD ליונקים | ||||||
| - PPD ו'. - PPD לציפורים |
בחזרזירים מחוסנים נמצאו אינדיקטורים חיוביים ל-RSLL 24-120 שעות לאחר מתן מנה אחת, שלוש וחמש מנות חיסון של חיסון BCG.
RSLL עם DPD עבור ציפורים היה שלילי, מה שמאשר את הספציפיות של RSL עם DPD עבור יונקים.
דוגמה 4. מחקר לקביעת רגישות בכלבים הנגרמת כתוצאה מהחדרת חלקי חיסון חיים של מיקובקטריה. BCG-1
בניסויים על כלבים לאחר הכנסת חיסון אחת, שלוש, חמש מנות חיסון של חיסון BCG, נמצא כי לאחר 24-72 שעות, כאשר דם קיים אינטראקציה עם מי מלח, מספר הלויקוציטים היה 5.2-6.2 10 9/ליטר, ועם PPD ליונקים 3 .4-4.7 10 9 /l, כלומר. לוקופניה צוינה.
מספר הלויקוציטים עם מי מלח פיזיולוגי גדל בהשוואה לנורמה פי שניים או יותר. כתוצאה מכך, האינדיקטורים של RSLL הסתכמו ב-14-25% עם מנה אחת, 20.8-60.6% עם שלוש, ו-22-68% עם חמש. השיעור הגבוה ביותר של RSLL היה 48 שעות לאחר החיסון. ערכי RSLL חיוביים צוינו במנה אחת לאחר 24-96 שעות, בשלושה לאחר 24-120 שעות, בחמישה לאחר 24-240 שעות, כלומר. עם עלייה במינון החיסון, משך הרגישות של לויקוציטים גדל והפעילות עלתה - אינדיקטורים של RSLL (טבלה 5).
| טבלה 5 מדדי RSLL בכלבים וארנבות שעברו רגישות עם חיסון BCG |
|||||||||
| זמן לאחר החיסון (שעה) | מספר מנות החיסון של חיסון BCG | ||||||||
| כלבים | ארנבים | ||||||||
| אחד (0.05 מ"ג) | שלוש (0.15 מ"ג) | חמש (0.25 מ"ג) | חמש (0.25 מ"ג) | עשר (0.50 מ"ג) | |||||
| PPD ml. | PPD ml. | PPD ml. | PPD ml. | ציפורים | קאם | PPD ml. | ציפורים | קאם | |
| ביום הרגישות | 1 | 0 | 0,7 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 | 1 |
| 24 | 24 | 45,9 | 60,5 | 58 | 1 | 0 | 56 | 1 | 0 |
| 48 | 25 | 60,6 | 68 | 71 | 0 | 0 | 72 | 0 | 0 |
| 72 | 23 | 50 | 63,8 | 71 | 0 | 1 | 41 | 1 | 0 |
| 96 | 14 | 43,6 | 62,6 | 36 | 1 | 0 | 26 | 1 | 0 |
| 120 | 1,9 | 20,8 | 57,4 | 2 | 0 | 1 | 30 | 0 | 1 |
| 144 | 1 | 3,4 | 54,9 | 0 | 1 | 0 | 25 | 0 | 0 |
| 168 | 1 | 1 | 41,2 | 0 | 0 | 0 | 19 | 0 | 1 |
| 192 | 0 | 0 | 0 | 0 | 17 | 1 | 1 | ||
| 216 | 32 | 0 | 0 | 1 | 17 | 0 | 0 | ||
| 240 | 22 | 0 | 1 | 0 | 13,7 | 0 | 0 | ||
| 264 | 0 | 0 | 1 | 1 | 16,0 | 1 | 0 | ||
| 288 | 1,4 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | ||
| 336 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | |||
| 408 | 23 | 1 | 1 | ||||||
| 672 | 1 | 0 | 0 | ||||||
| - PPD ml. - PPD ליונקים | |||||||||
| - PPD ו'. - PPD לציפורים |
דוגמה 5. מחקר לקביעת רגישות בארנבות הנגרמת על ידי החדרת מיקובקטריות חיות של חתיכת החיסון. BCG-1
כאשר חיסנו ארנבות בחמש מנות חיסון של חיסון BCG, התכולה הנמוכה ביותר של לויקוציטים בדם בעת אינטראקציה עם PPD עבור יונקים נמצאה לאחר 24 ו-72 שעות (4.6-4.7 10 9 /ליטר), ובעשר מנות, המספר הקטן ביותר של לויקוציטים בעת אינטראקציה עם PPD עבור יונקים היה לאחר 24 שעות (3.8 10 9 /ליטר) ו-48 שעות (4.7 10 9 /ליטר). המוזרות היא שבמהלך האינטראקציה של דם עם PPD ליונקים לאחר 72-264 שעות ו-408 שעות לאחר החיסון, מספר הלויקוציטים היה גבוה פי כמה מהנורמה, והסתכם ב-11-28.5 10 9/ליטר, כלומר. לוקוציטוזיס צוין במקום לויקופניה. ובמקביל, מספר הלויקוציטים בדגימות עם מי מלח פיזיולוגי (דגימות בקרה) עלה משמעותית על מספרם בדגימות ניסוי והסתכם ב-25.0-38.7 10 9 /ליטר. נקבע כי על רקע ליקוציטוזיס הנגרמת כתוצאה מהחדרת מינונים גדולים של חיסון BCG, RSLL בארנבות היה חיובי ונע בין 13.7 ל-72% (טבלה 5).
דוגמה 6. בדיקת דגימות דם של פרות RSLL שנתנו תגובה חיובית כפולה לטוברקולין
אבחון תגובות שחפת של תמוגה ספציפית של לויקוציטים RSLL בתנאי ייצור בוצע ב-SEC "Dawn" של אזור Matveevo-Kurgan.
באוקטובר 2006, שבע מתוך 198 הפרות שנבדקו הגיבו בצורה חיובית לטוברקולין בחווה שהצליחה בעבר. עם שחפת חוזרת ונשנית לאחר 45 יום, הם שוב נתנו תגובה חיובית. מתן תוך עורי של טוברקולין הביא להיווצרות של נפיחויות מפוזרות בעקביות עדנית, קפל העור התעבה ב-5-10 מ"מ.
לפני השחיטה, פרות דיממו לצורך בדיקה בתגובה של תמוגה של לויקוציטים ספציפיים (RSLL). תוצאות מחקרים על מספר הלויקוציטים ואינדיקטורים של RSLL בפרות עם תגובה בולטת לטוברקולין מוצגות בטבלה 6.
| טבלה 6 RSLL ונתונים פתואנטומיים בפרות שהגיבו בחיוב לטוברקולין |
|||||||
| מספרי מלאי של פרות | מספר הלויקוציטים ואינדקס הדם RSLL בעת אינטראקציה עם | ||||||
| פִיסִיוֹלוֹגִי פִּתָרוֹן | PPD עבור ml. | PPD עבור ציפורים | קאם | ||||
| מספר אגמים | מספר אגמים | RSLL% | מספר אגמים | RSLL% | מספר אגמים | RSLL% | |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| 6827 | 7,7 | 5,5 | 29 | 7,6 | 1 | 7,55 | 2 |
| 071 | 11,0 | 7,1 | 36 | 11,0 | 0 | 10,5 | 1 |
| 4006 | 5,05 | 5,0 | 1 | 5,0 | 1 | 5,05 | 1 |
| 4018 | 9,5 | 2,75 | 71 | 9,35 | 2 | 9,4 | 1 |
| 162 | 5,0 | 4,8 | 4 | 4,9 | 1 | 4,9 | 1 |
| 109 | 5,0 | 4,9 | 2 | 5,0 | 0 | 4,9 | 1 |
| 148 | 5,75 | 4,2 | 27 | 5,7 | 1 | 5,7 | 1 |
כפי שניתן לראות מטבלה 6, מתוך שבע הפרות שהגיבו למתן תוך עורי של טוברקולין, רק ארבע מה-RSLL היו חיוביות (מלאי מס' 6827; מס' 071; מס' 4018; מס' 148) כאשר דגימות דם קיימו אינטראקציה עם PPD-טוברקולין ליונקים. דגימות דם עם PPD-טוברקולין לציפורים ו-CAM נתנו אינדיקטורים שליליים של RSLL.
