Laboratoorsed diagnostikad
Laboratoorsed diagnostikad Sidekoe süsteemsed kahjustused on peamiselt suunatud põletikuliste ja destruktiivsete protsesside aktiivsuse määramisele selles. Patoloogilise protsessi aktiivsus nendes süsteemsetes haigustes põhjustab muutusi vereseerumi valkude sisus ja kvalitatiivses koostises.
Glükoproteiinide määramine. Glükoproteiinid (glükoproteiinid) on biopolümeerid, mis koosnevad valkude ja süsivesikute komponentidest. Glükoproteiinid on osa rakuseinast, ringlevad veres transpordimolekulidena (transferriin, tseruloplasmiin), glükoproteiinide hulka kuuluvad mõned hormoonid, ensüümid ja immunoglobuliinid.
Reumaatilise protsessi aktiivse faasi soovituslik (kuigi kaugeltki mitte spetsiifiline) on seromukoidvalgu sisalduse määramine veres mis sisaldab mitmeid mukoproteiine. Seromukoidi üldsisaldus määratakse valgukomponendiga (biureti meetod), tervetel inimestel on see 0,75 ± 0,025 g/l. Nüüd on võimalik mitte ainult määrata seromukoidi kogusisaldust, vaid ka seda fraktsioneerida. Seega on praegu eraldatud 9 üksikut valku, mis on osa seromukoidist. Seromukoidsete verevalkude hulka kuulub haptoglobiin, mis on osa α2-globuliini fraktsioonist. Haptoglobiinil on võime hemoglobiiniga seonduda. Samal ajal imendub haptoglobiini-hemoglobiini kompleks makrofaagide süsteemi (mononukleaarsete fagotsüütide süsteem) ja takistab seeläbi raua kadu erütrotsüütide hävitamisel. Tavaliselt on haptoglobiini sisaldus 1,0 ± 0,032 g/l. Difuussete sidekoehaiguste ägedas faasis täheldatakse selle valgu sisalduse järsku suurenemist proportsionaalselt protsessi aktiivsuse ja levimusega. See on püsivam diagnostiline märk kui näiteks ESR-i tõus. Haptoglobiini kvantifitseerimiseks kasutatakse elektroforeesi meetodeid. Praeguseks on avastatud mitmeid haptoglobiini variante, kuid reumaatiliste haigustega patsientidel ei ole võimalik leida ühe või teise haptoglobiini tüübi ülekaalu. Teatud diagnostiline väärtus on vaske sisaldava vere glükoproteiini - tseruloplasmiini - avastamine reumaatiliste haigustega patsientide veres. Tseruloplasmiin on transportvalk, mis seob veres vaske ja kuulub α2-globuliinide hulka. Määrake tseruloplasmiin deproteiniseeritud seerumis, kasutades parafenüüldiamiini. Tavaliselt on selle sisaldus 0,2-0,05 g / l, põletikulise protsessi aktiivses faasis suureneb selle tase vereseerumis. Põletiku aktiivsust difuussete sidekoehaiguste korral saab hinnata mitte ainult vereseerumi valgukomponentide kontsentratsiooni järgi, vaid ka selles sisalduvate glükoproteiinide, sealhulgas heksooside (D-galaktoos, D-mannoos, D) süsivesikute sisalduse järgi. -glükoos), pentoosid (D-ksüloos, L-arabinoos), desoksüsuhkur (L-fruktoos, L-ramnoos); Glükoproteiinide tüüpiline komponent on ka neuramiin (siaal)hape.
Heksoosisisalduse määramine . Kõige täpsemaks peetakse meetodit, mis kasutab värvireaktsiooni ortsiini või resortsinooliga, millele järgneb värvilahuse kolorimeetria ja kalibreerimiskõvera põhjal arvutamine. Heksooside kontsentratsioon suureneb eriti järsult põletikulise protsessi maksimaalse aktiivsuse korral.
Fruktoosisisalduse määramine. Selleks kasutatakse reaktsiooni, mille käigus glükoproteiini ja väävelhappe interaktsiooni produktile lisatakse tsüsteiinvesinikkloriid (Dische meetod). Fruktoosi normaalne sisaldus on 0,09 ± 0,01 g/l.
