סך הכל חלבון בסרום. שיטות קביעה, ערך קליני ואבחנתי, מאפיינים ספציפיים. שיטה לקביעת גליקופרוטאין וחלבוני סרום בדם ערך אבחוני של קביעת גליקופרוטאין

אבחון מעבדה

אבחון מעבדהנגעים מערכתיים של רקמת החיבור מכוונים בעיקר לקביעת פעילותם של תהליכים דלקתיים והרסניים בה. פעילות התהליך הפתולוגי במחלות מערכתיות אלו מובילה לשינויים בתוכן ובהרכב האיכותי של חלבוני סרום הדם.

קביעת גליקופרוטאין. גליקופרוטאין (גליקופרוטאינים) הם ביו-פולימרים המורכבים ממרכיבי חלבון ופחמימות. גליקופרוטאין הם חלק מדופן התא, מסתובבים בדם כמולקולות הובלה (טרנספרין, צרולופלסמין), גליקופרוטאין כוללים כמה הורמונים, אנזימים ואימונוגלובולינים.

מעיד (אם כי רחוק מלהיות ספציפי) לשלב הפעיל של התהליך הראומטי הוא קביעת התוכן של חלבון seromucoid בדםהמכיל מספר מוקופרוטאינים. התוכן הכולל של seromucoid נקבע על ידי מרכיב החלבון (שיטת biuret), אצל אנשים בריאים הוא 0.75 ± 0.025 גרם/ליטר. עכשיו אפשר לא רק לקבוע את התוכן הכולל של seromucoid, אלא גם לחלק אותו. אז, נכון לעכשיו, 9 חלבונים בודדים שהם חלק מסרומוקואיד בודדו. חלבוני דם סרומוקואידים כוללים הפטוגלובין, שהוא חלק מחלק ה-α2-globulin. להפטוגלובין יש יכולת להיקשר להמוגלובין. במקביל, קומפלקס ההפטוגלובין-המוגלובין נספג במערכת המקרופאגים (מערכת הפגוציטים החד-גרעיניים) ובכך מונע אובדן ברזל במהלך הרס אריתרוציטים. בדרך כלל, התוכן של הפטוגלובין הוא 1.0 ± 0.032 גרם/ליטר. בשלב החריף של מחלות רקמת חיבור מפוזרות, נצפית עלייה חדה בתכולת חלבון זה ביחס לפעילות ושכיחות התהליך. זהו סימן אבחוני קבוע יותר מאשר, למשל, עלייה ב-ESR. שיטות אלקטרופורזה משמשות לכימות הפטוגלובין. נכון לעכשיו, התגלו מספר גרסאות של הפטוגלובין, אך לא ניתן למצוא את הדומיננטיות של סוג כזה או אחר של הפטוגלובין בחולים עם מחלות ראומטיות. ערך אבחוני מסוים הוא זיהוי בדם של חולים במחלות ראומטיות של גליקופרוטאין בדם המכיל נחושת - ceruloplasmin. Ceruloplasmin הוא חלבון תחבורה הקושר נחושת בדם ושייך ל-α2-globulins. קבע ceruloplasmin בסרום דה-פרוטאיני באמצעות paraphenyldiamine. בדרך כלל, התוכן שלו הוא 0.2-0.05 גרם / ליטר, בשלב הפעיל של התהליך הדלקתי, רמתו בסרום הדם עולה. ניתן לשפוט את פעילות הדלקת במחלות רקמת חיבור מפוזרות לא רק לפי ריכוז מרכיבי החלבון בסרום הדם, אלא גם לפי תכולת רכיבי הפחמימות של גליקופרוטאין בו, הכוללים הקסוזות (D-galactose, D-mannose, D -גלוקוז), פנטוזים (D-xylose, L-arabinose), deoxysugar (L-פרוקטוז, L-rhamnose); מרכיב טיפוסי של גליקופרוטאינים הוא גם חומצה נוירמינית (סיאלית).

קביעת תכולת ההקסוז . השיטה המשתמשת בתגובת צבע עם אורצין או רסורצינול, ואחריה קולורימטריה של תמיסת הצבע וחישוב מעקומת כיול, נחשבת למדויקת ביותר. ריכוז ההקסוזות עולה בחדות במיוחד בפעילות המרבית של התהליך הדלקתי.

קביעת תכולת פרוקטוז. לשם כך, נעשה שימוש בתגובה שבה מוסיפים ציסטאין הידרוכלוריד לתוצר האינטראקציה של הגליקופרוטאין עם חומצה גופרתית (שיטת דישה). התכולה הרגילה של פרוקטוז היא 0.09 ± 0.01 גרם/ליטר.

קביעת תכולת החומצות הסיאליות. במהלך תקופת הפעילות המרבית של התהליך הדלקתי בחולים עם מחלות דם ראומטיות, עולה תכולת החומצות הסיאליות, הנקבעות לרוב בשיטת הס (תגובה). תגובה זו מבוססת על היווצרות של תוצר צבעוני של שילוב של חומצות סיאליות מפורקות מגליקופרוטאין בסרום עם מגיב גופרית אצטית שנקבע על ידי קולורימטריה של תמיסה (צבע). התוכן הרגיל של חומצות סיאליות הוא 0.6 ± 0.02 גרם/ליטר.

קביעת תכולת פיברינוגן. עם הפעילות המרבית של התהליך הדלקתי בחולים עם מחלות ראומטיות, תכולת הפיברינוגן בדם עלולה לעלות, אשר אצל אנשים בריאים בדרך כלל אינה עולה על 4.0 ± 0.03 גרם/ליטר. תכולת הפיברינוגן נקבעת או על ידי שיטת המשקל, על ידי שקילת קריש מבודד מפלסמת דם, או על ידי השיטה האנזימטית של Bidwell.

קביעת חלבון C-reactive. במחלות ראומטיות, חלבון C-reactive מופיע בסרום הדם של חולים, אשר נעדר בדמם של אנשים בריאים. הוא קיבל את השם הזה בשל יכולתו להיכנס לתגובת משקעים עם פנאומוקוק C-דיסכריד. במהלך האלקטרופורזה הוא נע עם (32-גלובולינים. נוכחותו בדם נקבעת בשיטת אנדרסן ומקרתי לפי תגובת המשקעים עם סרום חיסוני ספציפי. יש לציין שגם גילוי חלבון C-reactive אינו א. סימן אבחוני ספציפי למחלה ראומטית, שכן היא יכולה להופיע בדם של חולים עם דלקת ריאות, זיהומים סטרפטוקוקליים וסטפילוקוקליים, עם אוטם שריר הלב. בדלקת מפרקים שגרונית וזאבת אריתמטית מערכתית, ניתן לזהות גורם שגרוני, שהוא אימונוגלובולין מסוג M ב- דם של חולים. G ו-A, אז יהיה נכון יותר לדבר על גורמי ראומטואיד.

הגדרה של גורם שגרוני. הגורם השגרוני נקבע או באמצעות בדיקת לטקס, כאשר נסיוב החולה נבדק בתגובת אגלוטינציה עם y-גלובולין אנושי הנספג על חלקיקי לטקס, או תגובת Waaler-Rose, שבה ארנבת y-globulin נספג על אריתרוציטים של ראם. התוצאות נלקחות בחשבון על ידי דילול הסרום המקסימלי (טיטר) שבו עדיין ניתן לזהות גורם שגרוני. באנשים בריאים, הטיטר המרבי אינו עולה על 1:64. לאיתור גורם שגרוני יש ערך אבחוני יחסי בלבד, מכיוון שניתן לגלות אותו במספר מחלות אחרות, כגון צהבת, עגבת, שחפת, גידולים.

