Seroloogiline diagnostikameetod hõlmab 2 uurimisvaldkonna kasutamist: serodiagnostika (spetsiifiliste antikehade tuvastamine uuritava vereseerumis) ja seroidentifitseerimine (eraldatud patogeeni antigeensete omaduste määramine selle tüübi ja tüübi kindlakstegemiseks).
Serodiagnostikas, aglutinatsioonis, sadestamises, lüüsis, RSK-s kasutatakse reaktsioone, milles kasutatakse märgistatud antigeene või antikehi. Nende reaktsioonide komponendid on: uuritud patsientide vereseerum ja standardsed antigeensed preparaadid. Uurimistöö eesmärgiks on määrata nakkushaiguste patogeenide vastaste antikehade tiitrid uuritavates seerumis.
Spetsiifiliste antikehade kõrgete tiitrite tuvastamine, eriti kui need jõuavad nn "diagnostiliste" tiitrite tasemele, kinnitab kavandatud diagnoosi. Suurt tähtsust omistatakse paarisseerumite uurimisele, kui tiitritakse samaaegselt nii haiguse alguses (3.-4. päeval) võetud kui ka haiguse 7.-10. päeval saadud seerumeid. Diagnostilisel väärtusel on antikehade tiitrite 4-kordne tõus.
Seridentifitseerimisel kasutatakse klaasi aglutinatsioonireaktsiooni sagedamini kui teisi. Reaktsioonikomponendid: kasvatatud patogeeni (antigeeni) puhaskultuur ja standardsed diagnostilised küüliku immuunseerumid (antikehad).
Seroloogilise meetodi eelised- lihtsus, juurdepääsetavus, kõrge tundlikkus, spetsiifilisus, kiirus.
Puudused: vajadus kallite standardravimite ja -seadmete järele.
Allergoloogiline meetod
See meetod hõlmab keha sensibiliseerimise tuvastamist konkreetse nakkustekitaja suhtes, millel on suur diagnostiline väärtus. Teatavasti kaasneb mõnede nakkushaiguste kulgemisega hilinenud tüüpi ülitundlikkuse teke. Sellega seoses põhjustab sellistele patsientidele allergeeni väikeste annuste intradermaalne manustamine organismist vastava reaktsiooni, mis on põhjustatud korduvast kokkupuutest allergeeniga. Reaktsioon kulgeb vastavalt viivitatud tüübile ning 48–72 tunni pärast ilmnevad allergeeni süstekohas punetus, turse ja mõnikord infiltraat (positiivne reaktsioon). Kui keha ei ole sensibiliseeritud, ei põhjusta intradermaalne manustamine organismi reaktsioone (negatiivne reaktsioon). Tööstus toodab spetsiaalseid preparaate nahaallergiliste testide jaoks: tuberkuliin, düsenteeria, brutselliin, tulariin jne.
Allergoloogiline meetod on eriti oluline juhtudel, kui nakkushaiguse tekitaja tuvastamine on keeruline või võimatu (näiteks leepra puhul) või kui see võtab kaua aega (näiteks brutselloosi korral). Tuberkuliinitesti kasutatakse praktikas mitte ainult diagnostilistel eesmärkidel, vaid ka laste BCG vaktsiiniga revaktsineerimise aja määramiseks, samuti kollektiivse tuberkuloosivastase immuunsuse uurimiseks.
Allergoloogilise meetodi eelised - selle lihtsus, usaldusväärsus, väljendus.
Viga - piiratud kasutamine, kuna mitte kõik nakkushaigused ei moodusta hilist tüüpi ülitundlikkust.
SEROLOOGILISED REAKTSIOONID DIAGNOOSIS
NAKKUSHAIGUSED
Praegu kasutatakse immunoloogiliste uuringute meetodeid laialdaselt nakkushaiguste ja mittenakkushaiguste laboratoorseks diagnoosimiseks.
Antigeenide ja antikehade vahelisi koostoimereaktsioone nimetatakse seroloogilisteks (seerum – seerum, logod – õpetus).
Kõigi seroloogiliste reaktsioonide olemus seisneb antigeenide ja neile vastavate antikehade spetsiifilises kombinatsioonis kompleksi moodustamiseks. Seroloogiline reaktsioon on võimalik, kui on olemas immunoloogiline vastavus (homoloogia) - põhikomponendid - antigeenid ja antikehad. Immunoloogiline spetsiifilisus põhineb antigeeni ja antikeha struktuursel komplementaarsusel.
Antigeenide ja antikehade interaktsiooni protsess toimub kahes faasis - spetsiifilises ja mittespetsiifilises. Esimene faas areneb kiiresti. See koosneb antikeha aktiivse tsentri spetsiifilisest ühendusest vastava (homoloogse) antigeeni determinantrühmadega. Järgnev faas areneb aeglasemalt, mittespetsiifilisemalt - see on antigeeni-antikeha reaktsiooni väline ilming (helveste kadu, söötme hägusus jne).
Seroloogilisi teste kasutatakse kahel eesmärgil:
1) antikehade tuvastamiseks uuritavas seerumis, kasutades teadaolevaid antigeene (serodiagnostika);
2) tundmatu antigeeni määramine teadaolevate seerumite abil (seridentifitseerimine).
Tundmatu antigeeni määramine mikrobioloogiliste uuringute käigus viiakse läbi, et teha kindlaks isikust eraldatud patogeenide geneeriline, liik, tüüp. Sellistel juhtudel on reaktsiooni kahest põhikomponendist (antikeha, antigeen) antigeen teadmata, reaktsioon tuleb läbi viia teadaolevate antikehadega. Antud juhul on antigeen uuritavast materjalist eraldatud mikroorganismide puhas kultuur. Immuundiagnostilisi seerumeid kasutatakse tuntud antikehadena. Viimased saadakse eelnevalt vastavate bakteriaalsete antigeenidega immuniseeritud loomade (enamasti küülikute) verest. Immuunseerumid peaksid sisaldama kõrgel tasemel spetsiifilisi antikehi.
Lisaks saab seroloogiliste testidega määrata erinevaid mittebakteriaalseid antigeene: määrata veregruppe, koe antigeene, kasvajaid, valida doonor-retsipiendi paare elundite ja kudede siirdamisel jne.
Seroloogilisi teste saab kasutada ka antikehade tuvastamiseks vereseerumis. Sellistel juhtudel on vaja teadaolevat antigeeni (diagnosticum). Antigeenidena võib kasutada elusate või tapetud mikroobide suspensioone, ekstrakte või nendest eraldatud keemilisi fraktsioone.
Paljud praegu tervishoiupraktikas kasutatavad seroloogilised testid erinevad nähtuse poolest, mis paljastab antigeeni ja antikeha vahelise seose. Reaktsiooni ilmne ilming on erinev sõltuvalt sellest, millist tehnikat kasutatakse, millises füüsikalises olekus antigeeni või immuunseerumit kasutatakse ja kas reaktsioonis osaleb komplement. Näiteks korpuskulaarse antigeeni kasutamisel toimub aglutinatsiooni fenomen – osakeste adhesioon (aglutinatsioonireaktsioon). Kuna tahkete osakeste antigeenid koosnevad suhteliselt suurtest osakestest, moodustub nähtav flokullentne sade. Kui reaktsioonis kasutatakse lahustuvat antigeeni, täheldatakse peeneteralist sadet – sadet (sadestamisreaktsioon). Kui bakteriantigeenide ja immuunseerumi interaktsioonireaktsiooni sisestatakse ka komplement, toimub bakteriolüüs (bakteriaalsete antigeenide lahustumine) või erütrotsüütide lüüs (kui neid kasutatakse antigeenina). Fluorokroomide, ensüümide või radioisotoopidega märgistatud immuunseerumite kasutamine seroloogilistes reaktsioonides võimaldab tuvastada antigeenide spetsiifilist seondumist antikehadega vastavalt vastavale nähtusele (radioisotoopmärgise sära, värvimuutus või aktiivsus).
Seroloogiliste reaktsioonide hindamiseks kasutatakse selliseid kriteeriume nagu spetsiifilisus ja tundlikkus. Spetsiifilisus on antigeenide võime reageerida ainult homoloogsete antikehadega. Tundlikkus - võime spetsiifiliseks interaktsiooniks minimaalsete antigeenide ja antikehade kogustega.
Aglutinatsiooni reaktsioon
Aglutinatsioonireaktsioon (RA) on antigeenide spetsiifiline interaktsioon antikehadega, mis väljendub antigeenide adhesioonis seerumi antikehade mõjul ja nende sadestumises elektrolüüdi juuresolekul. See oli esimene pakutud seroloogilistest reaktsioonidest.
Aglutinatsioonireaktsiooni eripäraks on see, et selle koostises kasutatakse antigeenidena rakke või muid korpuskulaarseid osakesi. Reaktsioon põhineb korpuskulaarsete antigeenide võimel spetsiifiliselt ühineda immuunseerumi homoloogsete antikehadega, moodustades terade, helveste, tükkide kujul sademe. Reaktsioon toimub ainult elektrolüütide juuresolekul. Reaktsioonis kasutatud antigeene nimetatakse aglutinogeenideks, antikehi aglutiniinideks ja tekkivat sadet aglutinaadiks.
Antigeenina aglutinatsioonireaktsioonis võib kasutada eluskultuuride suspensiooni isotoonilises naatriumkloriidi lahuses või formaliini, alkoholi või kuumutamisega tapetud mikroobide, aga ka erütrotsüüte, leukotsüüte või muid rakke.
Antikehade allikaks on teadaolev aglutineeriv seerum, mis saadakse loomade immuniseerimisel sobivate antigeenidega, või uuritava patsiendi seerum.
Aglutinatsioonireaktsiooni seadistamiseks on erinevaid viise. Nendest on kõige sagedamini kasutatavad: orientatsioonireaktsioon klaasil, laiendatud aglutinatsioon katseklaasides, hemaglutinatsiooni ja kaudse hemaglutinatsiooni (RIHA) reaktsioonid.
Sarnane teave.
Seroloogiline uuring ehk teisisõnu seroloogiline analüüs on bioloogiliste materjalide uurimine laboris. See analüüs võimaldab teil kindlaks teha patogeensete bakterite olemasolu uuritavas organismis või toodetes, mis läbivad kontrollkontrolli.