בדיקה וטרינרית של שחיטת הבקרה והאבחון של פרות שהגיבו בצורה חיובית לטוברקולין הראתה שמתוך ארבע בעלי חיים עם אינדיקטורים חיוביים ל-RLLS, רק בשניים היו שינויים בבלוטות הלימפה האופייניות לשחפת: בפגר אחד בתת-הלוע ובלוע, וב- בלוטות הלימפה המדיסטינליות והמזנטריות השניות. בפגרים של שתי פרות עם תגובה חיובית לבדיקת טוברקולין ואינדיקטורים חיוביים ל-RSLL, שינויים פתואנטומיים האופייניים לשחפת לא זוהו חזותית באיברים הפנימיים ובלוטות הלימפה. זה כנראה בגלל ההדבקה האחרונה של בעלי חיים בגורם הסיבתי של שחפת, ועדיין לא נוצרו שינויים פתולוגיים. בנוסף, במהלך הביקורת והאבחון שלאחר המוות, נמצא כי שתי פרות בעגל עמוק (7-8.5 חודשי הריון) ואחת עם אנדומטריטיס חריפה עם זיהום סטרפטוקוקלי נתנו תגובות חיוביות למתן תוך עורי של טוברקולין. שינויים פתולוגיים בפרות שהגיבו בחיוב לטוברקולין מוצגים בטבלה 7.
| טבלה 7 שינויים פתולוגיים ואנטומיים בפרות שהגיבו בחיוב לטוברקולין |
|
| מספר פרות | שינויים פתולוגיים |
| 6827 | לא נמצאו שינויים פתולוגיים באיברים הפנימיים ובבלוטות הלימפה. |
| 071 | בלוטת הלימפה העל-עורקית מונחת יתר על המידה, לבלוטת הלימפה הכבדית יש מוקדי חלב על החתך, לא נמצאו שינויים פתולוגיים אחרים באיברים הפנימיים ובבלוטות הלימפה. |
| 4006 | אנדומטריטיס לאחר לידה, שינויים פתולוגיים אחרים באיברים הפנימיים ובלוטות הלימפה לא זוהו |
| 4018 | לבלוטת הלימפה השמאלית התת-למיתית שעל החתך היו מוקדים נמקיים אפורים-לבנים, לא נמצאו שינויים פתולוגיים אחרים באיברים הפנימיים ובבלוטות הלימפה |
| 162 | שינויים אנטומיים פתולוגיים באיברים הפנימיים ובלוטות הלימפה לא זוהו, הריון 7 חודשים |
| 109 | שינויים אנטומיים פתולוגיים באיברים הפנימיים ובלוטות הלימפה לא זוהו, הריון 7.5 חודשים |
| 148 | לא נמצאו שינויים פתולוגיים באיברים הפנימיים ובלוטות הלימפה, הריון 8 חודשים |
בדיקת הבקרה והאבחון של פרות שנשחטו שהגיבו בחיוב לטוברקולין הראו שבארבעה מקרים מתוך שבעה, בדיקת טוברקולין חיובית חופפת ל-RSLL חיובי (B=4:7=0.57); במקרה אחד (B=1:7=0.14) של שלוש פרות עם הריון של 7-8 חודשים. בדיקת טוברקולין חיובית עלתה בקנה אחד עם עומק (8 חודשים; B=1:3=0.33); במקרה אחד - עם זיהום סטרפטוקוקלי (אנדומטריטיס חריפה; B=1:7=0.14).
RSLL בשני מקרים מתוך ארבעה אינדיקטורים חיוביים עלו בקנה אחד עם זיהוי שינויים פתואנטומיים האופייניים לשחפת (B=2:4=0.5), ובשני מקרים מתוך ארבעה (B=2:4=0.5) נתונים פתואנטומיים חזותיים לא מצאו את זה. נמצא כי זה לא יכול להיות הבסיס להחרגת זיהום מוקדם עם mycobacteria, כאשר שינויים פתולוגיים עדיין לא נוצרו.
סִפְרוּת
1. אבחון שחפת. // V.P.Urban, M.A.Safin, A.A.Sidorchuk, M.V.Kharitonov, R.S.Sigbatulin, F.G. אקברוב. // סדנה בנושא אפיזוטולוגיה ומחלות זיהומיות עם תברואה וטרינרית. ספר לימוד. מוסקבה: קולוס, 2003, עמ' 82-86.
2. בקרה אפיזוטולוגית ואבחון שחפת בבעלי חיים ממינים שונים. מניעה ובקרה של מחלות זיהומיות הנפוצות לבני אדם ובעלי חיים. אוסף חוקים סניטריים וטרינרים. אד. רשמי. Goskomsanepidnadzor מרוסיה. משרד החקלאות של רוסיה. מוסקבה. 1996, עמ' 164-167.
3. הנחיות לעריכת בדיקה בו זמנית באמצעות טוברקולין ואלרגן מורכב ממיקובקטריה לא טיפוסית (AM) באבחון שחפת בבעלי חיים. חקיקה וטרינרית. כרך 3. מוסקבה: קולוס, 1981, עמ' 220-224.
4. שרוב א.נ. מדריך שחפת "הכנות וטרינריות" (בעריכת דוקטור למדעי הביולוגיה D.F. Osidze). מוסקבה: קולוס, 1981, עמ' 192-201.
1. שיטה לאבחון מוקדם של שחפת בבעלי חיים, לרבות זיהוי בעלי חיים מגיבים לשחפת בחוות ובחצרות משגשגות על ידי בדיקות אלרגיות מתוכננות, המאופיינת בכך שמבעלי חיים המגיבים חיובית לשחפת, נבדק הדם על ידי תגובת תמוגה הספציפית של לויקוציטים (RSLL) באמצעות PPD tuberculins כאבחנה ליונקים, PPD לציפורים ו-KAM.
2. השיטה לאבחון מוקדם של שחפת לפי תביעה 1, המאופיינת בכך שבאבחון שחפת בבקר מתבצע RSLL עם PPD-טוברקולין ליונקים, PPD-טוברקולין לעופות ואלרגן קומפלקס KAM ממיקובקטריות לא טיפוסיות.
3. שיטה לאבחון מוקדם של שחפת לפי תביעה 1, המאופיינת בכך שבעת אבחון שחפת בחזירים מבצעים RSLL עם PPD-טוברקולין ליונקים ו-PPD-טוברקולין לציפורים.
// 2341288 // 2443428
ההמצאה מתייחסת לתחום המיקרוביולוגיה הווטרינרית
ההמצאה מתייחסת לתחום הביוטכנולוגיה
ההמצאה מתייחסת לתחום אבחון מעבדה וניתן להשתמש בה לאבחון אקספרס של מיקסומטוזיס בארנבות. מהות השיטה נעוצה בעובדה שתגובת לויקוציטים ספציפית (RSLL) מתבצעת באמצעות חיסון אנטי-מיקסומטי מזן B-82, מחושב אינדקס RSLL, ובערך של 10% או יותר, מיקסומטוזיס הוא מאובחן. התוצאה הטכנית היא פיתוח שיטה המאפשרת אבחון מואץ בשלב מוקדם של המחלה, וכן לזהות את המהלך האסימפטומטי של מיקסומטוזיס. 1 ו.פ. f-ly, 2 כרטיסיות.
ההמצאה מתייחסת לרפואה וטרינרית, בפרט לשיטות ביטוי לאבחון מיקסומטוזיס.
קיימות שיטות שונות לאבחון מיקסומטוזיס של ארנב, לרבות זיהוי אנטיגנים בעור הפגוע באמצעות נוגדנים פלואורסצנטיים, זיהוי של נוגדנים, מחזורי קומפלקסים חיסונים באמצעות תגובות קיבוע משלים, תגובות אימונודיפוזיה, תגובות נטרול ובדיקת אנזים אימונו (Gunenko V.V. et al. O) אבחון ומניעה של ארנב מיקסומטוזיס מדע וטרינרי, 1987, כרך 12, עמ' 44-45). החסרונות של השיטות המוכרות הם המורכבות, זמינות הציוד היקר, חוסר היכולת לקבוע את נוכחות הנגיף בימים הראשונים לאחר ההדבקה.
מטרת ההמצאה היא להפחית את זמן הגילוי באורגניזם החי של הפתוגן של מיקסומטוזיס. גילוי אפשרי החל משלוש עד שש שעות לאחר ההדבקה.
השגת מטרה זו מבוססת על תופעת הפעלה מיידית, רגישות יתר ומתח יתר של תאי דם בעלי יכולת חיסונית - לויקוציטים - לחשיפה חוזרת ונשנית מחוץ לגוף של אותו אנטיגן שחדר קודם לכן לגוף.
השיטה לאבחון myxomatosis בארנבות היא כדלקמן. דגימת דם נלקחת מחיית הניסוי. במבחנה ניסיונית המכילה 0.05 מ"ל של תמיסת נתרן ציטראט 3.8%, 0.1 מ"ל מדם הבדיקה ומינון עבודה של אנטיגן - 0.05 מ"ל של חיסון תרבית חי יבשה נגד מיקסומטוזיס של ארנבות מהזן "B-82" ב. דילול של מנת חיסון אחת לכל מ"ל של תמיסת מלח. צינור הבקרה ממולא באותו נפח, אבל תמיסת המלח היא ללא אנטיגן.
הצינורות מודגרים בתרמוסטט למשך שעתיים בטמפרטורה של +37 מעלות צלזיוס, מטלטלים כל 30 דקות. לאחר מכן, כדי להשמיד אריתרוציטים מהמבחנות והמבחנות, 0.02 מ"ל דם מועבר למבחנות עם 0.4 מ"ל של תמיסה 3% של חומצה אצטית וגוון בסגול ג'נטיאן. מספר הלויקוציטים בשתי הדגימות בתא Goryaev נספר וקצב התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים מחושב (באחוזים) לפי הנוסחה:
RSLL נחשב חיובי בשיעור של 10% או יותר.
במקרה של לויקוציטוזיס חמור, כאשר קשה לספור לויקוציטים, דגימות הבקרה והניסוי הנחקרות מדוללות בנוסף עם מי מלח ביחס של 1:1 או 1:2.
עשרה ארנבות בריאים נבחרו לקביעת מינון העבודה של האנטיגן (חיסון נגד מיקסומטוזיס של ארנבות, תרבית חיה יבשה מהזן "B-82"). דם מכל ארנב חולק לשלוש דגימות. שלוש צינורות עם 0.05 מ"ל של תמיסת נתרן ציטראט 3% מולאו ב-0.1 מ"ל מדם הבדיקה. לאחר מכן, הוכנס לצינור הראשון 0.05 מ"ל מהאנטיגן - חיסון תרבותי חי יבש נגד מיקסומטוזיס של ארנבות מזן "B-82" בדילול של ארבע מנות חיסון של התרופה לכל מ"ל של תמיסת מלח, 0.05 מ"ל של התרופה. חיסון בדילול של שתי מנות חיסון לתוך השפופרת השנייה עבור מ"ל אחד של תמיסת מלח, בשלישית - 0.05 מ"ל של החיסון בדילול, מנת חיסון אחת לכל מ"ל של תמיסת מלח.