קביעת גורם הלופוס. בדם ניתן לזהות דקירות במח עצם, אקסודט של חולים עם זאבת אדמנתית מערכתית, גורם לופוס (LE-lupus erythematosus cells), שמקורו מוסבר כדלקמן. עקב נוכחותו של הגורם LE-globulin nature בסרום הדם של החולים, גרעיני תאי הדם והרקמות מתנפחים, הכרומטין מאבד את המבנה שלו והופך למסה אמורפית. החומר הזה כבר זר לגוף, ולכן הוא עובר פגוציטים על ידי לויקוציטים. תאי LE נמצאים במיקרוסקופ, הם בדרך כלל לויקוציטים נויטרופילים, שהציטופלזמה שלהם מכילה תצורות הומוגניות אחת או יותר, סגול אדמדם (כתם תכלת-אאוזין). ניתן גם לראות גופים השוכבים בחופשיות, שצבעם ומבנהם זהים לאלו שבתאים. ניתן למצוא גם גופי לופוס מוקפים בניוטרופילים, מה שנקרא רוזטות. יש להבדיל בין תאי LE לבין תאי טארט, שהם לויקוציטים נויטרופיליים אשר בלעו את שאריות הגרעין עם קווי מתאר של רשת הכרומטין. כדי לחפש תאי LE, מתקבל ריכוז גבוה של לויקוציטים במריחות, אשר נצבעות לאחר מכן לפי רומנובסקי. שיעור הזיהוי של תאי LE בחולים עם לופוס אריתמטוזוס מערכתי נע בין 40 ל-95%. ניתן להבחין בתופעת LE, אם כי בתדירות נמוכה בהרבה, בנזק חמור לכבד ובלוקמיה חריפה, אך במחלות אלו תאי LE נמצאים בצורה לא עקבית והם בודדים.

תגובות אנגרעיניות. לאחרונה, חקר התגובות האנטי-גרעיניות, שביניהם המקום העיקרי הוא קביעת נוגדנים ל-DNA, deoxyribonucleotide וגרעיני תאים, קיבל משמעות אבחנתית. מחקרים אלו מבוצעים בשיטת אימונופלואורסצנטי.

ניתוח דם כללי.בבדיקת דם בחולים עם מחלות סיסטמיות של רקמת החיבור, מתגלה עלייה ב-ESR, לעיתים לוקוציטוזיס נויטרופילי. בדרך כלל שינויים אלו מתרחשים בראומטיזם בשלב הפעילות המרבית. עם זאבת אדמנתית מערכתית, ניתן להבחין בלוקופניה גם במעבר של נוסחת הלויקוציטים שמאלה עד למיאלוציטים. עם צורות ממושכות וחוזרות ברציפות של שיגרון, מתגלה אנמיה היפו- או נורמכרומית בחולים. אנמיה מתרחשת גם בדלקת מפרקים שגרונית ובזאבת אריתמטית מערכתית.

בדיקות אימונולוגיות. שינויים בבדיקות אימונולוגיות במחלות רקמת חיבור מפוזרות, בנוסף לאלו שתוארו קודם לכן, כוללים עלייה בטיטר של נוגדנים אנטי-סטרפטוקוקליים (אנטיסטרפטוהיאלורונידאז ואנטיסטרפטוקינאז יותר מ-1:300, אנטיסטרפטוליזין יותר מ-1:250). עלייה בטיטר של נוגדנים אנטי-סטרפטוקוקליים הופכת לאינדיקטור רציני במיוחד בהיעדר מוקדי זיהום בגוף ובטיטרים גבוהים מאוד (1:1500 ומעלה). לפעמים רמת נוגדני הסטרפטוקוקל בקדחת שגרונית עשויה להישאר תקינה.

חלבונים הקשורים לקבוצות פחמימות מהווים מחלקה נרחבת של תרכובות שבהן מבדילות בין שתי קבוצות גדולות:

1. גליקופרוטאין - חלבונים המכילים כמות קטנה של פחמימות (עד 15%) כקבוצה תותבת, המחוברים לרדיקלים של חומצות אמינו בקשרים קוולנטיים. חלק הפחמימות מכיל הקסוזים (גלקטוז, מנוז, לעיתים רחוקות גלוקוז), פנטוזים (קסילוז, ארבינוז), דהאוקסיסוגרים (פוקוז, רמנוזה), סוכרי אמינו (אצטילגלקטוזאמין, אצטיל גלוקוזאמין), חומצה נוירמינית ואסטרות חומצה אצטית שלה (חומצות סיאליות). לרוב החלבונים הללו יש תכונות חומציות מעט. בקבוצת הגליקופרוטאין נבדלים סרומוקואידים (סרוגליקואידים), בעלי תכונות חומציות בולטות ומסיסים בחומצות פרכלוריות, טריכלורואצטיות וסולפוסליציליות. חלק זה, המהווה 1% מכלל חלבוני מי גבינה, כולל 12% מכלל פחמימות הפלזמה.

2. פרוטאוגליקנים (מוקופוליסכרידים) - תרכובות הידרופיליות, הכוללות 20-80% פחמימות. מרכיבי הפחמימות של פרוטאוגליקנים נקראים גליקוזאמינוגליקנים. ישנם 7 סוגים של גליקוזאמינוגליקנים, מתוכם 5 סוגים מכילים חומצה גלוקורונית (אלה כוללים חומצה היאלורונית, כונדרויטין-4-סולפט וכונדרואיטין-6-סולפט, הפרין והפארן סולפט), הסוג השישי (דרמטן סולפט) מכיל אידורוני (גלקטורוני) חומצה , השביעית (קרטן סולפט) - גלקטוז. חומצות סיאליות, מנוז, קסילוז קיימות בכמות מינימלית. לפרוטאוגליקנים יש תכונות חומציות בולטות מאוד בשל נוכחותם של מספר רב של קבוצות קרבוקסיל ושאריות חומצה גופרתית.

כאשר לומדים את התוכן של חלבונים המכילים פחמימות, ניתן להשתמש במספר גישות מתודולוגיות:

1. קביעת גליקופרוטאינים בשלב חריף בודדים על ידי או אנזימטי ספציפי אימונולוגישיטות.

2. זיהוי גליקופרוטאין עשיר אלקטרופורטישברים.

3. מחקר של קומפלקסים של פחמימות-חלבון לפי חלק החלבון שלהם ( עכורו נפלומטרישיטות, על חלבון טירוזין).

4. קביעת כמות הפחמימות הקשורות לחלבונים. השיטות של קבוצה זו הן המתאימות ביותר למעבדות ביוכימיות. בדם ניתן לקבוע כל אחד ממרכיבי הפחמימות, אולם קביעת חומצות סיאליות והקסוזות הקשורות לחלבון היא פשוטה וזולה יותר:

• הכמות הכוללת של ההקסוזים הקשורים לחלבון מתאימה לתוכן הגליקופרוטאין, וכמות הסרוגליקואידים נקבעת על פי ריכוז ההקסוזים המסיסים בחומצה פרכלורית ובלתי מסיסים בחומצה פוספוטונגסטית:

• כאשר לומדים את רמת הפרוטאוגליקנים, מרכיב הפחמימות מושקע מראש עם אמינים רבעוניים, בפרט, cetyltrimethylammonium, ואז גליקוזאמינוגליקן נקבעים על ידי תגובה ספציפית:

ההבדל בצבע לאחר תגובות קרבזול ואורסין מאפשר לשפוט את התוכן היחסי של דרמטן סולפט בדגימה. עבור דגימה טהורה של דרמטן סולפט, היחס בין תכולת הגליקוזאמינוגליקנים לפי תגובת הקרבזול לריכוזם, שנקבע על ידי תגובת האורסין, הוא 0.67. בנוכחות גליקוזאמינוגליקנים אחרים (למעט קרטן סולפט), המקדם עולה.

כפי ש מאוחדאושרו שיטת הרסורצינול לקביעת ריכוז החומצות הסיאליות ושיטת האורסין לקביעת כל ההקסוזות שהן חלק מגליקופרוטאין והקסוזות הקשורות לסרוגליקואידים.

שיטת קביעת ריכוז רסורסינול
חומצות סיאליות (לפי סווננהולם)

עִקָרוֹן

כאשר גליקופרוטאינים בפלזמה מחוממים עם חומצה טריכלורואצטית, חומצות סיאליות מתפצלות, אשר בתורן עוברות הידרוליזה ליצירת חומצה נוירמינית. Resorcinol בנוכחות מלחי נחושת במדיום חומצה הידרוכלורית נותן צבע כחול עם חומצה נוירמינית.

ערכים תקינים

ריכוז החומצות הסיאליות בדם עולה עם תהליכים דלקתיים שונים (אנדוקרדיטיס, אוסטאומיאליטיס), עם שחפת, לוקמיה, לימפוגרנולומטוזיס, נפרוזה, עולה בחדות עם גידול מוחי, אוטם שריר הלב, עולה עם נזק לפרנכימה הכבד, קולגנוזות ועוד. תהליכים המתרחשים עם הרס רקמת חיבור.