Seroloogilised diagnostikameetodid
Seerumite või muude bioloogiliste objektide (piim, sapp, sülg, soole limaskesta tampoonid, aga ka kopromaterjalid) uurimine annab üsna usaldusväärse ettekujutuse organismi reaktsioonist nakkustekitaja sissetoomisele. Tuleb märkida, et seroloogiliste uurimismeetodite kasutamine ei ole mitte ainult diagnostilise väärtusega, vaid annab usaldusväärset teavet keha kaitse taseme, elanikkonna immuunsuse seisundi ja erinevat tüüpi rotaviiruste leviku kohta uuritavas piirkonnas. Seroloogiliste uuringute tulemused võivad anda teavet ka profülaktiliste ravimite antigeense koostise optimeerimiseks ja kasutada vaktsiinide immunoloogilise efektiivsuse hindamiseks.
Siiski tuleb märkida, et vajadus uurida paarisvereseerumeid, mis võetakse 1,5-2-nädalaste intervallidega, ja ekspressdiagnostikameetodite kättesaadavus vähendavad seroloogiliste reaktsioonide diagnostilist väärtust.
Seetõttu on traditsioonilised seroloogilised testid – komplemendi sidumise test (CFR) ja hemaglutinatsiooni pärssimise test (HIT) praegu vaid piiratud kasutusega. Nende meetodite lihtsus, reaktiivide kättesaadavus ja odavus muudavad need siiski laboripraktikas kasutatavaks. RSK ja RTGA seadistamine toimub vastavalt üldtunnustatud meetoditele.
Näide RSK kasutamisest vaktsineerimisjärgse immuunsuse uurimiseks on K. Midkhani töö (1989). 116 5-kuulise lapse seerumite uurimisel täheldati RSK andmetel usaldusväärseid serokonversioone 44% juhtudest ning neutralisatsioonitesti (PH) ja ensüümi immuunanalüüsi (ELISA) tulemuste põhjal 83 ja 96% juhtudest. vastavalt.
Immuunsuse uurimine
Rahvastiku immuunsuse uurimiseks CSC abil uurisime 1246 OKZ-ga patsiendi seerumit vanuses mitu kuud kuni 80 aastat ja vanemad. Selgus, et komplementi siduvate antikehade geomeetrilised keskmised tiitrid olid kõrgeimad vanuserühmades 2-4 ja vanemad kui 60 aastat, mis kinnitab meie varasemaid andmeid rotaviirusnakkuse kõrgeima levimuse kohta nendes vanuserühmades.
Rotaviiruse test
RTGA-d kasutatakse rotaviirusnakkuse uurimisel sagedamini kui RSK-d ja reeglina koos teiste laboratoorsete testidega. Seega Andrade J. P. jt. kasutas rotaviiruse VP2, VP4, VP6 ja VP7 struktuursete valkude antikehade uurimiseks RTGA-d, immunobloti, ELISA-blokki. Autorite sõnul leiti 2–4-aastastel lastel rotaviiruste vastaseid hemaglutineerivaid antikehi 70–80%.
Sõltuvalt teatud valkude antikehade tasemest tuvastasid autorid RTGA järgi 4 indiviidide rühma. I ja II rühma (60%) kuulusid lapsed, kellel oli kõrge VP4 ja VP7 vastaste antikehade tase, ja need klassifitseeriti "immuunseks". III rühma (4%) kuuluvad isikud, kellel on madal VP7 ja VP6 antikehade tase, nn "osaliselt immuunsed". IV rühma lapsed (36%), kellel RTGA järgi antikehi ei tuvastatud, määrati "mitteimmuunseks" ja moodustasid riskirühma, kuna nende hulgas on võimalik raske rotaviiruse infektsiooni teke. Tuleb märkida, et selles vaatluses olid RTGA ja ELISA ploki tundlikkusnäitajad üsna võrreldavad.
RTGA-d on korduvalt kasutatud struktuurse valgu VP4 uurimiseks. Uuringud on näidanud, et selle hemaglutinatsiooni aktiivsust inhibeerivad spetsiifiliselt antiseerumid, kinnitades seega, et VP4 on rotaviiruste hemaglutiniin. Sarnased andmed avaldas varem M. Ezekiel (1995).
Seega näitavad esitatud tööd, et RSK ja RTGA on endiselt kasutusel rotaviirusnakkuse uurimisel, kuid need meetodid on abistava iseloomuga ja neid tuleks teiste testidega dubleerida.
Neutraliseerimistestid
Neutraliseerimisreaktsioon põhineb inimese või looma immuunseerumi võimel neutraliseerida viiruse paljunemist ja seeläbi vältida selle nähtusega seotud ilminguid. Olenevalt bioloogilisest mudelist võivad need ilmingud olla: konkreetse kliinikuga haiguse areng, viiruse paljunemine ja isoleerimine, spetsiifiliste antikehade tootmine, samuti tsütopaatilise toime ilmnemine või blobide teke kasutamisel. rakukultuur.
Makrobioloogilisi mudeleid kasutatakse praegu peamiselt veterinaarmeditsiinis, viiruste tuvastamine inimestel toimub enamasti rakukultuuril, nii esmasel kui ka transfusioonil. PH-meetodid on jagatud kahte rühma vastavalt põhilisele seadistusskeemile. Ühes meetodite rühmas kombineeritakse lahjendamata seerumit viiruse seerialahjendustega, teises testitakse seerumi lahjendusi viiruse konstantse annusega. Neutraliseerimisreaktsiooni käivitamiseks eelistatakse patogeeni, mis põhjustab tugevat tsütopaatilist toimet või paljuneb intensiivselt bioloogilises mudelis.
Rotaviirustel on aga kahjuks kerge tsütopaatiline toime, mida B. Weberi juhitud teadlased (1992) veenvalt tõestasid. Uuring, mis hõlmas 121 OKI-ga laste väljaheiteproovi, kasutades klassikalist viiruse eraldamise meetodit MA-104 rakkudel CPP kontrolli all, näitas ainult 4 positiivset juhtu (3,3%), samas kui rotaviiruste tuvastamiseks kasutati kaasaegseid meetodeid (ELISA, PCR). , EF PAAGis) võimaldas tõsta selle näitaja 54,4%-ni. Seetõttu on PH tundlikkuse suurendamiseks vaja täiendavaid metoodilisi tehnikaid, mis aitavad visualiseerida viiruse vähenemist, mida kasutatakse: radioaktiivse või immunofluorestsentsmärgisena, naastude moodustumisel, immunoperoksidaasi värvimisel jne. Tuleb märkida, et põhimõttel on Viirust neutraliseerivate antikehade taseme määramine on identne klassikalise PH-meetodiga, erineb sellest ainult eraldusvõime poolest, st seerumi viirust neutraliseeriva aktiivsuse visualiseerimises. Sel juhul määrab seerumi aktiivsuse selle võime pärssida viiruse nakkavate omaduste ilminguid.
Praegu kasutatakse enamikus uuringutes kahte meetodit rotaviiruse vastaste viirust neutraliseerivate antikehade hulga mõõtmiseks. Üks neist põhineb üksikute viirusega nakatunud rakkude arvu loendamisel (Plaq meetod), mis seonduvad spetsiifiliselt fluorestseeruva konjugeeritud antikehadega. Teises testis hinnatakse viiruse neutraliseerimise taset viiruse antigeeni tootmise vähenemise järgi ensüümi immuunanalüüsi abil. Mõlema meetodi võrdlev uuring näitas lineaarset seost ELISA indeksite ja naastude moodustavate ühikute arvu vahel rotaviiruse serotüübi iga prototüübi tüve puhul: Wa, DS-1, P, VA-70. Saadud andmete põhjal on lihtne määrata seerumi lahjendus, mis tagab 60% nakkusliku viiruse neutraliseerimise (neutraliseeriva antikeha tiiter). Selgus, et mõlema meetodiga materjalide testimisel on antikehade tiitrid samad ja tulemuste reprodutseeritavuse poolest ei erine mõlemad testid. Fluorestseiiniga märgistatud antikehi kasutava meetodi mõningane eelis seisneb autorite sõnul tulemuste suuremas objektiivsuses (automaatne registreerimine) ja väiksemas töömahukuses.
Viirust neutraliseerivate antikehade tiitrite mõõtmiseks kasutatakse ka modifitseeritud PH-d, blokeerides ELISA monoklonaalsete antikehadega.
- viirust neutraliseerivate antikehade (VNA) tootmise intensiivsuse uurimine loodusliku nakatumise ja vaktsineerimise ajal;
- VNA moodustumine rotaviiruste erinevateks struktuurvalkudeks;
- VNA vereseerumite ning sülje ja soole limaskesta sekretoorsete antikehade rolli hindamine kaitsmisel looduslike infektsioonide eest (Ward R. et al., 1990, 1992, 1993, 1995, 1997).
Kokkuvõtteks tuleb rõhutada, et neutraliseerimisreaktsiooni selle erinevates modifikatsioonides kasutatakse endiselt laialdaselt nii eksperimentaalsetes kui ka kliinilistes uuringutes ning kõrge tundlikkuse ja spetsiifilisuse tõttu on see standard kõigi teiste seroloogiliste meetodite jaoks.
Sademete analüüs
Sadestamistestid põhinevad seerumi interaktsioonil viirusantigeenidega osmootsete protsesside abil või elektrivälja mõjul geelikeskkonnas või muud tüüpi kandjas. Üks neist meetoditest on vastuimmunoelektroforeesi (VIEF) reaktsioon. Autorid uurisid rotaviirusliku kõhulahtisusega tervete ja haigete täiskasvanute ja laste vereseerumeid, samuti spetsiifilisi immunoglobuliinipreparaate inimese rotaviiruse antikehade olemasolu tuvastamiseks VIEF-meetodil 7% agaroosis, millele oli lisatud 4% polüetüleenglükooli. Selgus, et RV-vastased antikehad ringlesid üsna laialdaselt ning neid leiti haigetel täiskasvanutel ja lastel vastavalt 90,2-87,7%, samuti 78,4% tervetest alla 1-aastastest lastest. Kõik 32 immunoglobuliini seeriat sisaldasid RV-vastaseid antikehi tiitrites 1:4-1:128. Autorite hinnangul sobib meetod populatsiooni immuunsuse uurimiseks.
radioimmunosadestamine
Teine sadestamise tehnika on radioimmunosadestamine. Autorid kasutasid seda meetodit, et uurida immuunvastust struktuursetele ja mittestruktuursetele valkudele primaarse rotaviirusnakkuse korral ja näitasid, et immuunvastus oli rohkem väljendunud VP4 kui VP7 suhtes.
