Vere hüübimissüsteemi uurimise meetodid hõlmavad järgmisi rühmi:

1. indikatiivne (üldine), annab aimu kogu hüübimiskaskaadi kui terviku ja selle üksikute etappide seisundist (registreerimine võib toimuda visuaalselt või üksikute seadmete abil - koagulograaf, tromboelastograaf jne);
2. üksikute tegurite puudulikkuse eristamine - korrigeerivad hüübimistestid, uuritud vereplasma segamise testid teatud tegurite teadaoleva puudulikkusega patsientide vereplasmaga;
3. süsteemi üksikute komponentide kvantitatiivne määramine nende funktsionaalse aktiivsuse järgi (koagulatsioonitestid, kromogeensete ja muude substraatide uuringud) ja (või) immunoloogiliste markerite abil;
4. vere hüübimisprotsessi ja fibrinolüüsi intravaskulaarse aktivatsiooni tuvastamine funktsionaalsete tunnuste või sellise aktivatsiooni molekulaarsete markerite abil - aktiveeritud hüübimisfaktorite tuvastamine vereringes, trombotsüütide degranulatsiooniproduktid, vere hüübimissüsteemi komponentide või nende metaboliitide lõhenemine, uute antigeensete markerite tekkimine aktiveeritud faktorite ja nende komplekside, vere hüübimissüsteemi märgistatud komponentide metabolismi kiirendamine (nende poolväärtusaja lühenemine vereringes).

Seega kasutatakse vere hüübimissüsteemi seisundi hindamisel neid tegelikena koagulatsiooni tehnikad(laboratoorsed ja instrumentaalsed), mis on diagnostilise protsessi aluseks, ja immunoloogilised, radionukliidide ja muud tüüpi uuringud. Veelgi enam, paljudel juhtudel saab süsteemi komponente määrata nii funktsionaalse aktiivsuse kui ka immunoloogiliselt - vastava antigeeni sisalduse järgi veres. Selliste meetodite paralleelne kasutamine võimaldab eristada patoloogia vorme, mis on seotud vastava hüübimisfaktori sünteesi puudumisega (sel juhul vähenevad võrdselt nii selle funktsionaalne aktiivsus kui ka antigeeni kogus), ja vorme, milles faktori molekul sünteesitakse. , kuid see on ebanormaalne ja funktsionaalselt defektne.

Esimeste vormide tähistamiseks lisatakse vastava teguri numbrile märk “-” (näiteks VIII-, IX- jne) ja teises - märk “+” (näiteks VIII+, IX+).

Orientatsiooni (üldised) hüübimistestid

Vere hüübimisaja määramine

Vere hüübimisaja määramine(eelistatult Lee-White meetod) on kaua kasutatud kiirtest (otse patsiendi voodi kõrval) indikatiivne test, mis võimaldab tuvastada olulisi vere hüübimishäireid, mis on seotud hemokoagulatsioonifaktorite (v.a faktor VII) defitsiidi või antikoagulantide toimega. ja fibrinolüütikumid. Seda kasutatakse indikatiivse testina ja hepariinravi kontrollimiseks, hepariini toime kõrvaldamiseks protamiinsulfaadiga. Test on suhteliselt tundetu, selle näitajaid rikutakse ainult vere hüübimisfaktorite sisalduse märgatava langusega plasmas (alla 4-5%) ja seetõttu ei sobi see hemofiilia A ja B kergete vormide, samuti vere tuvastamiseks. hüübimishäired angiohemofiilia, XI faktori puudulikkuse, prekallikreiini ja suure molekulmassiga kininogeeni korral. Nendel põhjustel ei saa testi kasutada patsientide preoperatiivseks uurimiseks: normaalsete testiväärtuste (5-10 minutit) korral võib tekkida tugev postoperatiivne verejooks.

Plasma rekaltsifikatsiooni aeg

Plasma rekaltsifikatsiooniaeg on mittestandardiseeritud madala tundlikkusega test, mis on hüpokoagulatsiooni tuvastamiseks vähem usaldusväärne kui täisvere hüübimisaeg. Seda ei saa soovitada hemostaasihäirete diagnoosimiseks.

Aktiveeritud osaline tromboplastiini aeg plasmas

Aktiveeritud osaline plasma tromboplastiini aeg (APTT, kaoliin-kefaliin test) on ülitundlik meetod, mis tuvastab vere hüübimishäired, kui protsessi käivitab sisemine mehhanism. See on selektiivselt tundlik plasma hüübimisfaktorite defitsiidi suhtes (kuna trombotsüütide ja trombotsüütide faktori 3 puudulikkust kompenseeritakse väliselt manustatava tsefaliini või erütrofosfatiidiga).

Seda kasutatakse hepariinravi kontrollimiseks, patsientide operatsioonieelseks uurimiseks jne Normatiivsed näitajad sõltuvad kasutatud tsefaliini proovidest, enamasti on need 37-50 s (optimaalselt - 37-45 s).

Plasma kaoliini aeg

Plasma kaoliiniaeg on eelmisega sarnane test, kuid ilma tsefaliini (erütrofosfatiidi) lisamiseta plasmale, mille tulemusena on see tundlik mitte ainult plasma hüübimisfaktorite puudulikkuse, vaid ka trombotsüütide puudumise suhtes. ja trombotsüütide faktor 3. Selle teguri aktiivsust saab ligikaudselt hinnata, kui võrrelda patsiendi plasma kaoliini aega kõrge ja madala trombotsüütide arvuga (normaalne - 57-70 s).

Fosfolipiidkomponentide kasutamine, mis annavad APTT-s 55 sekundit või rohkem hüübimisaega, ei ole soovitatav, kuna see vähendab järsult testide täpsust ja reprodutseeritavust, sealhulgas VIII ja IX faktorite kvantitatiivset määramist.

Silicon Plasma aeg

Plasma silikooniaeg on plasma rekaltsifikatsiooni aeg, mis saadakse nõelte, katseklaaside, pipettide silikoonimise tingimustes, st minimaalse kontaktaktivatsiooniga. Test on tundlik kontaktfaasi hüperkoagulatsiooni-intravaskulaarse aktivatsiooni suhtes (faktorid XII ja XI), kuid see rikkumine on selgemini tuvastatav täisvere silikoonhüübimisaja määramisel (Lee-White'i meetodil või vere tromboelastograafilisel registreerimisel). protsess silikoonitud küvetis).

Normatiivsed näitajad sõltuvad kasutatavast silikoonist ja määratakse tervete inimeste vere uurimisel iga selle proovi kohta eraldi. Silikooni valides on parim see, mis vere (plasma) hüübimisaega kõige enam pikendab.

Plasma protrombiini (tromboplastiini) aeg

Plasma protrombiini (tromboplastiini) aeg (Quick time, protrombiini indeks) iseloomustab taaskaltsifitseeritud vereplasma hüübimise kiirust, kui protsess käivitatakse välise mehhanismi abil, st inimese (või küüliku) aju tromboplastiini lisamisega.

Tromboplastiini aktiivsus standardiseeritud normaalse (kontroll)plasma segaproovidel. Kõige sagedamini kasutatakse tromboplastiine aktiivsusega 12–18 s (klassikalise Quick-meetodi puhul 12–13 s). Mida nõrgem on tromboplastiin, seda suurem on meetodi viga.

Normaalse plasma protrombiiniaja korral võimaldab test tuvastada protrombiini kompleksfaktorite - VII, X, V ja II isoleeritud või kumulatiivse puudulikkuse, millest kolm faktorit (VII, X ja II) on K-vitamiinist sõltuvad ja nende aktiivsus väheneb kaudsete antikoagulantide mõjul. Sellega seoses on protrombiini test peamine kumariinide (neodikumariin või pelentaan, sinkumar jne) ja teiste selle rühma ravimite (fenüliin) annuste kontrollimisel.

Protrombiiniaeg jääb normaalseks protrombinaasi aktivatsiooni sisemise mehhanismi tegurite - XII, XI, IX, VIII faktorite (st igat tüüpi hemofiilia ja Hagemani defektiga), samuti prekallikreiini defitsiidi ja suure molekulmassiga. kininogeen (HMW kininogeen)

Kirjanduses on erinevaid protrombiini testi tulemuste määramine. Kõige otstarbekam on näidata uuritava ja kontrollvereplasma protrombiiniaega sekundites (mis annab teavet ka kasutatava tromboplastiini aktiivsuse kohta). Mõnikord kasutavad nad nende kahe suuruse suhet, st indeksit (testitava plasma PV, s)/(kontrollplasma PV, s), (norm 0,9-1,1).

Teine selle näitaja hindamise vorm, mida laborites enim kasutatakse, on protrombiini indeksi arvutamine protsentides pöördaritmeetilise proportsiooni (norm on 90-110%) koostamise teel, kuid selline arvutus on vale. , kuna hüübimisfaktorite kontsentratsiooni ja hüübimisaja vahel pole vahet.aritmeetiline, vaid logaritmiline sõltuvus. Lisaks on protrombiini test tundlik ainult hüübimisfaktorite vähenemise suhtes alla 50% nende normaalväärtusest. Seetõttu on soovitatav kasutada protrombiiniindeksi määramist protsentides normaalse plasma segaproovi lahjenduskõvera (1:2, 1:4, 1:8 jne) järgi. Selline kõver koostatakse üks kord erineva algaktiivsusega (12-18 s) tromboplastiinide jaoks ja selle järgi määratakse protrombiini indeks uuritud patsientidel. Selle tehnika eeliseks on ka see, et kõikide uuringute, sh erinevatel päevadel dünaamikas tehtud uuringute tulemused ei ole seotud juhuslike erinevate normaalse vereplasma proovidega, vaid keskmistatud samade standardparameetritega, mille tulemusena meetod viga on oluliselt vähenenud.. Normaalse plasma proportsioonist ja lahjenduskõverast saadud indeksid ei vasta üksteisele üldse. Seda tuleks arvesse võtta ka kaudsete antikoagulantide toime jälgimisel, sest tavapärase indeksi langus ligikaudu 50%-ni vastab indeksi langusele piki lahjenduskõverat 25-30%-ni. Sellega seoses tuleks analüüsid alati teha. näidake, kuidas protrombiini indeks arvutati, millised on selle aktiivsuse tromboplastiini normatiivsed näitajad.

Plasma trombiini aeg

Plasma trombiiniaeg, st tsitraadiplasma hüübimisaeg, kui sellele on lisatud standardse aktiivsusega trombiini, on peamine test vere hüübimise lõppfaasi hindamisel. Selle indikaatori arvestamine on oluline kõigi teiste hüübimistestide õigeks tõlgendamiseks, sest vere hüübimise viimase etapi rikkumine peaks kõigi ülaltoodud meetodite puhul paratamatult kaasa tooma hüübimisaja pikenemise.

Enamasti kasutatakse trombiinitesti tegemisel sellist trombiinilahuse kontsentratsiooni, mis segatuna võrdse koguse vereplasmaga annab hüübimise 12-18 s, kuid düsfibrinogeneemia äratundmisel kasutatakse ka nõrgemaid kontsentratsioone ( mis põhjustab hüübimist 30-35 sekundi jooksul).

trombiini aeg- oluline diagnostiline indikaator, selle rikkumist täheldatakse nii kaasasündinud kui ka sageli esineva omandatud (sekundaarse) hüpoprotrombineemia, enamiku düsfibrinogeneemia korral, samuti hepariini, fibrinolüüsitoodete (PDF) ja paljude teiste antitrombiinide ja aktiivsuse inhibiitorite mõjul. fibriini monomeeride iseseisev kokkupanek. Seetõttu on trombiiniaeg peamiselt ja suuremal määral häiritud ägeda ja alaägeda DIC sündroomi korral, mis mängib olulist rolli selle patoloogia kiires diagnoosimises.

Autokoagulatsiooni test

Autokoagulatsioonitest (ACT) on ülitundlik kaheetapiline test, mis iseloomustab vere hüübimisprotsessi, kui see käivitatakse sisemise mehhanismi poolt. Sarnaselt APTT-ga ei ole test VII faktori defitsiidi suhtes tundlik, kuid samas ei sõltu selle näidustused fibrinogeeni (faktor I) sisaldusest uuritavas vereplasmas, mis eristab seda kõigist teistest ligikaudsetest hüübimistestidest.

ACT eeliseks on ka see, et uuritakse lahjendatud verd, mis suurendab oluliselt testi tundlikkust hüübimisfaktorite vaeguse suhtes ning lisaks ei nõua ACT kaoliini ja tsefaliini kasutamist, kuna kontakt- ja fosfolipiidide aktivatsiooni standardiseerimine veres. see saavutatakse katsealuse enda erütrotsüütide hemolüsaadiga.

ACT olemus seisneb selles, et 2 ml kaltsiumkloriidi hüpotoonilisele lahusele (0,222%) lisatakse 0,1 ml uuritava verd.

Selles hemolüsaadi-kaltsiumi segus moodustuvad protrombinaas ja trombiin, mille aktiivsus määratakse 0,2 ml selle segu järjestikuse lisamisega 0,2 ml katsealuse plasmale (esimese 10 minuti jooksul iga 2 minuti järel, ja seejärel iga 10 minuti järel 1 tunni jooksul).

Uuritava plasma on fibrinogeeni allikas, mille peal testitakse segus moodustunud trombiini aktiivsust. Nagu näitavad arvukad uuringud, võib seda asendada tervete inimeste vereplasma või fibrinogeenilahusega. Sel juhul väheneb patsiendi verevool 0,1-0,2 ml-ni (võib võtta sõrmest!) muudab autokoagulatsiooni testi mikrokoagulatsiooni testiks (MCT) ja muudab selle väga mugavaks kasutamiseks pediaatrias, sealhulgas vastsündinute hemostaasi uurimisel.

Koagulatsiooni aktiivsus ACT-s ja MKT-s alguses suureneb ja tervetel inimestel saavutab maksimumi tavaliselt vere-kaltsiumi segu (CCM) inkubatsiooni 10. minutiks, kui substraadi plasma koagulatsioon toimub 10 ± 1 sekundiga. Seejärel hakkab KKS-i hüübimisaktiivsus langema, mis viitab selles moodustunud trombiini inaktiveerumisele. Hemofiilia, hepariini toime ja muude hüübimishäirete korral väheneb CCS-i hüübimisaktiivsus järsult ja maksimum liigub 10. minutist hilisemasse kuupäeva. Hüperkoagulatsiooniga täheldatakse trombiini aktiivsuse varasemat ja olulisemat tõusu RCC-s.

Testi läbiviimisel ühes katseklaasis (määramine alles KKS-i inkubatsiooni 10. minutil) saab seda kasutada hepariinravi kontrollimiseks. Selle tehnika eelis aktiveeritud osalise tromboplastiini aja testi ees seisneb selles, et see välistab erinevate tsefaliinide ebaühtlase mõju hepariini hüübimisajale.

ACT (MKT) põhjal on välja töötatud lihtne ja täpne meetod hemofiilia diferentsiaaldiagnostikaks.

Teatmeteostes toodud teisendustabelite abil saab ACT (MKT) näitajaid väljendada protsentides ja kujutada graafiku - autokoagulogrammi - kujul.

Mitmete verehüübimise üldiste parameetrite hindamiseks kasutatakse laialdaselt ka instrumentaalseid uurimismeetodeid, milles kasutatakse peamiselt erinevaid koagulograafe ja tromboelastograafe.

Tromboelastograafia annab aimu mitte ainult vere või plasma hüübimise ajalistest parameetritest, vaid ka tekkivate trombide struktuurist ja mehaanilistest omadustest. Viimastel aastatel on riistvaralistes salvestusmeetodites juurutatud ka hüübimisprotsessi kontakt- ja fosfolipiidide aktiveerimise standardimine. Koagulogrammid luuakse ka üldiste hüübimistestide - APTT, protrombiini, trombiini jt massiliseks teostamiseks koos tulemuste automaatse salvestamisega.

Meetodid erinevate hüübimisfaktorite puudulikkuse eristamiseks ja nende kvantitatiivseks määramiseks

Allolevas tabelis olevad andmed näitavad, et ligikaudne vere hüübimise uuring kolme põhitesti abil võimaldab grupiliselt eristada erinevate plasma hüübimisfaktorite puudulikkust. Seega on koagulatsiooni aeglustumine ainult protrombiini testis (I tüüpi häire) kõigi teiste normaalsete näidustuste korral iseloomulik VII faktori pärilikule puudulikkusele või selle faktori taseme vähendamisele obstruktiivse ikteruse arengu varases staadiumis või kaudsete antikoagulantidega ravi esimesel 1-2 päeval, kui supressioon VII faktori süntees on oma arengus ees kõigi teiste K-vitamiinist sõltuvate hüübimisfaktorite taseme languse osas.

Peamiste hüübimistestide rikkumiste tüübid teatud plasma hüübimisfaktorite puudulikkusega
Rikkumiste tüübid		Koagulatsiooni testid
		APTT, ACT
	Willebrandi tegur
	Plasma prekallikreiin
	VM kininogeen
	Otsese toimega antikoagulandid (hepariin, heparinoidid jne)
	Kaudsed antikoagulandid (kumariinid)
Märge. (+) - koagulatsiooni aeglustumine; (-) - hüübimishäire puudub.