הצינורות הודגרו במשך שעתיים ב-+37 מעלות צלזיוס, תוך ניעור כל 30 דקות. לאחר מכן, כדי להשמיד אריתרוציטים מהמבחנות והמבחנות, 0.02 מ"ל דם הועבר למבחנות עם 0.4 מ"ל של תמיסה 3% של חומצה אצטית וגוון בסגול ג'נטיאן. לאחר מכן, ספרנו את מספר הלויקוציטים בכל המבחנות בתא Goryaev וחישבנו את קצב התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים (באחוזים) לפי הנוסחה:
כאשר Lk ו-Lo הם המספר המוחלט של לויקוציטים בדגימות הבקרה והניסוי.
RSLL עבור ארנבות בריאות צריך להיות מתחת ל-10%. התוצאות מוצגות בטבלה. אחד.
כפי שניתן לראות מטבלה 1, RSLL בכל הדגימות לא עלה על 10%, לכן, רציונלי יותר לקחת דילול של החיסון נגד מיקסומטוזיס ארנבת, חיסון תרבית חיה יבשה מזן B-82, בשיעור של מנת חיסון אחת למ"ל של מי מלח פיזיולוגי, כמנת עבודה של האנטיגן.
לאבחון רטרוספקטיבי של מיקסומטוזיס בחווה לא מתפקדת, נבדק דם של ארנבות.
בהתבסס על תוצאות המצב הקליני של הארנבות, נוצרו 4 קבוצות של בעלי חיים, 5 ראשים כל אחת (טבלה 2).
הקבוצה הראשונה - ארנבות נושאות וירוסים עם צורה סמויה של מיקסומטוזיס - היו במגע עם חולים, אך ללא שינויים קליניים. לאנשים היו אזורים חסרי שיער גלויים, המעידים על בלוטות מיקסומה בעבר.
בקבוצה השנייה - חולים קלינית ב-myxomatosis - נבחרו ארנבות חולות עם בצקת של העפעפיים, בסיסי האפרכסות, אזור אנוגנטי, גב, עם תצורות נודולריות מוגבלות בעור האוזניים, הראש והעפעפיים.
ארנבות מהקבוצה השלישית חוסנו על מנת לבסס את הדינמיקה של תמוגה לויקוציטים מרגע החדרת האנטיגן המיקסומטי לגוף החי, ולזהות את מאפייני התגובה של תמוגה לויקוציטים במחוסנים בהשוואה לנשאי וירוסים.
ארנבות מהקבוצה הרביעית בריאים מבחינה קלינית ואינם נגועים בנגיף ה-Myxomatosis, הם משמשים כשליטה.
בבעלי חיים מכל הקבוצות, מדד התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים נקבע. לשם כך נלקחו דגימות דם מהחיות. כל דגימה חולקה לניסוי ובקרה. במבחנה ניסיונית המכילה 0.05 מ"ל של תמיסת נתרן ציטראט 3.8%, 0.1 מ"ל מדם הבדיקה ומינון עבודה של אנטיגן - 0.05 מ"ל של חיסון תרבית חי יבשה נגד מיקסומטוזיס של ארנבות מהזן "B-82" ב. דילול של מנת חיסון אחת לכל מ"ל של תמיסת מלח. צינור הבקרה היה מלא באותו נפח, אבל תמיסת המלח מולאה ללא אנטיגן.
הצינורות הודגרו בתרמוסטט למשך שעתיים בטמפרטורה של +37 מעלות צלזיוס, תוך ניעור כל 30 דקות. לאחר מכן, כדי להשמיד אריתרוציטים מהמבחנות והמבחנות, 0.02 מ"ל דם הועבר למבחנות עם 0.4 מ"ל של תמיסה 3% של חומצה אצטית וגוון בסגול ג'נטיאן. ספרנו את מספר הלויקוציטים בשתי הדגימות בתא Goryaev וחישבנו את קצב התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים (באחוזים) לפי הנוסחה:
כאשר Lk ו-Lo הם המספר המוחלט של לויקוציטים בדגימות הבקרה והניסוי.
RSLL נחשב חיובי בשיעור של 10% או יותר.
התוצאות מוצגות בטבלה 2.
| שולחן 2 מדדי RSLL בארנבות עם מיקסומטוזיס, מחוסנים ובריאים |
||||
| קבוצות של שפני ניסיונות | RSLL, ב-% | משך התצפיות בימים | ירידה ב-% תמוגה בממוצע ליום (%) | |
| בתחילת הלימוד | בסוף המחקר | |||
| 1. צורה נסתרת, נשאי וירוסים. | 30-42 | 29-38 | 10 | 0,25 |
| 2. חולה קליני ב-myxomatosis | 62-77 | 60-71 | 10 | 0,40 |
| 3. מחוסן בחיסון מיקסומטי | 29-36 | 21-28 | 10 | 0,80 |
| 4. פקדים שלמים | 4-9 | 4-9 | 10 | 0 |
כפי שניתן לראות מטבלה 2, שיעור הירידה באחוז תמוגה של לויקוציטים בארנבות מחוסנות גדול פי 3.2 מאשר בארנבות נושאות וירוסים עם צורה סמויה של מיקסומטוזיס, ופי 2 מאשר בחולים קליניים. בחולים עם הצורה הקלינית של מיקסומטוזיס, אחוז תמוגה של לויקוציטים לאורך כל תקופת התצפית היה גבוה מאוד והגיע ל-60-77%.
בקבוצת הארנבונים המחוסנים נמצאה ביום השלישי עלייה חדה באחוז תמוגה של לויקוציטים. זוהי עדות לכך שהחיסון היבש בתרבית חיה נגד מיקסומטוזיס של ארנבות מזן "B-82" גורם למצב של רגישות של לויקוציטים בדם (האחראים לחסינות) לפני היווצרות נוגדנים ספציפיים בגוף.
תמוגה של לויקוציטים בארנבות שלמות לא עלה על 10% לאורך כל תקופת הניסוי; היה בטווח התקין.
המחקר של RSLL מאפשר אבחון מהלך אסימפטומטי של מיקסומטוזיס.
תְבִיעָה
1. שיטה לאבחון מיקסומטוזיס של ארנב, המאופיינת בכך שתגובת לויקוציטים ספציפית (RSLL) מתבצעת באמצעות חיסון אנטי מיקסומטי מזן B-82, מחושב אינדקס RSLL ומאובחנת מיקסומטוזיס בערכו של 10% או יותר.
2. שיטה לאבחון מיקסומטוזיס של ארנבת לפי תביעה 1, המאופיינת בכך שבמקרה של לויקוציטוזיס, דגימות דם מדוללות בתמיסת מלח ביחס של 1:1 או 1:2 לפני ספירת הלויקוציטים.
דרישות
לפיתוח מחקרים ניסיוניים כדי להצדיק את הריכוזים המקסימליים המותרים של אלרגנים כימיים תעשייתיים באוויר של אזור העבודה והאטמוספירה
הוראות מתודולוגיות
MU 1.1.578-96
1. פותח על ידי מכון המחקר לרפואה תעסוקתית של האקדמיה הרוסית למדעי הרפואה (Dueva L.L., Alekseeva O.G.), מכון המחקר לאקולוגיה אנושית והיגיינה סביבתית של האקדמיה הרוסית למדעי הרפואה (Pinigin M.A., Tepikina L.A.), Institute of אימונולוגיה של משרד הבריאות והתעשייה הרפואית של רוסיה (Chernousov A.D.), המכון המרכזי לדרמטונרולוגי של משרד הבריאות והתעשייה הרפואית של רוסיה (Umerov Zh.G.), מכון המחקר של סנט פטרבורג לבריאות תעסוקתית ומחלות תעסוקתיות של משרד הבריאות והתעשייה הרפואית של רוסיה (Sidorin G.I., Martinson T.G.), מכון מחקר סניטרי והיגייני בלארוס (Shevlyakov V.V.), מכון המחקר של חרקוב לבריאות תעסוקתית ומחלות תעסוקתיות (Vasilenko N.M.), מעבדת המחקר המרכזית של האקדמיה הרפואית הלטבית (Ivanova I.A.).
2. אושר והוכנס לתוקף על ידי סגן יו"ר ראשון של הוועדה הממלכתית לפיקוח תברואתי ואפידמיולוגי של רוסיה - סגן רופא המדינה התברואתי הראשי של הפדרציה הרוסית S. V. Semenov ב-21 באוקטובר 1996.
3. הוכנס במקום ההמלצות המתודולוגיות "ארגון מחקרים על ויסות היגייני של אלרגנים תעשייתיים באוויר אזור העבודה" (1980) ובנוסף ל"הנחיות זמניות לביסוס הריכוזים המרביים המותרים של מזהמים באוויר האטמוספרי. של אזורים מיושבים" (1989).
^ 1 אזור שימוש
ההנחיות מיועדות לטוקסיקולוגים העוסקים בביסוס תקני ההיגיינה לחומרים מזיקים באוויר אזור העבודה והאטמוספרה. הנחיות מוקדשות לקביעת סטנדרטים היגייניים לאלרגנים כימיים תעשייתיים באוויר אזור העבודה והאווירה. יותר מעשור של תרגול בביסוס תקני היגיינה (מגבלות ריכוז מקסימליות והנעלה) לאלרגנים תעשייתיים באוויר אישר את יעילותו של אמצעי זה במניעת התפתחות מחלות אלרגיות בקרב עובדים בתעשיות אלרגניות ואוכלוסיית אזורי התעשייה. הנחיות אלו פותחו תוך התחשבות בנתונים שהצטברו במהלך השנים על התיאוריה והפרקטיקה של אלרגולוגיה טוקסיקולוגית. במקביל, ניתנת גישה מאוחדת להצדקת תקני היגייני לאלרגנים כימיים תעשייתיים באוויר של אזור העבודה והאווירה.