Seerumi ja sekretoorse immunoloogilise vastuse uurimine tetravalentse reassortantvaktsiini kasutamisel vastsündinutel Selleks kasutati radioimmunoanalüüsi tehnikat koos ELISA ja PH-ga. Näidati, et immuunvastus seerumis sõltub manustatud antigeeni annusest; mis puudutab antikehade tuvastamist süljes, siis autorid selgitavad nende väljanägemist rinnapiima tarbimisega.
Radioimmunosadestamise reaktsiooni kasutatakse ka peenuuringutes. Seega kasutas J. Tosser seda meetodit VP6 valgu topoloogia uurimiseks genoomi struktuuris ja pakkus, et VP 6 osaleb sisemiste kapsiidikanalite moodustamises.
Ka teised teadlased kasutasid 1994. aastal radioimmunosadestamise meetodit rotaviirusnakkuse immunoloogiliste muutuste uurimiseks. Autorid näitasid, et ägedal perioodil registreeritakse peamiselt IgA VP2 ja VP6 suhtes, samas kui tervenemisperioodil vähenes sekretoorsete antikehade (IgA) tootmise intensiivsus mitte ainult VP2, vaid ka teiste struktuursete ja mittestruktuursete valkude suhtes. . Hiljem saadi sarnased andmed radioimmunosadestamise meetodil. Autorid näitasid, et lisaks VP4-le ja VP7-le osalevad immunoloogilises protsessis ka VP2, VP6 ja NSP2.
Seega on immunosadestamist kasutatud diagnostiliselt immuunvastuse uurimiseks loodusliku rotaviirusnakkuse korral.
Viimastel aastatel on immunosadestamine asendunud radioimmunosadestamise meetodiga, mida kasutatakse vaktsineerimis- ja nakkusjärgse immuunsuse hindamiseks RV-nakkuse korral ning peente teadusuuringute jaoks.
hübridisatsiooni meetodid
Rotaviiruste antikehade määramiseks kasutatakse laialdaselt immunoblotmeetodit. Western-bloti kasutamise näide rotaviirusnakkuse diagnoosimisel on H. Ushijima (1989), kes iseloomustas immunoblotanalüüsi abil RV struktuurvalkude vastaste antikehade spetsiifilisust 21 OKZ-ga lapsel, samuti IgA ja IgG koproantikehade tase nende valkude suhtes.nakatamata lastel. Autorid püstitasid hüpoteesi, et immunoblotanalüüs võimaldab määrata haiguse diagnoosi ühe koproantikehade proovi põhjal ilma paarisvereseerumit uurimata. Pavlov I. jt (1991) demonstreerisid Western-bloti kasutamise võimalust VP1, VP2, VP4, VP6 ja VP7 vastaste antikehade taseme määramiseks. Autorid uurisid inimeste ja loomade vereseerumit rotaviiruse tüvede SA-11, DS-1, Wan Ito vastaste antikehade esinemise suhtes ja jõudsid järeldusele, et Western blot analüüsi saab edukalt kasutada immuunsuse hindamiseks kliinilises praktikas.
Arvatakse, et immunobloti saab kasutada rotaviirusnakkuse diagnoosi kinnitamiseks ilma paarisseerumit kasutamata ühe koproantikehade proovi jaoks.
Koos RTHA ja ELISA-ga kasutati karja immuunsuse uurimiseks immunoblotti. On leitud rühm indiviide, kes ei ole VP2, VP4, VP6 ja VP7 suhtes immuunsed, mis esindavad riskirühma, mis vajavad peamiselt aktiivse ja passiivse immuniseerimisega kaitset (Andrade J. P. et al., 1996).
Immunobloti kasutamist loodusliku RV-nakkuse protsessi seroloogiliste muutuste uurimisel märgivad ka Begue R. et al. (1998). Autorid kinnitasid, et VP2- ja VP6-vastased antikehad osalevad kõige sagedamini immuunvastuses infektsioonile ning VP7 ja VP4-vastased antikehad osalevad harvemini.
Immunofluorestsentsanalüüs
Rotaviirustega nakatatud rakkude testseerumite tiitrimiseks kasutatakse kaudset immunofluorestsentsmeetodit, milles kasutatakse fluorokroomiga märgistatud liigivastaseid seerumeid. Reaktsioon põhineb märgistatud antikehade ja homoloogse antigeeni spetsiifilisel interaktsioonil, samas kui antigeen-antikeha kompleks on kergesti tuvastatav fluorestsentsmikroskoobi abil.
Seda meetodit kasutades viisid autorid läbi seroloogilise uuringu kahe Lõuna-Ameerika indiaanlaste rühmaga ja leidsid mõlemas rühmas suure seropositiivsete isikute protsendi: ELISA järgi vastavalt 67,8 ja 77,4% ning IFM-iga vastavalt 45,5 ja 56,7%.
Teises uuringus, milles käsitleti nabaväädiveres IFM-i abil RV-rühma C vastaste antikehade taseme määramist, näidati, et 30% fertiilses eas naistest tuvastati need antikehad, mis viitab varasemale infektsioonile.
ELISA-d kasutatakse praegu koos PH-ga rotaviirusnakkuse seroloogilises diagnoosimises äärmiselt laialdaselt. See meetod, mis põhineb ensüümiga märgistatud antikehade või antigeenide kasutamisel, on selle rakendamise lihtsuse ja ökonoomsuse tõttu kõige sobivam ja paljulubavam rotaviirusnakkuse seroloogiliseks diagnoosimiseks. Meetod võimaldab teha elanikkonna massilisi seroepideemilisi uuringuid, hinnata vaktsiinide immunoloogilist ja epidemioloogilist efektiivsust, uurida erinevate klasside antikehade kaitsvat rolli inimkeha erinevates bioloogilistes vedelikes ning samuti läbi viia rotaviirusnakkuse seroloogilist diagnoosi. .
R. Azeredo (1989) viis läbi ELISA-ga arvukalt uuringuid, mis näitasid, et kindlaksmääratud rotaviiruse etioloogiaga OKZ-ga patsientide arv oli seroloogilise uuringu tulemuste põhjal oluliselt väiksem kui nende nakatumise tase. Need andmed näitasid, et paljusid rotaviirusnakkuse kliinilisi juhtumeid ei diagnoosita RV väljaheites tuvastamisega. Täiendavad uuringud rotaviirusnakkuse levimuse kohta kinnitasid seda oletust. Seroepidemioloogiliste uuringute läbiviimisel selgus, et 50-70% elanikkonnast oli kõrge antikehade tase, mis viitab RV laialdasele levikule inimpopulatsioonis.
Veelgi suuremad võimalused avab ELISA erinevatesse immunoglobuliinide klassidesse kuuluvate antikehade taseme dünaamika määramisel. Niisiis väidavad 1989. aasta metoodika autorid, et vaktsineerimisprotsessi ajal täheldati RV-vastaste antikehade märkimisväärset suurenemist veres 83–96%. IgA- ja IgG-klassi rotaviirusevastased antikehad tuvastati võrdselt hästi ELISA ja PH-ga plasma vähenemise kaudu - vastavalt 67,6 ja 70,0%. IgM klassi antikehade serokonversioon tuvastati ELISA ja RSC abil vastavalt 53 ja 44% lastest. Erinevate klasside antikehade tootmise intensiivsuse analüüsi tulemuste põhjal järeldasid autorid, et kõige tõhusam, lihtsam ja kiireim meetod serokonversioonide tuvastamiseks pärast vaktsineerimist on IgA antikehade tuvastamise meetod ELISA abil.
Seda järeldust kinnitas ka R. Bishopi töö (1996), mis näitas, et 68 ema-lapse paari, kellel oli diagnoositud RV-nakkus, uuringu tulemuste põhjal näidati, et IgA antikehade tuvastamine ELISA abil väljaheite materjalid on kõige tundlikum marker.nii kliiniliselt väljendunud kui ka asümptomaatiline infektsioon. Sarnased tulemused raske RV kõhulahtisusega laste uurimisel sai J. Kolomina 1998. aastal.
Serokonversioonide intensiivsuse uurimiseks on aga vaja uurida paarisseerumit, mis pikendab oluliselt diagnostikaprotsessi. Samal ajal on hästi teada, et IgM klassi antikehade ilmumine annab tunnistust nakkusprotsessi algusest. Meie andmetel, mis saadi rotaviirusnakkusega patsientide ELISA ja RSK uuringul, selgus, et ELISA tulemuste kohaselt leidus kõigi uuritud isikute veres RV vastaseid IgM antikehi, RSK andmetel aga ainult 77% (R
Viimastel aastatel on ELISA-st saanud geeni- ja serotüübispetsiifiliste antikehade määramise võimaluse realiseerimisega tõeliselt universaalne meetod rotaviirusnakkuse uurimiseks, mida kasutatakse:
- uurides klasside IgA, M, G antikehade tootmist üksikute struktuursete ja mittestruktuursete RV valkude suhtes;
- erinevat tüüpi vaktsiinide immunoloogilise efektiivsuse hindamisel: nõrgestatud, külmaga kohandatud, DNA-põhised, reassortantsed;
- kui uuritakse antikehade tootmist keha erinevates bioloogilistes vedelikes loodusliku infektsiooni tingimustes ja immuniseerimise ajal.