Sialhapete sisalduse määramine. Põletikulise protsessi maksimaalse aktiivsuse perioodil reumaatiliste verehaigustega patsientidel suureneb siaalhapete sisaldus, mis määratakse kõige sagedamini Hessi meetodil (reaktsioon). See reaktsioon põhineb seerumi glükoproteiinidest lõhustatud siaalhapete kombinatsioonist äädikhappe väävli reagendiga värvilise produkti moodustumisel, mis määratakse lahuse (värvi) järgneva kolorimeetria abil. Normaalne siaalhapete sisaldus on 0,6 ± 0,02 g/l.
Fibrinogeeni sisalduse määramine. Põletikulise protsessi maksimaalse aktiivsuse korral reumaatiliste haigustega patsientidel võib fibrinogeeni sisaldus veres tõusta, mis tervetel inimestel ei ületa tavaliselt 4,0 ± 0,03 g/l. Fibrinogeeni sisaldus määratakse kas kaalumeetodil, vereplasmast eraldatud trombi kaalumisel või Bidwelli ensümaatilisel meetodil.
C-reaktiivse valgu määramine. Reumaatiliste haiguste korral ilmneb patsientide vereseerumis C-reaktiivne valk, mis tervete inimeste veres puudub. See sai selle nime tänu oma võimele astuda sadestumisreaktsiooni pneumokoki C-disahhariidiga. Elektroforeesi käigus liigub see koos (32-globuliinidega. Selle esinemine veres määratakse Anderseni ja McCarthy meetodil sadestamisreaktsiooniga spetsiifilise immuunseerumiga. Tuleb märkida, et C-reaktiivse valgu tuvastamine ei ole samuti reumaatilise haiguse spetsiifiline diagnostiline tunnus, kuna see võib ilmneda kopsupõletiku, streptokokkide ja stafülokoki infektsioonide, müokardiinfarktiga patsientide veres.Reumatoidartriidi ja süsteemse erütematoosluupuse korral võib tuvastada reumatoidfaktorit, mis on M-klassi immunoglobuliin. patsientide veres.G ja A, seega oleks õigem rääkida reumatoidfaktoritest.
Reumatoidfaktori määratlus. Reumatoidfaktor määratakse kas latekstesti abil, kui patsiendi seerumit uuritakse aglutinatsioonireaktsioonis lateksiosakestele adsorbeerunud inimese y-globuliiniga, või Waaler-Rose reaktsiooni, kus küüliku y-globuliin adsorbeerub lamba erütrotsüütidele. Tulemusi võetakse arvesse maksimaalse seerumi lahjenduse (tiitri) alusel, mille juures on veel võimalik reumatoidfaktorit tuvastada. Tervetel inimestel ei ületa maksimaalne tiiter 1:64. Reumatoidfaktori tuvastamisel on vaid suhteline diagnostiline väärtus, sest seda saab tuvastada mitmete teiste haiguste, nagu hepatiit, süüfilis, tuberkuloos ja kasvajad, puhul.
Luupusfaktori määramine. Verest saab tuvastada luuüdi punktsioone, süsteemse erütematoosluupusega patsientide eksudaate, luupusfaktorit (LE-erütematoosluupuse rakud), mille päritolu selgitatakse järgmiselt. LE-globuliini loodusfaktori esinemise tõttu patsientide vereseerumis paisuvad vererakkude ja kudede tuumad, kromatiin kaotab oma struktuuri ja muutub amorfseks massiks. See materjal on organismile juba võõras, mistõttu leukotsüüdid fagotsüteerivad seda. LE rakud leitakse mikroskoopiliselt, need on tavaliselt neutrofiilsed leukotsüüdid, mille tsütoplasmas on üks või mitu homogeenset punakasvioletset (asure-eosiini plekk) moodustist. Näha on ka vabalt lebavaid kehasid, mille värvus ja struktuur on identsed rakkudes leiduvatega. Samuti võite leida luupuse kehasid, mida ümbritsevad neutrofiilid, nn rosetid. LE-rakke tuleks eristada Tart-rakkudest, mis on neutrofiilsed leukotsüüdid, mis on endasse haaranud säilinud kromatiinivõrgu kontuuridega tuuma jäänused. LE-rakkude otsimiseks saadakse määrdudes kõrge leukotsüütide kontsentratsioon, mis seejärel Romanovski järgi värvitakse. LE-rakkude tuvastamise määr süsteemse erütematoosluupusega patsientidel on vahemikus 40–95%. LE nähtust võib täheldada, kuigi palju harvemini, raske maksakahjustuse ja ägeda leukeemia korral, kuid nende haiguste korral leitakse LE-rakke ebajärjekindlalt ja need on üksikud.
nukleaarsed reaktsioonid. Hiljuti on diagnostilise tähtsusega omandanud tuumavastaste reaktsioonide uurimine, mille hulgas on põhikohal DNA, desoksüribonukleotiidi ja raku tuumade vastaste antikehade määramine. Need uuringud viiakse läbi immunofluorestsentsi meetodil.