הערכת סיכון אלרגיה בעת קביעת סטנדרטים היגייניים לתרכובות כימיות ומוצרים מורכבים המבוססים עליהם מתבצעת בהכרח במקרים הבאים:
בעת קיצוב תרכובות כימיות חדשות השייכות למעמדות כימיים שלא נחקרו במונחים של אלרגולוגיה;
בעת קיצוב תרכובות כימיות ומוצרים מורכבים השייכים למעמדות כימיים המכילים אלרגנים ידועים כבר, או בעלי אנלוגים כימיים בעלי אפקט רגיש;
אם יש תלונות אלרגיות או סימנים קליניים של נגעים אלרגיים אצל אנשים שיש להם מגע עם תרכובת או מוצר כימי זה.
^ 2. תכנית מערך המחקר
המחקר מתבצע בשני שלבים. מטרת השלב הראשון היא לזהות את התכונות האלרגניות של החומר הנבדק, השלב השני הוא להצדיק את ערכו של התקן ההיגייני (ראה תרשים).
בשלב הראשון של המחקר, נעשה שימוש בשיטות של רגישות מפורשת של שפני ניסיונות ועכברים.
^ תכנית מערך המחקר
שלב I - זיהוי תכונות אלרגניות
שלב ב' - הצדקת ערך התקן הסניטרי
א נורמליזציה באנלוגיה
^ ב. קיצוב לפי הסכימה המואצת והשלמה
כאשר לומדים תרכובות כימיות פשוטות, מומלץ להשתמש בשיטה של רגישות של חזירי ניסיונות תוך עורית לאזור האוזן ו/או רבייה של רגישות יתר מסוג מושהה (להלן מכונה DTH) בעכברים.
הרגישות של חזירי ניסיונות, כמין הרגיש ביותר של חיות מעבדה לפעולת אלרגנים כימיים, מאפשרת להעריך את הפעילות האלרגנית של החומר הנחקר. לשם כך, בעלי חיים עוברים רגישות על ידי החדרת שתי מנות של החומר לאזור האוזן: 50 ו-200 מיקרוגרם/חיה. רבייה של HRT בעכברים מאפשרת לחשוף את התכונות האלרגניות של לא רק חומרים מסיסים מסיסים, אלא גם בלתי מסיסים במים, עם פעילות אלרגנית חזקה או מתונה. מכיוון שהחדרת אלרגנים חלשים לעכברים אינה מתבטאת בפיתוח של HRT מוגדר היטב, אם התוצאה של ניסוי זה על עכברים היא שלילית או מפוקפקת, חזירי ניסיונות צריכים לעבור רגישות נוספת במינון של 200 מיקרוגרם/חיה. יחד עם זאת, כמו גם עבור חומרים בעלי פעילות אלרגנית חלשה לכאורה, השימוש במינון רגישות גבוה עוד יותר של 500 מיקרוגרם/חיה אינו נכלל. כאשר לומדים מוצרים פולימריים מורכבים ולא נרפאים, מתבצעת רגישות משולבת של חזירי ניסיונות (לעור האוזן ובנוסף בצורה אפקוטנית) ו/או משתמשים בשיטה להתרבות HRT בעכברים.
בנוסף לשיטות מחקר חובה אלו של השלב הראשון, ניתן להשתמש גם בשיטות אחרות של רגישות לבעלי חיים על פי האינדיקציות הרלוונטיות. לכן, במחקר של תרכובות ומוצרים כימיים, בעיקר דביקים וצמיגים, המזהמים את עורם של עובדים, מומלץ לבדוק את האפשרות לפתח אלרגיות מגע בשיטה של יישומים אפקוטניים מרובים על חזירי ים. לאבק תעשייתי בלתי מסיס במים, כבר בשלב הראשון של המחקר, ניתן ליישם את השיטה של רגישות תוך קנה הנשימה של חולדות לבנות.
אם המאפיינים האלרגניים של החומר הנחקר לא מתגלים בשלב הראשון של המחקר, אז הוא מנורמל כחומר של פעולה רעילה כללית. אם לפחות אחת משיטות הרגישות אפשרה לזהות את התכונות האלרגניות של החומר הנחקר, אזי יש לבצע את השלב השני של המחקר.
שלב II של המחקר, בהתאם לשיטת הרגולציה (באנלוגיה, תכנית מואצת או מלאה), כולל את הניסויים הטוקסיקולוגיים-אלרגולוגיים הבאים.
כאשר מנרמל באנלוגיה, מתבצעת השוואה של חומרת ותדירות הרגישות בבעלי חיים הנגרמת על ידי החדרת אלרגן ייחוס והחומר הנבדק, תוך שימוש בשיטות של רגישות מפורשת של השלב הראשון. כאשר מנרמל אבק בלתי מסיס, ניתן גם להשתמש ברגישות תוך קנה הנשימה של חולדות לבנות. עבור תרכובות כימיות פשוטות, האלרגן הייחוס הוא כבר חומר מנורמל, הדומה במבנה הכימי שלו ומכיל את אותן קבוצות כימיות פעילות האחראיות להתפתחות הרגישות. האלרגן הייחוס להרכב מורכב הוא כבר הרכב מנורמל, דומה בהרכבו ומכיל את אותו מרכיב האחראי על התפתחות הרגישות.
בהיעדר אלרגן ייחוס, השלב השני של המחקר כולל קביעה ניסויית של ספי רגישות: בשאיפה אחת של החומר - Lim sens אֵס, עם שאיפות מרובות - Lim sens ch. השוואת ערכים Lim sens אֵסו Lim sens chעם Lim אֵסו Lim ch, שהוקם בניסויים טוקסיקולוגיים על השפעות אינטגרליות וספציפיות, מאפשר לך לקבוע אם השפעת הרגישות מגבילה. בהתחשב בנתונים אלו, ערכו של תקן ההיגיינה מוצדק (ראה סעיף 6).
בעת קיצוב מוצרים כימיים מורכבים, רגישות של בעלי חיים בשני שלבי המחקר מתבצעת עם מוצר שלם; אם מתגלה רגישות, כל המרכיבים העיקריים בצורתם הטהורה משמשים לבדיקה, ואם הרכב אינו ידוע, המוצר כולו או התמצית ממנו (ראה סעיף 5.3).
^ 3. הקמת מחקר לזיהוי תכונות אלרגניות
3.1. רגישות תוך עורית של חזירי ניסיונות
בניסוי משתמשים בשפני ניסיונות צעירים במשקל 250-300 גרם, המחולקים ל-2 קבוצת ביקורת כללית אחת של 8-10 חיות כל אחת. בעלי חיים מקבוצות ניסוי עוברות רגישות על ידי החדרת פעם אחת לתוך העור של פני השטח החיצוניים של האוזן קרוב יותר לבסיס שלה 50 (קבוצת ניסוי ראשונה) ו-200 מיקרוגרם לכל בעל חיים (קבוצת ניסוי שנייה) של החומר הנבדק בנפח של 0.02 - 0.1 מ"ל. מים מזוקקים, מי מלח פיזיולוגי, אצטון, אלכוהול, tween-80, דימתיל סולפוקסיד וכו' משמשים כממיסים. תחליבים מימיים משמשים בעת לימוד מוצרים שמנים, ותמציות משמשות לפולימרים נרפאים (ראה סעיף 5.3). חיות בקרה מוזרקות עם אותו נפח של ממס, מתחלב או נוזל מיצוי.
זיהוי של רגישות (ראה סעיף 5) מתבצע לאחר 8 עד 10 ימים. אלרגנים חזקים בשתי המינונים גורמים לרגישות בולטת בחזירי ים: אינדיקטור הקבוצה הממוצע של בדיקות אלרגולוגיות שונה באופן מובהק סטטיסטית מזה של חיות ביקורת. אלרגנים בינוניים גורמים לרגישות בולטת רק כאשר ניתנים במינון של 200 מיקרוגרם לבעל חיים, וכאשר ניתנים במינון של 50 מיקרוגרם לכל חיה - חלשה, שבה נמצא רגישות ב-1/3 - 1/2 מהחיות, וה אינדיקטורים קבוצתיים ממוצעים של בדיקות אלרגולוגיות עשויים שלא להיות שונים מאלו של חיות ביקורת. אלרגנים חלשים גורמים לרגישות חלשה רק כאשר החומר ניתן במינון של 200 מיקרוגרם לבעל חיים, בעוד שרק בדיקות עם תאי דם יכולות להיות חיוביות, ובדיקות עור יכולות להיות שליליות.
^ 3.2. רגישות משולבת של שפני ניסיונות
מוצרים מורכבים ופולימרים מוכחים יכולים להיספג בצורה גרועה מאוד, ובמקרה זה לא מתרחשת רגישות בחזירי ניסיונות אפילו ב-200 מיקרוגרם/עור אוזן חי. לקבלת ההחלטה הסופית על נוכחות של תכונות אלרגניות במקרה של תוצאות שליליות של בדיקות אלרגולוגיות של בעלי חיים, יישומים אפקוטניים של החומר מתחילים למחרת. לאחר היישום השביעי, חזירי הים נבדקים שוב.