Seega, nagu esitatud andmetest järeldub, uuritakse rotaviirusnakkuse immunoloogilisi aspekte mitmesuguste laborimeetodite abil. Seetõttu on optimaalse uurimismeetodi valik, võttes arvesse selle resolutsiooni, majanduslikku ja ajakulu, üsna keeruline ning sõltub nii teadlaste ees seisvatest ülesannetest kui ka labori varustusest. Ja veel, meie arvates tuleks erinevate meetodite hulgast välja tuua kaks - neutraliseerimisreaktsioon rakukultuuris ja ensüümi immuunanalüüs -, mis pakuvad erinevate immunoglobuliinide klasside antikehade uurimist. Rotaviirusnakkuse ekspressdiagnostika võimalus määrab nende meetodite erilise lubaduse laialdaseks kasutamiseks.
Õppeaine "Viiruste tuvastamise meetodid. Mükooside (seenhaigused) diagnoosimise meetodid. Algloomade tuvastamise meetodid." sisukord:Viirusevastaste antikehade (AT) tuvastamine vereseerumis. RTGA. RSK. REEF. Immunosorptiivsed meetodid viirusevastaste antikehade tuvastamiseks.
Lihtsam ja soodsam lähenemine - viirusevastaste antikehade (AT) tuvastamine seerumis. Vereproove tuleb võtta kaks korda: kohe pärast kliiniliste tunnuste ilmnemist ja 2-3 nädala pärast. Äärmiselt oluline on uurida täpselt kahte seerumiproovi. Ühe uuringu tulemusi ei saa pidada lõplikuks, kuna AT ilmnemist ei ole võimalik käesoleva juhtumiga seostada. Võimalik, et need antikehad ringlevad pärast eelmist nakatumist. Sellises olukorras on raske taastumisperioodil saadud seerumi uuringu rolli üle hinnata. Haiguse esinemisele esimese proovi võtmise perioodil viitab AT tiitri vähemalt neljakordne tõus, mis tuvastati teise proovi uuringu käigus.
Allpool loetletud meetodid ei võimalda antikehade diferentseerumist(AT) moodustub haiguse ajal ja ringleb pärast paranemist (selle perioodi kestus on erinevate infektsioonide puhul erinev). Kuna adekvaatse diagnoosi jaoks on vaja kinnitada AT tiitrite olulist suurenemist kahes proovis, uuritakse esimest proovi ägedas faasis ja teist - taastumisperioodil (2-3 nädala pärast). Saadud tulemused on retrospektiivsed ja sobivad paremini epidemioloogilisteks uuringuteks.
RTGA tuvastab viiruste (näiteks gripiviiruse) hemaglutiniinide vastu sünteesitud AT. Meetod muudab selliste antikehade (AT) tuvastamise patsiendi seerumis lihtsaks.
RSK- põhiline viirusnakkuste serodiagnostika(olemasolevate hulgas). Reaktsioon tuvastab komplementi fikseerivad IgM ja IgG, kuid ei erista neid; saadud tulemuste optimeerimiseks nõuab reaktsiooni formuleerimine personali teatud oskusi.
REEF. Kui on olemas nakatunud koe biopsia ja kaubanduslikud fluorestseiiniga märgistatud AT komplektid, võib diagnoosi kinnitada otsene immunofluorestsents. Reaktsiooni formuleerimine hõlmab uuritud koe inkubeerimist AT-ga, nende järgnevat eemaldamist ja proovi fluorestsentsmikroskoopiat.
Immunosorptsioonimeetodid viirusevastaste antikehade tuvastamiseks
Immunosorptsiooni meetodid(näiteks ELISA ja RIA) on informatiivsemad, kuna need tuvastavad IgM ja IgG eraldi, mis võimaldab teha teatud järeldusi nakkusprotsessi dünaamika või taastumisseisundi kohta. AT tuvastamiseks adsorbeeritakse teadaolev Ag tahkele substraadile (näiteks katseklaaside seintele, plastikust mikroplaatidele, Petri tassidele) ja lisatakse patsiendi seerumi erinevaid lahjendusi. Pärast sobivat inkubeerimist eemaldatakse seondumata AT-d, lisatakse ensüümiga märgistatud inimese Ig vastane antiseerum, seondumata AT-de inkubeerimise ja pesemise protseduuri korratakse ning lisatakse mis tahes kromogeenne substraat (ensüümi toime suhtes tundlik). Kuna värvimuutus on võrdeline spetsiifiliste antikehade sisaldusega, on nende tiitrit võimalik spektrofotomeetrilise meetodiga määrata. HIV-nakkuse diagnoosimisel on enim levinud immunoblotanalüüs.
Kaudsed meetodid süüfilise diagnoosimiseks.
Süüfilise diagnoosimiseks kasutatakse palju uurimismeetodeid, mis erinevad tehnika ja eesmärgi poolest. Otsesed meetodid on suunatud patogeeni tuvastamisele uuritavas materjalis, kasutades mikroskoopiat (tumevälja mikroskoopia jne) või PCR-i.
Lisaks kahvatu treponema (T. pallidum) otsese tuvastamise meetoditele on süüfilise uurimisel ka kaudne ( seroloogiline) uurimismeetodid, mis tuvastavad süüfilise tekitaja vastased antikehad vereseerumis ja tserebrospinaalvedelikus. Süüfilise diagnoosimise kaudsed meetodid hõlmavad ELISA, RPHA, CSR, RIF ja RIF-abs, RIBT, PCR, ekspressmeetodi, immunobloti ja teiste seroloogilisi teste.
Seroloogilised meetodid nakkushaiguste diagnoosimiseks.
Seroloogilised diagnostilised kriteeriumid põhineb spetsiifilistel antigeen-antikeha reaktsioonidel. Määramist vajavate mikroorganismide antigeenid (rakuseina komponendid, flagellad, kapslid, DNA ja toksiinid) reageerivad seerumis sisalduvate antikehadega. Antigeenide ja neile vastavate antikehade vahel toimub seos, mis on seroloogiliste diagnostikameetodite aluseks. Seroloogilisi teste kasutatakse tundmatu antigeeni (mille allikas on bakter, viirus, toksiin jne) tuvastamiseks tuntud antikeha abil või antikeha tuvastamiseks seerumis, kasutades teadaolevat antigeeni.
Seroloogilised reaktsioonid klassifitseeritakse sõltuvalt antigeeni seisundist ja selle keskkonna omadustest, milles antigeen ja antikeha interakteeruvad, samuti vastavalt läbiviimise meetodile.
Seroloogiliste reaktsioonide läbiviimiseks kasutatakse paljusid laborimeetodeid, nagu aglutinatsioon, sadestamine, komplemendi sidumine, immunofluorestsents, ensüümi immunoanalüüs ja radioimmunoanalüüs ja teised. Need reaktsioonid võimaldavad mikroorganismide tõhusat esialgset tuvastamist.
Seroloogiliste reaktsioonide tekitamiseks vajalikud seerumid saadakse eksperimentaalselt, eelkõige toodetakse neid vaktsiini- ja seerumiinstituutides ning neid pakutakse kaubanduslike diagnostikakomplektide osana.
Seroloogilised meetodid on oluline vahend inimeste ja loomade nakkushaiguste diagnoosimisel ja ravimisel, kuna nende abil saab mitte ainult tuvastada haiguse tekitajat, vaid ka tuvastada vastavate patogeenide vastaseid spetsiifilisi antikehi patsientide ja paranenud patsientide veres. Seroloogilised meetodid on praegu kõige tõhusamad diagnostikameetodid, kui patogeeni on võimatu või raske isoleerida, ning suhteliselt harva saadakse valepositiivseid ja valenegatiivseid tulemusi.
Seroloogiliste meetodite kasutamine süüfilise diagnoosimiseks
Süüfilise diagnoosimise seroloogiliste laboratoorsete meetodite aluseks on organismi võime anda immuunvastus patogeeni ilmnemisele. Vere (või tserebrospinaalvedeliku) seerumis (plasmas) toimuvate seroloogiliste reaktsioonide abil tuvastatakse infektsiooni immuunvastuse jäljed, nimelt antikehad kahvatu treponema antigeenide või antigeenide endi vastu.
Olemasolevate kliiniliste ilmingute spetsiifilisuse kindlakstegemiseks (see tähendab, et need on süüfilise tagajärg) ja tulevikus patoloogilise protsessi dünaamika kontrollimiseks, on välja pakutud suur hulk seroloogilisi uurimismeetodeid. Neid samu meetodeid kasutatakse laialdaselt ka elanikkonna sõeluuringul.
Vastavalt kehtivatele riiklikele juhistele ja kliinilistele juhistele kasutatakse paljudes maailma riikides kõrgetasemelisi seroloogilisi meetodeid elanikkonna uuringutes süüfilisega patsientide tuvastamiseks ja kliinilise diagnoosi seadmiseks. Neid kasutatakse nii haiguse kliiniliste tunnuste esinemisel patsientidel kui ka varjatud perioodidel.
Seroloogiliste reaktsioonide määramine on üks kõige usaldusväärsemaid meetodeid süüfilise diagnoosimiseks. Reguleeritud seadistusmeetodiga standardiseeritud seroloogilisi teste nimetatakse süüfilise seroloogilisteks testideks. Arvestades, et peaaegu kõik seroloogilised reaktsioonid süüfilisele võivad teatud tingimustel olla valepositiivsed või valenegatiivsed, tuleks need panna kompleksi ja vajadusel dünaamikasse.
Seroloogilised testid, mida kasutatakse antikehade määramiseks patsiendi vereseerumis, erinevad üksteisest tundlikkuse, spetsiifilisuse, seadistamise keerukuse ja maksumuse poolest. Tõhusaks süüfilise serodiagnoosimiseks kasutatakse lisaks klassikalistele meetoditele immunoloogilisi teste ja tehnoloogiaid, mis on 21. sajandil saanud uue tõuke arengule.
Antikehi tuvastatakse erinevate immunokeemiliste (seroloogiliste) meetoditega, sealhulgas settereaktsioonide, ensüümi immunoanalüüsi, immunokeemiluminestsentsanalüüsi, immunokromatograafiliste testide, lineaarse immunoblotanalüüsi, voolufluoromeetria, immunokiibi tehnoloogia ja teiste abil.