XII, XI, IX, VIII faktorite, von Willebrandi (mitte kõigis vormides), prekallikreiini ja kininogeeni HM puudulikkuse korral täheldatakse ainult sisemise hüübimismehhanismi, st aktiveeritud osalise tromboplastiini aja ja ACT (II tüüpi) rikkumist. Neist pärilike hüübimisdefektide korral täheldatakse XII faktorite, prekallikreiini ja HM-kininogeeni defitsiiti üliharva ja sellega ei kaasne verejooksu, samas kui VIII faktorite (hemofiilia A), IX (hemofiilia B) ja von Willebrandi faktori puudust. on väga levinud (rohkem kui 96% kõigist pärilikest koagulopaatiatest) ja sellega kaasneb tugev verejooks. Nende vahel viiakse kõigepealt läbi edasine diferentsiaaldiagnostika.

XI faktori puudus on suhteliselt haruldane (umbes 0,5–1,0% kogu hemofiiliast), esineb väga kerge verejooksuga (peamiselt pärast vigastusi ja operatsioone) ning on asümptomaatiliste häirete esimese alarühma ning hemofiilia ja von Willebrandi tõve vahepealsel positsioonil.

Teist tüüpi häireid iseloomustab nii osalise tromboplastiini aja ja ACT kui ka protrombiiniaja pikenemine. See on iseloomulik faktorite V, X või II defitsiidile või kõigi K-vitamiinist sõltuvate tegurite (VII, X, IX, II) komplekssele vaegusele, mida täheldatakse obstruktiivse kollatõve ja muud tüüpi K-vitamiini korral. defitsiit, samuti kaudsete antikoagulantide võtmisel.

Ja lõpuks, nagu samast tabelist näha, võib otsese toimega võtmisel esineda kõigi kolme testi (IV tüüp) näidustuste rikkumine, mida täheldatakse päriliku ja omandatud hüpo- ja düsfibrinogeneemia korral (mitte kõik). antikoagulandid (hepariin, heparinoidid, hirudiin jne), ravi fibrinolüüsi aktivaatorite ja defibrineerivate ravimitega (streptokinaas, urokinaas jne), patoloogiliste antitrombiinide ilmumine veres ja ained, mis takistavad fibriini monomeeride - paraproteiinide - ühendamist (koostumist). , krüoglobuliinid, immuunkompleksid, samuti DIC-sündroomist põhjustatud komplekssete hüübimishäirete korral. Sellisel juhul rikutakse trombiiniaega sageli suuremal määral ja mõnevõrra varem kui teiste testidega.

Võttes arvesse haiguse väljakirjutamist ja selle päriliku tekke võimalust või sekundaarset seost muud tüüpi patoloogiate ja meditsiiniliste või muude mõjudega, verejooksu olemasolu või puudumist ja selle tüüpi, on võimalik nende haiguste tekkepõhjuseks õigesti määrata. sügava vere hüübimishäired.

Kõik diferentseerivad testid põhinevad korrigeerimise põhimõttel st selle kindlaksmääramisel, mil määral tuvastatud verehüübimishäire kõrvaldatakse või, vastupidi, ei kõrvaldata vereplasma proovide või kunstlikult saadud veretoodetega, millel on teadaolevalt ühe või teise hüübimisfaktori puudulikkus.

Selleks loovad spetsialiseeritud laborid enda jaoks faktoripuudulike vereplasmade kogusid, mis võtavad need vastu patsientidelt, kellel on teadaolevalt sügav (alla 1%) iga teguri puudulikkus, ja säilitavad neid väikestes pakendites (igaüks 0,5 ml) temperatuur -30 ° C. Vajadusel need proovid sulatatakse ja kasutatakse diagnostilistes testides.

Kogemata üles sulanud või kasutamata jäetud plasmat ei tohi uuesti külmutada. Korrigeerivates testides ei tohi kasutada ühe või teise teguri immuuninhibiitoritega plasmat. Paljude ettevõtete diagnostikakomplektid sisaldavad külmkuivatatud vereplasma proove, millel on tuvastatavate hüübimisfaktorite (substraadiplasma) puudulikkus. Kuid paljusid hüübimishäireid täheldatakse kliinilises praktikas äärmiselt harva, seetõttu kasutatakse kunstlikult valmistatud normaalse vere komponente, millel on teatud hüübimisfaktorite puudulikkus, aga ka heterogeenset plasmat (kanad, pardipojad jne).

Tabelis on teave vere hüübimisfaktorite sisalduse kohta korrigeerivates hüübimistestides kasutatavates verekomponentides, sõltuvalt nende säilitusajast. Selle tabeli abil on lihtne dešifreerida mis tahes kolme peamise hüübimistesti näitu. Seda tüüpi korrigeerivate meetodite puhul kasutatakse teste, mis on standardiseeritud kontakt- ja fosfolipiidide aktiveerimisega, st kaoliin-kefaliin või hemolüsaadi kasutamine (ACT-s).

vereplasma	hüübimisfaktor
	sisemine mehhanism	väline mehhanism
	VIII IX XI XII prekallikreiin	VIIXVII
Native (säilivusajaga kuni 18 tundi)
Adsorbeeritud *
Säilivusajaga üle 24 tunni
Säilivusaeg 2-4 päeva (+4°C juures)	Pole kasutatud
Filtreeritud **	Pole kasutatud
Kanade või pardipoegade kohalik plasma (kuni 3-4 päeva vanused)		Pole kasutatud
Märge. (+) - teguri olemasolu; (-) - puudumine.
* Adsorptsioon toimub kas baariumsulfaadiga oksüdeeritud plasmast (BaSO 4 -plasma). või alumiiniumhüdroksiidgeel tsitraatplasmast (Al (OH) 3 plasma).
** Filtreerimine toimub läbi kahe asbestifiltri (Seitzi filtrid) – 20% (ülemine filter) ja 30% (alumine filter) asbestisisaldusega või läbi kahe- või kolmekordistatud vastavalt 30% ja 20% filtrite.

Uuringud patsiendi vereplasma segamiseks plasmaga, millel on teadaolevalt ühe või teise teguri puudujääk

Aktiveeritud osaline tromboplastiini aeg määratakse uuritud vereplasmas, normaalses plasmas (kontroll) ja plasmas, kus on teada VIII (hemofiilia A), IX (hemofiilia B), XI ja XII faktorite puudulikkus. Seejärel valmistatakse segu testitud tsitraadiplasma proovidest (7/10 mahust) ja järjestikku igast puudulikust plasmast (3/10 mahust), alustades VIII ja IX faktori puudulikkusest ( kõige levinumad patoloogia vormid!).

Segule lisatakse kaoliin ja tsefaliin ning 2 minuti pärast taaslubjatakse (temperatuuril 37 °C). Segus, kus aktiveeritud osaline tromboplastiini aeg ei ole normaliseerunud, on sama hüübimisdefekt.

Seega, kui uuritaval patsiendil aktiveeritud osalist tromboplastiini aega ei normaliseerita teadaoleva VIII faktori puudulikkusega patsiendi vereplasma lisamisega, vaid seda korrigeeritakse IX faktori puudulikkusega patsiendi vereplasmaga, on tal hemofiilia A.

Sarnaselt, kuid protrombiini testi põhjal, eristatakse protrombiini kompleksfaktorite (X, V, VII ja II) defitsiiti.

Tromboplastiini genereerimise test

Vere hüübimise sisemise mehhanismi häirete eristamiseks klassikaline tromboplastiini genereerimise test trombotsüütide komponendi, mille valmistamine nõuab märkimisväärset aja- ja vereinvesteeringut, asendamisega tsefaliiniga Tromboplastiini genereerimise testi puudusteks on selle mahukus, vajadus valmistada ette suur hulk reaktiive ja märkimisväärne ajakulu. selle rakendamise kohta.

Autokoagulatsioonitestil põhinev korrigeeriv test.

Teine korrigeeriv test, mis põhineb korrektsioonil samade normaalse vere komponentidega autokoagulatsioonitesti alusel, vastab täielikult ekspressdiagnostika ülesannetele.

See test on ülimalt töökindel, kiire ja hõlpsasti teostatav ning nõuab katsealuselt väikest (mitte rohkem kui 0,5 ml) verd, mis võimaldab seda kasutada pediaatrilises praktikas.

Selles, nagu ka tromboplastiini genereerimise testis, kasutatakse korrigeerimiseks adsorbeeritud plasmat ja vana vereseerumit, mis tsentrifuugitakse enne uuringut uuesti. Kolmesse katsutisse valatakse 2 ml 0,222% kaltsiumkloriidi lahust ning kahte neist lisatakse 0,1 ml adsorbeeritud normaalset vereplasmat (1. tuub) ja 0,1 ml vana normaalset vereseerumit (2. katsuti). Kolm teist katsutit täidetakse 0,2 ml normaalse tsitraatplasmaga. Seejärel lisatakse kõikidesse katseklaasidesse kaltsiumkloriidi lahusega 0,1 ml katsealuse tsitraatverd.

Täpselt 4 minutit pärast selle segu inkubeerimist testitakse selle hüübimisaktiivsust normaalse plasmaga.

Hüübimisaktiivsuse järsk langus ainult esimeses katsutis (normaalse BaSO 4 -plasmaga) näitab, et patsiendil on IX faktori puudulikkus (hemofiilia B), ainult teises katseklaasis (vana seerumiga) VIII faktori puudulikkus (hemofiilia). A); kui korrektsioon toimub mõlemas torus (võrdselt tugev), siis on ilmselgelt tegemist XI või XII faktori puudulikkusega (vt tabel 14).

Koagulatsioonitestid, mis eristavad vere hüübimishäireid vastavalt sisemisele mehhanismile (normaalse protrombiini ja trombiini ajaga)
Puudulikud tegurid uuritud vereplasmas
	Adsorbeeritud plasma (ilma IX faktorita)	Vana seerum (ilma faktoritaVIII)	Adsorbeeritud plasma ja vana seerumi segu
VIII faktor
XI või XII tegurid

See test on väga tundlik, kuna uuring viiakse läbi 20 korda lahjendatud verega, mille trombotsüütide faktor 3 on kompenseeritud hemolüsaadiga. Ainus kasutatud reagent on hüpotooniline kaltsiumkloriidi lahus, mis teeb proovi avalikult kättesaadavaks.

Sama lihtne on II, V ja VII+, X faktorite vaeguse eristamiseks protrombiini testi alusel tehtavate korrektsiooniuuringute meetod (tabelis).

Koagulatsioonitestid, mis eristavad II, V ja V faktori puudulikkustII+,+X protrombiini testi põhjal (normaalse trombiini ajal)
Puudulikud tegurid uuritud vereplasmas	Testitavale plasmale lisatakse normaalsed verekomponendid
	Adsorbeeritud plasma (ilma II, VII, X faktoriteta)	Vana plasma (faktor V puudub)	Filtreeritud plasma (ilma teguritetaVII ja X)	Vana seerum (ilma teguritetaII ja V)
VII või X tegurid
Märge. (+) - koagulatsiooni normaliseerimine; (-) - koagulatsiooni normaliseerumise puudumine.

VII ja X faktorite vaeguse eristamiseks tehakse täiendav hüübimistest, lisades uuritavale vereplasmale rästikumadu mürgi lahust – ravimit. lebetox(valitakse mürki kontsentratsioon, mis tsefaliini ja kaltsiumkloriidi juuresolekul põhjustab hüübimist 20-25 s; kõiki koostisosi võetakse 0,1 ml ja segatakse) (tabel allpool).

Samal eesmärgil kasutatakse Indias elava Russelli rästiku mürgipreparaati (drug stepven).

Hüübimistestid, mis eristavad VII ja X faktori puudulikkust, kasutades rästikumürki (lebetox)
Puudulikud tegurid uuritud vereplasmas	Testid
	gyurza mürgiga + tsefaliin + kaltsiumkloriid	gyurza mürgiga + tsefaliin + kaltsiumkloriid + filtreeritud vereplasma (faktorite allikas V aVIII)	protrombiin
VII faktor
Märge. (+) - koagulatsiooni normaliseerimine; (-) - koagulatsiooni normaliseerumise puudumine.

Diferentsiaaldiagnostika lõpetatakse vajadusel defitsiitsete tegurite või nende spetsiifiliste immuuninhibiitorite kvantitatiivse määramisega, milleks kasutatakse spetsiaalseid ülitundlikke standardiseeritud meetodeid. Nendes meetodites kasutatakse normaalse vereplasma segaproovide lahjenduskõverate konstrueerimist, korrigeerides kõigi tegurite, välja arvatud uuritud, puudulikkust. Need kõverad määravad uuritava faktori aktiivsuse patsientide plasmas.

Eriti oluline on VIII ja IX faktorite kontsentratsiooni kvantitatiivne määramine, samuti nende inhibiitorite olemasolu A- ja B-hemofiiliaga patsientidel (eriti enne kirurgilisi sekkumisi ja nende ajal ning intensiivse asendusravi ajal), samuti hilinenud verejooksu korral. sünnitusjärgne verejooks, kui on vaja eristada DIC-sündroomi ja haruldast patoloogiat - VIII faktori immuuninhibiitori ilmnemist (isegi palju harvemini - V faktorit).

Raske XIII faktori puudulikkuse korral(väga harv pärilik häire) kõik hüübimistestid on normaalsed, kuid trombid lahustuvad 5M või 7M uureas.

Samuti aitab see eristada erinevate hüübimisfaktorite puudulikkust, võttes arvesse analüüsinäitude normaliseerumise astet ja eriti ajastust pärast verepreparaatide intravenoosset manustamist patsientidele, s.t. parandusarvestusin vivoL. 3. Barkagani meetodi järgi.

See tehnika on eriti tõhus, kui ringluses olevate diferentseeruvate tegurite eluiga on väga erinev. Seega varieerub protrombiini kompleksfaktorite poolväärtusaeg mitmest tunnist (faktor VII) kuni mitme päevani (faktor II). Vahepealse positsiooni nende vahel hõivavad tegurid X (2-2,5 päeva) ja V (12-18 tundi).

Seetõttu suureneb protrombiini indeks pärast ulatuslikku plasma jugaülekannet VII faktori puudulikkuse korral väga lühiajaliselt, V faktori vaeguse korral mõnevõrra kauem (umbes 4-6 korda) ja pikemaks perioodiks (üle 1-2 päeva). Sellega seoses on indikatiivne mõju ravimi PPSB (VII, IX, X ja II faktorite kontsentratsioon) protrombiiniindeksile. Samuti normaliseerib see lühiajaliselt protrombiiniaega VII faktori puudulikkuse korral ja pikemaks (mitu kordi!) faktori X ja II puudulikkuse korral. Kuna faktor V selles preparaadis puudub, ei paranda see seda puudust.

Sarnane erinevus tuvastatakse sisemise hüübimismehhanismi faktorite (XII, XI, IX ja VIII) vereülekande ja asendusravi ajal, mis registreeritakse aktiveeritud osalise tromboplastiini testiga.

Eriti huvipakkuv on VIII faktori taseme korrigeerimise ja APTT näidustuste dünaamika hemofiilia A ja von Willebrandi tõve transfusioonravis. Esimesel neist haigustest tuvastatakse pärast antihemofiilse plasma ülekannet (boolusena, kiirelt!) või krüosademe manustamist kohene maksimaalne hüübimisvõime paranemine ja seejärel selle üsna kiire (10-18 tunni jooksul) pidev vähenemine. von Willebrandi tõve korral suureneb hüübimisaktiivsus mõne tunni jooksul pärast vereülekannet ja seejärel on selle langus palju aeglasem kui vereülekande korral. Sellega seoses kasutatakse asendusülekandeid von Willebrandi tõve ravis harvemini kui hemofiilia A puhul.

Hüübimisfaktorite ning kallikreiin-kiniini ja fibrinolüütiliste süsteemide komponentide funktsionaalse aktiivsuse uurimine kromogeensete substraatide abil

Meetodid põhinevad vere hüübimises, fibrinolüüsis ja kiniinide moodustumisel osalevate proteolüütiliste ensüümide ja nende inhibiitorite aktiivsuse uurimisel vastavalt nende ensüümide suhtes spetsiifiliselt tundlike peptiidide lõhustumise intensiivsusele ja kiirusele, mille lagunemisel vabaneb värvaine (β-nitroaniliin).

Reageeriva segu värvuse aste see määratakse spektrofotomeetriliselt ning vastavate ensüümide (hüübimisfaktorid, kallikreiin, plasmiin jne) aktiivsust hinnatakse selle intensiivsuse järgi, ensüümi inhibiitorite aktiivsust aga protsessi pärssimise järgi.

Näiteks hepariini ja antitrombiin III toimet saab hinnata kromogeensete substraatide lõhustamise nõrgenemise järgi faktori Xa või trombiini toimel ja α2-antiplasmiini aktiivsust plasmiini toime nõrgenemise järgi vastavale kromogeensele substraadile. . Kromogeensed substraadid neil on kas numbriline tähis (näiteks s-2222) või neid nimetatakse kromosiinideks koos lühendatud eesliitega, mis näitab ensüümi, mille suhtes see substraat on tundlik (näiteks Chromozym PL - plasmiini substraat, Chromozym TH - trombiini substraat, Chromozym PK - prekallikreiin / kallikreiini substraat jne).