Üldine vereanalüüs. Sidekoe süsteemsete haigustega patsientide vereanalüüsis leitakse ESR-i suurenemine, mõnikord neutrofiilne leukotsütoos. Tavaliselt esinevad need muutused reuma korral maksimaalse aktiivsuse staadiumis. Süsteemse erütematoosluupuse korral võib leukopeeniat täheldada ka leukotsüütide valemi nihkumisega vasakule kuni müelotsüütideni. Pikaajaliste ja pidevalt korduvate reumavormide korral tuvastatakse patsientidel hüpo- või normokroomne aneemia. Aneemiat esineb ka reumatoidartriidi ja süsteemse erütematoosluupuse korral.
immunoloogilised testid. Sidekoe difuussete haiguste immunoloogiliste testide muutused hõlmavad lisaks eelnevalt kirjeldatutele ka streptokokivastaste antikehade tiitrite tõusu (antistreptohüaluronidaas ja antistreptokinaas üle 1:300, antistreptolüsiin üle 1:250). Streptokokivastaste antikehade tiitrite tõus muutub eriti tõsiseks näitajaks infektsioonikolde puudumisel organismis ja väga kõrgete tiitrite korral (1:1500 ja üle selle). Mõnikord võib reumaatilise palaviku korral streptokoki antikehade tase jääda normaalseks.
Süsivesikute rühmadega seotud valgud moodustavad ulatusliku ühendite klassi, milles eristatakse kahte suurt rühma:
1. Glükoproteiinid - proteesrühmana väikeses koguses süsivesikuid (kuni 15%) sisaldavad valgud, mis on kovalentsete sidemetega seotud aminohapete radikaalidega. Süsivesikute osa sisaldab heksoose (galaktoos, mannoos, harva glükoos), pentoose (ksüloos, arabinoos), desoksüsuhkruid (fukoos, ramnoos), aminosuhkruid (atsetüülgalaktoosamiin, atsetüülglükoosamiin), neuramiinhapet ja selle äädikhappeestreid (siaalhapped). Enamikul neist valkudest on kergelt happelised omadused. Glükoproteiinide rühmas eristatakse seromukoide (seroglükoide), millel on väljendunud happelised omadused ja mis lahustuvad perkloor-, trikloroäädik- ja sulfosalitsüülhappes. See fraktsioon, mis moodustab 1% kõigist vadakuvalkudest, sisaldab 12% kõigist plasma süsivesikutest.
2. Proteoglükaanid (mukopolüsahhariidid) - hüdrofiilsed ühendid, mis sisaldavad 20-80% süsivesikuid. Proteoglükaanide süsivesikute komponente nimetatakse glükoosaminoglükaanideks. Glükoosaminoglükaane on 7 tüüpi, millest 5 tüüpi sisaldavad glükuroonhapet (nende hulka kuuluvad hüaluroonhape, kondroitiin-4-sulfaat ja kondroitiin-6-sulfaat, hepariin ja heparaansulfaat), kuues tüüp (dermataansulfaat) sisaldab iduronhapet (galakturoonhape) hape , seitsmes (kerataansulfaat) - galaktoos. Siaalhappeid, mannoosi, ksüloosi on minimaalses koguses. Proteoglükaanidel on tugevalt väljendunud happelised omadused suure hulga karboksüülrühmade ja väävelhappejääkide tõttu.
Süsivesikuid sisaldavate valkude sisalduse uurimisel on võimalik kasutada mitmeid metoodilisi lähenemisviise:
1. Üksikute ägeda faasi glükoproteiinide määramine spetsiifilise ensümaatilise või immunoloogiline meetodid.