Serodiagnoosi (seroloogilisi meetodeid kasutav uuring) kasutatakse:
- süüfilise kliinilise diagnoosi kinnitamine,
- varjatud süüfilise diagnoosimine,
- ravi efektiivsuse jälgimine kui süüfilisega patsientide ravimise üks kriteerium,
- süüfilise ennetamine (teatud elanikkonna rühmade sõeluuring patoloogia tuvastamiseks).
Olulisemad omadused, mida seroloogilised testid nõuavad – tundlikkus, spetsiifilisus, reprodutseeritavus
Laboratoorse diagnostika meetodi valiku määravaks kriteeriumiks on selle efektiivsus – tundlikkus, spetsiifilisus ja reprodutseeritavus.
Tundlikkus on positiivsete tulemuste osakaal patsientidel. Meetodi tundlikkus määratakse nende proovide positiivsete tulemuste protsendi järgi, mis teadaolevalt sisaldavad patogeeni spetsiifilisi markereid (nt patogeeni antigeene või nende vastaseid antikehi).
Spetsiifilisus- negatiivsete testitulemuste osakaal tervetel patsientidel. Meetodi spetsiifilisuse määrab nende proovide negatiivsete tulemuste protsent, mis ilmselgelt ei sisalda patogeeni spetsiifilisi markereid. Seega, mida suurem on tundlikkus ja spetsiifilisus, seda usaldusväärsem ja usaldusväärsem on uurimismeetod.
Olulised diagnostilised kriteeriumid hõlmavad ka reprodutseeritavus samade proovide korduvate uuringute tulemused. Tuleb märkida, et vaatamata olulistele kõrgtehnoloogia edusammudele ei ole kõigis uuritud biotestides 100% (absoluutset) tundlikkust ja spetsiifilisust tagavaid meetodeid.
Praegu on Venemaal ametlikult registreeritud testisüsteemid, komplektid ja koostisained, mille tundlikkus ja spetsiifilisus reaktsiooni seadistamisel on alla 95%. Seega on alati võimalus ebaadekvaatse tulemuse saamiseks.
Testide klassifikatsioon kasutatava antigeeni tüübi järgi. Treponemaalsed ja mittetreponemaalsed süüfilise testid
Kaasaegses venereoloogias kasutatakse diagnostilistel eesmärkidel enam kui tosinat süüfilise seroloogiliste reaktsioonide varianti, mida saab erinevate kriteeriumide järgi jagada erinevatesse kategooriatesse. Klassifitseerimine toimub vastavalt uurimismetoodikale, ulatusele, kiirusele, madalale maksumusele, nõuetele laboriseadmetele jne.
Treponemaalsed reaktsioonid on teoreetiliselt spetsiifilisemad, kuid annavad ka valepositiivseid tulemusi. Veelgi enam, need ei võimalda eristada ravimata ja väljaravitud süüfilist. Treponemaalsete reaktsioonide tulemused on mõlemal juhul positiivsed. Mitte-treponemaalsed reaktsioonid eristavad ravimata või hiljutisi ja ravitud infektsioone.
Uuringu käigus on soovitatav läbi viia nii treponemaalsed kui ka mittetreponemaalsed reaktsioonid. Süüfilise diagnoosi kindlakstegemiseks ja kinnitamiseks on vaja mõlemat tüüpi - treponemaalse ja mittetreponemaalse - testi positiivseid tulemusi. Seetõttu kasutatakse mittetreponemaalseid teste koos treponemaalsete testidega ning neid tehakse teatud ajavahemike järel enne ravi, ravi ajal ja pärast ravi lõppu.
1. Mittetreponemaalsed testid
Kõige kuulsamad mittetreponemaalsed testid, mille tulemuste visuaalne tõlgendamine on
- RW – Wassermanni reaktsioon lipiidantigeenidega (komplemendi fikseerimise reaktsioon kardiolipiini antigeeniga, RSKk)
- Kanni reaktsioon (praegu ei kasutata),
- Zaks-Vitebsky tsütokoolne reaktsioon (praegu ei kasutata),
- sademete mikroreaktsioon plasma või inaktiveeritud seerumiga (MRP või RMP),
- RPR (Rapid Plasma Reagin Test),
- TRUST (toluidiinipunase kuumutamata seerumi test).
Mitte-treponemaalsete testide hulgas on 2 testi reaktsioonitulemuste mikroskoopilise lugemisega:
1. VDRL - (suguhaiguste uurimislabor);
2. USR - test aktiivsete plasmareaginide (Unheated Serum Reagins) määramiseks.
Reaktiivsus mittetreponemaalsetes testides viitab tavaliselt koekahjustusele ega ole alati spetsiifiline süüfilise suhtes. Rakendamise lihtsus ja madalad kulud võimaldavad neid kasutada süüfilise esialgse diagnoosi seadmisel skriinimisreaktsioonidena.
2. Treponemaalsed testid
Treponemaalsed testid kasutavad spetsiifilisi treponemaalseid antigeene. Need testid on vajalikud diagnoosi kinnitamiseks (RPHA, RIT, RIF ja ELISA). Need on keerulisemad ja kallimad kui 1. rühma testid, kuid ka spetsiifilisemad ja tundlikumad. Antikehade tuvastamine tserebrospinaalvedelikus toimub ka treponemaalsete testide abil.
Traditsioonilised süüfilise diagnoosi kinnitavad treponemaalsed testid nõuavad kallist laborivarustust ja kogenud personali, mistõttu tehakse neid harva väljaspool spetsialiseeritud laboreid. Kuid neid saab nüüd asendada lihtsate ja kiirete treponemaalsete testidega, mida saab teha välitingimustes ja kasutada täisverd. Nende reaktsioonide läbiviimine ei nõua pikaajalist väljaõpet, eritingimusi reaktiivide ja seadmete säilitamiseks.
Treponemaalsete ekspressreaktsioonide võrdlev odavus, mugavus ja praktilisus juhivad neile tähelepanu mitte ainult kui diagnoosi kinnitamise meetoditele. Neid reaktsioone saab kasutada süüfilise skriinimiseks esmatasandi arstiabis (neid saab teha kohapeal samas tervishoiuasutuses) või piirkondades, kus laboreid ei ole. Kuna aga T. pallidum'i antikehad määratakse mitme aasta jooksul, olenemata sellest, kas patsienti raviti või mitte, ei saa treponemaalsete kiirreaktsioonide abil hinnata ravi efektiivsust ja diferentsiaaldiagnostikat ravimata ja väljaravitud süüfilise korral.
Süüfilise diagnoosimise seroloogiliste meetodite klassifikatsioon vastavalt tuvastatud antikehade tüübile
Kaasaegses dermatovenereoloogias kasutatakse diagnoosimiseks erinevaid seroloogilisi reaktsioone süüfilisele. Mõningaid meetodeid, mis olid aktuaalsed kümme aastat tagasi, ei kasutata enam keerukuse või spetsiifilisuse puudumise tõttu. Sõltuvalt tuvastatud antikehadest jagatakse süüfilise seroloogilise diagnoosimise meetodid kolme rühma:
I. Lipiidide (reagin) reaktsioonid - määratakse lipiidantigeenide (reaginide) antikehad:
1) flokulatsioon: mikroreaktsioon klaasil lipiidantigeenidega - ekspressdiagnostika meetod (sadestamise mikroreaktsioonid - MRP), VDRL, CMF (kardiolipiini mikroflokulatsiooni test), RPR jne;
2) komplemendi sidumisreaktsioon (RSK) lipiidsete antigeenidega: Wassermani reaktsioon (RV), kvalitatiivne ja kvantitatiivne fikseerimismeetod, termostaatiline ja külmas (Colmeri reaktsioon);
3) settereaktsioonid, mida praegu ei kasutata: Cahni sadestamisreaktsioon, tsütokoolne Sachs-Vitebsky reaktsioon jne;
II. Rühma treponemaalsed reaktsioonid - määratakse antikehad rühma treponemaalsetele antigeenidele (mis on osa nii patogeensete kui ka saprofüütsete treponeemide mikroobirakkudest):
1) CSC Reiteri valgu antigeeniga;
2) immunofluorestsentsreaktsioon (RIF);
3) immuunadhesioonireaktsioon (RIP).
III. Liigispetsiifilised valgutreponemaalsed reaktsioonid - määratakse Treponema pallidum'i spetsiifiliste liikide antigeenide antikehad:
1) kahvatu treponeemide immobiliseerimise reaktsioon (RIT);
2) RIF-abs immunofluorestsentsreaktsioon ja selle variandid (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS jne);
3) kahvatu treponeemide (TPHA) kaudse hemaglutinatsiooni reaktsioon ja selle modifikatsioon TPPA.
4) ensüümi immuunanalüüs (ELISA);
5) immunoblotanalüüs.
Süüfilise seroloogiliste testide praktiline kasutamine
Erinevatel praktilistel eesmärkidel kasutatakse erinevaid seroloogilisi teste.
Välismaal kasutatakse massilistel elanikkonna küsitlustel ja vajadusel süüfilise erakorralisel avastamisel mittetreponemaalseid skriiningreaktsioone (VDRL, RPR jne). Diagnoos nõuab kinnitust treponemaalsete testidega FTA-ABS, TPHA või TPPA. Praegu on sõeltestides soovitatav kasutada ELISA-d VDRL-i asendajana. See on tingitud asjaolust, et ELISA testi eristab tundlikkus, spetsiifilisus, võime automatiseerida uuringuid, aga ka diagnostiliste testikomplektide väljatöötamine. Lisaks on põhjendatud süüfilise uurimise järjekorra vastupidine skeem, kui esmalt kasutatakse treponemaalseid teste.
Ravi efektiivsuse jälgimiseks ja infektsiooni aktiivsuse hindamiseks on soovitatav määrata kvantitatiivne VDRL. ELISA testi antitreponemaalsete IgM antikehade määramiseks kasutatakse kinnitava/täiendava testina.
Kodumaises praktikas kasutatakse seroloogiliste reaktsioonide kompleksi (CSR), sealhulgas mikrosadestamisreaktsiooni (RMP) kardiolipiini antigeeniga ja CSC-d kardiolipiini ja treponemaalsete antigeenidega. Hiljuti soovitatakse CSR-is asendada RSK ELISA või RPHA-ga. Kasutatakse ka RIF-i (ja selle modifikatsioone - RIF-Abs jt), RIBT-i.