Kromogeensed substraadid laiendavad hemostaasisüsteemi uurimise võimalusi, kuid pole paljude laborite jaoks veel piisavalt kättesaadavad. Mõnedel nende abiga läbiviidud uuringutel ei ole tavapäraste hüübimistestide ees eeliseid ja need annavad nendega kokkulangevaid tulemusi; muudel juhtudel lihtsustab ja kiirendab nende kasutamine uuringut, muudab selle täpsemaks; kolmandaks on need tehnikad sõltumatu tähtsusega ja neid ei saa asendada hüübimistestidega (näiteks prekallikreiini määramine).

Hemostaasisüsteemi komponentide immunoloogiline määramine

Hemostaasisüsteemi komponentide immunoloogiline määramine toimub järgmiste meetoditega:

• Immunosadestamine;
• Immunoelektroforees;
• Radioimmunoanalüüs ja muud sobivate antiseerumite abil

Sel juhul hinnatakse ühe või teise hüübimisfaktori (või selle fragmentide) antigeeni sisaldust vereplasmas, mitte funktsionaalset aktiivsust, mida saab järsult vähendada antigeeni normaalse sisalduse korral plasmas. See olukord on tüüpiline kõigile neile juhtudele, kui kehas sünteesitakse ebanormaalseid (funktsionaalselt defektseid) tegureid, mis säilitavad oma antigeensuse, kuid millel puudub võime hemostaasis osaleda.

See võimaldab eristada vastavate tegurite sünteesi täielikku lakkamist ja nende ebanormaalsete vormide teket.

Samal ajal saab hemostaasisüsteemi mitmeid komponente määrata ainult immunoloogiliselt.

Sellesse rühma kuuluvad sellised olulised uuringud nagu järgmiste komponentide määratlus:

• β-tromboglobuliin;
• α2-makroglobuliin;
• valgud C ja S;
• faktor VIII:C ja VIII:R cof antigeenid;
• fibrinolüüsi tooted (PDF);
• trombiin-antitrombiin III ja plasmiin-antiplasmiini komplekside neoantigeenid;
• mitmeid teisi teste.

Seetõttu täiendab immunoloogiline uuring märkimisväärselt hemostaasisüsteemi erinevate osade funktsionaalset hindamist.

Diagnostilised testid, mis põhinevad maomürgi preparaatide kasutamisel reagentidena

Ammu on kindlaks tehtud, et paljude madude mürgid sisaldavad väga aktiivseid proteolüütilisi ensüüme, mis põhjustavad vere hüübimist ja mõjutavad hüübimiskaskaadi erinevaid osi. Seetõttu kasutatakse maomürke ja nendest eraldatud koagulaase laialdaselt hemostaasihäirete tuvastamiseks, hüübimisfaktorite kvantifitseerimiseks, lahustuvate fibriin-monomeeri komplekside (SFMC) tuvastamiseks ja kvantifitseerimiseks ning paljudes teistes uuringutes.

Madomürkidega proovid muudavad sageli hemostaasihäirete diagnoosimise palju lihtsamaks ja tõhusamaks.

Tabelis on toodud andmed mürkide toimemehhanismi kohta vere hüübimissüsteemile ja igaühe diagnostilise kasutamise võimaluste kohta.

Madomürkide hemokoagulatiivsed omadused ja nende kasutamine diagnostikapraktikas
Madude nimi * ja nende mürkidest pärit ravimid	Toimemehhanism hüübimissüsteemile	Erinevused looduslike hüübimisfaktorite omadustest	Diagnostiliste rakenduste võimalused
Gyurza Vipera lebetina); lebetox (Russelli rästik; stipven)	Faktori X aktivaator (kaltsiumi, faktori V ja fosfolipiidi juuresolekul**)	Erinevalt kudede tromboplastiinist ei sisalda see fosfolipiidi ega kompenseeri selle puudust. Ei vaja hüübimiseks VII faktorit	Faktori ja trombotsüütide määramine ning selle vabanemine agregatsiooni käigus; VII ja X faktori puudulikkuse piiritlemine; teguri X kvantifitseerimine
Efa mitmekihiline (Echis multisgumatos) ja liivane efa (Echis carinatus); ecarin, echitox	II faktori aktivaator, moodustab ebatüüpilise trombiini-Em	Erinevalt α-trombiinist ei blokeeri trombiin-Em hepariin ja antitrombiin III, ei aktiveeri XIII faktorit (hüübed lüüsitakse uureas), koaguleerib kogu fibrinogeeni kogumit ja kõiki lahustuvaid fibriini-monomeeri komplekse.	Hüperkoagulatsiooni, sealhulgas latentse, tuvastamine hepariini ravis; üldfibrinogeeni ja RFMK kvantitatiivne määramine trombineemia ja DIC diagnoosimiseks
Harilik koon (Aghistrodon halus halus), samuti paljud troopilise Ameerika ja Aasia lõgismadud; ancistron-H1, reptilaas, botropklotaas, krotalaas, ancrod jne.	Koaguleerib fibrinogeeni, eraldades ainult peptiidid A ja moodustades mittetäielikud fibriini monomeerid (des-A-fibriin)	Ei lõhusta B peptiide, ei aktiveeri XIII faktorit ja trombotsüüte, ei põhjusta trombide tagasitõmbumist, ei blokeeri hepariini poolt, lüüsib kiiresti trombe	Düsfibrinogeneemia äratundmine; hepariini rolli hindamine koagulatsiooni viimase etapi rikkumises (võrreldes trombiini ajaga)
* Kõik need maod elavad Kesk-Aasias (sulgudes on märgitud teised sarnase toimemehhanismiga liigid ja nendest valmistatud preparaadid; Russelli rästik elab Indias, Daboya rästik Austraalias.
** Tsefaliini ja trombotsüütide faktori 3 analoog.

Neid võimalusi suurendab veelgi mitme mürgi samaaegne kasutamine ja kõige lihtsamad üldised hüübimistestid. Näiteks rästiku ja efa mürgiga koagulatsiooniproovide samaaegne kasutamine muudab VII, X-V ja II faktorite defitsiidi eristamise lihtsaks (allolevas tabelis) ning täiendava korrektsiooniga filtreeritud normaalse plasmaga (faktorite V allikas). ja II) - faktorite X ja v defitsiit.

Koagulatsioonitestid, kasutades erinevaid mürke, eristades protrombiini kompleksfaktorite puudulikkust
Puudulikud tegurid uuritud vereplasmas	Testid
	gyurza mürgiga + tsefaliin	mürgiga efa	protrombiin
Märge. (+) - koagulatsiooni normaliseerimine; (-)-koagulatsiooni normaliseerumise puudumine.

Peamiste füsioloogiliste antikoagulantide määramine

Kõige olulisem on peamise füsioloogilise antikoagulandi - antitrombiin III aktiivsuse määramine, mille langus võib olla geneetiliselt määratud (primaarne trombofiilia) või sekundaarne intensiivse tarbimise (DIC, massiivne tromboos) või kiirenenud ainevahetuse (ravi hepariiniga, L-asparaginaas, sünteetilised rasestumisvastased vahendid ) ja immuunkomplekside, paraproteiinide, fibronektiini, ägeda faasi valgud blokeerivad.

Igal juhul säilitab antitrombiin III aktiivsuse langus alla 60–65% intravaskulaarse koagulatsiooni, muutes hepariini antikoagulandi toime vähem väljendunud. Kuid väga sageli puudub regulaarne vastavus antitrombiin III taseme ja hepariini tundlikkuse vähenemise vahel.

Sel juhul domineerib tavaliselt hepariini antikoagulandi toime nõrgenemine antitrombiin III aktiivsuse vähenemise astme suhtes. On tõestatud, et antitrombiin III puudulikkuse erinevate vormide korral võib selle afiinsus hepariini suhtes erineda. Lisaks on hepariini erinevatel fraktsioonidel, mille suhe ravimites on väga erinev, erinev afiinsus antitrombiin III suhtes. Seetõttu on praktiliselt oluline uurida nii antitrombiin III tegelikku aktiivsust kui ka selle võimet muutuda hepariini toimel kiiretoimeliseks antikoagulandiks.

Antitrombiin III antikoagulantne toime

Antitrombiin III antikoagulantne toime määrab uuritud vereplasma võime ( lahutatud- Copley-Wintersteini meetod või defibrineeritud kuumdenatureerimine temperatuuril 56 ° C - Loligeri, Abildgaardi jt meetodid) inaktiveerivad väljastpoolt sisestatud trombiini teatud aja jooksul. Trombiini jääkaktiivsust sellises plasmas saab määrata selle hüübimisaktiivsuse järgi (fibrinogeenil, baariumsulfaadiga adsorbeeritud plasmal) või trombiini või faktori Xa suhtes tundliku kromogeense substraadi lagunemise järgi (kuna antitrombiin III inaktiveerib ka selle faktori).

Hepariini kofaktori aktiivsus

Vereplasmas sisalduva antitrombiini III hepariini-kofaktori aktiivsus pikk periood määrati plasma hepariini taluvuse testiga, mida võib pidada soovituslikuks, kuna see annab väga laia normaalväärtuste vahemikku ega ole piisavalt reprodutseeritav.

Oluliselt täpsemad ja reprodutseeritavamad on testid, mis uurivad hepariini erinevate kontsentratsioonide mõju väikest kogust vereliistakuid sisaldava uuritava plasma trombiiniajale. Võrreldakse trombiiniaja pikenemist normaalses kontrollvereplasmas, millele on lisatud samu hepariini proove.

Niisiis lisatakse trombiini-hepariini testis uuritavale vereplasmale sellised kogused hepariini, mis kontrollis pikendavad trombiiniaega 15-lt 32-35 s-ni (madal kontsentratsioon) ja kuni 95-110 s-ni. (kõrge hepariini kontsentratsioon). Nende andmete põhjal arvutatakse plasma antitrombiini aktiivsuse (AAP) ja plasma antikoagulandi reservi (ARP) indeksid.

Sarnaseid meetodeid kasutatakse laialdaselt ka trombiini inaktivatsiooni astme hindamiseks nii koagulatsioonitestides kui ka kromogeensetel substraatidel.

Antitrombiin III antigeeni immunoloogiline määramine

Antitrombiin III antigeeni immunoloogiline määramine võimaldab eristada erinevaid trombofiilia tüüpe:

• antitrombiin III ebapiisava sünteesiga (antigeense markeri taset vähendatakse piisavalt aktiivsuse vähenemiseni);
• selle ebanormaalsete ja funktsionaalselt defektsete vormide säilinud sünteesiga (antigeense markeri tase on palju kõrgem kui aktiivsus).

Valgud C ja S, trombomoduliin ja α 2 -makroglobuliin määratakse immunoensümaatiliste meetoditega.

Peatükk 3. Kliinilised ja laboratoorsed algoritmid hemostaasisüsteemi hindamiseks organismis

Viimane, neljas faas koosneb spontaansest fibrinolüüsist.

Fibrinolüüs on protsess, mis viib trombi lahustumiseni . Selle kestus 48-72 h) Fibrinolüüsi süsteemi esindab verevalgu plasminogeen, mis pärast aktiveerimist muutub aktiivseks plasmiiniks, millel on proteinaasidele iseloomulikud ensümaatilised omadused. See hõlmab ka fibrinolüüsi aktivaatoreid ja inhibiitoreid.

Fibrinolüüsi tulemusena tekivad fibriini lagunemissaadused (FDP) ja suurenevad plasmas, sealhulgas D-dimeerid. Ja

nende suurenemine trombolüütilise ravi ajal näitab sageli ravi efektiivsust.

Antikoagulantide süsteem

Moodustamisel antikoagulantide süsteem samuti prokoagulandi lülis osalevad plasma, trombotsüütide ja kudede valgufaktorid. Antikoagulandi veresüsteemi koguaktiivsus koosneb aktiivsusest õiged antikoagulandid Ja fibrinolüüsi süsteemi aktiivsus. Fibrinolüütilise süsteemi funktsioon taandub vereringes juba moodustunud fibriini trombide lahustamisele, see tähendab, et need kaks antikoagulandi veresüsteemi lüli täiendavad üksteist.

Antitrombiin III (AT III) on peaaegu kõigi ensümaatiliste hüübimisfaktorite universaalne inhibiitor, mis moodustab enam kui 75% kogu plasma antikoagulandi aktiivsusest ja on hepariini peamine kofaktor.

Hepariin inhibeerib väikestes annustes Xa, IXa, VIII faktoreid. Hepariini suured annused pärsivad vere hüübimise kõiki faase.

2-makroglobuliin inhibeerib trombiini, kallikreiini, plasmiini, trüpsiini. 2-antitrüpsiin inhibeerib faktoreid XIa, IIa ja plasmiini

K-vitamiini roll

Hemostaasi prokoagulandi lüli funktsionaalseid komponente kirjeldades tuleks peatuda K-vitamiini osalemisel üksikute plasma hüübimisfaktorite aktiveerimisel.

K-vitamiin (kinoon) viitab rasvlahustuvatele vitamiinidele, satub organismi koos toiduga ning seda sünteesib ka soolestiku mikrofloora. Seetõttu esineb avitaminoosi K harva, tavaliselt siis, kui soolestikus on halvenenud rasvade imendumine.

Hemostaasisüsteemi tegureid, mille täielikuks toimimiseks on vaja K-vitamiini, nimetatakse K-vitamiinist sõltuvateks teguriteks. Nende hulka kuuluvad: faktor II (protrombiin), faktor VII, IX, X ja kaks antikoagulanti - valk C ja valk S. Pärast sünteesi hepatotsüütides vajavad nad mõningast muutmist. K-vitamiini puudumisel on see protsess blokeeritud, mis viib funktsionaalselt sünteesini defektsed tegurid koagulatsioon, mis ei suuda suhelda Ca2+ ioonide, fosfolipiidide pindadega ja moodustada vere hüübimiseks vajalikke aktiivseid komplekse.

Selliseid tegureid nimetatakse "valkudeks, mis ilmnevad K-vitamiini puudumisel" ja need on lühendatud selle nimetuse ingliskeelsest vastest "PIVKA" (Probleminduced by vitamin K bez).

Vaatamata asjaolule, et avitaminoos K ise on haruldane, tuleb kliinilises praktikas selle nähtusega tegeleda K-vitamiini funktsionaalne intratsellulaarne defitsiit.

See tekib kumariini rühma suukaudsete antikoagulantide võtmise ajal ( dikumarool, kumadiin, sintrom, markumar, varfariin), mis on tingitud ensüümide pärssimisest, mis on teadaolevalt seotud K-vitamiini ladestumisega ja kudedes vabanemisega.

Neid antikoagulante saavate patsientide veres moodustub palju PIVKA-sid, mis lülituvad vere hüübimisprotsessist välja ja selle tulemusena tekib hüpokoaguleeriv seisund.

Hemostaasisüsteemi seisundi uurimise tunnused

Vere hüübimissüsteemi funktsioonide hindamiseks kasutatakse erinevaid teste, vere hüübimisaega, verejooksu kestust, aga ka mitmeid hüübimisfaase iseloomustavaid näitajaid.

Täisvere hüübimisaeg vastavalt Lee-White'ile
Vere kokkupuude kahjustatud veresoone seina või võõrpinnaga, verevoolu aeglustumine ja peatamine (staas) põhjustab hemostaasi lülide järjestikust aktiveerumist: trombotsüütide adhesiooni ja agregatsiooni, plasmavalgufaktorite kaskaadaktiveerumist, protrombinaasi teket, trombiini moodustumist. , ja seejärel fibriini tromb, mis isoleerib kahjustatud ala ja aitab kaasa regeneratiivsete protsesside kiirendamisele.

KATSE OMADUSED
Vere hüübimisaeg - värskelt võetud stabiliseerimata veeniverest klaastorus trombi moodustumise aeg.

EELANALÜÜTILISED OMADUSED
Patsiendi eriline ettevalmistus ei ole vajalik. Vigade vältimiseks veenivere võtmisel analüüsitulemustes on vaja vältida küünarvarre massaaži, kohe pärast vere ilmumist lõdvestada žgutt ja lasta selle esimesed kahjustatud kudede fragmente sisaldavad tilgad vatitampoonile / marli tampoonile.

UURIMISE MEETOD
Pärast alkoholiga töötlemist ja küünarnuki piirkonna kuivatamist sisestatakse kubitaalveeni kuiv lai nõel ilma süstlata.

Kuiva klaasist silikoonita katseklaasi tõmmatakse 1 ml verd, käivitades selle sisenemisel kohe stopperi. Uuring viiakse läbi temperatuuril 20-25 °C. 2 minutit pärast vere võtmist ja seejärel iga 30 sekundi järel kallutatakse toru ettevaatlikult 45–60 ° nurga all ja tehakse kindlaks, kas veri levib mööda seinu. Stopper peatatakse trombi moodustumise lõpus (toru kallutamisel ei voola veri üle).