ירידה ברמת החומצות הסיאליות בנסיוב נצפתה בחולים עם אנמיה מזיקה, המוכרומטוזיס, מחלת וילסון ותהליכים ניווניים במערכת העצבים המרכזית.

קביעת תכולת הסרומוקואידים וסך הכל
כמות הגליקופרוטאין בשיטת אוקסין

עִקָרוֹן

גליקופרוטאין מושקע יחד עם חלבוני סרום או פלזמה עם אלכוהול, המשקע נשטף, מומס באלקלי, ולאחר הידרוליזה עם חומצה גופרתית, ריכוז ההקסוזות נקבע על ידי תגובה עם אורצין, התואמת את תכולת הגליקופרוטאין.

כדי לקבוע סרומוקואידים, חלבונים מושקעים עם חומצה פרכלורית, בעוד שסרומקואידים אינם משוקעים. לאחר מכן, סרומוקואידים מושקעים מהסופרנטנט באמצעות חומצה פוספוטונגסטית, המשקע נשטף ולאחר המסתו באלקלי נקבעת רמת ההקסוזות.

ערכים תקינים

ערך קליני ודיאגנוסטי

כמות הגליקופרוטאין של הקסוז עולה בתהליכים דלקתיים שונים: שחפת, דלקת ריאות, דלקת ריאות, שיגרון חריף, גלומרולונפריטיס, סוכרת, אוטם שריר הלב, גאוט, ניאופלזמות ממאירות. חשיבות מיוחדת היא קביעת ריכוז הגליקופרוטאין במחלות אטיות, בעוד שעלייה בפעילות מצביעה על הפעלת התהליך, אם כי ייתכן שעדיין לא יופיעו תסמינים קליניים.

עלייה בתוכן של hexose seromucoids נצפית בכל התהליכים הדלקתיים והנקרוביוטיים: אוטם שריר הלב, גידולים ממאירים, דלקת כיס המרה כרונית, שחפת ריאתית הרסנית, שיגרון.

ירידה באינדיקטורים מזוהה בדלקת כבד זיהומית, ניוון כבד תאי וטרשת נפוצה.

המוגלובין מסוג גליקוזיל

המוגלובין, כמו חלבונים אחרים, כאשר הוא נשמר בתמיסה של גלוקוז או חד-סוכר מפחית אחר, עובר גליקוזילציה לא אנזימטית, כלומר, הוא מוסיף פחמימה למבנה שלו ליצירת בסיסים שיף. מידת הגלוקוזילציה של המוגלובין מתאימה ישירות לזמן הדגירה ולריכוז הגלוקוז במדיום. לפיכך, תכולת המוגלובין מסוכר (המסומן כ-HbA 1c) מאפיינת את הרמה הממוצעת של ריכוז הגלוקוז בדם למשך 4-6 שבועות, כלומר, לתקופה התואמת את משך החיים של מולקולת ההמוגלובין (זמן מחצית חיים הוא 90- 100 ימים).

ניתן להבחין בין הסוגים הנורמליים הבאים של המוגלובין: א 1(מהווה 96-98% ממאגר החלבונים הכולל), A2 (2‑5%), א 3 (<1%), ו(1-2%). המוגלובין A 1 מורכב משלושה מרכיבים: HbA 1a, HbA 1b ו-HbA 1c. המרכיב האחרון הוא המוגלובין גליקוזיל ונותן מתאם חזק עם דרגת הסוכרת.

1. כרומטוגרפי- המדויק ביותר, אך גוזל זמן ודורש כלים מיוחדים וריאגנטים.

2. אלקטרופורטי- נעשה שימוש במדיות שונות.

3. שיטות כימיות באמצעות הידרוליזה של קשר בין חלבון לשארית חד-סוכר.

קביעת רמת ההמוגלובין הגלוקוזיל
על ידי תגובה עם חומצה thiobarbituric

עִקָרוֹן

ערכים תקינים

נַסיוֹב

4,5‑6,1%

ערך קליני ודיאגנוסטי

רמת ההמוגלובין הגלוקוזיל עולה בסוכרת ומאפיינת את יעילות הטיפול. יחד עם זאת, עלייה בריכוז HbA 1c עד 8-10% מעידה על פיצוי טוב, עד 10-12% - בערך מפוצה חלקית, יותר מ-12% - על סוכרת לא מפוצה.

ירידה במדד נצפית במהלך התחדשות הדם לאחר איבוד דם.

• < Назад

מוזיאון "בית חולים חירום קליני בעיר הראשונה"

האוניברסיטה לרפואה בצפון המדינה

קורס אבחון מעבדה קליני

סך חלבון, משמעותו ושיטות הקביעה

מבוצע על ידי רופא מתמחה:

גרנט מ.מ.

ארכנגלסק 2008

מבוא

מִיוּן

חלבוני פלזמה

אלבומינים

גלובולינים

ערך קליני ודיאגנוסטי

היפופרוטאינמיה

היפרפרוטאינמיה

שיטות לקביעת סך החלבון בסרום הדם

רשימת ספרות משומשת

מבוא

חלבונים הם תרכובות אורגניות בעלות מולקולריות גבוהה המכילות חנקן, המורכבות מיותר מ-20 סוגים של חומצות אמינו אלפא. הגבול המותנה בין פוליפפטידים גדולים לחלבונים הוא המשקל המולקולרי של 8000-10000. חלבוני פלזמה מסונתזים בעיקר בכבד, בתאי פלזמה, בבלוטות הלימפה, בטחול ובמח העצם.

פלזמת דם אנושית מכילה יותר מ-100 חלבונים שונים, שונים במקורם ובתפקודם. מתוך 9-10% השאריות היבשות של פלזמת הדם, חלבונים מהווים 6.5-8.5%.

מִיוּן

פשוט (חלבונים) (מכיל רק חומצות אמינו)

קומפלקס (חלבונים) (חומצות אמינו ורכיבים שאינם חומצות אמינו: heme, נגזרות ויטמינים, שומנים או פחמימות)

פיברילרי (המרכיבים רקמות צפופות רבות)

גלובולרי (אלבומינים (4-5%), גלובולינים (2-3%), פיברינוגן (0.2-0.4%)

ישנן הקבוצות הפונקציונליות הבאות של חלבונים:

חלבוני תחבורה (טרנספרין)

חלבונים בשלב אקוטי (חלבון C-reactive)

חלבונים בשלב לא חריף (אלבומין, טרנספרין)

גורמי משלים וקרישה (משלים C4, פקטור VIII)

אנזימים (עמילאז)

אנטי אנזים (אנטיתרומבין III)

פרוטאוהורמונים (אינסולין)

אימונוגלובולינים (IgG)

חלבונים שתפקידיהם אינם מובנים היטב (חומצה אלפא גליקופרוטאין)

תפקידם הפיזיולוגי של חלבוני הפלזמה הוא לשמור על לחץ אוסמוטי קולואידי, יכולת החיץ של הפלזמה, ובמקרים מסוימים להפקיד (אחסון) מולקולות שומנים, מוצרים מטבוליים, הורמונים, חומרים רפואיים ומיקרו-אלמנטים. חלק מחלבוני הפלזמה מבצעים פונקציה אנזימטית, אימונוגלובולינים מבצעים חסינות הומורלית. רכיבי משלים וחלבון C-reactive חשובים ליישום עמידות לא ספציפית, במיוחד במקרה של זיהומים חיידקיים. האיזון בין גורמי הקרישה והמעכבים מבטיח שהדם בדרך כלל נוזלי ונקרש במהירות במקרה של פציעה.

בלדם פלזמה קי

אלבומים:

הערך המנורמל הוא 56.5 - 66.8 (אלבומין בסרום הדם מהווה כ-60% מסך החלבון. אלבומינים מסונתזים בכבד (כ-15 גרם ליום), זמן מחצית החיים שלהם הוא כ-17 ימים. לחץ פלזמה אונקוטי הוא 65 -80% עקב אלבומין. אלבומינים ממלאים תפקיד חשוב של הובלת חומרים פעילים ביולוגית רבים, בפרט הורמונים. הם מסוגלים להיקשר לכולסטרול, בילירובין. חלק ניכר מהסידן בדם קשור גם לאלבומין. אלבומין הם מסוגל לשלב עם תרופות שונות.