RIBT-i kasutatakse uuringureaktsioonina treponemaalsete reaktsioonide lahknemise korral.
Süüfilise laboratoorse seroloogilise diagnoosimise lähenemisviisid Vene Föderatsioonis
Kliiniliste laboratoorsete uuringute ühtsete meetodite juurutamine NSV Liidus ja Vene Föderatsioonis võimaldas kasutusele võtta arenenumaid diagnostikameetodeid, tõhustada kliinilise diagnostika laborite tööd, suurendada tööviljakust, vähendada laboratoorsete uuringute dubleerimist ja sai aluseks uuringute läbiviimisele. valmis reaktiivikomplektide ratsionaalsete vormide väljatöötamine.
1985. aastal jäeti NSV Liidus süüfilise diagnoosimise parandamiseks diagnostilisest kompleksist välja mittetreponemaalne CSC reaktsioon mittespetsiifilise (Wassermanni) antigeeniga ja settereaktsioonid (tsütokoolne ja kaana), kuna need on vähem tundlikud ja ei võimalda. Lisainformatsioon.
Selle asemel kasutati süüfilise (CSR) seroloogiliste testide kompleksi osana komplemendi sidumise reaktsiooni treponemaalsete ja kardiolipiini antigeenidega (RSKt) ning mikrosadestamisreaktsiooni kardiolipiini antigeeniga (RMP). Selle reaktsioonide kompleksi suurem tundlikkus ja teabesisaldus tagas mitte ainult reagiinide, vaid ka antitreponemaalsete antikehade tuvastamise.
1985. aastal
1. RMP kardiolipiini antigeeniga vereplasma ja inaktiveeritud vereseerumiga. Valikutest isoleeritud rakenduse korral.
2. CSC treponemaalsete ja kardiolipiidsete antigeenidega; kvalitatiivsed ja kvantitatiivsed seadistusmeetodid, termostaadiga ja külmas;
3. Treponema pallidum immobilisatsioonireaktsioon (RIT); katseklaasi ja melange seadistusmeetodid;
4. Immunofluorestsentsreaktsioon (RIF) järgmistes modifikatsioonides: RIF absorptsiooniga (RIF-abs) vereseerumi ja kapillaarverega, RIF-200, RIF kogu tserebrospinaalvedelikuga (RIF-c); kvalitatiivsed ja kvantitatiivsed seadistusmeetodid. Süüfilise latentse ja hilise vormi diagnoosimine, otsustajate äratundmine (valepositiivsed tulemused)
5. Klassikaliste seroloogiliste reaktsioonide kompleks (CSR): RSC (Wassermani reaktsioon) kardiolipiini ja treponemaalsete antigeenidega + RMP. Elanikkonna ennetav uurimine süüfilise suhtes, süüfilise kõikide vormide diagnoosimine, ravi efektiivsuse jälgimine, süüfilisega kontaktis olevate isikute läbivaatus.
2001. aastal kiitis Vene Föderatsiooni tervishoiuministeerium heaks uue normatiivdokumendi, mis reguleerib diagnostiliste testide läbiviimise korda - Vene Föderatsiooni tervishoiuministeeriumi 26. märtsi 2001. aasta korraldus nr 87 "Süüfilise seroloogilise diagnoosi parandamise kohta ".
Süüfilise laboratoorse diagnoosimise parandamiseks, töökvaliteedi parandamiseks ja süüfilise esinemissageduse edasise leviku tõkestamiseks on soovitatav asendada seroreaktsioonide kompleksis (CSR) olev RSK süüfilise diagnoosimisel ELISA ja TPHA meetodil. sõeluuringud ja kinnitavad testid, sest need testimissüsteemid on väga tundlikud, spetsiifilised ja reprodutseeritavad.
26. märtsi 2001. aasta korraldus nr 87 "Süüfilise seroloogilise diagnoosi parandamise kohta" näeb Venemaal süüfilise sero- ja tserebrospinaalvedeliku diagnoosimiseks ette järgmiste meetodite kasutamise:
1. RMP ja välismaised analoogid (VDRL, RPR ja sarnased mikroreaktsioonid) sõeltestidena elanikkonna süüfilise uurimisel. RMP viiakse läbi plasma või inaktiveeritud vereseerumiga.
2. Ensüüm-immunoanalüüs (ELISA). Antigeen kultiveeritud või patogeensest treponema pallidum'ist. Diagnostilised reaktsioonid, sealhulgas likööri diagnostika jaoks. Seadistamise lihtsuse ja kaubanduslike testisüsteemide kättesaadavuse tõttu saab neid kasutada sõeltestidena.
3. Passiivse hemaglutinatsiooni (RPHA) reaktsioon. Antigeen kultiveeritud või patogeensest treponema pallidum'ist. Valiku- ja diagnostilised reaktsioonid.
4. RIF-i kvalitatiivsed ja kvantitatiivsed variandid (RIF-abs, RIF-c, RIF kapillaarverega sõrmest). Antigeen - Nicholsi tüve patogeenne kahvatu treponema.
5. Süüfilise seroloogiliste reaktsioonide (CSR) kompleks, mis koosneb komplemendi sidumise reaktsioonist (CFR) treponemaalsete ja kardiolipiini antigeenidega ning RMP-st. Komplemendi sidumise reaktsiooni on võimalik asendada ELISA või RPHA-ga ka kombinatsioonis RMP-ga. CSR viitab diagnostilistele testidele.
6. Kahvatu treponema immobilisatsioonireaktsioon (RIBT), mille puhul kasutatakse antigeenina Nicholsi tüve patogeenset kahvatut treponema. RIBT-d on diagnostilised kinnitavad testid.
Seega soovitatakse tervishoiuasutustes patsientide süüfilise uurimise järjekord kavandada järgmiselt:
1. Esmase läbivaatuse käigus viiakse läbi mikrosadestamise (RMP) või selle modifikatsiooni (RPR, TRUST, VDRL) selektsiooni (sõeluuringu) reaktsioon kvantitatiivses ja kvalitatiivses versioonis ning positiivse tulemuse korral mistahes spetsiifiline kinnitav treponemaalne test ( RPHA, ELISA, CSR, RIF, RIT);
2. Pärast ravi lõppu paigaldatakse RMP või selle modifikatsioon ning tiitri languse järgi hinnatakse nakkusprotsessi dünaamikat ja ravi efektiivsust. Teraapia efektiivsuse kinnituseks on tiitri langus 4 või enama korda 1 aasta jooksul.
Vastuvõtt kokkuleppel! Laupäev pühapäev.
SEROLOOGILISED UURINGUD(lat. seerumi seerum + kreeka logose doktriin) - immunoloogia meetodid, mis uurivad inimese või looma vere spetsiifilisi omadusi, et seroloogiliste reaktsioonide abil tuvastada antigeene või antikehi.
S. algus ja. pandi eelmise sajandi lõpus, pärast seda, kui leiti, et antigeeni seost antikehaga (vt Antigeen - antikeha reaktsioon) kaasnevad mitmed visuaalseks vaatluseks kättesaadavad nähtused - aglutinatsioon (vt.), sadestumine (vt) või lüüsi. Antigeenide (vt) või antikehade (vt) spetsiifilise äratundmise võimalus oli, kui üks neist komponentidest on teada.
1897. aastal teatas F. Vidal, et kõhutüüfusehaigete vereseerum aglutineerib selektiivselt tüüfuse baktereid ja seetõttu saab seda reaktsiooni (vt Vidali reaktsioon) laboris rakendada. kõhutüüfuse diagnoosimine. Samal aastal näidati, et katku-, tüüfuse- ja koolerabakterite kultuurifiltraadid moodustavad koos vastavate immuunseerumitega helbeid või sadet.
Sadestamisreaktsioon osutus sobivaks mis tahes valguantigeenide tuvastamiseks. Aastatel 1900-1901. K. Landsteiner leidis, et inimese erütrotsüütides on kaks erinevat antigeeni (A ja B) ning vereseerumis kaks aglutiniini (a ja P), mis aitasid kaasa hemaglutinatsioonireaktsiooni kasutamisele veregruppide määramisel (vt.).
Veregrupi ja Rh-faktori määramise aglutinatsioonireaktsiooni kasutatakse sünnitusabi praktikas koos vereülekannete ja kudede siirdamisega. Rh-faktori vastased antikehad (vt) on mittetäielikud antikehad, nad ei ole võimelised Rh-positiivsete erütrotsüütidega otseselt reageerima, seetõttu kasutage nende tuvastamiseks Coombsi reaktsiooni (vt Coombsi reaktsioon), mis põhineb mittetäielike antikehade tuvastamisel antiglobuliini abil. seerumid. Teadaoleva spetsiifilisusega erütrotsüütidele lisatakse uuritav seerum, seejärel antiglobuliini seerum IgG vastu (kaudne Coombsi reaktsioon). Uuritud vereseerumi mittetäielike antikehade Fab-fragmendid kinnituvad erütrotsüütidele ja IgG-vastased antikehad kinnituvad nende antikehade vabadele Fc-fragmentidele ning toimub erütrotsüütide aglutinatsioon. Hemolüütilise aneemia diagnoosimiseks kasutatakse otsest Coombsi reaktsiooni.Selliste patsientide kehas ühinevad punased verelibled veres ringlevate Rh-faktori vastaste antikehadega. Nende tuvastamiseks lisatakse patsiendilt võetud erütrotsüütidele IgG-vastased antikehad. Erütrotsüütide aglutinatsiooni ilmnemine kinnitab haiguse diagnoosi.
Hemaglutinatsiooni inhibeerimise reaktsioon - RTGA (vt Hemaglutinatsioon) - põhineb nähtusel, mis takistab (inhibeerib) erütrotsüütide hemaglutinatsiooni viiruste poolt immuunseerumi abil. Viiruse hemaglutinatsiooni nähtus ei ole serool. reaktsioon ja tekib viiruse seose tulemusena erütrotsüütide retseptoritega, kuid HTA on seroloogiline test, mida kasutatakse viirusevastaste antikehade tuvastamiseks ja tiitrimiseks. RTGA on peamine gripi, leetrite, punetiste, mumpsi, puukentsefaliidi ja teiste viirusnakkuste serodiagnostika meetod, mille tekitajatel on hemaglutineerivad omadused.