VÕRDLUSPIIRID
Täisvere hüübimisaeg toatemperatuuril on 6-11 minutit. Segavate tegurite (temperatuur, toru ja nõela seinte seisund, toru kalde sagedus ja amplituud, vere maht ja selle võtmise protseduuri omadused) olulise mõju tõttu on hajumine. katsetulemustest, isegi kui tingimusi rangelt järgitakse, on üsna suur. Test on soovituslik, selle jaoks puuduvad kalibreerimis- ja kontrollmaterjalid.

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
Vere hüübimisaja pikenemine näitab hüpokoagulatsiooni nihkeid: sisemise hemostaasi raja fibrinogeeni ja plasmafaktorite väljendunud defitsiit, antikoagulantide toime, oluline hemodilutsioon, dissemineeritud intravaskulaarse koagulatsiooni hüpokoagulatiivne faas jne.

Vähenemine (vähem kui 4-6 minutit) on kliiniliselt väheinformatiivne; võib eeldada plasmafaktorite hüperaktiveerumist või vere reoloogiliste omaduste rikkumist, kuid sagedamini seostatakse vere hüübimisaja lühenemist verevõtu tehnika rikkumisega (traumaatiline protseduur) või trombotsütoosiga. Eristamiseks on vaja sõeluuringu (hindamise) hüübimiskatseid.

Hüübimisaeg aktiveeritud
Kaoliini toimet testi ajal peetakse sarnaseks kontaktpinna vereringes ilmnemisega - subendoteliaalne kollageen, südame tehisklapid, proteesid, kehaväliste ravimeetodite seadmed jne. trombiini ja fibriini trombi moodustumine.

EELANALÜÜTILISED OMADUSED
Verevõtmise peamine ülesanne on minimeerida kudede vigastusi, et mitte provotseerida koefaktori vabanemist.

Kapillaarvere võtmisel on soovitav kasutada tavalist ümmarguse nõelaga lansetti, mis vigastab punktsiooni ajal kudet minimaalselt. Tulemuste moonutamise vältimiseks ärge pigistage sõrmest verd.

UURIMISE MEETOD
Uuring viiakse läbi spetsiaalsetel täisvere koagulomeetritel ühekordselt kasutatavate kassettidega, mis sisaldavad standardkogus kontaktfaasi aktivaatorit - kaoliini. Mõned kassetid sisaldavad lisaks kaoliinile hepariini inaktivaatorit, mis välistab selle mõju testitulemustele. Veri kogutakse spetsiaalse pipeti või kapillaari abil seadme kolbampulli ja segatakse kiiresti; edasine määramisprotseduur kulgeb automaatselt. Trombi moodustumise hetk määratakse verega kokkupuutuvate elektroodide ja moodustunud trombi vahelise takistuse muutumisega (elektromeetriline määramine) või plastlipu pööramise raskus küvetis (mehaaniline koagulomeeter).

VÕRDLUSPIIRID
Enamikus seadmetes varieerub tulemus 80-120 s, olenevalt padrunite seeriast, nende hoidmise ja kasutamise tingimustest, kaoliini kogusest ja omadustest, vere kaoliiniga segamise intensiivsusest ja täielikkusest, salvesti tüübist, ja temperatuur. Seoses hüübimise kontaktaktiveerimise standardiseerimisega on tulemuste hajuvus vere hüübimisaja testiga võrreldes oluliselt väiksem.

Testi jaoks puuduvad kalibreerimis- ja kontrollmaterjalid (kontroll täisverd). Analüüsi kvaliteeti saab ligikaudselt hinnata mitme terve inimese venoosse või kapillaarvere uuringu tulemuste põhjal.

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
Vere hüübimisaja testi suurenemine näitab hüpokoagulatsiooni nihkeid - plasmafaktorite puudulikkust või inaktiveerumist, antikoagulantide tsirkulatsiooni, tõsist hemodilutsiooni, dissemineerunud intravaskulaarse koagulatsiooni hüpokoagulatsioonifaasi ja on võimalik ka trombotsütopeenia korral. Plasmafaktorite hüperaktiveerimisega võib täheldada testiga aktiveeritud vere hüübimisaja vähenemist, kuid see ei ole aluseks lõplikule järeldusele hüperkoagulatsiooni seisundi ja terapeutiliste meetmete võtmise kohta (vaja on rohkem uuringuid).

Põhimõtteliselt määratakse aktiveeritud vere hüübimisaeg, et kontrollida ja reguleerida patsiendi hepariniseerumise taset tehisorganite (kunstliku vereringe aparaat, tehisneer, maks, hemosorptsioon) operatsiooni ajal, protamiini neutraliseeriva annuse arvutamine. sulfaat ja hepariini neutraliseerimise täielikkuse hindamine. Meetodi eeliseks on võimalus uurida otse patsiendi voodi kõrval või operatsioonitoas (saaga punkt – diagnoos ravikohas), samuti hepariini suhtes resistentsete patsientide tuvastamise suhteline kiirus suuremate annuste kasutamisel. optimaalse toime saavutamiseks tuleb ravimit manustada.

Kaoliini aeg
KATSE OMADUSED
Trombotsüütidevaese tsitraadiplasma hüübimisaeg 37 °C juures määratakse pärast kontaktfaasi standardset aktiveerimist kaoliiniga (tseoliit) ja rekaltsifikatsiooni (varem tsitraadiga seotud Ca2+ ioonide füsioloogilise kontsentratsiooni taastamine vereproovi võtmisel). Pärast tsentrifuugimist plasmasse jäänud patsiendi trombotsüüdid ja fosfolipiidmembraanide fragmendid toimivad maatriksina koagulatsiooniensüümide komplekside koostamiseks, kuid neist ei piisa hüübimisreaktsioonide täielikuks kulgemiseks. Seetõttu on test lisaks hüübimisfaktoritele tundlik fosfolipiidide moodustiste arvu ja nende omaduste suhtes plasmas, samuti antifosfolipiidsete antikehade olemasolu suhtes.

EELANALÜÜTILISED OMADUSED
Järgige hemostaasi uurimiseks venoosse vere võtmise üldtingimusi; kandke žgutti mitte rohkem kui 1 minutiks, kasutage piisava läbimõõduga ühekordseid teravaid nõelu, lõdvestage žgutt pärast vere ilmumist nõelast ja laske esimesed tilgad vatitikule. Veri võetakse katseklaasi 3,2% naatriumtsitraadi lahusega vahekorras 9:1 ja segatakse kohe. Eelistatavamad on tsitraati sisaldavad vaakumverevõtusüsteemid; nende sisu segatakse neli korda keerates. Tsitraadiverega torusid tsentrifuugitakse 1500-2000 g juures 15 minutit ja võetakse ettevaatlikult supernatant – trombotsüütide vaene plasma. Parem on hoida trombotsüütide vaest plasmat enne testimist plastikust katseklaasides ja segada vahetult enne analüüsi.

UURIMISE MEETOD
Trombotsüütide vaesele plasmale lisatakse kaoliini suspensioon, kuumutatakse 37 ° C juures, lisatakse kaltsiumkloriidi lahust ja käivitatakse stopper (või alustatakse mõõtmist koagulomeetril). Määrake fibriini trombi moodustumise aeg koagulomeetril (eelistatavalt) või kallutage katseklaasi perioodiliselt veevannis. Soovitatav on keskmistada sama plasma kahe määramise väärtused.

VÕRDLUSPIIRID
Tulemus kõigub 65-90 s piires.

HÄIRED
Testi tulemusi mõjutavad tugevalt vere tsentrifuugimise tingimused (neist oleneb trombotsüütide jääkarv), samuti lisatud kaoliini kogus ja omadused.

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
Kaoliini aja väärtused üle 90 s võivad viidata hüpokoagulatsioonile – plasmafaktorite puudulikkusele (XII, XI, IX, VIII, X, V, II, fibrinogeen), dissemineerunud intravaskulaarse koagulatsiooni hüpokoagulatsioonifaasile, raskele hemodilutsioonile, antikoagulantide (hepariini, jne) või plasmafaktorite ja fosfolipiidvastaste antikehade inhibiitorite olemasolu. Kaoliini aeg alla 65 s on sageli seotud tsentrifuugimise tingimuste rikkumisega või sette segamisega supernatandi valimisel. Lisaks on sarnased nihked võimalikud plasmafaktorite hüperaktivatsiooniga (dissemineeritud intravaskulaarse vere hüübimise hüperkoagulatsioonifaasis), looduslike antikoagulantide puudumisega jne.

UURITULEMUSTE KLIINILINE RAKENDAMINE
Trombotsüütide vaese plasmaga tehtud kaoliini aja test säilitas oma väärtuse ainult luupuse antikoagulandi määramisel; muudel juhtudel on soovitav teha informatiivsem aktiveeritud osalise tromboplastiini aja test, mis annab tulemustes vähem kõikumisi.

Aktiveeritud osaline (osaline) tromboplastiini aeg
KATSE OMADUSED
Trombotsüütide vaese tsitraadiplasma hüübimisaeg määratakse füsioloogilisel temperatuuril (37 °C), kontaktfaasi standardse aktiveerimise tingimustes, fosfolipiidide juuresolekul ja Ca2 ioonide lisamisega. Aju fosfolipiidid, erütrotsüüdid või sojaoa asendavad trombotsüütide fosfolipiidide maatriksit hüübimisensüümide komplekside (kaoliin või ellagic) koostamiseks
hape. Trombotsüütide puudumise tõttu plasmas ja nende asendaja - osalise tromboplastiini - lisamise tõttu ei mõjuta trombotsüütide faktorid praktiliselt testi tulemusi. Aktiveeritud osalist tromboplastiini aega on võimalik määrata spetsiaalsete kassettidega kaasaskantavatel koagulomeetritel. Mõnikord nimetatakse testi aktiveeritud osaliseks tromboplastiini ajaks, mis on analoogne aktiveeritud osalise tromboplastiini ajaga.

EELANALÜÜTILISED OMADUSED
Järgige veenivere võtmise üldtingimusi hemostaasi (tsitraadi lisamisega) uurimiseks ja trombotsüütide vaese plasma saamiseks. Aktiveeritud osalise tromboplastiini aja parameetrid on toatemperatuuril stabiilsed kuni 4 tundi; hepariini ravis tuleb uuring läbi viia 1 tunni jooksul pärast materjali võtmist. Külmutatud trombotsüütide vaest plasmat on võimalik säilitada kuni 10-20 päeva, kuid lubatud on ainult üks sulatamine.

VÕRDLUSPIIRID
Make up 20-45 s. Aktiveeritud osalise tromboplastiini aja testi tulemused sõltuvad vere/tsitraadi suhte täpsusest, fosfolipiidkomponendi ja kaoliini (või ellaghappe) tüübist ja omadustest, temperatuurist, samuti tulemuste registreerimismeetodist, tüübist ja seadme tundlikkus, reaktiivide tüüp ja aktiivsus ning seadme tüüp. Igal laboril on soovitatav määrata oma kohalikud normi väärtused.

Segavate tegurite mõju vähendamiseks on võimalik tulemust hinnata aktiveeritud osalise tromboplastiini aja indeksi kujul, mille normaalväärtuste vahemik on 0,8-1,2:

APTT indeks = patsiendi APTT / kontroll-normaalse plasma APTT.

Võimalikud kontrollplasma valikud aktiveeritud osalise tromboplastiini aja indeksi arvutamiseks:
Segu plasmast vähemalt 10 tervelt inimeselt, mis on saadud samadel tingimustel kui patsiendi plasma (see on väikeste laborite puhul problemaatiline). Lisaks pole tavaliselt kindlust, et need inimesed on terved.
Lüofiliseeritud standardne ühendplasma (RNP-plasma), mida tuleks lahjendada 30 minutit enne uuringut. Parem on, kui plasmat on seda tüüpi seadmetel eelnevalt testitud ja seadme tootja soovitab seda võrdluseks.
Parim võimalus on teatud tüüpi instrumentide ümberkalibreerimine teatud tüüpi laboris kasutatavate reaktiivide ja plasmade jaoks (seda teevad suuremad laboriseadmete tootjad). Sel juhul saab sertifitseeritud normaalse kontrollplasma mõõtmise tulemust kasutada aktiveeritud osalise tromboplastiini ajaindeksi arvutamiseks.

KVALITEEDI TAGAMINE JA KONTROLL
Aktiveeritud osalise tromboplastiini aja testi jaoks ei ole standardset WHO kontrollmaterjali, kuna määramisel kasutatakse erinevaid reaktiive ja erineva tundlikkusega seadmeid. Koagulatsiooniuuringutes on soovitav järgida seadmete tootja soovitusi kontrollmaterjalide valikul. Kvaliteedikontrolliks kasutatakse sageli värskelt lahjendatud võrdlusnormaalset ühendatud plasmat, säilivusaeg on 2-4 tundi pärast lüofiliseeritud ravimi lahjendamist) koos aktiveeritud osalise tromboplastiini aja sertifitseeritud väärtusega. Konvergentsi ja reprodutseeritavuse hindamiseks või sekundaarse standardina võib kasutada mitme terve inimese vereliistakute vaest plasmat (kehtib 4–6 tunni jooksul pärast kättesaamist). Tulemuste hajumine ühe plasmaproovi uurimisel ja sama seeria reaktiivide kasutamisel ei tohiks ületada 10%.

Trombide või hemolüüsi jälgedega plasmat ei tohiks uurida, sest hemostaasi aktiveerumise tõttu võib sellise testi aktiveeritud osaline tromboplastiini aeg väheneda. Hepariini juuresolekul uuritud plasmas võib aktiveeritud osalise tromboplastiini aega oluliselt pikendada - kuni 300 s või rohkem, kuni täieliku hüübimise puudumiseni. Antikoagulant võib proovi sattuda kateetrist vere saamisel (mis on väga ebasoovitav) või hepariini süsteemsel kasutamisel. Juhul, kui hepariini sattumist proovi pole võimalik vältida, antikoagulandi toimet välistada, kasutatakse hepariini inaktivaatoriga APTT reaktiivi või plasmat eeltöödeldakse hepariini sorbendiga ja tsentrifuugitakse, kurnatakse. see settest.

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
Aktiveeritud osalise tromboplastiini aja pikenemine võib viidata:
sisemise hemostaasi raja tegurite (XII, XI, IX, VIII, X, V, II, fibrinogeen) koguse / aktiivsuse kaasasündinud või omandatud vähenemise kohta, harvemini - von Willebrandi faktor. IX, X ja II faktorite vähendamine on võimalik eelkõige kaudsete antikoagulantide ravis;
tsitraadi liia kohta proovis - absoluutne (liiga palju lisatud tsitraati) või suhteline (katseklaasi mittetäielik täitmine standardse koguse tsitraadiga verega);
hepariini (patsiendile manustamisel või kateetrist allaneelamisel) või hirudiini esinemise kohta proovis;
mõne infusiooniravimi (dekstraanide) esinemise kohta proovis;
fibriini/fibrinogeeni lagunemissaaduste, plasmafaktorite patoloogiliste inhibiitorite või luupuse tüüpi antikoagulantide esinemise kohta proovis.

Aktiveeritud osalise tromboplastiini aja vähenemine ei oma kliinilist tähtsust, kuna see on sageli seotud vigadega vereproovide võtmisel ja töötlemisel. Hüperkoaguleeruvate seisundite diagnoosimine peaks põhinema hemostaasi aktiveerimise markerite määramisel ja konkreetse kliinilise olukorra hindamisel.

UURITULEMUSTE KLIINILINE RAKENDAMINE
Aktiveeritud osalise tromboplastiini aja test on üks põhilisi plasma hüübimisomaduste uurimise meetodeid, mis paljastavad nihked koagulatsiooni aktivatsiooni sisemises rajas (aktiveeritud osalise tromboplastiini aja pikenemine on kliinilise tähtsusega). Aktiveeritud osalise tromboplastiini aja määramine toimub hüpokoagulatsiooni nihke esmaseks tuvastamiseks, hemofiilia diagnoosimiseks ja verehüübimishäiretega patsientide seisundi jälgimiseks, dissemineerunud intravaskulaarse koagulatsiooniga, hepariinravi kontrollimiseks ja patoloogiliste inhibiitorite tuvastamiseks. Antifosfolipiidide sündroomi diagnoosimisel kasutatakse luupuse antikoagulandi määramiseks vähendatud fosfolipiidide sisaldusega nn luupussensitiivset APTT reaktiivi.

Korrigeerivad proovid vastavalt aktiveeritud osalise tromboplastiini aja testile
KATSE OMADUSED
Määrake uuritud plasma ja normaalse doonorplasma või üksikute hüübimisfaktorite puudulikkusega plasma segu aktiveeritud osaline tromboplastiini aeg. Testid võimaldavad eristada aktiveeritud osalise tromboplastiini aja pikenemise põhjust - hüübimisfaktorite puudulikkust / düsfunktsiooni (koos konkreetse puuduva faktori määratlusega) või hüübimisinhibiitorite olemasolu.

UURIMISE MEETOD
Enne testide tegemist on vaja määrata uuritava plasma aktiveeritud osaline tromboplastiini aeg; parandus tehakse ainult siis, kui see on pikendatud. Eraldi osa uuritavast plasmast segatakse mahusuhtes 1:1 värske normaalse ühendatud doonori plasma või värskelt lahjendatud RNP plasmaga (või teatud tegurite tõttu puuduliku plasmaga) ja korratakse aktiveeritud osalise tromboplastiini aja määramist.