2. Rikkalike glükoproteiinide tuvastamine elektroforeetiline fraktsioonid.
3. Süsivesikute-valgu komplekside uurimine nende valguosa järgi ( hägune ja nefelomeetriline valgu türosiini kohta).
4. Valkudega seotud süsivesikute hulga määramine. Selle rühma meetodid on kõige sobivamad biokeemiliste laborite jaoks. Verest saab määrata mis tahes süsivesikute komponente, kuid siaalhapete ja valkudega seotud heksooside määramine on lihtsam ja odavam:
- valguga seotud heksooside üldkogus vastab glükoproteiinide sisaldusele ning seroglükoidide hulk määratakse perkloorhappes lahustuvate ja fosfovolframhappes lahustumatute heksooside kontsentratsiooni järgi:
- proteoglükaanide taseme uurimisel sadestatakse süsivesikute komponent eelnevalt kvaternaarsete amiinidega, eriti tsetüültrimetüülammooniumiga, seejärel määratakse glükoosaminoglükaanid spetsiifilise reaktsiooniga:
Värvuse erinevus pärast karbasooli ja ortsiini reaktsioone võimaldab hinnata dermataansulfaadi suhtelist sisaldust proovis. Puhta dermataansulfaadi proovi puhul on glükoosaminoglükaanide sisalduse ja nende kontsentratsiooni suhe vastavalt karbasooli reaktsioonile, mis on määratud ortsiini reaktsiooniga, 0,67. Teiste glükoosaminoglükaanide (välja arvatud kerataansulfaat) juuresolekul koefitsient suureneb.
Nagu ühtne kiideti heaks resortsinoolmeetod siaalhapete kontsentratsiooni määramiseks ja ortsiinmeetod kõigi glükoproteiinide hulka kuuluvate heksooside ja seroglükoididega seotud heksooside määramiseks.
Resortsinooli kontsentratsiooni määramise meetod
siaalhapped (Svennerholmi järgi)
Põhimõte
Plasma glükoproteiinide kuumutamisel trikloroäädikhappega eralduvad siaalhapped, mis omakorda hüdrolüüsitakse, moodustades neuramiinhappe. Resortsinool vasesoolade juuresolekul vesinikkloriidhappe keskkonnas annab neuramiinhappega sinise värvuse.
Normaalväärtused
Sialhapete kontsentratsioon veres suureneb erinevate põletikuliste protsesside (endokardiit, osteomüeliit), tuberkuloosi, leukeemia, lümfogranulomatoos, nefroosi korral, suureneb järsult ajukasvaja, müokardiinfarkti, maksa parenhüümi kahjustuse, kollagenooside jt korral. protsessid, mis tekivad sidekoe hävitamisega.
Sialhapete taseme langust seerumis on täheldatud kahjuliku aneemia, hemokromatoosi, Wilsoni tõve ja kesknärvisüsteemi degeneratiivsete protsessidega patsientidel.
Seromukoidide sisalduse ja üldkoguse määramine
glükoproteiinide kogus orcine meetodil
Põhimõte
Glükoproteiinid sadestatakse koos seerumi- või plasmavalkudega alkoholiga, sade pestakse maha, lahustatakse leelis ning pärast hüdrolüüsi väävelhappega määratakse heksooside kontsentratsioon ortsiiniga reageerimisel, mis vastab glükoproteiinide sisaldusele.
Seromukoidide määramiseks sadestatakse valgud perkloorhappega, seromukoide aga ei sadestata. Seejärel sadestatakse supernatandist fosfovolframhappega seromukoidid, sade pestakse maha ja pärast leelises lahustamist määratakse heksooside tase.
Normaalväärtused
Kliiniline ja diagnostiline väärtus
Heksoosi glükoproteiinide arv suureneb koos erinevate põletikuliste protsessidega: tuberkuloos, pleuriit, kopsupõletik, äge reuma, glomerulonefriit, diabeet, müokardiinfarkt, podagra, pahaloomulised kasvajad. Eriti oluline on glükoproteiinide kontsentratsiooni määramine aeglaste haiguste korral, samas kui aktiivsuse suurenemine näitab protsessi aktiveerumist, kuigi kliinilised sümptomid ei pruugi veel ilmneda.
Seromukoidide heksooside sisalduse suurenemist täheldatakse kõigis põletikulistes ja nekrobiootilistes protsessides: müokardiinfarkt, pahaloomulised kasvajad, krooniline koletsüstiit, hävitav kopsutuberkuloos, reuma.
Näitajate vähenemine tuvastatakse nakkusliku hepatiidi, hepatotsellulaarse düstroofia ja hulgiskleroosi korral.