Passiivse või kaudse hemaglutinatsiooni reaktsioon. Kasutatakse erütrotsüüte või neutraalseid sünteetilisi kemikaale (nt lateksiosakesed), mille pinnale sorbeeritakse antigeenid (bakteriaalsed, viiruslikud, koed) või antikehad (vt Boydeni reaktsioon). Nende aglutinatsioon toimub sobivate seerumite või antigeenide lisamisel. Antigeenidega sensibiliseeritud RBC-sid nimetatakse antigeenseteks erütrotsüütide diagnostikaks ja neid kasutatakse antikehade tuvastamiseks ja tiitrimiseks. Antikehadega sensibiliseeritud erütrotsüüte nimetatakse immunoglobuliini erütrotsüütide diagnostikaks (vt) ja neid kasutatakse antigeenide tuvastamiseks:
Passiivset hemaglutinatsioonireaktsiooni kasutatakse bakterite (tüüfus ja paratüüfus, düsenteeria, brutselloos, katk, koolera jt), algloomade (malaaria) ja viiruste (gripp, adenoviirusnakkused, puukentsefaliit, Krimmi hemorraagiline palavik) põhjustatud haiguste diagnoosimiseks. jne) . Passiivse hemaglutinatsiooni reaktsioon tundlikkuses ei ole halvem kui viiruse eraldamise meetod arenoviirushaiguste korral (vt), eriti lümfotsüütilise kooriomeningiidi korral. Lümfotsüütilise kooriomeningiidi viirusantigeen tuvastatakse viirusekandjatel (koduhiirtel) passiivse hemaglutinatsioonireaktsiooni käigus ekstraheeritud elundite suspensioonidega, mis on lahjendatud kümneid tuhandeid kordi. Salmonelloosi korral tuvastatakse passiivse hemaglutinatsiooni reaktsioonis baktereid kuni mitmesaja mikroobikeha kontsentratsioonis 1 g väljaheites, düsenteeriabakterid toiduainetes, kui 1 g materjali sisaldus on vähemalt 500 mikroobikeha.
Passiivset hemaglutinatsiooni reaktsiooni kasutatakse viirusliku B-hepatiidi diagnoosimisel ja ennetamisel. Nõukogude Liidus valmistatakse ägeda B-hepatiidiga patsientide veres HBs antigeeni (vt Austraalia antigeen) tuvastamiseks diagnostiline aine, milleks on kana erütrotsüüdid. sensibiliseeritud kitse immunoglobuliiniga HBs antigeeni vastu. Diagnostika tilk kombineeritakse uuritavate inimeste võrdse koguse vereseerumiga ja kui selles esineb HBs antigeen, tekib aglutinatsioon. Reaktsioon on võimeline hõivama kuni 1,5 ng/ml HBs antigeeni. HBs antikehade tuvastamiseks kasutatakse erütrotsüüte, millele on adsorbeeritud HBs antigeen, mis on eraldatud patsientide verest. Passiivse hemaglutinatsiooni reaktsiooni kasutatakse ka patsiendi ülitundlikkuse tuvastamiseks ravimite ja hormoonide, näiteks penitsilliini või insuliini suhtes. Sel juhul sensibiliseeritakse inimese 0-veregrupi erütrotsüüdid raviainega ja seejärel tuvastatakse nende aglutiniinid patsiendi vereseerumis.
Passiivse hemaglutinatsiooni reaktsiooni kasutatakse gonadotropiini tuvastamiseks uriinis, et tuvastada rasedus (vt kooriongonadotropiin). Selleks inkubeeritakse selle hormooni standardseerumit uuritava uriiniga. Pärast erütrotsüütide lisamist neile adsorbeeritud hormooniga aglutinatsiooni ei toimu (positiivne vastus), kuna uriinis sisalduv hormoon neutraliseerib aglutineerivad antikehad.
Sademete nähtusel põhinevad reaktsioonid
Neid kasutatakse mitmesuguste antigeenide ja antikehade tuvastamiseks. Kvalitatiivse reaktsiooni lihtsaim näide on läbipaistmatu sadestumisriba tekkimine katseklaasis oleva antikeha antigeeni sadestumise piiril. Laialdaselt kasutatakse erinevat tüüpi sadestamisreaktsioone poolvedelagar või agaroosgeelides (Ouchterloni topeltimmunodifusioonimeetod, radiaalne immunodifusioonimeetod, immunoelektroforees), to-rukis on nii kvalitatiivsed kui ka kvantitatiivsed (vt Immunodifusioon, Immunoelektroforees).
Topeltimmunodifusiooni seadistamiseks valatakse klaasplaadile kiht sulatatud geeli ja pärast kõvenemist lõigatakse välja 1,5-3 mm läbimõõduga augud. Testitavad antigeenid asetatakse süvenditesse ringikujuliselt ja teadaoleva spetsiifilisusega immuunseerum asetatakse kesksesse süvendisse. Üksteise poole difundeerudes moodustavad homoloogsed seerumid ja antigeenid sademe. Radiaalse immunodifusiooniga (vastavalt Mancini meetodile) viiakse agarisse immuunseerum. Süvenditesse asetatud antigeen difundeerub läbi agari ning immuunseerumiga sadestamise tulemusena tekivad süvendite ümber läbipaistmatud rõngad, mille välisläbimõõt on võrdeline antigeeni kontsentratsiooniga. Selle reaktsiooni modifikatsiooni kasutatakse gripi diagnoosimisel IgM ja IgG antikehade tuvastamiseks (vt Immunoglobuliinid). Gripi antigeen viiakse agarisse ja vereseerum süvenditesse. Seejärel töödeldakse plaate IgM või IgG antikehade vastaste immuunseerumitega, mis aitab tuvastada vastavate antikehade reaktsiooni antigeenidega. Meetod võimaldab üheaegselt määrata antikehade tiitreid ja nende kuulumist teatud immunoglobuliinide klassi.
Immunoelektroforeesi tüüp on radioimmunoforees. Sel juhul täidetakse pärast antigeenide elektroforeetilist eraldamist antigeenide liikumisega geelis paralleelselt lõigatud soon esmalt radioaktiivse joodiga märgistatud immuunseerumiga määratavate antigeenide vastu ja seejärel immuunseerumiga. IgG antikehad, mis sadestavad moodustunud antikeha kompleksid antigeeniga. Kõik seondumata reagendid pestakse välja ja antigeen-antikeha kompleks tuvastatakse autoradiograafiaga (vt.).
Täiendage reaktsioone. Komplemendi osalusega reaktsioonid (vt) põhinevad Cl (Clq) komplemendi alamkomponendi ja seejärel komplemendi teiste komponentide võimel ühineda immuunkompleksidega.
Komplemendi sidumise reaktsioon võimaldab teil tiitrida antigeene või antikehi vastavalt antigeeni-antikeha kompleksi komplemendi sidumise astmele. See reaktsioon koosneb kahest faasist: antigeeni interaktsioon uuritava vereseerumiga (testimissüsteem) ja hemolüütilise seerumi interaktsioon lamba erütrotsüütidega (indikaatorsüsteem). Testisüsteemi positiivse reaktsiooni korral toimub komplemendi sidumine ja seejärel antikehaga sensibiliseeritud erütrotsüütide lisamisel hemolüüsi ei täheldata (vt Komplemendi sidumise reaktsioon). Reaktsiooni kasutatakse laialdaselt vistseraalse süüfilise (vt Wassermani reaktsioon) ja viirusnakkuste (vt Viroloogilised uuringud) serodiagnostikaks.
Tsütolüüs. Rakustruktuuride vastased antikehad võivad komplemendi osalusel lahustada neid struktuure kandvad rakud. RBC lüüsi saab kergesti hinnata hemoglobiini vabanemise astme ja intensiivsuse järgi. Tuumarakkude lüüsi hinnatakse surnud rakkude protsendi loendamisega, mis ei värvu metüleensinisega. Sageli kasutatakse ka radioaktiivset kroomi, mis on varem rakkudega keemiliselt seotud. Hävitatud rakkude arvu määrab rakkude lüüsi käigus vabanenud sidumata kroomi hulk.
Geelis võib tekkida erütrotsüütide radiaalse hemolüüsi reaktsioon. Lamba erütrotsüütide suspensioon asetatakse agaroosigeeli, lisades sinna komplemendi; süvendid tehakse klaasile külmutatud kihina ja neile lisatakse hemolüütilist seerumit. Antikehade radiaalse difusiooni tulemusena moodustub süvendite ümber hemolüüsi tsoon. Hemolüüsi tsooni raadius on otseselt võrdeline seerumi tiitriga. Kui erütrotsüütidele adsorbeerub antigeen, näiteks gripiviiruse, punetiste või puukentsefaliidi glükoproteiin hemaglutiniin, võib nende viiruste immuunseerumi hemolüüsi nähtust taastoota. Radiaalse hemolüüsi reaktsioon geelis on leidnud rakendust viirusnakkuste diagnoosimisel, kuna on lihtne määrata staadium, tundlikkus seerumi inhibiitorite suhtes ja võime tiitrida vereseerumit vastavalt hemolüüsitsooni läbimõõdule ilma seerialahjendusi kasutamata.
immuun adhesioon. Erütrotsüütide, trombotsüütide ja teiste vererakkude pinnal on kolmanda komplemendi komponendi (C3) retseptorid. Kui antigeenile (bakterid, viirused jne) lisada sobiv immuunseerum ja komplement, moodustub antigeen-antikeha kompleks, mis on kaetud komplemendi C3 komponendiga. Trombotsüütidega segamisel settib komplemendi C3 komponendi tõttu antigeen-antikeha kompleks rakkudele ja põhjustab nende aglutinatsiooni (vt Immuunadhesioon). Seda reaktsiooni kasutatakse HLA-süsteemi antigeenide määramiseks (vt Transplantatsiooniimmuunsus) ja mitmete viirusnakkuste (puukentsefaliit, denguepalavik) uurimisel kaasneb to-rukkiga immunopatool. protsessid ja viiruse antigeenide ringlus veres kombinatsioonis antikehadega.