ריכוז החומר עבור יישומים אפיקוטיים נבחר בתהליך של לימוד השפעת גירוי העור או בניסוי מיוחד: 6 - 8 שפני ניסיונות במשקל 250 - 300 גרם למשך 7 - 10 ימים (5 פעמים בשבוע) מורחים 3 טיפות של החומר הנבדק והדילולים שלו 1:2, 1:10 ו-1:100 על "חלונות" קצוצים של פני השטח הצדדיים של הגוף בגודל של 2X2 ס"מ. כממס, נוח להשתמש בממס נדיף. אינו מגרה את העור (אצטון, אלכוהול 70 מעלות, דימתיל סולפוקסיד). אם נוצר סרט, הוא נשטף לאחר 4 שעות, במקרים אחרים העור אינו מטופל בכלום. מכינים משחות מחומרים בלתי מסיסים (רצוי על לנולין, ולא על ג'לי נפט), המופצות בעזרת מרית עין על פני ה"חלון". עבור רגישות, בחר את הריכוז המרבי שלא גרם להתפתחות של דרמטיטיס מגע.
^ 3.3. קביעת HRT בעכברים
בקבוצות הניסוי והביקורת לוקחים 10 עכברים של קו טהור (BALB / C, CA-1, DVA / 2) או 16 - 20 עכברים גזעיים במשקל 18 - 20 גרם בסיס זנב. מינון הרגישות של החומר מתחלב ב-60 µl של תערובת של אדג'ובנט מלא של פרוינד (CAF) ותמיסת האנק pH 7.5, שהוכנה ביחס של 1:1. הרכב PAF: 1 מ"ל לנולין, 3 מ"ל שמן וזלין, 5 מ"ג חיסון BCG מומת בחום. לנפח זה של PAF, הוסף 50 μl של Tween-20 ו-0.5 מ"ל מים מזוקקים. התערובת עוברת חיטוי. חיות בקרה מוזרקות עם 60 μl של תערובת זו ללא תוספת של חומר הבדיקה.
כדי לזהות רגישות לאחר 5 ימים, אותה כמות של החומר הנחקר (10 מ"מ או 100 מיקרוגרם) המומס (מורח) בתמיסה של האנק מוזרקת לתוך כרית הכף האחורית של עכברים כמו במהלך הרגישות. לאחר 24 שעות, עובי שתי הרגליים האחוריות במ"מ נמדד במיקרומטר הנדסי MK-0-25. על כמות הבצקת, כלומר. התפתחות DTH נשפטת לפי ההבדל בעובי של שתי הרגליים האחוריות (מדד DTH). בחיות בקרה, זה בדרך כלל 0.04 - 0.09 מ"מ. עודף מובהק סטטיסטית של HRT הקבוצה הממוצעת של חיות ניסוי בהשוואה לבקרות מצביע על נוכחות של תכונות רגישות בולטות או מתונות בתרכובת הנחקרת.
^ 3.4. יישומים אפקוטניים מרובים על חזירי ים
בחירת ריכוז הרגישות מתבצעת באותו אופן כמו עבור רגישות משולבת (ראה סעיף 3.2). יישומים אפקוטניים מבוצעים 5 פעמים בשבוע למשך 4 שבועות (20 יישומים בסך הכל). אם בשבוע ה-2-3 של הניסוי, חזירי ניסיונות מראים סימנים של דרמטיטיס מגע, אז נמשכים יישומי רגישות באזור אחר של העור. זיהוי רגישות מתבצע 1-2 ימים לאחר היישום האחרון. במקרה זה, מבוצעת בדיקת טיפת עור בצד הנגדי.
^ 4. הקמת מחקר להצדקת ערכם של תקני היגיינה
4.1. רגישות תוך קנה הנשימה של חולדות לבנות
שתי קבוצות של חולדות לבנות ניתנות פעם אחת לקנה הנשימה 0.5 - 1.0 מ"ל של תרחיף של האבק הנחקר הכתוש ביותר במינונים של 50 ו- 10 מ"ג בתמיסה פיזיולוגית מחוממת ל-37 מעלות צלזיוס. חיות מקבוצת הביקורת מוזרקות עם 1 מ"ל של תמיסת מלח מחוממת עד 37 מעלות צלזיוס.
הליך ההחדרה נעשה בצורה הטובה ביותר ללא הרדמה. לשם כך, החולדה מקובעת במצב אנכי, בדיקה מתכת מוכנסת לחלל הפה, מקובעת על מזרק עם מינון מתאים של תרחיף, היא מועברת לאורך הקיר הקדמי של הגרון דרך הגלוטטיס (יש תחושה של מכשול) עד שהוא נעצר בהתפצלות קנה הנשימה, הבדיקה מורמת מעט וההחדרה מתבצעת. לאחר המתן, החיה נשמרת במצב זקוף למספר תנועות נשימה. במקביל, צפצופים וקול חריכה מאשרים את חדירת המתלה לריאות.
בדיקה של בעלי חיים מכל הקבוצות מתבצעת 5 ימים לאחר מתן תוך קנה הנשימה.
^ 4.2. חשיפה לשאיפה בודדת
שאיפות בודדות של חומר על מנת לקבוע את הערך Lim sens acרצוי לבצע על חזירי ניסיונות או חולדות לבנות לאחר מציאת הערך Lim אֵס. לאלרגנים חלשים ובינוניים, די בדרך כלל לבצע שאיפות של החומר הנחקר בריכוזים ברמת הפעיל, הסף ובסדר גודל נמוך מזה של ההשפעה הרעילה הכללית. כאשר לומדים אלרגנים חזקים, עדיין יש צורך לבצע שאיפות בריכוזים נמוכים יותר. משך כל שאיפה הוא 4 שעות לאוויר אזור העבודה ו-24 שעות לאוויר האטמוספרי. מספר החיות בקבוצה חייב להיות לפחות 10.
יש לבצע שאיפות בודדות בחולדות כדי שניתן יהיה להשוות ערכים Lim sens acו Lim אֵסמתקבל על אותו מין בעל חיים. עם זאת, אם שאיפה בודדת אינה גורמת לרגישות בחולדות, יש לחזור עליה בחזירי ניסיונות.
זיהוי רגישות מתבצע שבוע לאחר השאיפה.
לְכָל Lim sens acלקחת ריכוז של החומר, שאיפה בודדת שלו גורמת לרגישות אצל 2 עד 5 מתוך 10 בעלי חיים, המתבטאת בבדיקות מעבדה חיוביות ו/או בדיקות פרובוקטיביות. יחד עם זאת, ערכי הקבוצה הממוצעים של מדדי רגישות עשויים שלא להיות שונים באופן מובהק סטטיסטית מאלו הביקורת.
^ 4.3. חשיפה מרובה לשאיפה
שאיפות מרובות מבוצעות על בעלי חיים מאותו המין שעליהם Lim sens ac. משך החשיפה הוא: בעת הגדרת MPC באוויר אזור העבודה 4 שעות מדי יום 5 פעמים בשבוע למשך שבועיים, עבור MPC באוויר האטמוספרי 14 ימים של חשיפה רציפה (סביב לשעון). בהתאם לכך, לאחר שבועיים, מתבצעת הבדיקה הראשונה של בעלי חיים. במקרה של תוצאה שלילית או מפוקפקת, השאיפה נמשכת עוד שבועיים ומבצעים אותו משטר ובדיקה חוזרת. בעת הקמת ה-MPC באוויר של אזור העבודה, משך החשיפה הכולל לא יעלה על חודש אחד, ועבור אוויר אטמוספרי ניתן להמשיך בניסוי עד חודשיים. חשיפה ארוכה יותר אינה מעשית, מכיוון שהיא אינה מובילה לעלייה באפקט הרגיש. יתרה מכך, שאיפות עוקבות עלולות להוביל להיחלשות ההשפעה עקב התפתחות תהליכים חיסוניים מפצים ולהקשות על קביעת ריכוז הסף. לפיכך, ההשפעה של ניסוי של 2-4 שבועות שווה ביסודה לניסוי טוקסיקולוגי כרוני, מה שמאפשר להשוות בין הערכים Lim chו Lim sens ch .
קביעת ריכוז הסף על ידי אפקט הרגישות ( Lim sens ch) מתבצע על פי אותם עקרונות כמו בחשיפה אחת לאינהלציה.
^ 5. שיטות לגילוי רגישות
מסמך זה ממליץ על שיטות לאיתור רגישות לתרכובות כימיות ולמוצרים שנבדקו באופן נרחב בפרקטיקה טוקסיקולוגית: בדיקות עור פרובוקטיביות ובדיקות אלרגוט ספציפיות למעבדה המבוססות על תגובה של תאי דם לאלרגן במבחנה. בדיקות אלו יכולות לזהות תגובות אלרגיות מסוגים שונים: מושהה (בדיקת טיפת עור פרובוקטיבית), סוג ריאגיני מיידי (בדיקות תאי פיטום), וכן בתיווך קומפלקסים של מערכת החיסון (תמוגגת לויקוציטים ובדיקות נויטרופילים בדם). הבדיקות המומלצות אינן צריכות להגביל את יוזמת המחקר, שכן לגיטימי להשתמש בשיטות אחרות, הן אבחון אלרגודי ספציפי והן לא ספציפיות, המעידות על התפתחות רגישות בחיות ניסוי (אימונולוגיות, ביוכימיות, אימונומורפולוגיות וכו').
^ 5.1. בדיקת טיפת עור פרובוקטיבית בחזירי ניסיונות
כדי לבצע בדיקת טיפת עור (להלן CP), ריכוז הבדיקה והחומר הנבדק נבחרים מראש על קבוצה של שפני ניסיונות שלמים (6-8 פרטים). לשם כך, על המשטחים הצדדיים של גוף החיה, השיער נחתך ב-4 - 8 חלקים בגודל 1 x 1 ס"מ, מופרדים על ידי רצועות צמר. יש למרוח 1-3 טיפות מהחומר בריכוז מסוים על האזור המתאים. בדרך כלל, החומר נבדק בצורתו המקורית ובדילולו פי שניים או פי עשרה. מים, אלכוהול 70 מעלות, אצטון, דימתיל סולפוקסיד משמשים כממס (מדלל). במקרה זה, אחד מאזורי העור צריך להיות בקרה, עליו מוחל הממס המתאים (מדלל). התגובה נלקחת בחשבון חזותית לאחר 24 שעות.