Glükosüülitud hemoglobiin
Hemoglobiin, nagu ka teised valgud, läbib glükoosi või mõne muu redutseeriva monosahhariidi lahuses hoidmisel mitteensümaatilise glükosüülimise, see tähendab, et see lisab oma struktuuri süsivesikuid, moodustades Schiffi alused. Hemoglobiini glükosüülimise aste vastab otseselt inkubatsiooniajale ja glükoosi kontsentratsioonile söötmes. Seega iseloomustab glükosüülitud hemoglobiini (tähistatud kui HbA 1c) sisaldus vere glükoosikontsentratsiooni keskmist taset 4-6 nädala jooksul, st perioodi jooksul, mis on proportsionaalne hemoglobiini molekuli elueaga (poolväärtusaeg on 90-). 100 päeva).
Eristatakse järgmisi normaalseid hemoglobiini tüüpe: A 1(moodustab 96-98% kogu valgukogusest), A2 (2‑5%), A 3 (<1%), F(1-2%). Hemoglobiin A 1 koosneb kolmest komponendist: HbA 1a, HbA 1b ja HbA 1c. Viimane komponent on glükosüülitud hemoglobiin ja annab tugeva korrelatsiooni suhkurtõve astmega.
1. Kromatograafiline- kõige täpsem, kuid aeganõudev ja nõuab spetsiaalseid riistu ja reaktiive.
2. Elektroforeetiline- kasutatakse erinevaid meediume.
3. Keemilised meetodid, mis kasutavad valgu ja monosahhariidijäägi vahelise sideme hüdrolüüsi.
Glükosüülitud hemoglobiini taseme määramine
reaktsioonil tiobarbituurhappega
Põhimõte
Normaalväärtused
| Seerum | 4,5‑6,1% |
Kliiniline ja diagnostiline väärtus
Glükosüülitud hemoglobiini tase tõuseb suhkurtõve korral ja iseloomustab ravi efektiivsust. Samal ajal näitab HbA 1c kontsentratsiooni tõus kuni 8–10% hästi kompenseeritud, kuni 10–12% - umbes osaliselt kompenseeritud, üle 12% - kompenseerimata suhkurtõbe.
Indikaatori langust täheldatakse vere regenereerimisel pärast verekaotust.
- < Назад
MUUSEUM "ESIMESE LINNA KLIINILINE KIIRHOIDLA"
PÕHJARIIGI MEDITSIINIÜLIKOOL
KLIINILISE LABORIDIAGNOOSI KURSUS
Üldvalk, selle tähendus ja määramismeetodid
Interniarsti poolt läbi viidud:
Gernet M.M.
Arhangelsk 2008
SISSEJUHATUS
Klassifikatsioon
Plasma valgud
Albumiinid
Globuliinid
Kliiniline ja diagnostiline väärtus
Hüpoproteineemia
Hüperproteineemia
Meetodid üldvalgu määramiseks vereseerumis
Kasutatud kirjanduse loetelu
SISSEJUHATUS
Valgud on kõrgmolekulaarsed orgaanilised lämmastikku sisaldavad ühendid, mis koosnevad enam kui 20 tüüpi alfa-aminohapetest. Tingimuslik piir suurte polüpeptiidide ja valkude vahel on molekulmass 8000-10000. Plasma valke sünteesitakse peamiselt maksas, plasmarakkudes, lümfisõlmedes, põrnas ja luuüdis.
Inimese vereplasma sisaldab rohkem kui 100 erinevat valku, mis erinevad päritolu ja funktsiooni poolest. 9-10% vereplasma kuivjäägist moodustavad valgud 6,5-8,5%.