שינויים איכותיים וכמותיים באלבומין בדם אפשריים. שינויים איכותיים באלבומין הם נדירים מאוד בגלל ההרכב ההומוגני של חלק חלבון זה; שינויים כמותיים מתבטאים בהיפר-היפואלבומינמיה.

היפראלבומינמיה נצפית עם התייבשות במקרים של פציעות קשות, עם כוויות נרחבות, כולרה.

היפואלבומינמיה הן ראשוניות (בילודים כתוצאה מחוסר בשלות של תאי הכבד) ומשניות, עקב מצבים פתולוגיים שונים הדומים לאלו הגורמים להיפופרוטינמיה. כמו כן עשויה להמוליך תפקיד בהורדת ריכוז האלבומין, למשל במהלך ההריון. ירידה בתכולת האלבומין מתחת ל-22-24 גרם לליטר מלווה בהתפתחות של בצקת ריאות.)

גלובולינים:

אלפא 1 - 3.5 - 6.0 (המרכיבים העיקריים של חלק זה כוללים b 1 -אנטיטריפסין, b 1 - ליפופרוטאין, b 1 חומצי - גליקופרוטאין) (שינויים בשבריר של b 1 - גלובולינים נצפים בהחמרה חריפה, תת-חריפה של כרוני תהליכים דלקתיים; נזק לכבד; כל התהליכים של ריקבון רקמות או התפשטות תאים. נצפית ירידה בשבריר של b 1 - גלובולינים עם מחסור של b 1 - אנטיטריפסין, hypo - b 1 - ליפופרוטאינמיה.)

אלפא 2 - 6.9 - 10.5 (חלק מכיל b 2 - מקרוגלובין, הפטוגלובין, אליפופרוטאין A, B (apo-A, apo-B), C, ceruloplasmin) (עלייה בשבריר b 2 - גלובולינים נצפית בכל סוגי החריפים תהליכים דלקתיים, במיוחד בעלי אופי אקסודטיבי ומוגלתי בולט (דלקת ריאות, אמפיאמה פלאורלית, סוגים אחרים של תהליכים מוגלתיים); מחלות הקשורות למעורבות של רקמת חיבור בתהליך הפתולוגי (קולגנוזיס, מחלות אוטואימוניות, מחלות ראומטיות); גידולים ממאירים; שלב ההתאוששות מכוויות תרמיות; תסמונת נפרוטית; המוליזה של דם במבחנה. ירידה בשבר נצפית בסוכרת, דלקת לבלב (לפעמים), צהבת מולדת ממקור מכני בילודים, דלקת כבד רעילה. B 2 - גלובולינים כוללים את עיקר חלבוני פאזה אקוטי.עלייה בתכולתם משקפת את עוצמת תגובת הלחץ והתהליכים הדלקתיים בסוגי פתולוגיה אלו.

בטא - 7.3 - 13.0 (שברית b מכילה טרנספרין, המופקסין, רכיבים משלימים, אימונוגלובולינים וליפופרוטאינים) (עלייה בשבריר הבטא-גלובולין מתגלה בהיפרליפופרוטאין ראשונית ומשנית, מחלות כבד, תסמונת נפרוטית, כיבי קיבה מדממים. ירידה בתכולת בטא גלובולינים מתגלה ב-gopo-beta lipoproteinemia.

גמא - 12.8 - 19.0 (שבריר g מכיל Ig (IgG, IgA, IgM IgD, IgE), לכן, עלייה בתכולת g-globulins נצפתה במהלך התגובה של מערכת החיסון, כאשר AT ונוגדנים עצמיים מיוצרים: עם זיהומים ויראליים וחיידקיים, דלקת, קולגנוזיס, הרס רקמות וכוויות.היפרגמגלבולינמיה משמעותית, המשקפת את פעילות התהליך הדלקתי, אופיינית לדלקת כבד פעילה כרונית ושחמת הכבד.עלייה בשבריר g - גלובולין נצפית ב-88 -92% מהחולים עם הפטיטיס פעילה כרונית (וב-60-65% מהחולים היא בולטת מאוד - עד 26 גרם/ליטר ומעלה).כמעט אותם שינויים מצוינים בחולים עם שחמת כבד פעילה ומתקדמת מאוד , עם כל זה, תכולת ה-g-globulin עולה לרוב על תכולת האלבומין, שנחשב לסימן פרוגנוסטי גרוע.

במחלות מסוימות תיתכן סינתזה מוגברת של חלבונים הנכנסים לשבריר ה-g-globulin, ובדם מופיעים חלבונים פתולוגיים - פראפרוטאינים, המתגלים באלקטרופורזה. יש צורך באימונואלקטרופורזה כדי להבהיר את אופי השינויים הללו. שינויים דומים נראים במיאלומה נפוצה, מחלת ולדנסטרום.

הירידה בתכולת ה-g-globulins היא ראשונית ומשנית.

ישנם שלושה סוגים עיקריים של היפוגמגלבולינמיה ראשונית: פיזיולוגית (בילדים בגילאי 3-5 חודשים), מולדת ואידיופתית. הגורמים להיפוגמגלבולינמיה משנית יכולים להיות מחלות ומצבים רבים המובילים לדלדול של מערכת החיסון.

השוואה בין כיוון השינויים בתכולת אלבומינים וגלובולינים לשינויים בתכולת החלבון הכוללת נותנת בסיס למסקנה כי היפרפרוטאינמיה קשורה לעתים קרובות יותר להיפרגלובולינמיה, בעוד שהיפופרוטאינמיה נובעת לרוב מהיפואלבומינמיה. בעבר נעשה שימוש נרחב בחישוב יחס האלבומין-גלובולין, כלומר היחס בין גודלו של חלק האלבומין לגודלו של חלק הגלובולין. בדרך כלל, נתון זה הוא 2.5-3.5. בחולים עם דלקת כבד כרונית ושחמת הכבד, מקדם זה יורד ל-1.5 ואף ל-1 עקב ירידה בתכולת האלבומין ועלייה בשיעור הגלובולין. בשנים האחרונות ניתנה יותר ויותר תשומת לב לקביעת תכולת הפרה-אלבומינים, במיוחד בחולי החייאה קשים העוסקים בתזונה פרנטרלית. ירידה בריכוז פרה-אלבומין היא בדיקה מוקדמת ורגישה של מחסור בחלבון בגוף המטופל.)

יחס A/G משמש בדרך כלל כמדד ליחס בין אלבומין לגלובולינים.

ניתן להבחין בשינויים במקדם זה בשחמת כבד, גלומרולונפריטיס, תסמונת נפרוטית, דלקת כבד חריפה, זאבת אריתמטית מערכתית.

ריכוז החלבונים בפלסמה בדם תלוי ביחס שבין קצב הסינתזה וההפרשה שלהם מהגוף וכן בנפח הפיזור.

חלבונים רבים נוצרים בכבד, תאי פלזמה ולימפוציטים מסנתזים אימונוגלובולינים, מקרופאגים - חלבונים של מערכת המשלים. אובדן פסיבי של חלבונים במשקל מולקולרי נמוך מתרחש דרך הגלומרולי הכלייתי ודופן המעי. חלק מהחלבונים הללו נספגים מחדש או נספגים ומתפרקים ברירית המעי. רוב חלבוני הפלזמה, לאחר שנקלטו בפינוציטוזיס, מקוטלים בתאי אנדותל נימיים או בפגוציטים חד-גרעיניים.

תפקידים פיזיולוגיים של חלבוניםהדם הם רבים, העיקריים שבהם:

· שמירה על לחץ קולואיד-אונקוטי, שמירה על נפח הדם, קשירת מים ושמירתם, מניעת יציאתם מזרם הדם;

לקחת חלק בתהליכי קרישת הדם;

· לשמור על קביעות ה-pH של הדם, מה שיוצר את אחת ממערכות החיץ של הדם;

בחיבור עם מספר חומרים (ChS, בילירובין וכו'), כמו גם עם תרופות, הם מעבירים אותם לרקמות.

לשמור על רמה תקינה של קטיונים בדם על ידי יצירת תרכובות שאינן ניתנות לדיאליזה איתם (לדוגמה, 40-50% מהסידן בסרום קשורים לחלבונים; חלק ניכר מברזל, נחושת, מגנזיום ויסודות קורט אחרים קשור גם חלבונים);

· לשחק תפקיד חשוב בתהליכים חיסוניים;

לשמש כעתודה של חומצות אמינו;

· לבצע פונקציה רגולטורית (הורמונים, אנזימים וחומרי חלבון פעילים ביולוגית אחרים).