כריכוז בדיקה, נבחר המקסימום, שהמריחה שלו על עורם של חזירי ים שלמים אינה גורמת לתגובת גירוי (אריתמה, נפיחות) לאחר 24 שעות.
הגדרת CP. על עור נטול שיער של צדי חזירי ניסיונות (ניסוי ובקרה) יש למרוח טיפה אחת של החומר הנבדק בריכוז בדיקה. התגובה מוערכת חזותית לאחר 24 שעות לפי הסולם הבא:
0 נקודות - אין תגובה נראית לעין;
נקודה אחת - אריתמה ורודה מעט בכל האזור או לאורך הפריפריה;
2 נקודות - אריתמה ורודה בהירה בכל האזור או לאורך הפריפריה;
3 נקודות - אריתמה אדומה בוהקת בכל האזור;
4 נקודות - נפיחות בעור עם או בלי אריתמה;
5 נקודות - נפיחות קשה, כיב מוקד, דימום.
^ 5.2. בדיקת נפיחות אוזניים פרובוקטיבית
בחירת ריכוז הבדיקה ל-TOU אינה שונה עקרונית מזו של CP: משתמשים באותם ממיסים (אצטון, 70% אלכוהול) ודילולים של החומר (מ-0.1 עד 20%, לעתים רחוקות יותר 50% או מוצר לא מדולל) . עם זאת, מספר החיות הכולל גדל מכיוון שניתן לבדוק רק שני ריכוזים (אחד בכל אוזן) לכל חיה.
הגדרת TOU: מדוד ראשוני את העובי של החלק האמצעי של האפרכסת עם מיקרומטר במ"מ, ואז 25 μl מהחומר הנבדק בריכוז עבודה מוחל על שני המשטחים של השליש האמצעי של האוזן כשהם מיושרים ומקובעים בפינצטה. לאחר 24 שעות, עובי האוזן נמדד מחדש וערך TOU מחושב מההבדל בעובי לפני ואחרי המריחה. TOU נחשב חיובי בחזירי ניסיונות וחולדות עם אינדיקטור של 0.03 מ"מ או יותר, בעכברים - 0.01 מ"מ או יותר. בשפני ניסיונות, TOU ניתן לציון בסולם הבא:
0 נקודות - עד 0.03 מ"מ;
נקודה אחת - 0.03 - 0.07 מ"מ;
2 נקודות - 0.08 - 0.12 מ"מ;
3 נקודות - 0.13 - 0.17 מ"מ;
4 נקודות - 0.18 - 0.22 מ"מ;
5 נקודות - 0.23 מ"מ או יותר.
^ 5.3. בחירת מינוני עבודה של חומר לקביעת אלרגוטסטים ספציפיים עם תאי דם של בעלי חיים
בדיקות אלרגוטס ספציפיות עם תאי דם, ככלל, מבוצעות עם 0.1 - 0.01% פתרונות (בתמיסת מלח), כך שהם יכולים להשתמש בחומרים מסיסים גרועים. עבור חומרים שאינם מסיסים במים גם בריכוזים כאלה, יש לבחור חומר מסיס במים עם דטרמיננט אנטיגני קבוצתי: למשל, למוצרי פולימר המכילים פורמלדהיד, תמיסות פורמלדהיד; למוצרי פולימר המכילים קבוצות אפוקסי - אפיכלורוהידרין; עבור כל תרכובות הכרום - CrCl 3; עבור מתכת Be ותרכובותיה - בריליום גופרתי וכו'. כאשר לומדים פולימרים מרפאים, משתמשים בתמצית: החומר הנבדק ומלוחים ביחס של 1:1 לפילמור ו-1:10 למוצרי פולי עיבוי במהלך דגירה ב-37 מעלות צלזיוס למשך 3-5 ימים.
רצוי להכין פתרונות לא ממוצרים טכניים, אלא מחומרים טהורים מבחינה כימית. מכיוון שסביבה חומצית או בסיסית עלולה לגרום נזק לתאי הדם, יש להקפיד שה-pH של תמיסת העבודה יהיה ניטרלי או מעט בסיסי (pH 7.2 - 7.4). אם החומר יוצר תמיסה לא יציבה, יש להכין תמיסות עבודה לכל ניסוי. ניתן לאחסן תמיסות מתמידות במקרר למשך חודש, אולם יש לעקוב אחר הסטריליות שלהן ובמקרה של עכירות או היווצרות סרט לא ניתן להשתמש בתמיסה.
מינוני עבודה (ריכוזי תמיסות) של חומרי הבדיקה נבחרים על ידי ביצוע בדיקה עם דם של בעלי חיים שלמים באמצעות מספר דילולים. כדי לזהות רגישות, נבחר הריכוז המרבי של התמיסה שאינו גורם לעלייה בתמוגה או שינויים אחרים בתאי הדם התואמים לבדיקה בהשוואה לדגימת ביקורת בתוספת נוגד קרישה בלבד.
^ 5.4. התגובה של תמוגה ספציפית של לויקוציטים בדם
אפשרות 1. 0.1 מ"ל של תמיסה פיזיולוגית (דגימת בקרה) מוסיפים למבחנה או לבאר הראשונה של הצלחת, מוסיפים 0.1 מ"ל של תמיסה פיזיולוגית, שבה מינון העבודה של החומר הנבדק מומס קודם לכן (דגימה נסיונית), לשני. לאחר מכן, 0.1 מ"ל מדם הבדיקה מתווסף לשתי המבחנות. מערכות התגובה מעורבות בניעור ומודגרות למשך שעתיים ב-37 מעלות צלזיוס. מכל דגימה, דם מועבר ב-0.02 מ"ל, בהתאמה, לשתי מבחנות או בארות של הטבליה המכילות 0.4 מ"ל של תמיסה מימית 3% של חומצה אצטית כדי להשמיד אריתרוציטים.
אפשרות 2. דם של חיות ניסוי נאסף בשני מלנג'רים עד לסימן 0.5, לאחר מכן מוסיפים למלנג'ר הראשון עד לסימן 1 תמיסה 5% של נתרן ציטראט שהוכנה במי מלח פיזיולוגי (דגימת ביקורת) (עד אותו סימן I) - תמיסת נתרן ציטראט 5%, שבה מינון העבודה של החומר הנבדק הומס קודם לכן (דגימה נסיונית). המלנגורים מנערים ומודגרים ב-37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים. לאחר מכן, בשני המלנגורים, עד לסימון II, מוסיפים תמיסה מימית של חומצה אצטית בגודל 3-5%, בצבע כחול מתילן.
החישוב של המספר המוחלט של לויקוציטים מתבצע בתא ספירת דם או על פיקסקל. בעת שימוש במלנגורים, לפני מילוי החדר, 3-4 טיפות מנוקזות מראש.
מחוון RSLL מחושב על ידי הנוסחה:
התגובה נחשבת חיובית עם שיעור תמוגה של לויקוציטים של 10% או יותר. מדד RSLL מעל 20% מצביע על רמה גבוהה של רגישות לבעלי חיים.
ריכוזי עבודה של אלרגנים כימיים אינם אמורים לגרום לתמוגה של יותר מ-9% מהלוקוציטים של בעלי חיים שלמים ולרוב תואמים לדילול של 0.5 - 0.05% במי מלח; דילולים גבוהים יותר דורשים חומרים בעלי מגרה בולטת, ולכן, השפעה ציטוטוקסית על תאי הדם.
^ 5.5. תגובת נזק ספציפית לנויטרופילים
כדי לבסס את התגובה של נזק ספציפי לנויטרופילים (להלן בדיקת PPN), תמיסת מימית 5% של נתרן ציטראט או תמיסה של 1.5% של EDTA (Chelaton-3) שהוכנה בתמיסת מלח פיזיולוגית משמשת כחומר נוגד קרישה (מוניטור). ה-pH של התמיסה).
ריכוז העבודה של החומר הנחקר מוכן על אותו נוגד קרישה שמתווסף לדם. ריכוז העבודה לא אמור לגרום נזק ליותר מ-4% מהנויטרופילים של בעלי חיים שלמים בגרסה הראשונה של בדיקת PPN ו-7% בגרסה השנייה.
הגדרת מבחן PPN. לתוך צינור הצנטריפוגה הסיליקוני הראשון (דגימת ניסוי) הוסף 0.1 - 0.2 מ"ל של תמיסה של החומר הנבדק בריכוז עבודה, לתוך השני (דגימת ביקורת) - אותו נפח של נוגד קרישה בלבד. לאחר מכן, אותו נפח דם של החיה הנבדקת מתווסף לשתי הצינורות, ולאחר מכן מערבבים בעדינות את הצינורות ונשמרים במשך שעה בטמפרטורת החדר.
אפשרות 1. לאחר סיום הדגירה מכינים משתי המבחנות על שקף זכוכית מריחות בעובי בינוני, המקובעות ומוכתמות בשיטה הנהוגה במריחות צביעה לספירת נוסחת הלויקוציטים. תחת טבילה, נספרים 100 נויטרופילים, תוך התחשבות במספר התאים עם כרומטינוליזה ברורה, פיכנוזה, פיצול גרעיני, היפרכרומטוזיס או קריוליזה.