HÄIRED
Proovitulemusi võib mõjutada otseste antikoagulantide (hepariin ja hirudiin) olemasolu uuritavates proovides.

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
Hüübimisinhibiitorite (luupuse antikoagulant, VIII ja IX faktorite inhibiitorid) juuresolekul uuritavas proovis ei too normaalse plasma lisamine kaasa aktiveeritud osalise tromboplastiini aja normaliseerumist. Kui uuritud plasmas on faktoreid vähe, viiakse puuduvad ained osana tavalisest plasmalisandist, mille järel muutub pikendatud aktiveeritud osaline tromboplastiini aeg normaalseks. Lisades substraadi plasma, millel on üksikute tegurite puudus, saab määrata konkreetse puuduva faktori; selle konkreetse teguri defitsiidiga plasma lisamisega ei normaliseeru aktiveeritud osaline tromboplastiini aeg, samas kui muude tegurite puudusega plasma põhjustab parameetri normaliseerumist.

UURITULEMUSTE KLIINILINE RAKENDAMINE
Korrigeerivate proovide abil vastavalt aktiveeritud osalise tromboplastiini aja testile tuvastatakse sisemise hemostaasi raja tegurite puudulikkus ja / või nende inhibiitorite olemasolu (kaasasündinud ja inhibeeriva hemofiilia diagnoos, antifosfolipiidide sündroom).

protrombiini aeg
KATSE OMADUSED
Protrombiiniaja uurimine on vere hüübimissüsteemi hindamise kõige olulisem sõeluuring. Fibriini trombi moodustumise aeg trombotsüütide vaeses tsitraadiplasmas määratakse siis, kui välise hemostaasi rada aktiveeritakse koefaktorit ja fosfolipiide sisaldava koe tromboplastiiniga Ca2+ ioonide juuresolekul temperatuuril 37 °C. Tromboplastiini allikaks võivad olla erütrotsüüdid, ajukude või muud koed; võib kasutada ka rekombinantset tromboplastiini. Täisvere protrombiiniaega on võimalik määrata spetsiaalsete kassettidega kaasaskantavatel koagulomeetritel.

EELANALÜÜTILISED OMADUSED
Järgige hemostaasi uurimiseks venoosse vere võtmise üldtingimusi. Optimaalne on venoosse vere uurimine. Kapillaarveri on protrombiiniaja määramiseks vähem sobiv, kuna see sisaldab ettearvamatus koguses koefaktorit, mis satub sinna sõrme torkimisel, mis tekitab teatud probleeme (eriti pediaatrias). Kapillaarverd on mõttekas uurida spetsiaalsete kaasaskantavate koagulomeetrite juuresolekul, milles trombide moodustumise aega väljendatakse veenivere ekvivalendis ja kasutatakse kassette koos reaktiividega, mis minimeerivad "oma" koefaktori mõju. Vahetult enne analüüsi võetakse veri sõrmest, vältides survet pehmetele kudedele; esimene tilk eemaldatakse vatitikuga. Võetud veri segatakse 3,8% naatriumtsitraadi lahusega vahekorras 9:1, võtmiseks mõeldud kapillaar pestakse eelnevalt sama tsitraadilahusega.

Protrombiiniaja testi tulemused püsivad stabiilsena kuni 24-48 tundi, kui tsitraadiga venoosset verd hoitakse toatemperatuuril suletud primaarsetes vaakumtorudes. Avatud katseklaasidega töötamisel on vajalik plasma eraldamine rakkudest 60 minuti jooksul ja protrombiiniaja määramine 2-4 tunni jooksul pärast vere võtmist. Saadud plasmat hoitakse kuni uuringuni toatemperatuuril; jahutamine temperatuurini 4 °C kauem kui 24 tundi võib põhjustada VII faktori külma aktiveerumist ja protrombiiniaja lühenemist.

UURIMISE MEETOD
Testitav plasma kuumutatakse temperatuurini 37 °C, lisatakse tromboplastiini reaktiiv kaltsiumkloriidiga ja määratakse fibriintrombi moodustumise aeg (koagulomeetril või käsitsi). Kapillaarvere protrombiiniaja määramisel kasutatakse sama põhimõtet, kuid kasutatakse erineva toimeaine kontsentratsiooniga reagente ja mõõtmine toimub käsitsi või mehaanilise registreerimispõhimõttega koagulomeetril (eelistatavalt paralleelproovides keskmise tulemuse arvutamine).

PROTROMBIAJA TESTI TULEMUSTE HINDAMISE MEETODID Plasma protrombiini aktiivsus vastavalt Quickile
Katse põhineb arvutustel vastavalt kalibreerimiskõverale, mis peegeldab protrombiinikompleksi aktiivsuse (st protrombiiniaja väärtuse) sõltuvust normaalse plasma lahjendusastmest, väljendatuna protsentides. Kalibreerimisgraafiku koostamiseks määrake lahjendamata värske normaalse ühendatud plasma (100%) ja selle 50, 25 ja 12,5% lahjenduste protrombiiniaeg. Mõned teadlased peavad fibrinogeenisisalduse vähenemise tõttu 12,5% lahjendamist sobimatuks. Tulemused kantakse ruudustikule ja ühendatakse joonega.

Patsiendi plasma testimisel mõõdetakse protrombiini aja väärtus ja määratakse protrombiini protsent Quicki järgi kalibreerimiskõvera abil, mis kajastab protrombiinikompleksi tegurite aktiivsust protsentides tervete inimeste plasmast. Kaasaegsed koagulomeetrid arvutavad selle indikaatori automaatselt patsiendi plasmas protrombiiniaja määramise ja kontrollplasma lahjenduste tulemuste põhjal.

Plasma protrombiini aktiivsus Ovreni järgi
Lisaks Quick testile on kaudsete antikoagulantide toime hindamisel võimalik Ovreni järgi uurida plasmat. Selles kasutatakse reaktiive, millele on lisatud V faktorit ja fibrinogeeni sisaldav adsorbeeritud veise plasma, mis võimaldab välistada nende kahe komponendi mõju testitulemustele ja uurida protrombiinikompleksi teiste tegurite (VII, X ja II) aktiivsust. ). Sel juhul püsivad uuritavate plasmade proovid pikemat aega stabiilsed, kuna meetod osutub termolabiilse faktori V aktiivsusest sõltumatuks.

Protrombiiniajal põhinevad hinnangulised väärtused
Segavate tegurite mõju vähendamiseks on soovitatav samaaegselt määrata uuritava proovi protrombiiniaeg ja võrdlusnormaalne ühendatud plasma ning hinnata tulemust protrombiini aja suhete kujul. Kaasaegsed koagulomeetrid ja hemostaasi analüsaatorid arvutavad indikaatorid automaatselt patsiendi proovis ja normaalses plasmas protrombiiniaja määramise tulemuste põhjal.
Protrombiini suhe: PO = patsiendi PV / normaalne plasma PV.
Protrombiini suhte indikaatoril on otsene loogiline seos patsiendi plasma protrombiiniaja muutustega (protrombiiniaja pikenemine toob kaasa protrombiini suhte suurenemise). Samal ajal mõjutab kasutatava spetsiifilise tromboplastiini tundlikkus väliste rajafaktorite (VII, X, V ja II) puudumise suhtes protrombiini suhte määramise tulemusi, mis võib põhjustada erinevate partiide puhul saadud andmete kokkusobimatust. reaktiiv.
Kaudsete antikoagulantide võtmine viib protrombiiniaja pikenemiseni, kuid selle mõõdetud pikenemise määr varieerub oluliselt sõltuvalt kasutatavast tromboplastiini reagendist. Sellega seoses võttis WHO hematoloogia standardimiskomitee 1983. aastal vastu standardiseeritud indikaatori - rahvusvahelise normaliseeritud suhte, mis arvutatakse kaudsete antikoagulantidega ravi jälgimisel (kui protrombiini testi väärtuste kõikumine sõltuvalt kasutatud reagentidest on vastuvõetamatu). Rahvusvaheline normaliseeritud suhe arvutatakse protrombiini suhte ja kasutatud tromboplastiini rahvusvahelise tundlikkuse indeksi põhjal protrombiini kompleksfaktorite puudumise suhtes: INR = POmic.
Iga reaktiivipartii rahvusvaheline tundlikkuse indeks on märgitud selle pakendile ja jääb tavaliselt vahemikku 1,0 kuni 1,6 (eelistatud on madalam väärtus). Kui kasutatakse tromboplastiini, mis ei ole rahvusvahelise tundlikkuse indeksi järgi sertifitseeritud, ei ole rahvusvahelise normaliseeritud suhte arvutamine võimalik; sel juhul määrake protrombiini aktiivsus vastavalt Quickile.
Rahvusvahelise normaliseeritud suhte määramisel kapillaarvereproovis on vererakkude mõju tõttu tulemus plasmaanalüüsiga võrreldes vähem usaldusväärne, seetõttu pole seda uuringut soovitatav teha ilma spetsiaalsete kaasaskantavate koagulomeetrite kasutamiseta.

VÕRDLUSPIIRID
Tromboosi aeg = 10-20 s (olenevalt reaktiivi tüübist ja määramistingimustest). Protrombiini osakaal Quicki järgi on 60-130% (olenevalt tromboplastiini preparaadist); mõned tootjad näitavad ainult normi alumist piiri (näiteks üle 70%), rõhutades, et protrombiiniaja lühenemisel ja protrombiini protsendi suurenemisel ei ole kliinilist tähtsust.

Protrombiini suhe = 0,85-1,2. Rahvusvahelise normaliseeritud suhte kontrollväärtuste märkimine on vale, kuna seda indikaatorit tuleks uurida patsientidel, kes võtavad kaudseid antikoagulante; rahvusvahelise normaliseeritud suhte terapeutiline intervall valitakse sõltuvalt ravimite väljakirjutamise näidustustest.

HÄIRED
Protrombiiniaja testi tulemused sõltuvad võetud vere mahust ja tsitraadi kogusest tuubis, tromboplastiini preparaadi aktiivsusest ja selle tundlikkusest VII, X, V ja II faktorite puudumise suhtes, samuti temperatuuri. Kui uuritavas proovis on hepariini, võib protrombiiniaeg oluliselt pikeneda - kuni 40 s või rohkem; sellise efekti välistamiseks töödeldakse plasmat eelnevalt hepariini sorbendiga ja tsentrifuugitakse.

KVALITEEDI TAGAMINE JA KONTROLL
Kiirtestis koostatakse kalibreerimisgraafik iga uue uuringute seeria (üheks päevaks) ja iga uue tromboplastiini reaktiivi seeria jaoks. Tulemuste õigsuse tagamiseks kasutatakse kõigil juhtudel ainult tervetelt doonoritelt saadud värsket liitplasmat või värskelt lahjendatud normaalset plasmat ning kvaliteedikontrolliks RNP plasmat. Standardset WHO kontrollmaterjali protrombiiniaja testi jaoks ei ole, kuna kasutatakse erinevaid reaktiive ja erineva tundlikkusega instrumente, kuid tootjad pakuvad tavaliselt kontrollplasmaid kindlate tingimuste jaoks (reaktiivid/seadmed). Reprodutseeritavuse ja konvergentsi hindamiseks võib kasutada mitme terve doonori värsket segatud plasmat (vähemalt 10) või värskelt lahjendatud lüofiliseeritud normaalset ühendplasmat (RNP plasma), mille säilivusaeg on 2-4 tundi kättesaamise hetkest või 2 tundi pärast. lüofiliseeritud preparaadi lahjendamine. Täpsuse suurendamiseks on soovitatav määrata koagulomeetril; paralleelproovide uurimisel ei tohiks protrombiiniaja tulemuste levik ületada 1 s.

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
Protrombiiniaja pikenemist või protrombiini protsendi langust vastavalt Quickile võib seostada kaasasündinud (harva) või omandatud aktiivsuse vähenemisega või välise hüübimisaktivatsioonitee tegurite puudulikkusega või (harvemini) nende inhibiitorite esinemisega. . See võib olla tingitud maksahaigusest, tarbimise koagulopaatiast ja faktorite kadumisest, K-vitamiini vaegusest ja teatud ravimite (eriti K-vitamiini antagonistide) kasutamisest. Piisava faktorite sisalduse korral on protrombiiniaja pikenemine võimalik fibrinogeeni sisalduse vähenemisega alla 1,5-1,0 g / l, samuti otseste antikoagulantide, kuid viimasel juhul protrombiini mõjul. aja test on vähem tundlik võrreldes aktiveeritud osalise tromboplastiini ajaga.

Protrombiiniaja vähenemine või protrombiini protsendi suurenemine vastavalt Quickile ei oma kliinilist tähtsust, kuigi need võivad kajastada väliste raja tegurite hüperaktiivsust (sealhulgas vereproovide võtmise protseduuri rikkumist).

UURITULEMUSTE KLIINILINE RAKENDAMINE
Protrombiiniaja test on üks peamisi meetodeid plasma ja täisvere hüübimisomaduste uurimiseks. Protrombiiniaja määramist kasutatakse kaudsete antikoagulantidega ravi kontrollimiseks, protrombiini kompleksfaktorite (VII, X, V ja II) koguse ja aktiivsuse muutuste tuvastamiseks ning maksa valkude sünteesi funktsiooni hindamiseks. Protrombiiniaja märkimisväärne pikenemine on sageli seotud verejooksu riskiga.

HINDAMINE SÕELINGU HÜBIMINE TESTID
Aktiveeritud osalise tromboplastiini aja isoleeritud pikenemine:
kombinatsioonis verejooksuga - VIII, IX, XI tegurite defitsiit / defekt;
verejooksu puudumisel - XII, XI tegurite defitsiit / defekt, suure molekulmassiga kininogeen, luupuse antikoagulandi olemasolu.

Isoleeritud protrombiiniaja pikenemine;
VII faktori puudulikkus/defekt (harv seisund).

Aktiveeritud osalise tromboplastiini aja ja protrombiiniaja kombineeritud pikenemine;
ravimite toime - antikoagulandid, varfariin, massilised vereülekanded;
patoloogilised seisundid - aktiveeritud osaline vere tromboplastiini aeg, maksa patoloogia, K-vitamiini vaegus;
harva esinevad seisundid - düsfibrinogeneemia, X, V, II faktorite puudulikkus/defekt.

KATSE OMADUSED
Fibriini trombi moodustumise aeg määratakse trombiini standardlahuse lisamisega uuritud tsitraadiplasmale temperatuuril 37 °C. Sel juhul sõltub reaktsiooniaeg peamiselt fibrinogeeni kontsentratsioonist ja omadustest, samuti antitrombiinide olemasolust ja toimest.

UURIMISE MEETOD
Uuritud trombotsüütide vaesele plasmale lisatakse temperatuuril 37 °C trombiinilahus ja määratakse (automaatselt või käsitsi) fibriini trombi moodustumise aeg. Paralleelselt testitakse normaalset plasmat.

VÕRDLUSPIIRID
Need on 14-17 s (olenevalt trombiini aktiivsusest).

HÄIRED
Hepariini juuresolekul uuritavas plasmas võib trombiiniaeg pikeneda 120 sekundini või rohkemgi. Kui on vaja välistada antikoagulandi toime, töödeldakse plasmat eelnevalt hepariini sorbendiga, tsentrifuugitakse ja supernatanti uuritakse.

KVALITEEDI TAGAMINE JA KONTROLL
RNP plasmat kasutatakse kvaliteedikontrolliks; trombiiniaja väärtuste variatsioonikoefitsient ei ületa tavaliselt 5%. Igal laboril soovitatakse määrata oma kontrollväärtused (võttes arvesse konkreetseid tingimusi).

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
Trombiiniaja pikenemise põhjuseks võib olla otseste antikoagulantide, paraproteiinide, hüpofibrinogeneemia, düsfibrinogeneemia (fibrinogeeni kvalitatiivne defekt) esinemine veres või fibriini ja fibrinogeeni lagunemissaaduste akumuleerumine veres, millel on antitrombiini aktiivsus ja mis takistavad trombiini teket. fibriini monomeeride polümerisatsioon.

UURITULEMUSTE KLIINILINE RAKENDAMINE
Trombiiniaeg on üks peamisi meetodeid plasma hüübimisparameetrite uurimiseks. Uuring viiakse läbi rikkumiste tuvastamiseks fibrinogeeni fibriiniks muutumise staadiumis, mis sõltub peamiselt fibrinogeeni ja fibriini moodustumise inhibiitorite - hepariini jne kogusest. Trombiiniaja märkimisväärne pikenemine viitab verejooksu ohule. Reptilaasi aeg (batroksobiin, ancistron)

KATSE OMADUSED
Fibriinihüübe moodustumise aeg tsitraatplasmas määratakse maomürgi trombiinitaolise ensüümpreparaadi - batroksobiini või antsistrooni - toimel, mis lõhustab fibrinopeptiidi A otse fibrinogeenist ja moodustab aktiivseid fibriini monomeere, mis polümerisatsiooni käigus moodustavad trombi. . Test on hepariini ja selle antitrombiini kompleksi suhtes tundlik.