לערך ליניקו-דיאגנוסטי

Normoproteinemia - תכולת חלבון כוללת תקינה

היפופרוטאינמיה - מופחתת סך החלבון

היפרפרוטאינמיה - תכולת חלבון גבוהה

היפופרוטאינמיה

1. צריכה לא מספקת של חלבון מזון, נצפית בדרך כלל עם תת תזונה, רעב, גידולים, היצרות של הוושט, פגיעה בתפקוד מערכת העיכול (עקב הידרדרות בעיכול ובספיגה של מרכיבי החלבון במזון), למשל, עם ממושך תהליכי מעיים דלקתיים.

לפי א.א. פוקרובסקי, אפילו הרכב חומצות אמינו לא מאוזן של מזון יכול לפעמים להוביל להיפופרוטינמיה.

כדי להבטיח תהליכי חיים תקינים, הגוף מנצל את חלקיק האלבומין של חלבוני הפלזמה בדם. עם צריכה מוגברת של אלבומין (הגורם בעיקר ללחץ דם אונקוטי), מתפתחת בצקת אונקוטית או רעבה. באופן כללי, כל ירידה בתכולת החלבון בפלסמת הדם מתחת ל-5 גרם% מלווה לעתים קרובות בבצקת רקמה היפופרוטאינמית.

2. הפחתת תהליכי הביוסינתזה של חלבון (דלקת כבד פרנכימית כרונית, מחלות אקוטיות וכרוניות, תהליכי ספירה ממושכים, ניאופלזמות ממאירות, תירוטוקסיקוזיס חמורה וכו').

3. איבוד חלבון על ידי הגוף במהלך דימום חריף וכרוני, עם חדירות מוגברת חדה של דפנות נימי דם (עם הנזקים הרעילים שלהם, כאשר חלבוני הדם משתחררים לרקמות), עם שטפי דם, היווצרות של exudates נרחב, ספיגה ב serous. חללים, ובצקות.

שחרור חלבונים (בעיקר אלבומינים) מזרם הדם מתרחש כאשר מסנן הכליות מופרע עקב מחלות כליה אורגניות (בעיקר נפרוזה ועמילואידוזיס), בהן חלבון נמצא כמעט תמיד בשתן, וכן בכוויות.

4. Defectoproteinemia (אלבומינמיה) - היעדר מולד או תוכן לא מספיק של ceruloplasmin בפלסמת הדם במחלת וילסון.

5. בנשים בזמן הנקה ובחודשי ההריון האחרונים.

6. תסמונת נפרוטית

7. קוושיורקור (מחסור חריף בחלבון)

8. תסמונת שימור מלח

היפרפרוטאינמיה

1. התייבשות רצינית

2. עם התעבות של הדם עקב איבוד קל של נוזלים, שקורה עם שלשולים רבים, הזעה מוגברת, הקאות בלתי ניתנות לשליטה, סוכרת אינספידוס, כולרה, חסימת מעיים, דלקת צפק כללית, כוויות קשות, מניעת מים.

3. בפוליארתריטיס כרונית וכמה וכמה תהליכים דלקתיים כרוניים.

4. היפרפרוטאינמיה מתמשכת של עד 12 גרם% ומעלה נצפית במיאלומה נפוצה (פלסמאציטומה), ונדלסטרום מקרוגלובלינמיה, שבה מוקדים נוספים והיווצרות חלבונים "לא תקינים", פתולוגיים - פרפרוטאינים מופיעים בעצמות השטוחות של הגולגולת.

היפופרוטאינמיה קשורה כמעט תמיד עם היפואלבומינמיה, והיפפרוטאינמיה עם היפרגלובולינמיה.

הגוף מפצה על היפואלבומינמיה בהיפרגלובולינמיה (גם אם אין גירוי של המערכת הרטיקולואנדותל) על מנת לשמור על רמת הלחץ האוסמוטי הקולואידי. להיפך, העלייה בגלובולינים מפוצה על ידי היפואלבומינמיה.

ערך אבחוני חשוב הוא הבהרת הקשרים הכמותיים בין חלקים בודדים של סרום הדם. המחקר שלהם מאפשר בידול של מחלות גם כאשר תכולת החלבון הכוללת בסרום אינה משתנה.

שיטות לקביעת סך החלבון בסרום הדם

ערכי התייחסות של ריכוז החלבון הכולל בסרום הדם - 65-85 גרם/ליטר

1. חנקן

2. קביעת המשקל הסגולי של הסרום

3. משקל (גרבימטרי), כאשר חלבוני דם מושקעים, מיובשים למשקל קבוע ומשקללים במאזן אנליטי.

4. רפרקטומטרי

5. קולורימטרי

6. נפלומטרי

7. פולרימטרי

8. ספקטרומטרי

1. רפרקטומטר IRF - 454 B2M

נועד לקבוע את החלבון בסרום הדם, בנוזל השדרה, לשלוט בריכוז התרופות, למדוד את צפיפות השתן.

2. קובאסאינטגרה - סך הכלחֶלְבּוֹןג'נרל.2

עקרון הבדיקה: נחושת דו ערכית מגיבה בתמיסה אלקלית עם קשרי פפטיד חלבוניים ליצירת קומפלקס ביאורט האופייני בצבע סגול.

3. קביעת שברי חלבון של סרום דם על ידי אלקטרופורזה על סרט תאית אצטט.

תמיסת המאגר מיועדת להפרדה אלקטרופורטית של חלבוני סרום בדם על גבי ממברנות תאית אצטט עם קביעה דנסימטרית לאחר מכן של שברי חלבון.

עיקרון השיטה

עקרון ההפרדה האלקטרופורטית של חלבונים מבוסס על מהירות התנועה השונה של מולקולות חלבון בדם בשדה חשמלי קבוע בעוצמה מסוימת. חלקי החלבון המופרדים נצבעים בצבע. עוצמת הצבע של שברי חלבון פרופורציונלית למספרם.

הדגימות נותחו

סרום ללא המוליזה, ליפמיה ואינו איקטרי. חלקי חלבון של סרום הדם יציבים בצינור סגור היטב ב-18-25 למשך 8 שעות, ב-2-8 למשך 3 ימים, ב-20 למשך חודש.

אָנָלִיזָה

1. ביצוע אלקטרופורזה

1.1. הניחו ממברנות יבשות בזהירות על פני מאגר האלקטרופורזה, הימנעו מהטבילה המהירה שלהן, והחזיקו עד להרטבה מלאה. ספג בעדינות ממברנות רטובות בין יריעות של נייר סינון עבה, ומונע מהן להתייבש. לפני יישום הדגימות, רצוי לבצע את שלב הקדם-פורזה. לשם כך, יש למקם את הממברנה בתא האלקטרופורזה ולהפעיל את הזרם במצב הנבחר למשך 10 דקות. ניתן להחליף את שלב הקדם-פורזה על ידי השרייה ממושכת של הממברנה בתמיסת חיץ (מספר שעות).

1.2. באמצעות המוליך, מרחו את דגימות סרום הדם המנותחות במרחק של 2-3 ס"מ מקצה הקתודה של הממברנה. מניחים את הממברנה בתא אלקטרופורטי ומחברים את הזרם.

2. עיבוד אלקטרופרוגרמה

2.1. צבע Crimson S.

לאחר כיבוי הזרם, העבירו בזהירות את הממברנה לתמיסת הצבע למשך 3-5 דקות, ואז פעמיים למשך 3 דקות לתמיסת חומצה אצטית 5-7% (עד שהרקע מלבין).

1.2. לעבד את האלקטרופורגרמה באמצעות סורק ותוכנית מחשב.

4. בדיקת תימול

עקרון השיטה:

סרום בטא-גלובולינים, גמא-גלובולינים וליפופרוטאינים מושקעים ב-pH 7.55 עם ריאגנט תימול. בהתאם לכמות וליחס ההדדי של שברי חלבון, מתרחשת עכירות במהלך התגובה, שעוצמתה נמדדת באופן עכור.