אפשרות 2. לאחר סיום הדגירה, ערבבו בעדינות שוב והוסיפו לשתי המבחנות 0.02 מ"ל של תמיסת עבודה מימית של אקרידין תפוז (1:20000). פתרון זה נשמר במקרר לא יותר משבועיים. להכנתו משתמשים בתמיסת יוד של תפוז אקרידין בדילול של 1:100, שניתן לאחסן בבקבוק כהה במקרר למשך מספר חודשים. לאחר 5 דקות, 1 טיפה מהתוכן מכל מבחנה מועברת לשתי שקופיות זכוכית, מכוסות בגלישת כיסוי ולאחר 3-5 דקות נבדקת ב- LUMAM עם טבילה. נספרים 100 נויטרופילים, המוגדרים היטב בשל שפע של גרגירי רובי על רקע זוהר ירוק עמום של הציטופלזמה.
נויטרופילים רגילים שלמים הם בצורת אליפסה או עגולה. נויטרופילים פגומים מזוהים על ידי בליטות אמובאידיות אופייניות (תנועתיות מוגברת של תאים) ושינויים מורפולוגיים (קצוות "קרועים" לא אחידים עם הרחקה מתחילה של הציטופלזמה לאורך קצוות התא, ואקווליזציה של הציטופלזמה, דה-גרנולציה, התגבשות דפוס הכרומטין של הגרעין ).
שיעור התגובה מחושב על ידי חלוקה ב-100 של ההבדל במספר הנויטרופילים הפגועים בדגימות הניסוי והביקורת. ערך המדד של 0.05 או יותר בגרסה הראשונה ו-0.08 או יותר בגרסה השנייה מצביע על הרגישות של בעל החיים.
^ 5.6. תגובת דגרנולציה ספציפית לתא תורן
המחקר מבוצע בהרדמה או מיד לאחר עריפת ראש החיה. לשם כך פותחים את דופן הבטן לאורך קו האמצע בעזרת מספריים ובזהירות (רצוי עם אצבעות בקצות אצבעות גומי, ולא בפינצטה) נשלפת החוצה את הלולאה הארוכה ביותר של המעי הפריסטלטי (5 ס"מ או יותר במידת מה). הלולאה מונחת על שקופית זכוכית חלופית כך שמתגלים 3 מקטעים גדולים של המזנטריה. לאחר מכן נחתך משני הצדדים קטע מלולאת המעי, ששוליה צריכים להיות תלויים על קצה הכוס ב-0.5 ס"מ. לאחר מכן, מורחים 40 µl של תמיסת מלח על כל מקטע של תכשיר הביקורת הראשון, ו-20 µl של אוטוסרום טרי (הוכן ביום המחקר מדם שנלקח מהווריד ההיאאידי) ו-20 µl של החומר הנבדק בריכוז עבודה מוחלים על כל מקטע של ההכנה הניסיונית השנייה, שהוכן בתמיסת מלח פיזיולוגית. שני ההכנות מודגרות למשך 5 דקות ב-37 מעלות צלזיוס, הפאזה הנוזלית מוסרת על ידי ספיגת קצה הזכוכית המוטה בנייר סינון, ובמידת הצורך, שוב מיישרים את המזנטריה בזהירות. התכשירים נצבעים מיד על ידי הצפתם למשך 1-1.5 דקות בתמיסה 1% של צבע אאוזין מתילן במתיל אלכוהול (לפי מאי-גרונוולד). מסירים את הצבע על ידי שטיפת התכשיר הנוטה מעט במים מפפטה ומשאירים לייבוש מלא באוויר (בדרך כלל 24 שעות). על התכשיר המיובש, מסירים את כל החלק של המעי והמחיצות בין מגזרי המזנטריה בעזרת אזמל.
ההכנות עוברות מיקרוסקופ עם טבילה (הגדלה 10 x 80), 50 תאי תורן נספרים באלכסון, תוך התחשבות בצורות פגומות ביניהם. יש לראות בתאי מאסט עם קרום שבור ושחרור גרגירים מעבר לגבולותיו (דה-גרנולציה), כמו גם פגומים לחלוטין. חשב את האינדיקטור של RDTK לפי הנוסחה:
התגובה נחשבת חיובית בשיעור של 1.31 ומעלה.
ריכוזי העבודה של כימיקלים עבור RDTC תואמים לרוב לדילול של 0.01 - 0.001% במי מלח, תחת פעולתם בחיות הביקורת מחוון ה-TC לא יעלה על 1.0 0.3.
^ 5.7. תגובה עקיפה של דה-גרנולציה של תאי פיטום
בדיקה זו (להלן RTDC) מבוססת על התגובה של תאי מטרה (תאי מאסט של חולדה לבנים) לחשיפה חוץ גופית לנוגדנים אלרגיים הכלולים בסרום הדם של חיות ניסוי ולחומר (אלרגן) הנבדק.
כדי להשיג מאגר של תאי פיטום, חולדות לבנות שלמות בהרדמת אתר מוזרקות תוך צפק עם 6-10 מ"ל של מי מלח שחומם עד 37 מעלות צלזיוס, מעורבב עם 0.5 מ"ל הפרין. לאחר עיסוי קל של דופן הבטן במספריים, מבצעים חתך של 1.5-2.2 ס"מ לאורך קו האמצע של הבטן, הפגר הופך והפלט הזורם מלולאות המעי נאסף לתוך שפופרת צנטריפוגה הרטובה בהפרין. האקסודאט עובר צנטריפוגה למשך 5 דקות. ב-1500 סל"ד, הסופרנטנט מושלך, והמשקעים מעורבבים לקבלת השעיה של תאי תורן.
לביצוע RNDTK, 0.05 מ"ל של תרחיף תאי פיטום ו-0.05 מ"ל של סרום של החיה הנבדקת מתווספים ל-2 בארות של הטבליה או ל-2 צינורות. לאחר מכן, 0.05 מ"ל של תמיסה פיזיולוגית מתווספת לדגימה הראשונה (ביקורת), 0.05 מ"ל של תמיסה פיזיולוגית מתווספת לדגימה השנייה (ניסיוני), שבה מינון העבודה של החומר הנבדק מומס (0.01 - 0.001% תמיסות , אשר לא אמור לגרום לנזק ספונטני ליותר מ-5% מתאי המטרה). לאחר מכן, על שקופית זכוכית נטולת שומנים אחת, שהוכתמה בעבר בשני קצוות הכוס בצורה של ריבועים, בתמיסת אלכוהול 0.3% של אדום נייטרלי ומיובשת בטמפרטורת החדר, מורחים טיפה מכל דגימה. כל טיפה מכוסה בגלישת כיסוי, ששוליה מרוחים בוזלין, ומודגרות ב-37 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.
ההכנות עוברות מיקרוסקופ בהגדלה של 20 על 80. בכל הכנה סופרים 50 תאי מאסט. החישוב של מחוון RDTC והערכתו מתבצעים כמו בסעיף 5.6 בעת הגדרת ה-RDTC.
^ 5.8. הערכת תוצאות גילוי רגישות
בעת ביצוע מחקרים של השלב הראשון, תדירות התפתחות הרגישות ועוצמתה מוערכת על פי מדדי הקבוצה הממוצעים של כל הבדיקות הפרובוקטיביות והאלרגולוגיות הספציפיות המשומשות. מחלקת הפעילות האלרגנית של החומר הנחקר נקבעת לפי הטבלה. 1: סוג 1 כולל אלרגנים חזקים, סוג 2 - בינוני וכיתה 3 - אלרגנים חלשים. במקרה של הבדל בהשפעה מבחינת תדירות הביטוי של רגישות וערכי מדדי הקבוצה הממוצעים של בדיקות פרובוקטיביות ו/או אלרגולוגיות ספציפיות, הפעילות האלרגנית של החומר מוערכת בהתאם מחוון בולט.
שולחן 1
^ סיווג של חומרים לפי עוצמת הפעילות האלרגנית
| שיטת רגישות | שיעורי פעילות אלרגנית |
|||||
| לפי תדירות התפתחות הרגישות | לפי מהימנות ההבדל בין מדדי הקבוצה הממוצעת בקבוצת הניסוי והביקורת |
|||||
| 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
|
| חזירי ים - 200 מק"ג | > 5 מתוך 10 | > 5 מתוך 10 | 5 פאונד מתוך 10 | £0.05 | £0.05 | > 0,05 |
| לתוך עור האוזן 50 מק"ג | > 5 מתוך 10 | 5 מתוך 10 | 0 | £0.05 | > 0,05 | - |
| חזירי ים - משולבים | > 5 מתוך 10 | > 5 מתוך 10 | 5 פאונד מתוך 10 | £0.05 | £0.05 | > 0,05 |
| חזירי ים - עטופים | > 5 מתוך 10 | > 5 מתוך 10 | 5 פאונד מתוך 10 | £0.05 | £0.05 | > 0,05 |
| עכברים - בעור בסיס הזנב | לא לוקחים בחשבון | £0.05 | £0.05 | > 0,05 |
||
כאשר עורכים ניסויי שאיפה בשלב השני של המחקר, הריכוז האפקטיבי נחשב לזה שבפעולתו מתפתחת רגישות בלמעלה ממחצית מהחיות, והמדדים הממוצעים של הקבוצה של בדיקות אלרגולוגיות שונות באופן מובהק סטטיסטית מאלה ב לשלוט בבעלי חיים. עבור הספים של פעולת רגישות חריפה וכרונית, ננקטים ריכוזים שתחת פעולתם (חד או מרובה, בהתאמה) מתפתחת רגישות אצל 2-5 מתוך 10 בעלי חיים, ואינדיקטורים הממוצעים של הקבוצה אינם שונים באופן משמעותי מאלה שבביקורת. חיות.