UURIMISE MEETOD
Plasmale lisatakse üks näidatud maomürgipreparaatidest, mis sisaldavad otsese fibriini moodustumise ensüüme. Määramine viiakse läbi sarnaselt trombiiniaja testiga; võrrelda uuritava ja normaalse plasma hüübimisaega.

UURITULEMUSTE KLIINILINE RAKENDAMINE
Reptilaasi aeg väheneb hüperfibrinogeneemia korral ja pikeneb fibrinogeeni vähenemise ja mõnede düsfibrinogeneemiate korral, samuti hüperfibrinolüüsi ja suure hulga fibriini lagunemissaaduste esinemise korral vereringes, mis takistavad fibriini monomeeride polümerisatsiooni. Testi saab teha hepariini juuresolekul. Tulemusi ei mõjuta hüübimisfaktorite ja luupuse antikoagulandi vastased antikehad.

Fibrinogeen (kontsentratsioon)
Fibrinogeen - fibriini trombide moodustumise alus - sünteesitakse maksas ja on pidevalt plasmas. Fibrinopeptiidid lõhustatakse selle molekulidest trombiini toimel ja moodustuvad fibriini monomeerid, mis seejärel spontaanselt polümeriseerivad ja ristsidestuvad.

KATSE OMADUSED
Kronomeetriline meetod hõlmab fibriintrombi moodustumise aja määramist, kui 10-kordselt lahjendatud plasmale (antitrombiini komponentide toime vähendamiseks) 37 °C juures lisatakse liig väga aktiivset trombiini. Nendes tingimustes sõltub reaktsiooniaeg peamiselt fibrinogeeni kontsentratsioonist, mis määratakse kalibreerimiskõveralt. Harvem kasutatav turbidimeetriline kineetiline meetod taandub kahepunktilisele söötme hägususe suurenemise kiiruse määramisele fibriini moodustumise ajal pärast tromboplastiini-kaltsiumi reaktiivi või maomürgi preparaadi lisamist lahjendatud plasmale.

EELANALÜÜTILISED OMADUSED
Järgige hemostaasi uurimiseks ja trombotsüütide vaese tsitraadiplasma saamiseks veenivere võtmise üldtingimusi. Kui kapillaarveri võetakse, segatakse see kohe vahekorras 1:1 antikoagulandiga. Katsematerjal on stabiilne 8 tundi, kui seda hoitakse suletud plast- või silikoonitud klaastorus. Tulemuste võimaliku moonutamise vältimiseks ei ole soovitav uurida plasmat, millel on trombid, hemolüüsi jäljed ja mis on saadud ka rohkem kui 8 tundi enne analüüsi.

UURIMISE MEETOD
Kronomeetriline meetod nõuab esialgset kalibreerimisgraafikut, lahjendades standardset normaalset plasmat puhverlahusega, et saada kalibreerimisproovid, mis on ekvivalentsed plasmaga, mille fibrinogeenisisaldus on 1–6 g/l. Uuring viiakse läbi koagulomeetril temperatuuril 37 ° C; Kalibreerimisproovidele lisatakse trombiinilahus ja plasma lahjendatakse 10 korda puhverlahusega ning määratakse trombi moodustumise aeg. Fibrinogeeni kontsentratsioon uuritavas plasmas leitakse kalibreerimiskõvera järgi. Kui see ületab 5-6 g / l, on õigete andmete saamiseks soovitatav määramist korrata, lahjendades plasmat puhverlahusega mitte 10, vaid 20 korda, korrutada tulemus 2-ga.

Turbidimeetriline meetod sarnaneb reptilaasi aja testiga, kuid uuring viiakse läbi mitte koagulomeetril, vaid fotomeetrilisel analüsaatoril, mis võimaldab määrata söötme hägususe suurenemise kineetikat. Hägustumise määr fibriini moodustumise ajal sõltub esialgsest plasma fibrinogeeni kontsentratsioonist, mis määratakse kindlaks kalibreerimisproovide uuringu tulemuste põhjal (vajalik mitmepunktiline kalibreerimine). Turbidimeetrilist meetodit kasutatakse osades automaatsetes hemostaasianalüsaatorites, samas testis on võimalik üheaegselt määrata protrombiiniaega.

VÕRDLUSPIIRID
Täiskasvanutel - 1,8-4,0 g / l, vastsündinutel - 1,2-3,0 g / l.

HÄIRED
Kronomeetriline meetod võib anda ebaõigeid tulemusi düsfibrinogeneemia korral, samuti kui suur hulk hepariini siseneb verre (näiteks veenikateetrist). Kapillaarvere uurimisel sõltub tulemus paljude täiendavate segavate tegurite (vererakud, erinev hematokrit) toimest, mis vähendab meetodi täpsust.

KVALITEEDI TAGAMINE JA KONTROLL
Fibrinogeeni määramise kvaliteedi kontrollimiseks kasutatakse kontroll-RNP-plasmat, kalibreerimiseks - standardplasma või fibrinogeeni standardlahuste lahjendamist. Sama plasmaprooviga töötamisel ei tohiks tulemuste hajumine ületada 5%. Erinevate meetodite näidustused samal plasmaproovil võivad üksteisest oluliselt erineda, eriti hüpo- või hüperfibrinogeneemia korral. Seetõttu soovitab labor kinni pidada ükskõik millisest meetodist, seda hoolikalt siluda ning regulaarselt läbi viia kalibreerimist ja kvaliteedikontrolli.

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
Fibrinogeeni sünteesitakse maksas ja see kuulub ägeda faasi valkude rühma. Selle kontsentratsiooni suurenemine plasmas on võimalik mis tahes ägeda faasi reaktsiooniga (põletikud, infektsioonid, põletused, vigastused, operatsioonijärgsel perioodil, äge müokardiinfarkt), samuti neeruhaiguste, süsteemsete sidekoehaiguste, pahaloomuliste kasvajate jne korral. Tervetel naistel suureneb fibrinogeeni tase raseduse, östrogeensete ravimite kasutuselevõtu ja menstruatsiooni ajal.

Fibrinogeeni sisalduse vähenemise peamised põhjused on liigne tarbimine koos suure hulga mikrohüüvete moodustumisega, lagunemine fibrinolüütiliste ravimite (streptokinaas jne) toimel või sünteesi kahjustus raske maksapatoloogia (tsirroos, äge düstroofia) korral. , samuti märkimisväärne hemodilutsioon. Tuleb arvestada, et rasked püopõletikulised protsessid, mis põhjustavad dissemineerunud intravaskulaarse koagulatsiooni sündroomi väljakujunemist, võivad kaasa aidata fibrinogeeni kui ägeda faasi valgu taseme tõusule ja seeläbi varjata selle suurenenud tarbimist.

UURITULEMUSTE KLIINILINE RAKENDAMINE
Fibrinogeeni kontsentratsiooni määramine on plasma hüübimisomaduste uurimise põhimeetod, mis sisaldub kõigis skriiningskeemides. Uuring viiakse läbi põhjuse väljaselgitamiseks ning verejooksu ja tromboosiriski hindamiseks. Fibrinogeeni kontsentratsiooni suurenemisega suureneb vere viskoossus järsult, kuid selle koagulatsioon in vitro ei kiirene. Pikaajaline kõrgenenud fibrinogeeni kontsentratsioon on ohtlik, kuna suureneb tromboosi ja elundite ja kudede isheemia oht. Kui fibrinogeeni kogus väheneb alla 1 g / l, on verejooks võimalik.

VIII faktor (aktiivsus)
Plasma VIII faktor (antihemofiilne globuliin) sünteesitakse maksas, põrnas, endoteelirakkudes, leukotsüütides ja neerudes. Veres on VIII faktor kombinatsioonis von Willebrandi faktoriga, mis stabiliseerib VIII faktorit ja pikendab oluliselt selle vereringe perioodi (kuni 12-24 tundi). Kokkupuutel minimaalse koguse trombiiniga vabaneb VIII faktor kompleksist ja avaldab oma hüübimist soodustavat toimet.

EELANALÜÜTILISED OMADUSED
Järgige hemostaasi uurimiseks ja tsitraadiplasma saamiseks venoosse vere võtmise üldtingimusi. VIII faktori madala stabiilsuse tõttu tuleb plasma koguda võimalikult kiiresti. Kiiresti ja korralikult sulatatud värskes külmutatud plasmas erineb VIII faktori aktiivsus värskest plasmast vähe.

UURIMISE MEETOD
Hüübimistest määrab VIII faktori puudulikkusega substraadi plasma segu aktiveeritud osalise tromboplastiini aja (
Kromogeense meetodi puhul viib lahjendatud testplasma inkubeerimine Xa faktori, fosfolipiidide, Ca2+ ja liigse X faktori lisamisega viimase aktiveerumiseni, mida soodustab VIII faktor. Saadud faktor Xa hüdrolüüsib spetsiifilise kromogeense substraadi värvilise n-nitroaniliini vabanemisega. Segus moodustunud trombiin, mis on samuti võimeline kromogeenset substraati hüdrolüüsima, blokeeritakse lisatud sünteetilise inhibiitoriga. Optilise tiheduse suurenemise kiirus A=405 nm juures on võrdeline VIII faktori aktiivsusega uuritavas plasmas. Xa ja X faktorite preparaadid, fosfolipiidid segatakse, uuritav plasma lahjendatakse puhverlahusega, lisatakse kromogeenset peptiidi substraati ja temperatuuril 37 ° C määratakse optilise tiheduse suurenemise kiirus V = 405 nm juures kineetilise meetodi abil. . Määramine viiakse läbi fotomeetril, biokeemilisel analüsaatoril või fotomeetrilise kanaliga hemostaasianalüsaatoril, tulemust väljendatakse protsendina standardsest normaalsest plasmast. Iga proovi uuritakse kaks korda ja arvutatakse aritmeetiline keskmine. Meetodi lineaarsusvahemik on 0 kuni 130%.

VÕRDLUSPIIRID

HÄIRED
Sama, mis aktiveeritud osalise tromboplastiini aja testis. VIII faktori aktiivsust ei saa määrata hepariini juuresolekul proovis või selle toime taustal.

KVALITEEDI TAGAMINE JA KONTROLL
Kvaliteedikontrolliks kasutatakse kontrollplasmat, milles VIII faktori aktiivsus on märgitud sertifikaadis ja vastab normaalsele (80-120%; 0,8-1,2 IU/ml) ja patoloogilisele tasemele.

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
VIII faktori aktiivsuse vähenemist seostatakse kõige sagedamini selle sünteesi rikkumisega (hemofiilia A korral) või inhibeerivate antikehade ilmnemisega, samuti kiirenenud lagunemisega ("kaitsmata" VIII faktor von Willebrandi tõve korral); harvemini - hüpertarbimisega. VIII faktori tasemel 6–25% on kerge puudulikkus, 1–5% - mõõdukas, alla 1% - raske. VIII faktori taseme olulise langusega kaasneb verejooks pärast vigastusi ja hemorraagiaid liigestes, lihastes ning teistes elundites ja kudedes. Kui plasma VIII faktori aktiivsus väheneb alla 25%, suureneb operatsioonijärgse verejooksu risk. VIII faktori aktiivsus suureneb ägeda faasi reaktsioonide (põletik, trauma jne), raseduse ja östrogeensete ravimitega ravi korral, pärast splenektoomiat ning võib suureneda ka diabeedi ja kasvajate korral. VIII faktori aktiivsust üle 175% peetakse trombofiilseks seisundiks.

IX tegur (tegevus/kogus)
Plasma IX faktor ehk jõulufaktor sünteesitakse maksas (süntees sõltub K-vitamiinist). Hemostaasi sisemise raja kaskaadaktiveerimise ajal soodustab aktiveeritud IX faktor tenaasi ensüümikompleksi osana (fosfolipiidmaatriksil) X-faktori üleminekut aktiivsesse vormi, protrombinaasi, trombiini ja fibriini hüübimist. IX faktorit ei tarbita vere hüübimise ajal ja see jääb seerumisse.

KATSE OMADUSED
Hüübimismeetodiga määramise põhimõte on sama, mis VIII faktori aktiivsuse uurimisel, kuid substraadina kasutatakse IX faktori puudulikkusega plasmat. ELISA määramine põhineb monoklonaalsete antikehadega määratava IX faktori seondumisel selle faktoriga, mis on fikseeritud tableti süvendi ja nende konjugaadi peroksidaasiga; kalibreerimine viiakse läbi vastavalt komplekti kuuluva standardse kalibreerimisplasma lahjendustele.

VÕRDLUSPIIRID
Need moodustavad 50-150% (0,5-1,5 RÜ / ml).

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
IX faktori aktiivsuse vähenemist võib seostada selle sünteesi rikkumisega (hemofiilia B, raske hepatiit ja maksatsirroos, ravi kaudsete antikoagulantidega), samuti inhibeerivate antikehade ilmnemisega. Teguritasemel 25–50% märgitakse varjatud puudulikkus, 6–24% - kerge puudulikkus, 1–5% - mõõdukas, alla 1% - raske puudulikkus. Raske IX faktori puudulikkusega kaasnevad hemorraagilised ilmingud, vere minimaalne aktiivsuse tase operatsioonijärgse verejooksu vältimiseks on 20-25% normist. IX faktori kogus/aktiivsus võib suureneda ravi ajal östrogeensete ravimitega ja neerupuudulikkuse korral. Kui IX faktori aktiivsus ületab 200%, tekib trombofiilne seisund.

Tegur X (tegevus/summa)
K-vitamiinist sõltuv X-faktor (Stuart-Praueri faktor) sünteesitakse maksas ja sellel on üks kesksemaid kohti plasma hemostaasisüsteemis. Nii sisemiste kui ka väliste hemostaasi radade kaskaadaktiveerimisel muudetakse faktor X aktiivseks proteaasiks - faktoriks Xa, mis muude protrombinaasi kompleksi komponentide (faktor Va, fosfolipiidid ja Ca2+) juuresolekul muudab protrombiini trombiiniks ja soodustab fibriini trombi moodustumist.

KATSE OMADUSED
X faktori isoleeritud defitsiiti uuritavas plasmas saab tuvastada aktiveeritud osalise tromboplastiini aja ja eriti protrombiini aja pikenemise järgi, mis normaliseeruvad normaalse doonorplasmaga segatestis, kuid jäävad pikemaks ka f-defitsiidiga plasma lisamisel. . X plasma.

X faktori kvantitatiivne määramine hüübimistestis toimub sarnaselt VIII faktori aktiivsuse uuringuga, kuid aktiveeritud osalise tromboplastiini aja asemel kasutatakse protrombiiniaja testi ja selle faktori puudulikkusega plasmat. X-faktori antigeeni saab määrata ensüümi immuunanalüüsiga, kasutades monoklonaalseid antikehi. Meetod määrab küll koguse, kuid analüüsi tegevusest aimu ei anna. Kromogeense meetodi kasutamisel viiakse faktor X lahjendatud testplasmas aktiivsesse olekusse Russeli rästiku mürgist (Russel Viper Venom - RVV) tulevate spetsiifiliste proteaaside toimel Ca2+ juuresolekul. Saadud faktor Xa hüdrolüüsib spetsiifilise kromogeense substraadi värvilise nitroaniliini vabanemisega; optilise tiheduse suurenemise kiirus lainepikkusel > või = 405 nm on võrdeline faktori X kontsentratsiooniga. Määramine viiakse läbi fotomeetril, biokeemilisel analüsaatoril või fotomeetrilise kanaliga hemostaasianalüsaatoril; tulemused on väljendatud protsendina faktori aktiivsusest standardplasmas (meetodi lineaarsus - 10 kuni 130%).

VÕRDLUSPIIRID
Need moodustavad 50-150%.

PREANALÜÜTILISED OMADUSED, HÄIRED
Uuring tuleb läbi viia hiljemalt 2 tundi pärast vere võtmist. Lipeemilised, ikterilised ja hemolüüsitud proovid ei ole soovitatavad; vastasel juhul on vajalik patsiendi plasmaga kontroll-tühi proov. Kvaliteedikontrolliks kasutatakse normaalset ja patoloogilist plasmat sertifitseeritud faktori X tasemega.Meetodi hindamiseks võib kasutada RNP plasmat või mitme terve inimese värsket (värskelt sulatatud) ühendatud plasmat.

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
X faktori aktiivsuse vähenemist seostatakse sagedamini selle sünteesi rikkumisega maksas (K-vitamiini vaegus, kaudsete antikoagulantide toime, raske maksapatoloogia) või vereringest kadumine amüloidoosi korral (isoleeritud X-faktori puudulikkus). Faktor X kontsentratsioonid võivad väheneda ka hepariinravi ajal AT-hepariini kompleksi seondumise ja inaktiveerimise tõttu. Kaasasündinud faktori puudulikkus on haruldane.

Uuring viiakse läbi aktiveeritud osalise tromboplastiini aja ja protrombiiniaja kombineeritud pikendamisega, et selgitada välja hüpokoagulatsiooni põhjus. X-faktori aktiivsuse minimaalne hemostaatiline tase veres on 5-10%, operatsioonijärgse verejooksu peatamise korral - 10-20% normist. Selgema langusega kaasneb verejooks.