ערך קליני ודיאגנוסטי:

בדיקת תימול מתאימה יותר למחקר תפקודי של הכבד מאשר דגימות עמידות לקולואידים. מאמינים שהוא חיובי ב-90-100% מהמקרים של מחלת בוטקין (כבר בשלב הפראיקטרי שלה ובצורה אנקטרית) ובדלקת כבד רעילה. התגובה חיובית בפוסט-הפטיטיס ובפוסט-נקרוטי, במיוחד שחמת איקטרית (בניגוד לצורות אחרות של שחמת), מחלות קולגן, מלריה וזיהומים ויראליים. עם צהבת חסימתית, היא (ב-75% מהמקרים) שלילית, שיש לה ערך אבחון דיפרנציאלי.

עם צהבת חסימתית, הבדיקה הופכת חיובית רק אם התהליך מסובך על ידי דלקת כבד פרנכימלית. להבדיל בין צהבת חסימתית לצהבת פרנכימית יש חשיבות רבה לשימוש בבדיקת תימול עם בדיקת בורשטיין (עבור בטא ופרה-בטליפופרוטאין).

עם צהבת parenchymal, שתי הבדיקות חיוביות, עם צהבת חסימתית, בדיקת תימול שלילית, ובדיקת בורשטיין חיובית באופן חד.

מרשימה של ספרות משומשת

1. חלבונים ספציפיים באבחון מעבדה קליני: שאלות ותשובות. - Töpfer G., Toma R., Tsavta B., M., 2004. - 96s

GLYCOPROTEIDS (גליקופרוטאין) הם ביו-פולימרים המורכבים ממרכיבי פפטיד (חלבון) ופחמימות מקושרים קוולנטיים. במקרים בהם החלק הפחמימתי של מולקולת G. מורכב משאריות או שאריות גלוקוז, G. נקראים גלוקופרוטאינים. G. נמצא בגוף של בעלי חיים, חיידקים וצמחים ומהווה את המעמד הנרחב והנחקר ביותר של תרכובות המכילות פחמימות. G. הם חלק מממברנת התא, מסתובבים בזרם הדם כמולקולות הובלה - למשל טרנספרין, צרולופלסמין (ראה דם). גליקופרוטאין כוללים כמה הורמונים, אנזימים ואימונוגלובולינים. אחת ההצעות הראשונות מדוע חלבונים זקוקים לרכיב פחמימה נעשתה על ידי Eylar (E. H. Eylar, 1965). כאשר בוחנים מספר גדול למדי של G., הוא גילה שכולם נמצאים מחוץ לתא, בזרם הדם, ברוק, בחלב ובסודות אחרים. בהתבסס על עובדה זו, הוא הציע השערה, לפיה מרכיב הפחמימות הוא סוג של מעבר, לאחר קבלת טו-רוגו מולקולת החלבון חייבת לעזוב את התא. אולם מאוחר יותר התקבלו נתונים המצביעים על כך שחלבונים תוך תאיים רבים הם G. ומהווים חלק ממברנות תוך תאיות שונות ומהקרום הציטופלזמי. בנוסף, נמצאו חלבונים שאינם מסוכרים (אלבומין, א-לקטלבומין, כימוטריפסינוגן ועוד) בסודות שונים ובנסיוב דם. לפיכך, השערת עילר אינה יכולה לטעון שהיא פתרון אוניברסלי לשאלת תפקידו של מרכיב הפחמימות. במחקרים נוספים, נמצא שאם חומצה סיאלית מפוצלת אנזימטית מחלק הפחמימות של מספר G. נסיוב (ceruloplasmin, haptoglobin, fetuin, orosomucoid), אזי זמן מחצית החיים של אסיאלו-גליקופרוטאינים אלו יקטן מכמה עשרות שעות עד מספר דקות. במקרה זה, כל האסיאלו-גליקופרוטאינים הללו נקשרים לממברנות של תאי כבד פרנכימליים.

מספר גליקופרוטאינים - הורמונים (למשל הורמונים גונדוטרופיים ומעוררי זקיקים) לאחר הסרת הסיאליק ל - לא נעלמים מהר מאוד מזרם הדם וכמו בסרום G. נמצאים בתאי הכבד. כתוצאה מכך, ההורמון אינו נקשר לתאי המטרה והביול שלו, הפעולה מופחתת בחדות.

שיטות ביוכימיות לקביעת גליקופרוטאין

בביול, נוזלים, דם ושתן יש תערובת של G שונים. כדי לבודד כל אחד מהם בצורה טהורה, נדרשת טכניקה מורכבת, לאורך זמן, המקשה על השימוש בו למחקרים סדרתיים. לכן, בתרגול טריז, הנפוצה ביותר היא ההגדרה הכוללת של G. לפי אחד המרכיבים של חלק הפחמימה הכלולים בהם - הקסוזות, הקסוסמינים, פוקוזה, סיאליק טו-תם או לפי היכולת לתת תגובה יוד to - that - ריאגנט של שיף (ראה מגיב של שיף).

ניתן לחלק את השיטות הנפוצות ביותר לקביעת G. לשתי קבוצות עיקריות: כימית ואלקטרופורטית. למחקרים מיוחדים נעשה שימוש בשיטות כרומטוגרפיות, פולארוגרפיות ורדיואימונולוגיות.

הכי כימיה. השיטות מבוססות על קביעת החלק הפחמימתי של מולקולת G. תוך שימוש בתגובות צבע שונות המבוססות על אינטראקציה של חד סוכר עם חומצה גופרתית ליצירת נגזרת פורפורלית (לדוגמה, תגובות עם אורצין, אנטרון, טריפטופן, קרבאזול, דיפנילמין, resorcinol, alpha-naphthol). תגובות כאלה נותנות מוצר צבעוני עם אחת מהתרכובות המפורטות או בסיס חנקני ארומטי. כמות המוצר הצבעוני שנוצר נקבעת על ידי פוטו-אלקטרוקולורימטריה. המדויקת ביותר היא השיטה לקביעת hexoses, באמצעות תגובת צבע עם orcin או resorcinol; הרגישה ביותר היא השיטה באמצעות אלפא-נפתול, אשר, עם זאת, משמשת לעתים קרובות יותר למחקרים אינדיקטיביים.

כמעט כל השיטות המשמשות לקביעת אמינוסוכרים מבוססות על השיטה הקלאסית של אלסון-מורגן (1933). עיקרון השיטה הוא שסוכר האמינו מגיב עם אצטיל אצטון בתמיסה חמה מעט בסיסית. במקביל, נוצרת תערובת של פירולים, שנותנת צבע אדום עם המגיב para-dimethylaminobenzaldehyde, שעוצמתו נקבעת פוטומטרית ב-530 ננומטר. גלוקוזאמין נותן כמעט את אותו צבע כמו גלקטוזאמין; עם מאננוסאמין, הצביעה חלשה במקצת. גלוקוזמין הידרוכלוריד משמש בעיקר לבניית עקומת כיול.

כדי לקבוע פוקוז, משתמשים בתגובה שבה מוסיפים ציסטאין הידרוכלורי לתוצר האינטראקציה של G. עם חומצה גופרתית.

תגובה זו היא הבסיס כמעט לכל השיטות המשמשות לקביעת מתילפנטוז (ראה שיטת Dische).

מוצעות מספר שיטות לאיתור והגדרה כמותית של סיאליק ל- t: שיטה אורצינובית עם ריאגנט של ביאל, שיטת resorcinol, שיטה עם תגובת thiobarbituric to - that, תגובת דיפנילמין ושיטת הס (ראה תגובת הס). הרגישה והספציפית ביותר היא השיטה עם חומצה thiobarbituric. האלקטרופורזה של G. הוצגה לראשונה על ידי Keiv and Gronwall (E. Koiw, A. Gronwall) בשנת 1952. מתוארים מספר שינויים בשיטה זו; חסרון משותף של רובם הוא המורכבות ההשוואתית של השיטה או צבע משמעותי של הרקע באלקטרופורגרמות. עקרון השיטה והטכניקה לביצוע אלקטרופורזה G זהים להפרדה אלקטרופורטית של חלקי חלבון של סרום דם על נייר (ראה אלקטרופורזה).