^ 6. הצדקה לערך תקני היגיינה
ביסוס הערך של התקן הסניטרי של אלרגן כימי תעשייתי בעת עריכת ערכת מחקר שלמה מתחיל בהשוואה Lim sens chעם Lim ch. בהתאם ליחס ביניהם, נקבעים שיטת הביסוס של MPC ונוכחות סימן A (אלרגן).
בעת הקמת ה-MPC באוויר של אזור העבודה, ההוראות הבאות מונחות.
אם רעילות היא הקריטריון המגביל, כלומר. הערכים של ספי הרגישות גבוהים מערכי ספי הרעילות, אז החומר כמעט אינו מסוכן כאלרגן, והוא מנורמל כבעל השפעה רעילה כללית; במקרה זה, הסימן A (אלרגן) אינו מושם.
אם ערכי הסף של ההשפעות הרעילות והרגישות הכלליות אינם שונים באופן משמעותי או שווים, אזי החומר צריך להיחשב כמסוכן מבחינת התפתחות נגעים רעילים ואלרגיים והוא מנורמל בהתאם להשפעה הרעילה הכללית , מלווה בסימון A (אלרגן).
אם הקריטריון המגביל הוא רגישות, כלומר. ספי הרגישות הם מתחת לספי הרעילות, אז החומר מסוכן כגורם אטיולוגי במחלות אלרגיות, הוא נחשב לאלרגן כימי תעשייתי ומנורמל על פי אפקט הרגישות עם הסימן A (אלרגן). במקרה זה, גורם הבטיחות לאלרגן כימי נקבע מתוך טבלה. 2.
שולחן 2
^ גורמי בטיחות קLim sens chבעת הגדרת המכונה באוויר של אזור העבודה
בעת הקמת MPC לחומרים מזיקים בעלי אפקט רגיש באוויר האטמוספרי, מומלצים קריטריונים מחמירים יותר, לאור העובדה שילדים, קשישים ואנשים עם מחלות שונות חשופים לחשיפה. במקרה זה, נלקח בחשבון לא רק ערך הסף של פעולת רגישות כרונית, אלא גם אזור פעולת רגישות כרונית, שנקבע על ידי הנוסחה:
.
יתר על כן, בהתאם לערך ז sens chלקבוע את מקדם הבטיחות ל Lim sens chלפי הטבלה 3 ערך ה-MPC שהושג עבור אפקט הרגישות מושווה ל-MPC עבור ההשפעה הרעילה הכללית, וערך ה-MPC הקטן ביותר נבחר כתקן ההיגייני. סימן A (אלרגן) נקבע בהתאם לעקרונות הביסוס של MPC באוויר של אזור העבודה.
שולחן 3
^ גורמי בטיחות קLim sens chבעת הגדרת ה-MPC באוויר האטמוספרי
אז אם ערכי הספים של כרוני, רעיל ורגישות עולים בקנה אחד והם 0.01 מ"ג/מ"ק, אז ז sens chיהיה שווה ל-1.0. במקרה זה, לפי טבלה. 3, מקדם הבטיחות לאפקט הרגיש לא יכול להיות פחות מ-3.0, וערך ה-MPC יהיה 0.003 מ"ג/מ"ר. אם נקבע מקדם בטיחות של 2.0 לרעילות, כלומר. ערך MPC יהיה 0.005 mg/m 3, מומלץ ערך MPC הנמוך ביותר, כלומר. 0.003 מ"ג למטר 3. אבל אם בדוגמה המנותחת מקדם הבטיחות לרעילות חייב להיות לפחות 5.0, כלומר. הערך שנקבע על ידי השפעה זו יהיה אפילו פחות (0.002 מ"ג / מ"ר), ואז הוא נבחר.
כאשר מבססים את SHEE בשיטה המואצת, כלומר. שטח השפעת הרגישות של החומר מחושב לפי הערך לפי הנוסחה שלהלן וערך ה-SHEV המחושב מההשפעה הרעילה הכללית מופחת כמה פעמים שהוא ז sensac .
.
אז, אם הערך של SHWV מחושב לפי רעילות כמו 0.2 מ"ג / מ"ר, ו ז sens acשווה ל-4, אזי ה-SHEL של החומר הנבדק, בהתחשב בהשפעת הרגישות, יהיה 0.05 מ"ג/מ"ק (0.2:4). סימן A (אלרגן) לשים בהתאם לעקרונות המשמשים בהצדקה של MPC.
כאשר מנרמל באנלוגיה, אם תדירות ועוצמת הרגישות הנגרמת על ידי חומר חופפות לאלה מחשיפה לאלרגן ייחוס, MPC או SHLI מוגדרים ברמה של ערך התקן האלרגני הייחוס המסומן A (אלרגן). עם סטייה משמעותית בתדירות ועוצמת הרגישות בהשוואה לאלו מחשיפה לאלרגן הייחוס, מתבצע שלב II של המחקר וההוראות הנ"ל משמשות להצדקת ה-MPC או SHLI.
דרגת המפגע נקבעת על פי הכללים המקובלים ברעלנות מונעת.
אימות קליני והיגייני של בטיחות ערך ה-MPC שנקבע בניסוי בבעלי חיים מתבצע על ידי השוואת תנאי העבודה ומצב הבריאות של העובדים בשיטות המקובלות ברעלנות מונעת, וכן על בסיס בדיקה אפידמיולוגית ואלרגולוגית של עובדים, כולל בדיקות אימונואלרגולוגיות ספציפיות סלקטיביות על מנת לזהות את התדירות ואת חומרת הרגישות לאלרגן תעשייתי זה.
יישום
(אִינפוֹרמָטִיבִי)
^ מידע ביבליוגרפי
1. הצהרת מחקר על ויסות היגייני של אלרגנים תעשייתיים באוויר אזור העבודה. הנחיות מס' 2121-80 מיום 23/01/1980. משרד הבריאות של ברית המועצות. ריגה, 1980.
2. הנחיות זמניות לביסוס הריכוזים המרביים המותרים של מזהמים באוויר האטמוספרי של אזורים מיושבים מס' 4681-88. משרד הבריאות של ברית המועצות. M, 1989.
3. שיטות לאבחון מעבדתי ספציפי של מחלות אלרגיות תעסוקתיות של אטיולוגיה כימית. הנחיות מס' 10-8 / 94 מיום 25/12/1979 משרד הבריאות של ברית המועצות. M, 1980.
4. Alekseeva O.G., Dueva L.A. אלרגיה לכימיקלים תעשייתיים. מ.: רפואה, 1978. - 242 עמ'.
5. Dueva L.A., Kogan V.Yu., Suvorov S.V., Shterengarts R.Ya. אלרגנים תעשייתיים. M. מרכז לפרויקטים בינלאומיים של הוועדה הממלכתית להגנת הטבע של ברית המועצות. מ', 1989. - 203 עמ'.
גודל גופן
מניעה ואבחון מעבדתי של ברוצלוזיס אנושי - הוראות מתודולוגיות - MU 3-1-7-1189-03 (אושר על ידי המדינה הראשית ... בפועל בשנת 2018
5.3.2. תגובת תמוגה לויקוציטים
הכנסת אנטיגן ספציפי לאורגניזם בעל רגישות אינה אדישה לנושא. בהקשר זה ראויה לתשומת לב שיטה יעילה לזיהוי רגישות יתר מסוג מושהה בשיטת חוץ-גופית באמצעות תגובת לויקוציטים (RLL). RLL מבוסס על התחשבות בהרס של לויקוציטים של אורגניזם בעל רגישות תחת השפעת אנטיגן ספציפי, הרשום בשיטת חוץ גופית. ל-RLL יש ספציפיות קפדנית, מאפשרת לכמת את מידת הרגישות של הגוף, ומאפשרת לקבל תשובה 3-4 שעות לאחר נטילת הדם.
טכניקת הגדרת RLL.
RLL מתבצע במבחנות העשויות מזכוכית טהורה מבחינה כימית. כאנטיגן, משתמשים בתרחיף של ברוצלה שנרצחה בחום (ניתן להשתמש בזן החיסון B.abortus 19BA) ב
7 ריכוזים 1 x 10 µl/ml.
דם למחקר נלקח בכמות של 1 מ"ל ומוכנס לבקבוקון עם הפרין בשיעור של 75-80 IU של הפרין לכל 1 מ"ל דם. 0.4 מ"ל של דם בהפרין מונח ב-2 מבחנות. 0.1 מ"ל של אנטיגן ברוצלוזיס מתווסף לצינור הראשון (צינור ניסוי), לשני - 0.1 מ"ל של מי מלח כדי לבסס תמוגה לא ספציפית של לויקוציטים (צינור בקרה). המבחנות מנערות במשך 2-3 דקות, ולאחר מכן ספירת הלויקוציטים מתבצעת בתא Goryaev לפי השיטה המקובלת בהמטולוגיה. לאחר מכן, המבחנות ממוקמות בתרמוסטט למשך שעתיים ב-37 מעלות צלזיוס ומנערות מעת לעת לאחר 15-20 דקות. לאחר הדגירה, הצינורות מנערים שוב למשך 2-3 דקות. ולספור לויקוציטים. הספירה מתבצעת לפחות 2 - 3 פעמים עבור כל צינור, ולאחר מכן המספר הממוצע שלהם מוצג. נוכחות לויקוציטים לאחר הדגירה בצינורות הניסוי והביקורת מחושבת לפי הנוסחה: מספר הלויקוציטים לאחר הדגירה x 100% מספר הלויקוציטים לפני הדגירה.
מדד הליקוציטים הספציפיים (PSL) מחושב על ידי קביעת ההפרש - אחוז הירידה בלויקוציטים במבחנה פחות אחוז הירידה בלויקוציטים בבקרה. PSL מבוטא כערך שלילי ונע בין -10 ל-30%. PSL פחות מ-10% מצביע על תמוגה לא ספציפית.