Kuna maksas sünteesitud faktori X aktiivsus väheneb kaudsete antikoagulantide mõjul koos protrombiini aktiivsusega, saab seda kasutada varfariinravi jälgimiseks.

VII tegur (tegevus/kogus)
Plasma K-vitamiinist sõltuv VII faktor (prokonvertiin) sünteesitakse maksas ja ringleb veres. Kui kuded on kahjustatud ja koefaktor siseneb vereringesse, moodustub Vila faktori aktiivne vorm, mis TF-faktori Vila kompleksi kujul aktiveerib faktorid IX ja X, mis omakorda viib moodustumiseni. trombiini ja fibriini trombi moodustumine.

KATSE OMADUSED
Hüübimismeetod põhineb uuritava plasma pikenenud protrombiiniaja korrigeerimisel normaalse ühendatud plasma lisamise teel, kuid korrektsiooni puudumisel patsiendi plasma ja VII faktori puudulikkusega substraadiplasma segukatses. Teave VII faktori määramise kromogeense meetodi kohta, mis põhineb kompleksi "TF-VIIa" moodustumisel, mis aktiveerib lisatud faktori X, mis seejärel hüdrolüüsib kromogeense substraadi värvilise n-nitroaniliini moodustumisega. Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA) võimaldab teil määrata nii prokonvertiini koguhulka ja selle koefaktoriga kompleksi (VII + VIIa + TF / VII + TF / VIIa) kui ka aktiivse vormi (VIIa + T / VIIa), mis tavaliselt on umbes 1% (~5 ng/ml).

VÕRDLUSPIIRID
Make up 50-200%; kui määratakse ELISA meetodil - 300-800 ng / ml.

HÄIRED
Hüübimis- ja kromogeensete testide tulemuste täiendav ebastabiilsus on seotud VII faktori spontaanse ja külma aktiveerimise võimalusega (vereplasma pikaajaline hoidmine madalal temperatuuril on ebasoovitav). Samal ajal ei muuda plasma kiire külmutamine selle teguri aktiivsust vähe. Hepariin* kontsentratsioonis kuni 0,5 U/ml ei mõjuta kromogeense uuringu tulemusi.

KVALITEEDI TAGAMINE JA KONTROLL
Kvaliteedikontrolliks kasutatakse VII faktori sertifitseeritud kontrollplasmat, RNP plasmat või mitme terve inimese värsket (värskelt sulatatud) ühendatud plasmat.

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
VII faktori aktiivsuse vähenemine on võimalik, kui selle süntees maksas on häiritud (vastsündinu perioodil, elundi raske patoloogiaga - hepatiit, tsirroos, K-vitamiini vaegus ja ravi kaudsete antikoagulantidega) ja tarbimiskoagulopaatia. Kaasasündinud prokonvertiini puudulikkus on väga haruldane. VII faktori aktiivsuse suurenemine on võimalik selle sünteesi aktiveerimisega maksas (östrogeensete ravimite toime, raseduse kolmandal trimestril jne).

UURITULEMUSTE KLIINILINE RAKENDAMINE
VII faktor on kõige lühema vereringe perioodiga (T 1/2=4-7 h); selle aktiivsuse järkjärgulist langust võib pidada üheks ägeda maksapuudulikkuse markeriks. VII faktori koguse/aktiivsuse suurenemist peetakse trombofiilseks seisundiks ja sellega võib kaasneda suurenenud risk haigestuda südame-veresoonkonna haigustesse.

Tegur V (tegevus/summa)
Plasma V-faktor (proaktseleriin) sünteesitakse maksas, ringleb veres mitteaktiivses vormis ja seda leidub trombotsüütides. Pärast proteolüütilist aktiveerimist toimib faktor Va faktori Xa peamise kofaktorina, suurendades selle aktiivsust mitme suurusjärgu võrra. Tegur Xa omakorda protrombinaasi ensüümikompleksi osana (faktorid Xa, Va, fosfolipiidid ja Ca2+) põhjustab trombiini teket ja soodustab fibriinihüübe teket.

KATSE OMADUSED
V-faktori puudulikkust võib kahtlustada hüübimistestis koos PT pikenemisega. Väärtused normaliseeruvad segatestis normaalse doonori plasmaga, kuid jäävad patoloogiliseks, kui lisatakse V-faktori puudulikkusega plasma. V faktori hüübimise määramine on sarnane VIII faktori aktiivsuse uuringuga, kuid see viiakse läbi vastavalt protrombiiniaja testile, kasutades faktori V puudulikkusega substraadi plasmat.

Kvantitatiivne määramine viiakse läbi ELISA meetodil, kasutades V faktori raske ahela monoklonaalseid antikehi ja peroksidaasi konjugaati selle valgu polüklonaalsete antikehadega. Meetod annab aimu teguri kogusest, kuid mitte reaktiivsusest.

VÕRDLUSPIIRID
Need moodustavad 50–150% normaalse ühendatud plasma tasemest.

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
V faktori aktiivsuse vähenemine võib olla tingitud maksasünteesi kahjustusest (raske maksahaigus) või ületarbimisest; kaasasündinud puudulikkus on väga haruldane. Faktori V aktiivsuse suurenemine on võimalik selle sünteesi kiirenemisega maksas (haiguste äge faas, rasedus jne). Uuring viiakse läbi protrombiiniaja pikenemise põhjuste eristamiseks normaalse aktiveeritud osalise tromboplastiini aja taustal. V faktori aktiivsuse minimaalne hemostaatiline tase veres on 5-15%, operatsioonide puhul - 25%.

Faktor XIII (fibrinaas, fibriini stabiliseeriv faktor)
Fibrinaas (faktor XIII, transglutaminaas) ristkovalentsete sidemete moodustumise kaudu stabiliseerib lahustuva fibriin-polümeeri trombi ja muudab selle tihedaks trombiks. Fibrinaasi osalusel tekkinud trombid lüüsivad aeglaselt. Kui faktori XIII aktiivsus väheneb, lagunevad trombid kiiresti isegi siis, kui vere fibrinolüütiline aktiivsus on normaalne.

KATSE OMADUSED
Funktsionaalne määramine põhineb fibrinogeeni standardlahusest, millele on lisatud XIII faktorit sisaldava uuritud plasma erinevate lahjendustega monokloroäädikhappe (või karbamiidoksalaadi) lahuses, moodustunud fibriinihüübe lüüsi hindamisel. Meetod on tulemuste hindamise etapis üsna subjektiivne. Fotomeetriline ensümaatiline meetod põhineb XHa faktori toimel sünteetilisel substraadil ja glutamaatdehüdrogenaasi reaktsioonis eralduvate ammooniumiioonide hulga määramisel fotomeetril või biokeemilisel analüsaatoril. Faktori XIII epitoopide vastastel polüklonaalsetel antikehadel põhinev ensüümimmunoanalüüs (ELISA) on väga tundlik ja hea reprodutseeritavusega. Meetod võimaldab määrata fibrinaasi kogust, kuid ei anna teavet selle aktiivsuse kohta.

EELANALÜÜTILISED OMADUSED
Trombotsüütide vaese tsitraadiplasma saamiseks järgige veenivere võtmise üldtingimusi. Plasmat tuleks analüüsida mitte hiljem kui 4 tundi pärast vereproovi võtmist. Ei ole soovitav uurida plasmat, millel on trombid ja hemolüüsi jäljed. Plasma võib külmutada üks kord, seejärel sulatada soojas vees.

UURIMISE MEETOD
Uuritud plasma seerialahjendustele puhverlahusega (1:2 kuni 1:512) lisatakse fibrinogeeni standardlahus, kaoliini suspensioon ja trombiini-kaltsiumi segu. 30-minutilise inkubeerimise ajal temperatuuril 37 °C moodustub fibriini tromb, mis on faktori XIII toimel erineval määral kõvenenud. Pärast monokloroäädikhappe lisamist ja 5-minutilist inkubeerimist loksutage katsuteid ja märkige üles plasma väikseim lahjendus, mille juures tromb laguneb väikesteks fibriini filamentideks. Paralleelselt testitakse komplektis sisalduva teadaoleva fibrinaasi aktiivsusega kalibraatori plasma sarnaseid lahjendusi (protsendina normaalsest plasmast). Faktori XIII tase arvutatakse madalaimate plasmatiitrite põhjal, milles tromb on lagunenud, võttes arvesse XIII faktori teadaolevat aktiivsust plasmakalibraatoris.

VÕRDLUSPIIRID
Moodustab 60-150% normaalsest plasmatasemest.

KVALITEEDI TAGAMINE JA KONTROLL
Analüüsi kvaliteedi kontrollimiseks kasutatakse XIII faktori normaalse ja patoloogilise tasemega kontrollplasmaid. Funktsionaalset meetodit ei saa standardida, kuna trombi lagunemise hindamine on suuresti subjektiivne.

TULEMUSTE TÕLGENDAMINE
XIII faktori vähenemist veres võib seostada selle sünteesi rikkumise või liigtarbimisega. Fibrinaasi aktiivsus väheneb vastsündinutel ja esimese elukuu lastel. Omandatud XIII faktori puudulikkus võib tekkida kiiritushaiguse, leukeemia, hepatiidi ja tsirroosiga, maksa metastaaside ja lümfoomiga patsientidel. Kirjeldatud on XIII faktori aktiivsuse olulist vähenemist (
UURITULEMUSTE KLIINILINE RAKENDAMINE
Testi kliiniline tähtsus on üldiselt madal. Fibrinaasi aktiivsuse vähenemist või suurenemist peetakse hemorraagilise või tromboosi riskifaktoriks. Samal ajal arvatakse, et 10% fibrinaasist tagab täieliku hemostaasi ja 2% sellest faktorist on piisav verejooksu peatamiseks.

Koagulatsiooniproovid(lat. coagulatio koagulatsioon, paksenemine; sünonüüm: settetestid, flokulatsioonitestid, vadakuvalkude labiilsuse testid, düsproteineemilised testid) – poolkvantitatiivsed ja kvalitatiivsed testid, mille eesmärk on määrata vereseerumi valkude kolloidne stabiilsus erinevates patoloogilistes tingimustes, millega kaasnevad düsproteineemia.

Peamine organ, milles vereseerumi valke sünteesitakse, on maks, seetõttu mõjutab maksa parenhüümi rakkude funktsiooni rikkumine alati neis sünteesitud valkude struktuuri. albumiini-globuliini suhe, need. maksa mõjutavate patoloogiliste seisundite arengu varases staadiumis tuvastatakse K. p. abil seerumivalkude kolloidse stabiilsuse rikkumine. Seetõttu kutsuti K. p-d varem maksaanalüüsiks. Hiljem leiti, et K. p. muutus erinevates haigustes, millega kaasneb düsproteineemia.

Valgukolloidlahuse vastupidavus koagulatsioonile (osakesed kleepuvad kokku koos nende agregaatide moodustumisega) sõltub üksikute kolloidosakeste suurusest, nende elektrilaengust ja iga osakest ümbritseva solvaadikihi paksusest. Agregaatide teke ja isegi nende sadestumine toimub kolloidosakeste suuruse suurenemise, nende elektrilaengu vähenemise või osakeste vahelise solvaadikihi purunemise korral. Düsproteineemia korral muutuvad vereseerumi valkude moodustatud kolloidlahuse füüsikalis-keemilised omadused ja need tegurid, mis ei saanud varem põhjustada selle hüübimist, põhjustavad seerumivalkude kolloidlahuse osakeste adhesiooni koos enam-vähem suurte agregaatide moodustumisega. K. p diagnostiline väärtus suureneb, kui võrrelda nende tulemusi teiste proovide tulemuste ja haiguse kliinilise pildiga.

NSV Liidus kasutatakse ühtsete meetoditena tümooli, sublimaadi ja Veltmanni testi.

Tümooli test(tümooli hägususe test, tümooli hägusus) pakkus 1944. aastal välja inglise patoloog N. F. Mac-Lagan. See põhineb vereseerumi hägususastme määramisel selle koostoimel tümooli küllastunud lahusega veronaali-medinaalpuhvris, pH 7,8. Hägususe intensiivsus oleneb puhverlahuse olemusest, pH väärtusest, kontsentratsioonist, kasutatud tümooli puhtusastmest ja temperatuurist.

Tümooli test on järgmine: kuni 6 ml tümool-veronaali puhverlahus lisada 0,1 ml hemolüüsimata vereseerum ja pärast 30 min seismist fotomeetritakse lainepikkusel 630-660 nm tümool-veronaali puhvri vastu küvetis, mille kihi paksus on 1 cm. Reaktsioon viiakse läbi kl t° 25°. Hägususe astet hinnatakse kalibreerimiskõvera põhjal, mis on koostatud baariumsulfaadi standardsuspensiooni lahjenduste optilise tiheduse määramise tulemuste põhjal.

Arvatakse, et tümooli test on positiivne vereseerumi albumiinisisalduse suhtelise vähenemisega ning b- ja g-globuliinide ning b-globuliinidega seotud lipiidide (lipoproteiinide) sisalduse suurenemisega.

Haiguste puhul, millega ei kaasne maksa parenhüümi kahjustus, on positiivne tümooliproov harva. See test on eriti oluline viirusliku e puhul, kuna. see muutub positiivseks kuni kollatõve tekkimiseni. Tümooli test on positiivne ka anikterilise ah-ga, pärast ülekantud a-d, e-maksaga.

sublimeeritud test(sublimaat-seteteproov) kuulub Takata reaktsioonide rühma. Takata reaktsiooni ehk Takata-Ara reaktsiooni (magenta sublimaadi test) pakkusid 1925. aastal välja Jaapani patoloogid Takata (M. Takata) ja Ara (K. Aga) ning see põhineb interaktsiooni käigus tekkiva hägususe määra määramisel. sublimaadi lahus (elavhõbedikloriid HgCL 2) ja naatriumkarbonaat vereseerumiga.

Sublimeeritud test on järgmine: 0,5 ml hemolüüsimata värske seerum, lahjendatud 1 ml soolalahust ja tiitritakse 0,1% sublimaadi lahusega, kuni tekib püsiv hägusus sellisel määral, et ajaleheteksti ei saa lugeda läbi vertikaalse häguse vedeliku kihi. Sublimaadi testi tulemused väljendatakse tiitrimiseks kasutatud sublimaadilahuse milliliitrites.

Tavaliselt läheb tiitrimiseks 1,6-2,2 ml elavhõbekloriidi lahus. Väiksemad kogused viitavad globuliinide sisalduse suhtelisele suurenemisele ja albumiini-globuliini suhte väärtuse vähenemisele.

Sublimaadi test on positiivne (tiitrimiseks kasutatav sublimaadi lahuse kogus on üle normi) e maksa, selle ägedate toksiliste kahjustuste, e, silikotuberkuloosi korral.

Veltmanni test(koagulatsioonitest, Austria arst Veltmann, Veltmanni reaktsioon, Veltmanni koagulatsiooniteip) pakkus välja 1930. aastal Veltmann (O. Weltmann) ja see põhineb hägususe ilmnemisel, kui vereseerumile lisatakse kaltsiumkloriidi lahust. Lisage 12 järjestikuse numbriga katseklaasi ("lindile") 0,1 ml vereseerumi ja 5 ml sobivate lahjendustega kaltsiumkloriidi lahus (protsentides): 0,1; 0,09; 0,08; 0,07; 0,06; 0,05; 0,045; 0,04; 0,35; 0,03; 0,02 ja 0,01. Katseklaaside sisu segatakse ja rest koos nendega kastetakse 15 tunniks keevasse veevanni. min. Statiivi välja võttes märkige tulemus üles. Katseklaasides olev vedelik võib olla selge, hägune või sisaldada helbest setet ning hägususe ja flokulatsiooni erinevus on väga selge. Märkige katseklaasid, millest helbed välja kukkusid. Tavaliselt kukuvad helbed välja 6-7 katseklaasis (ehk “lindi” pikkus Veltmanni järgi on 6-7 katseklaasi). Veltmann nimetas lindi nihke lühendamist vasakule, nihke pikendamist paremale. Järsu nihkega vasakule ei pruugi üheski torus olla hüübimist.

Hiljem pakuti välja mitmeid Veltmanni testi modifikatsioone, mis taandusid peamiselt testitava vereseerumi koguse, kaltsiumkloriidi ja keemisaja muutmisele. NSV Liidus võeti ühtse meetodina kasutusele Veltmanni testi modifikatsioon,

pakutud A. Teufl.

Veltmanni test Teifli modifikatsioonis on järgmine: kuni 0,1 ml lisatakse hemolüüsimata värske vereseerum 4.9 ml vesi, segada ja lisada 0,1 ml(2 tilka) 0,5% kaltsiumkloriidi lahus. Toru loksutatakse ja kuumutatakse leegil, kuni segu keeb korra. Jahedas ja läbiva valguses määratakse hägususe olemasolu. Kui hägusust pole, lisage veel 0,1 ml sellest lahusest ja keedetakse uuesti jne. Tulemusi hinnatakse proovile lisatud 0,5% kaltsiumkloriidi lahuse üldkoguse järgi, kuni ilmub helbeline sade.