הוצעו מספר שיטות לזיהוי שברי גליקופרוטאין; צביעה בכחול טולואידין, ברזל קולואידי, כחול אנסיאנו וכו'. עם זאת, השיטה הנפוצה ביותר לצביעה של גליקופרוטאינים עם ריאגנט של שיף, שהתבססה על התגובה (יוד ל- פוקסין-גופריתי לזה), שהוצעה במקור על ידי Hotchkiss (R. D. Hotchkiss) ומק מאנוס (J. F. A. McManus) לצביעה של G. בגיסטול, קטעים. העיקרון של שיטה זו הוא שרכיבי הפחמימות של ג' מתחמצנים על ידי תמיסה של יוד לאלדהידים, ואלדהידים יוצאים לאור בעזרת הריאגנט של שיף. לקביעה כמותית, שברים צבעוניים נפלטים מאלקטרופורגרמות, ולאחר מכן פוטומטריה של eluates, או נקבעים באמצעות דנסיטומטריה (ראה).

באדם בריא, לפי מחברים שונים, התוכן היחסי של השברים של ג' (ב%) הוא כדלקמן: אלבומין - 10.4-16.6; אלפא 1 -גלובולין - 14.2-18.3; אלפא 2 -גלובולין - 24.8-31.8; בטא-גלובולין - 21.7-25.0; אוגלובולין - 16.0-19.2.

האחוז הגבוה ביותר של תכולת הפחמימות מצוין בשברי גלובולינים, במיוחד באלפא2 ובטא גלובולינים (ראה גלובולינים).

מבטיחה היא שיטת האימונואלקטרופורזה (ראה), כמו גם שיטת האלקטרופורזה בג'ל פוליאקרילאמיד (PAGE), שהרזולוציה שלה יכולה להיות גבוהה פי 10 מהרזולוציה של אלקטרופורזה על הנייר.

תוצאות קביעת הגליקופרוטאין הן בעלות ערך אבחוני דיפרנציאלי רב במחלות של רקמת החיבור, מערכת הלב וכלי הדם, הלך.- קיש. מערכת העיכול, הכבד, הכליות, הריאות. במקביל ללימוד שינויים בתחזוקה של חומרים אלו בסרום הדם ובביול אחרים, נוזלים בנוסף לטריז, לנתונים יש חשיבות רבה לאומדן של פטרול עדכני, תהליך, יעילות הטיפול ולתחזית. בתהליכים דלקתיים - שיגרון חריף, שחפת, דלקת ריאות, פלאוריטיס, יש עלייה בתכולת כל השברים של G. בסרום הדם, במיוחד גלובולינים אלפא 1 - ואלפא 2. קביעת התכולה המוחלטת והיחסית של ג' בסרום הדם בראומטיזם היא בעלת החשיבות הגדולה ביותר. הריכוז של ג' בסרום הדם עולה גם עם גלומרולונפריטיס, גידולים, נמק, ולעיתים קרובות עם סוכרת.

שיטות היסטוכימיות לקביעת גליקופרוטאין ברקמות

שיטות הזיהוי של Gistokhim, G. מבוססות על זיהוי הקבוצות התגובתיות שלהן, כגון קבוצות 1,2-glycol, וגם קבוצות קרבוקסיליות של סיאלי ל- t. לקיבוע של G. ניתן להשתמש בתמיסה של 10% פורמלין ב- t° מ-0 עד 4° תוך 24-48 שעות. ישנן שיטות קיבוע עם תוספת של מלחים מסוימים לפורמלין, וכן חומרי ניקוי קטיוניים שונים (ראה), התורמים לשימור טוב יותר של פוליסכרידים ולהתמיינות ההיסטוכימית שלהם לאחר מכן. יש להעדיף את שיטת הייבוש בהקפאה של מקטעים ולאחר מכן הטבעה בפרפין. קיימות מספר לא מבוטל של שיטות היסטוכימיות והשינויים שלהן לזיהוי פוליסכרידים, אך לא כולן אמינות מספיק וזמינות מבחינה מעשית. האמינה ביותר בשימוש חובה בתגובות בקרה ומוצדקת מנקודת מבט של כימיה היא שיטת מקמנוס-הוצ'קיס-שבדש. במעבדות של ארצנו, השינוי של Shabadash משמש לרוב. השיטה מבוססת על חמצון של קבוצות 1,2-גליקול של פוליסכרידים עם מלח יוד אליך, ולאחר מכן זיהוי אלדהידים המתקבלים כתוצאה מתגובת פוקסין-גופרית לזה (ריאגנט של שיף). באזורי לוקליזציה של רירי וגליקופרוטאינים מתפתח צביעה סגול-אדום בעוצמה משתנה. בנוסף לתרכובות אלו, התגובה חושפת גם גליקוגן, גליקוליפידים ואלדהידים חופשיים. אלדהידים לא ספציפיים יכולים להופיע גם כתוצאה מחמצון של תרכובות עם קשרים בלתי רוויים במהלך קיבוע החומר עם פורמלין. לכן, כדי להשיג תוצאות אמינות, יש צורך בקרה היסטוכימית זהירה: קודם כל, יש צורך לשלול נוכחות של אלדהידים חופשיים ולא ספציפיים, ואם הם קיימים, לבצע תגובה חוסמת. שימוש ב-malt diastase (במקרים קיצוניים, עמילאז רוק), ניתן לשלול נוכחות של גליקוגן.

ריאגנטים נחוצים: פוקסין בסיסי גבישי (או מה שנקרא פוקסין בסיסי עבור פוקסין-גופריתי לך), 1 N. HCl, אשלגן או נתרן metabisulfite (K 2 S 2 O 5 או Na 2 S 2 O 5), מלח אשלגן תקופתי או טוב יותר (KIO 4), דיאסטז מאלט מטוהר מאוד, הידרוקסילאמין הידרוכלוריד. לתגובת האצטילציה: פירידין נטול מים ואנהידריד אצטי, 0.1 N. אשלגן קאוסטי (KOH), תרופת neuraminidase. שומנים מוסרים על ידי טיפול בממסים שונים (למשל, תערובת חמה של כלורופורם ומתיל אלכוהול).

התקדמות הגדרה. קטעים סדרתיים, ניסיוניים ובקרה, מטופלים בתמיסת אשלגן פריודאט, נשטפים במהירות במים, ומניחים במגיב של שיף, ולאחר מכן נשטפים בתמיסה טרייה של ביסולפיט (10 מ"ל של תמיסת 10% של אשלגן מטביסולפיט, 10 מ"ל של 1 N HCl ו-200 מ"ל מים מזוקקים). החלקים נשטפים ביסודיות בנפח גדול של מים, מיובשים באלכוהול, מנקים בקסילן ומורכבים בבלסם קנדי ​​ניטרלי.

תגובת האצטילציה של קבוצות גליקול והשימוש ב- neuraminidase מאשרים את מהימנות התוצאות שהתקבלו.

בִּיבּלִיוֹגְרָפִיָה Anasashvili A. Ts Glycoproteins of blood serum and urine, M., 1968, bibliogr.; Widershine G. Ya תרכובות המכילות פחמימות, הביוסינתזה שלהן ותפקידן בתא החי, מולק. ביול., ת' 10, מס' 5, עמ'. 957, 1976, ביבליוגרפיה; גליקופרוטאין, עורך. א גוטשלק, טרנס. מאנגלית, כרך 1 - 2, מ', 1969; D ere-vitskaya V. A. כימיה של גליקופרוטאין, Usp. ביול. chem. ed. ב.נ. סטפננקו, כרך 8, עמ'. 168, מוסקבה, 1967; הנחיות לשימוש בשיטות מחקר מעבדתיות קליניות מאוחדות, עורך. V. V. Menshikov. מוסקבה, 1973. פירס אי היסטוכימיה, טרנס. מאנגלית, עמ'. 741 ואחרים, מ', 1962; עקרונות ושיטות של ניתוח היסטורי-ציטוכימי בפתולוגיה, עורך. ע"פ אבצינא ואחרים עמ' 22. ע"פ. 7, L., 1971; Spiro R. G. Glycoproteins, Advanc. Protein Chem., v. 27, p. 349, 1973, ביבליוגר.

ג'יא וידרשיין; א' תס' אנאשווילי (מחקר מת'), ר' א' סימקובה (עיקר).

גליקופרוטאיןקיבלו את שמם מהמילה "גלוקוס" - מתוק, כי נמצא שהם מכילים פחמימות. הקבוצה התותבת מיוצגת על ידי פחמימות שונות ונגזרותיהן, הקשר שלה עם החלבון הוא קוולנטי, פחמימה-פפטיד.