Neutraliseerimisreaktsioon põhineb antikehade võimel neutraliseerida makromolekulaarsete või lahustuvate antigeenide teatud spetsiifilisi funktsioone, näiteks ensüümide aktiivsust, bakteriaalseid toksiine, viiruste patogeensust. Bakterioloogias kasutatakse seda reaktsiooni antistreptolüsiinide, antistreptokinaasi ja antistafülolüsiinide tuvastamiseks. Toksiinide neutraliseerimise reaktsiooni saab hinnata biol. toime, näiteks tiitritakse teetanuse- ja botuliinivastaseid seerumeid (vt Toksiini - antitoksiini reaktsioon). Loomadele manustatud toksiini ja antiseerumi segu hoiab ära nende surma. Viroloogias kasutatakse neutraliseerimisreaktsiooni erinevaid variante. Segades viirused sobiva antiseerumiga ja viies selle segu loomadesse või rakukultuuridesse, neutraliseeritakse viiruste patogeensus.
Reaktsioonid keemiliste ja füüsikaliste märgiste abil
Koonsi (AN Coons) 1942. aastal välja töötatud immunofluorestsents hõlmab serooli kasutamist. fluorokroomiga märgistatud seerumite reaktsioonid (vt Immunofluorestsents). Fluorokroomiga märgistatud seerum moodustab antigeeniga antigeen-antikeha kompleksi, mis muutub mikroskoobi all jälgimiseks kättesaadavaks fluorokroomi sära ergavate ultraviolettkiirte abil. Otsest immunofluorestsentsreaktsiooni kasutatakse rakuliste antigeenide uurimiseks, viiruse tuvastamiseks nakatunud rakkudes ning bakterite ja riketsia tuvastamiseks määrdudes. Seega töödeldakse marutaudi diagnoosimiseks viirusekandjates kahtlustatavate loomade ajutükkide jälgi luminestseeruva marutaudivastase seerumiga. Positiivse tulemuse korral täheldatakse närvirakkude protoplasmas erkrohelist värvi tükke. Gripi-, paragripi- ja adenoviirusnakkuse kiirdiagnoos põhineb viiruse antigeenide tuvastamisel nina limaskestalt pärinevate jäljendite rakkudes.
Laialdasemalt kasutatakse kaudse immunofluorestsentsi meetodit, mis põhineb antigeen-antikeha kompleksi tuvastamisel, kasutades IgG antikehade vastast luminestseeruvat immuunseerumit ja mida kasutatakse mitte ainult antigeenide tuvastamiseks, vaid ka antikehade tiitrimiseks. Meetod on leidnud rakendust herpese, tsütomegalipside, Lassa palaviku serodiagnostikas. Laboris tuleb hoida -20°C juures antigeeni sisaldavate rakkude, näiteks viirusega nakatunud VERO rakkude või atsetooniga fikseeritud kanafibroblastide preparaatide varu. Uuritud vereseerum kantakse preparaatidele kihiti, preparaat asetatakse immuunkomplekside moodustamiseks termostaadi f 37 ° juures ja seejärel pärast seondumata reaktiivide mahapesemist tuvastatakse need kompleksid märgistatud luminestseeruva seerumiga inimese globuliinide vastu. Kasutades märgistatud immuunseerumeid IgM või IgG antikehade vastu, on võimalik eristada antikehade tüüpe ja tuvastada varajane immuunvastus IgM antikehade olemasolu järgi.
Ensüümis - immunoloogilisel meetodil kasutatakse ensüümidega konjugeeritud antikehi, hl. arr. mädarõika peroksüdaas või aluseline fosfataas. Märgistatud seerumi seose tuvastamiseks antigeeniga lisatakse substraat, mis laguneb seerumi külge kinnitatud ensüümi toimel kollakaspruuni (peroksidaas) või kollakasrohelise (fosfataas) värviga. Kasutatakse ka ensüüme, mis lagundavad mitte ainult kromogeenset, vaid ka lumogeenset substraati. Sel juhul ilmub positiivse reaktsiooni korral sära. Sarnaselt immunofluorestsentsiga kasutatakse ensüümi immuunanalüüsi antigeenide tuvastamiseks rakkudes või antikehade tiitrimiseks antigeeni sisaldavatel rakkudel.
Kõige populaarsem ensüümi-immunoloogilise meetodi tüüp on immunosorptsioon. Tahkel kandjal võib Krimmis olla tselluloos, polüakrüülamiid, dekstraan ja mitmesugused plastid, adsorbeerida antigeeni. Sagedamini toimib kandjana mikropaneelide kaevude pind. Testitav vereseerum lisatakse sorbeeritud antigeeniga süvenditesse, seejärel märgistatakse ensüümi ja substraadiga antiseerum. Positiivseid tulemusi arvestab vedela keskkonna värvuse muutus. Antigeenide tuvastamiseks adsorbeeritakse antikehad kandjale, seejärel viiakse uuritav materjal süvenditesse ja reaktsioon tuvastatakse ensüümiga märgistatud antimikroobse seerumiga.
Radioimmunoloogiline meetod põhineb antigeenide või antikehade radioisotoopmärgise kasutamisel. Algselt töötati see välja spetsiifilise meetodina veres ringlevate hormoonide taseme mõõtmiseks. Katsesüsteem oli isotoobiga märgistatud hormoon (antigeen) ja selle vastane antiseerum. Kui sellisele antiseerumile lisatakse soovitud hormooni sisaldav materjal, siis see seob osa antikehadest, millele järgneva märgistatud tiitritud hormooni sisseviimisega seondub antikehadega võrreldes kontrollrühmaga väiksem kogus seda. Tulemust hinnatakse seotud ja seondumata radioaktiivse märgise kõverate võrdlemisega. Sellist meetodit nimetatakse konkurentsireaktsiooniks. Radioimmunoloogilisel meetodil on ka teisi modifikatsioone. Radioimmunoloogiline meetod on kõige tundlikum meetod antigeenide ja antikehade määramiseks, mida kasutatakse hormoonide, ravimite ja antibiootikumide määramiseks, bakteriaalsete, viiruslike, riketsiaalsete, algloomsete haiguste diagnoosimiseks, verevalkude, kudede antigeenide uurimiseks.
Seroloogiliste uurimismeetodite võrdlevad omadused ja kasutamine meditsiinipraktikas
S. meetodid ja. pidevalt täiustatud tundlikkuse ja kasutuse mitmekülgsuse suurendamise suunas. Esialgu serool. diagnoos põhines antikehade tuvastamisel. 20. sajandi keskpaiga tulekuga Immunofluorestsentsi ja passiivse hemaglutinatsiooni reaktsioonid, millel on suurem tundlikkus, sai võimalikuks tuvastada mitte ainult antikehi, vaid ka antigeeni otse patsientide materjalist. Ensüüm-immunoloogilised ja radioimmunoloogilised meetodid, mille tundlikkus on 2-3 suurusjärku suurem kui immunofluorestsents ja passiivne hemaglutinatsioon, lähenevad biol. bakterite ja viiruste tuvastamine. Nende rakendusala nii antigeenide kui ka antikehade tuvastamiseks on teoreetiliselt piiramatu.
Serodiagnoos inf. haigus põhineb antikehade ilmnemisel isoleeritud või kahtlustatava patogeeni vastu, olenemata sellest, kas patogeen avastati haiguse ägedas staadiumis. Uurige haiguse alguses ja 2-3 nädala jooksul võetud vereseerumite paare. hiljem. Antikehade suurenemine teises vereseerumis vähemalt 4 korda võrreldes esimesega on diagnostiliselt oluline. Samuti on oluline, milline immunoglobuliinide antikehade klass on esindatud. IgM antikehad leitakse haiguse ägeda perioodi lõpus ja taastumise varases staadiumis. IgG antikehad ilmuvad taastumise hilisemates staadiumides ja ringlevad pikka aega. Kui raseduse esimesel trimestril naisel leitakse punetiste viiruse IgM antikehad, on see raseduse katkestamise aluseks, kuna sel perioodil on loode viiruse suhtes eriti tundlik. Erinevatel inf. haigused kasutavad valikuliselt kõige spetsiifilisemaid ja mugavamaid meetodeid.
S. i. kasutatakse laialdaselt epidemioloogias. Erinevate elanikkonnarühmade vereproovide süstemaatiline kogumine ja uurimine võimaldab mõista elanikkonna kontakte aktivaatorite allikaga inf. haigused. Kollektiivse immuunsuse taseme uuring võimaldab tuvastada kõrge riskiga rühmi ja planeerida vaktsineerimistegevusi, uurida nakkuste geograafilist levikut. S. i. elanikkonna erinevad vanuserühmad võimaldasid näiteks tagantjärele tuvastada gripiviiruse erinevate variantide ringlemist teatud ajaperioodidel.
S. i. omavad suurt tähtsust pärilike haiguste (vt.) ja autoimmuunhaiguste uurimisel, millega kaasnevad vastavaid sihtrakke hävitavate koe- ja elundispetsiifiliste antikehade ilmumine, samuti onkoloogias kasvajaantigeenide tuvastamisel. Seega põhineb maksavähi immuundiagnostika alfa-fetoproteiini ja teiste embrüonaalsete antigeenide määramisel patsientide vereseerumis immunodifusiooni ja radioimmunoanalüüsi meetoditega.
Tänu serooli kasutamisele saavutatakse märkimisväärne teaduse edu rakuliste antigeenide, bakterite ja viiruste antigeensete peenstruktuuri uurimisel. monoklonaalsete antikehade reaktsioonid, rukkile on võimalik eraldada antigeenideterminandid.
Bibliograafia: Immunoloogia uurimismeetodid, toim. I. Lefkovits ja B. Pernis, tlk. inglise keelest, M., 1981; Immunoloogia juhend, toim. O. E. Vjazova ja Sh. X. Hodžajev Moskva, 1973. Kliinilise laboridiagnostika juhised, toim. V. V. Menšikov, Moskva, 1982. Immunology, toim. autor J.-F. Bach, N.Y., 1978.
S. Ya. Gaidamovitš.