Hemostaasisüsteemi häirete laboratoorne diagnostika on laboripraktikas üks kallimaid. Kõigi võimalike testide läbiviimine rikkumiste olemuse selgitamiseks kõigi patsientide jaoks on peaaegu ebareaalne ülesanne. Seetõttu on äärmiselt oluline jälgida kliiniliste andmete ja patsiendi ajaloo põhjal testimise etappe. Esimeses etapis on rikkumiste suuna selgitamiseks vaja läbi viia testid, mis kajastavad hemostaasisüsteemi tervete lülide seisundit. Hemostaasisüsteemi seisundi diagnoosimiseks on soovitatavate sõeltestide komplekt:

• APTT (aktiveeritud osaline tromboplastiini aeg)
• Protrombiini aeg (vastavalt Quickile)
• trombiini aeg
• fibrinogeen

Vere hüübimisaeg (BCT)
VSC on ligikaudne indikaator mitmeastmelise hüübimiskaskaadi seisundi kohta, mille tulemusena lahustuv fibrinogeen läheb lahustumatuks fibriiniks. See näitaja hindab hüübimisprotsessi tervikuna ega võimalda tuvastada selle rikkumiseni viivaid mehhanisme. VSC lühenemine viitab vajadusele vältida hüperkoagulatsiooni, mis sageli ähvardab tromboosi või trombembooliaga.

Kasutatakse sõeltestina plasma koagulatsiooni sisemise kaskaadi hindamiseks, luupuse antikoagulandi diagnoosimiseks ja hepariinide antikoagulandi toime jälgimiseks. APTT on patoloogia esmaseks tuvastamiseks olulisem test kui protrombiiniaeg, kuna see paljastab suhteliselt levinud hemofiilia A ja B (vastavalt VIII ja IX faktorite defitsiit) ning luupuse antikoagulandi olemasolu.
Test APTT-L + on eriti kõrge tundlikkusega luupuse antikoagulandi suhtes. VA olemasolul veres pikeneb hüübimisaeg 3-3,5 korda.
Test APTT-L – Seda iseloomustab kõrge spetsiifilisus sisemiste hüübimisfaktorite ja hepariini suhtes ning madal tundlikkus luupuse antikoagulandi suhtes, mis võimaldab eristada sisemise hüübimiskaskaadi häireid isegi nende skriinimise etapis.

on laialdaselt kasutatav sõeltest plasma koagulatsiooni koagulatsioonikaskaadi väliste ja üldiste radade seisundi hindamiseks. Normaalsed PV väärtused täiskasvanutel on 11-15 sekundit, vastsündinutel - 13-18 sekundit. PV tõus näitab kalduvust hüpokoagulatsioonile ja võib sõltuda individuaalsetest põhjustest:

• Protrombiini kompleksi ühe või mitme teguri puudulikkus, mida täheldatakse selliste harvaesinevate pärilike koagulopaatiate korral nagu hüpoprokonvertineemia (VII faktori puudulikkus) ja hüpoprotrombineemia (II faktori puudulikkus);
• Faktori X puudulikkus amüloidoosi (mille amüloid omastab) ning faktori V ja VII puudulikkus nefrootilise sündroomi korral (mis erituvad uriiniga);
• Protrombiini kompleksfaktorite sünteesi vähenemine maksahaiguste korral;
• Enteropaatia ja soole düsbakterioos, mis põhjustab K-vitamiini vaegust;
• K-vitamiini antagonistidega ravimisel;
• DIC-ga (protrombiinikompleksi tegurite tarbimine);
• Kroonilise pankreatiidi, kõhunäärme- ja põievähiga;
• Fibrinogeeni taseme langus veres (kuni 1 g / l ja alla selle);
• Ägeda ja kroonilise leukeemia korral (DIC arengu tõttu);
• Antitrombiini või antitromboplastiini taseme tõusuga;
• Ravimid (anaboolsed steroidid, antibiootikumid, suurtes annustes aspiriin, lahtistid, metotreksaat, nikotiinhape, kinidiin, kiniin, tiasiiddiureetikumid, tolbutamiid).

PV lühenemine viitab kalduvusele hüperkoagulatsioonile ja seda võib täheldada alajäsemete süvaveenide tromboosi algstaadiumis koos polütsüteemiaga raseduse viimastel kuudel.

Antikoagulantravi kontroll
PT määramine mängib juhtivat rolli kaudsete antikoagulantidega ravi kontrollimisel. Uuringu tulemusi väljendatakse traditsiooniliselt sekundites. PV määramisel kasutatakse vere hüübimisaktivaatorit tromboplastiini. Kui labor(id) kasutab täna üht ja homme teist tromboplastiini, on patsiendi PT päevade lõikes erinev. Tromboplastiini mõju välistamiseks PV määramise tulemustele kasutatakse indikaatorit - INR rahvusvahelist normaliseeritud suhet, mis võimaldab võrrelda erinevates laborites saadud tulemusi ja tagab kaudsete antikoagulantidega ravi täpsema jälgimise. INR arvutatakse järgmise valemiga:

Patsiendi INR = [patsiendi PT (sek) / kontroll-PT (sek)] rahvusvaheline tundlikkuse indeks

Kaudsete antikoagulantidega jälgimise peamine eesmärk on verejooksu vältimine. Antikoagulandi annust tuleb kohandada, et säilitada INR nõutaval tasemel, sõltuvalt ravi määramise põhjusest. Enamikul patsientidel tuleb INR hoida tasemel 2-3,0. INR-i tuleb jälgida iga 2-3 nädala järel.

Antikoagulantide taseme kontrollimiseks on WHO välja töötanud järgmised soovitused

Kliiniline seisund
Primaarse ja korduva süvaveenide tromboosi ja kopsu trombemboolia ennetamine	2,5 (2,0-3,0)
Preoperatiivne ettevalmistus: kirurgilised sekkumised puusapiirkonnas	2,0 (2,0-3,0)
Kõik muud kirurgilised sekkumised	2,5 (1,5-2,5)
Süvaveenide tromboosi, kopsu trombemboolia ravi ja korduva veenitromboosi ennetamine.	3,0 (2,0-4,0)
Arteriaalse trombemboolia ennetamine, sealhulgas kunstlike klappidega patsientidel	3,5 (3,0-4,5)
kõrge keskmine lühike	2,5 — 3,0 2,0 — 3,0 1,6 — 2,0

See on tähtsuselt kolmas põhisõeluuringu test. Test iseloomustab hüübimisprotsessi viimast etappi - fibrinogeeni muutumist fibriiniks trombiini toimel, seda mõjutab fibrinogeeni kontsentratsioon plasmas ja fibriini lagunemissaadused (PDF).

Kvantifitseerimine Claussi meetodil on hemostaasi uurimise põhitest. Fibriini moodustumine ja stabiliseerumine on trombi moodustumise viimane etapp, mille käigus lahustuv fibrinogeen muudetakse trombiini ja faktori XIII toimel lahustumatuks fibriiniks.
Ateroskleroosi korral suureneb fibrinogeeni tase pidevalt, mida on raske ravimitega korrigeerida. Selle tulemusena suureneb südame-veresoonkonna haiguste risk fibrinogeeni algsisalduse tõusuga vahemikus 3,0-4,5 g/l. Leiti, et südame-veresoonkonna haigustega patsientide vereplasmas fibrinogeeni taseme tõus eelneb müokardiinfarkti ja insuldi tekkele. Fibrinogeeni taseme ja nende tüsistuste tekke vaheline seos on eriti selge noorte ja keskealiste patsientide puhul. Fibrinogeeni taseme määramine on kõige tundlikum test perifeersete arterite haiguse asümptomaatilise staadiumi tuvastamiseks.

Spetsiaalsed testid hemostaasi plasma seose hindamiseks

VIII faktor sünteesitakse maksas, põrnas, endoteelirakkudes, leukotsüütides, neerudes ja osaleb plasma hemostaasi esimeses faasis (protrombinaasi moodustumine). VIII faktori määramine mängib hemofiilia A diagnoosimisel olulist rolli.
Hemofiilia A teke on tingitud VIII faktori kaasasündinud puudulikkusest. Samal ajal puudub patsientide veres VIII faktor (hemofiilia A) või see on funktsionaalselt defektses vormis, mis ei saa osaleda vere hüübimises (hemofiilia A+). Hemofiilia A" esineb 90-92% patsientidest ja hemofiilia A + - 8-10%. Hemofiiliaga patsientidel on F VIII:C sisaldus vereplasmas järsult vähenenud ja VIII-vWF kontsentratsioon selles on normi piires. Seetõttu jääb verejooksu kestus hemofiilia A korral normi piiresse ja von Willebrandi tõve puhul pikeneb.
A-hemofiilia on pärilik haigus, kuid 20-30% hemofiiliat põdevatel patsientidel ei anna ema sugulaste perekonna ajalugu teavet. Seetõttu on VIII faktori aktiivsuse määramisel suur diagnostiline väärtus. Sõltuvalt VIII faktori aktiivsuse tasemest jagunevad hemofiilia A järgmised kliinilised vormid: äärmiselt raske vorm (VIII faktori aktiivsus 0 kuni 1%); raske vorm (VIII faktori aktiivsus 1 kuni 2%); mõõdukas raskusaste (VIII faktori aktiivsus 2 kuni 5%); kerge vorm või subhemofiilia (VIII faktori aktiivsus 6–24%).
Umbes kolmandikul A-hemofiilia kandjatest on VIII faktori aktiivsus 25–49%. Kerge vormiga ja hemofiilia A kandjatega patsientidel täheldatakse haiguse kliinilisi ilminguid alles pärast vigastusi ja kirurgilisi sekkumisi. VIII faktori aktiivsuse minimaalne hemostaatiline tase veres operatsioonide jaoks on 25%, väiksema sisalduse korral on operatsioonijärgse verejooksu risk äärmiselt kõrge. VIII faktori aktiivsuse minimaalne hemostaatiline tase veres verejooksu peatamiseks on 15-20%, väiksema sisalduse korral on verejooksu peatamine ilma VIII faktorit patsiendile manustamata võimatu. Von Willebrandi tõve korral on VIII faktori aktiivsuse minimaalne hemostaatiline tase verejooksu peatamiseks ja operatsiooni läbiviimiseks 25%.
DIC-s, alates II staadiumist, on VIII faktori aktiivsus selge tarbimise koagulopaatia tõttu vähenenud. Raske maksahaigus võib viia VIII faktori madala tasemeni veres. VIII faktori sisaldus väheneb von Willebrandi tõve korral, samuti VIII faktori vastaste spetsiifiliste antikehade olemasolul. VIII faktori aktiivsus suureneb oluliselt pärast splenektoomiat. Kliinilises praktikas on väga oluline eristada hemofiiliat von Willebrandi tõvest.

Koagulogrammi parameetrid hemofiilia ja von Willebrandi tõve korral

Indeks	Hemofiilia	Haigus Willebrand
hüübimisaeg	pikendatud	Norm
Verejooksu kestus	Norm	pikendatud
Trombotsüütide agregatsioon ristotsetiiniga	Norm	vähendatud
protrombiini aeg	Norm	Norm
APTT	pikendatud	Norm
trombiini aeg	Norm	Norm
fibrinogeen	Norm	Norm

VII faktor (prokonvertiin või konvertiin)"α2-globuliinid". VII faktori kaasasündinud puudulikkus põhjustab hemorraagilise diateesi (Aleksandri tõbi) arengut.
Hüpoprokonvertineemia omandatud vormid esinevad imikutel esimestel elupäevadel, maksakahjustusega patsientidel ja ka kaudsete antikoagulantide toime tagajärjel. Prokonvertiini aktiivsus vereplasmas väheneb viirusliku hepatiidi, maksatsirroosi, ägeda alkohoolse hepatiidi, kroonilise püsiva hepatiidiga patsientidel. Maksatsirroosiga patsientidel on prokonvertiini taseme languse ja protsessi tõsiduse vahel selge seos. Lühikese poolväärtusaja tõttu on prokonvertiini aktiivsuse langus parim marker maksapuudulikkuse tekkeks.
VII faktori aktiivsuse minimaalne hemostaatiline tase veres operatsioonideks on 10-20%, väiksema sisalduse korral on operatsioonijärgse verejooksu risk äärmiselt kõrge. VII faktori aktiivsuse minimaalne hemostaatiline tase veres verejooksu peatamiseks on 5-10%, väiksema sisalduse korral on verejooksu peatamine ilma VII faktorit patsiendile manustamata võimatu.
DIC-ga alates II etapist on VII faktori aktiivsus selgelt vähenenud tarbimise koagulopaatia tõttu.

(fibriini stabiliseeriv faktor, fibrinaas, Lucky-Lorandi faktor) viitab β2-glükoproteiinidele. Kaasasündinud XIII faktori puudulikkus pärineb autosoomselt retsessiivselt valdavalt meestel. Fibrinaasi puudulikkuse esimene kliiniline tunnus 80% patsientidest on pikaajaline (päevade, mõnikord nädalate jooksul) verejooks nabahaavast. Verejooks avaldub petehhiaalse tüübi järgi. Tekivad ajuverejooksud. Märgitakse haavade aeglast paranemist, sageli moodustuvad postoperatiivsed songad, luumurrud paranevad halvasti. Kõik koagulogrammi parameetrid, välja arvatud XIII faktori taseme langus plasmas, jäävad normaalsesse vahemikku. Omandatud XIII faktori defitsiit avastatakse patsientidel, kellel on C-avitaminoos, kiiritushaigus, leukeemia, tsirroos, hepatiit, maksa metastaasidega vähk, lümfoom, DIC-sündroomid ja neil, kes on läbinud adrenalektoomia; pärast kaudse toimega antikoagulantide võtmist väheneb selle aktiivsus. XIII faktori vähenemine veres nende haiguste korral on tingitud selle sünteesi või tarbimise rikkumisest DIC-i protsessis.
Faktori XIII aktiivsust soovitatakse uurida pikaajaliste ja halvasti paranevate haavade ja luumurdude korral, kuna mõnel juhul võivad sellised nähtused olla seotud selle faktori puudulikkusega, kuna faktor XIII stimuleerib fibroblastide arengut.
XIII faktori aktiivsuse minimaalne hemostaatiline tase veres verejooksu peatamiseks on 1-2%, väiksema sisalduse korral on verejooksu peatamine ilma XIII faktorit patsiendile manustamata võimatu.
Trombembooliliste tüsistuste, ateroskleroosiga patsientidel, pärast kirurgilisi sekkumisi, sünnitanud naistel pärast adrenaliini, glükokortikoidide, pituitriini manustamist suureneb fibrinaasi aktiivsus sageli.

Faktor V resistentsus aktiveeritud C-valgu suhtes. Mitmete uute, kuni viimase ajani teadmata, kuid laialt levinud trombofiiliate hulka kuulub seisund, mis on põhjustatud faktori V resistentsusest aktiveeritud valgu C suhtes. Pärilik resistentsus aktiveeritud valgu C suhtes (RAPS) on primaarse trombofiilia kõige levinum põhjus. Tromboosihaigete seas esineb seda patoloogiat 30–60% ja kliiniliselt terve elanikkonna hulgas 10–15%. 90% juhtudest on RAPS põhjustatud faktori V geeni punktmutatsioonist, mis põhjustab arginiini asendumist glütsiiniga faktori V molekulis positsioonis 506 – aktiveeritud valgu C (APC) peamises toimekohas. Selle anomaalia tulemuseks on madal tundlikkus, st faktori Va (faktor V Leiden) resistentsus selle APS-i inaktiveerimisele. Kui faktori Va prokoagulantne aktiivsus on säilinud, põhjustab see trombiini teket ja trombofiilset seisundit. Kliiniliste ilmingute kohaselt on RAPS healoomulisem kui kaasasündinud puudulikkus. , valk C ja proteiin S. RAPS-i tromboosi kõige olulisemad kliinilised riskitegurid on operatsioon, rasedus ja suukaudsete rasestumisvastaste vahendite kasutamine. On kindlaks tehtud, et umbes 30% operatsioonijärgsest tromboosist on tingitud RAPS-ist. Raseduse ajal võib RAPS avalduda platsenta veresoonte tromboosi ja emakasisese loote surmana. Leideni mutatsiooniga naistel, kes kasutavad suukaudseid rasestumisvastaseid vahendeid, on tromboosi tekkerisk 30 korda suurem. Epidemioloogiliste uuringute tulemused näitavad RAPS-i sagedast kombinatsiooni valgu S või C-valgu päriliku või omandatud puudulikkusega. On selge, et selliste kombineeritud defektide korral suureneb tromboosi tekkerisk. On ülimalt oluline, et RAPS-i kõrge levimus üldpopulatsioonis tingib vajaduse selle patoloogia laboratoorsete uuringute järele mitte ainult tromboosiga patsientidel, vaid ka asümptomaatilistel inimestel, kellel on kõrge tromboosirisk. Faktori V resistentsuse korral aktiveeritud valgu C suhtes on APS-indeksi väärtus alla normi alumise piiri. Funktsionaalsete testide tulemuste kinnitamiseks on välja töötatud mitmeid polümeraasi ahelreaktsioonil põhinevaid meetodeid, et diagnoosida faktor Va resistentsust aktiveeritud C-valgu suhtes.