כעת הוכח שכמעט כל החלבונים (למעט אלבומינים בדם) מכילים כמות קטנה של פחמימות, ולכן רק אותם חלבונים בעלי ריכוז פחמימות של יותר מ-4% שייכים לגליקופרוטאין.

לכל הגליקופרוטאין יש משקל מולקולרי גבוה (עד כמה מיליוני D), תכונות חומציות, מסיסות במים, תמיסות חלשות של מלחים ואלקליים ניטרליים, משקעים על ידי חומצות ובעלות צמיגות גבוהה. הם עמידים בחום, שכן הפחמימות הכלולות בהרכבן מגבירות באופן משמעותי את עמידות מולקולות לכימיקלים ולחום שונים, מגינות עליהן מפני פעולת פרוטאזות, ובכך קובעות את התפקיד הביולוגי של הגליקופרוטאין. פחמימות מעניקות לחלבונים סגוליות רבה יותר; בשל קבוצות אלה, מקרומולקולות גליקופרוטאין יכולות לזהות מבנים אחרים.

גליקופרוטאין מצויים בכמויות גדולות בחומר הבין-תאי של רקמת החיבור, פלזמת הדם, הרוק וסודות נוספים, כחלק מהקרומים הציטופלזמיים והממברנות התוך-תאיות השונות, בציטוזול. תפקידם של גליקופרוטאינים הוא מגוון. הם מעבירים חומרים הידרופוביים ויוני מתכת; בהיותם חלק מקולטני הממברנה, הם מספקים ספציפיות של מגע עם תאים, משפיעים על התמיינות רקמות, משתתפים בתגובות אימונולוגיות, מבצעים תפקיד מגן, מכסים את הממברנות הריריות.

הם מחולקים לגליקופרוטאינים אמיתיים ולפרוטאוגליקנים. חלוקה זו מבוססת על % יחס שונה של חלק החלבון וקבוצת התותבת, וכן על מבנה קבוצת התותבת.

1. גליקופרוטאין אמיתי, מבנה, נציגים: מוצינים; אימונוגלובולינים; חלבונים הקובעים את קבוצת הדם; הורמונים; חלבוני הובלה; אנזימים; קולטנים, משמעותם, התפלגות.

כחלק מגליקופרוטאין אמיתיחלק החלבון מהווה כ-80%, וחלקה של קבוצת התותבות הוא כ-20%. בגליקופרוטאינים אמיתיים, הקבוצה התותבת מיוצגת על ידי פוליסכרידים שאין להם מבנה קבוע. הקבוצה התותבת של גליקופרוטאין אמיתית כוללת חד-סוכרים שונים ונגזרות האמינו שלהם, חומצות נוירמיניות או סיאליות בשילובים ויחסים שונים, כלומר. לחלק התותב של גליקופרוטאין אמיתי אין מבנה קבוע. גליקופרוטאין אמיתי מופץ באופן נרחב בגוף ומבצעים מגוון פונקציות.

גליקופרוטאין אמיתי כוללים: mucins, חלבונים הקובעים את סוג הדם; קולטנים, אנזימים, הורמונים, חלבוני תחבורה.

Mucins- אלו חלבוני ריר, הממוקמים בחלל הפה, מכסים את כל הריריות. הם מורכבים מחלבון פשוט, וקבוצת התותבת כוללת חד-סוכרים, הקסוסמינים, חומצות סיאליות ונויראמיניות בכמויות שונות ובשילובים שונים. מבין החד-סוכרים בהרכב המוצינים הם: גלוקוז, גלקטוז, פוקוז וכו'. הצמיגות של המוצינים תלויה בכמות החומצות הסיאליות. ערך המוצינים: מגן - מכסה את הריריות של מערכת העיכול, מערכת הנשימה, מערכת השתן - מגן עליהם מפני התייבשות ומפני חשיפה לגורמים פיזיקליים וכימיים.

חלבונים הקובעים את סוג הדם.

החלבונים הקובעים את הספציפיות הקבוצתית של הדם, על פי מבנה קבוצת התותבות, שייכים לגליקופרוטאין אמיתיים, אך שונים מהם בתכולת הפחמימות הגבוהה (עד 85%) שלהם, בנוכחות קבוצת התותבת אצטיל גלוקוזאמין במולקולה. , ובנייה מאוד מוזרה של חלק החלבון, שככל הנראה מעורב בשמירה על מבנה מסוים של שרשראות פחמימות. המוזרות של חלק החלבון טמונה בעובדה ש-2/3 מכל חומצות האמינו הן 4 חומצות אמינו: tre, pro, ser, ala, כלומר. ההרכב הכמותי של חלבונים, ללא קשר לספציפיות שלהם, דומה מאוד. הפעילות האנטיגנית של חלבונים אלו נקבעת לפי רצף הפחמימות הבא בקצות שרשרת הפחמימות: D-galactose-N-acetylglucosamine-D-galactose-N-acetylglucosamine. סוג הדם תלוי באיזו פחמימה מחוברת לשבר זה. עבור חומר H זהו פוקוז, עבור חומר A הוא פוקוז ו-N-אצטיל-גלקטוזאמין שקובע את הספציפיות של A, עבור החומר B פוקוז וגלקטוז טרמינלי שקובע את הספציפיות B. לפיכך, ניתן להשיג הבדלים בספציפיות של שרשראות פחמימות על ידי הצמדת פוקוזה, N-אצטילגלקטוזאמין או גלקטוז למקטע הטרמינל, וחומר H יכול להיחשב כמבשר של חומרים ספציפיים לקבוצה A ו-B. תגובתיות סרולוגית מלאה של הקבוצה חומרים ספציפיים אפשריים רק אם שלמות המולקולה כולה של תרכובות אלו נשמרת. .

קולטניםממוקם על פני השטח החיצוניים של הממברנות, הציטופלזמה בממברנות של אברונים. חלק מהאנזימים וחלק מההורמונים מכילים פחמימות, וגם חלבונים כמו טרנקורטין, הפטוגלובין, אימונוגלובולינים שייכים לגליקופרוטאין.

2. פרוטאוגליקנים, מבנה, נציגים, משמעות.

במולקולת פרוטאוגליקן, להיפך, חלקם של החלבונים הוא בין 2-2.3% ל-10%, וחלק הפחמימות הוא 90-98%. פרוטאוגליקנים הם פחמימות רגילות.

פרוטאוגליקנים - חלבונים מורכבים, נמצאים בחומר העיקרי של רקמת החיבור. כי הם מכילים כמות גדולה של חומצות בצורה של קבוצה תותבת, הם פוליאניונים ומשתתפים בהפצה ובדיפוזיה של מים וקטיונים. כממברנה בסיסית, פרוטאוגליקנים מעורבים בהפצה של חומרים מזינים. בחיבור לחלבונים מבניים הם יוצרים "מסננת מולקולרית", ויוצרים גם חללים מחולקים (תחומים) בהם נמצאים מים, עקב מחיצות אלו המים אינם זזים. נפח התאים והרקמות תלוי בפרוטאוגליקנים. הקבוצה התותבת של חלבונים אלו נקראת גליקוזאמינוגליקנים (GAG). הם מחולקים לשלושה סוגים: היאלורונית, חומצה גופרתית כונדרויטין, הפרין.

4. הקבוצה התותבת של פרוטאוגליקנים - גליקוזאמינוגליקנים - (GAGs) כונדרויטין גופרית, חומצה היאלורונית, הפרין. מושג המבנה, משמעות.

פרוטאוגליקנים מכילים חלק חלבון קטן (2-5%) וקבוצה תותבת המיוצגת על ידי גליקוזאמינוגליקנים (GAG). לאחרונים יש מבנה קבוע, כלומר, הם מורכבים מדיסכרידים לסירוגין, הכוללים חומצות אורוניות ואצטילהקסוזמינים (איור 7). ישנם 6 סוגי GAG - חומצה היאלורונית, כונדרואיטין סולפטים A, B, C, קרטן סולפטים והפרין, הנבדלים זה מזה באופי החומצות האורוניות, הקסוסאמינים, מידת הסולפטציה, סוג הקשר הכימי המחבר בין המונומרים, משקל מולקולרי, תכונות. הטבלה מציגה את הגליקוזאמינוגליקנים העיקריים של רקמות אנושיות.

טבלה הרכב כימי של גליקוזאמינוגליקנים