Klassifikatsioon
Lihtne (valgud) (sisaldab ainult aminohappeid)
Kompleks (valgud) (aminohapped ja mitteaminohappelised komponendid: heem, vitamiinide derivaadid, lipiidid või süsivesikud)
Fibrillaarne (moodustab palju tihedaid kudesid)
Globulaarne (albumiinid (4-5%), globuliinid (2-3%), fibrinogeen (0,2-0,4%)
Seal on järgmised valkude funktsionaalsed klassid:
Transpordivalgud (transferriin)
Ägeda faasi valgud (C-reaktiivne valk)
Mitteägeda faasi valgud (albumiin, transferriin)
Komplement ja hüübimisfaktorid (komplement C4, VIII faktor)
Ensüümid (amülaas)
Antiensüüm (antitrombiin III)
Proteohormoonid (insuliin)
Immunoglobuliinid (IgG)
Valgud, mille funktsioonid pole hästi teada (alfa-glükoproteiinhape)
Plasmavalkude füsioloogiline funktsioon on hoida kolloidset osmootset rõhku, plasma puhvermahtu, mõnel juhul ka lipiidimolekulide, ainevahetusproduktide, hormoonide, ravimainete ja mikroelementide ladestumist (säilitamist). Mõned plasmavalgud täidavad ensümaatilist funktsiooni, immunoglobuliinid täidavad humoraalset immuunsust. Komplemendi komponendid ja C-reaktiivne valk on olulised mittespetsiifilise resistentsuse rakendamiseks, eriti bakteriaalsete infektsioonide korral. Tasakaal hüübimisfaktorite ja inhibiitorite vahel tagab, et veri on vigastuse korral normaalselt vedel ja hüübib kiiresti
Belvereplasma ki
Albumiinid:
Normaliseeritud väärtus on 56,5 - 66,8 (albumiin vereseerumis moodustab ligikaudu 60% koguvalgust. Albumiinid sünteesitakse maksas (umbes 15g / päevas), nende poolväärtusaeg on ligikaudu 17 päeva. Plasma onkootiline rõhk on 65 -80% tänu albumiinile.Albumiinid täidavad olulist funktsiooni paljude bioloogiliselt aktiivsete ainete, eelkõige hormoonide transportimisel.Nad on võimelised seonduma kolesterooli, bilirubiiniga.Märkimisväärne osa vere kaltsiumist on samuti seotud albumiiniga.Albumiinid on võimalik kombineerida erinevate ravimitega.
Võimalikud on nii kvalitatiivsed kui ka kvantitatiivsed muutused vereplasma albumiinis. Albumiini kvalitatiivsed muutused on selle valgufraktsiooni homogeense koostise tõttu väga haruldased; kvantitatiivsed muutused avalduvad hüper- ja hüpoalbumineemiana.
Hüperalbumineemiat täheldatakse dehüdratsiooniga raskete vigastuste, ulatuslike põletuste, koolera korral.
Hüpoalbumineemiad on primaarsed (vastsündinutel maksarakkude ebaküpsuse tõttu) ja sekundaarsed erinevate patoloogiliste seisundite tõttu, mis on sarnased hüpoproteineemiat põhjustavate seisunditega. Hemodilutsioon võib samuti mängida rolli albumiini kontsentratsiooni langetamisel, näiteks raseduse ajal. Albumiini sisalduse vähenemisega alla 22-24 g / l kaasneb kopsuturse teke.)
Globuliinid:
Alfa 1 - 3,5 - 6,0 (selle fraktsiooni põhikomponentide hulka kuuluvad b 1 -antitrüpsiin, b 1 - lipoproteiin, happeline b 1 - glükoproteiin) (Muutusi b 1 - globuliinide fraktsioonis täheldatakse ägeda, alaägeda ja kroonilise ägenemise korral põletikulised protsessid;maksakahjustus;kõik kudede lagunemise või rakkude proliferatsiooni protsessid.b 1 - globuliinide fraktsiooni vähenemist täheldatakse b 1 - antitrüpsiini defitsiidi, hüpo - b 1 - lipoproteineemia korral.
Alfa 2 - 6,9 - 10,5 (fraktsioon sisaldab b 2 - makroglobuliini, haptoglobiini, alipoproteiine A, B (apo-A, apo-B), C, tseruloplasmiini) (fraktsiooni b 2 - globuliinide suurenemist täheldatakse igat tüüpi ägedate haiguste korral põletikulised protsessid, eriti väljendunud eksudatiivse ja mädase iseloomuga (kopsupõletik, pleura empüeem, muud tüüpi mädased protsessid); haigused, mis on seotud sidekoe kaasamisega patoloogilisesse protsessi (kollagenoos, autoimmuunhaigused, reumaatilised haigused); pahaloomulised kasvajad; termilistest põletustest taastumise staadium; nefrootiline sündroom; vere hemolüüs in vitro. Fraktsiooni vähenemist täheldatakse suhkurtõve, pankreatiidi (mõnikord), vastsündinute mehaanilise päritoluga kaasasündinud ikteruse, toksilise hepatiidi korral. B 2 - globuliinid hõlmavad põhiosa ägeda faasi valkudest.Nende sisalduse suurenemine peegeldab stressireaktsiooni ja põletikuliste protsesside intensiivsust seda tüüpi patoloogiate puhul.
Beeta - 7,3 - 13,0 (b-fraktsioon sisaldab transferriini, hemopeksiini, komplemendi komponente, immunoglobuliine ja lipoproteiine) (beeta-globuliinide fraktsiooni suurenemine tuvastatakse primaarse ja sekundaarse hüperlipoproteineemia, maksahaiguste, nefrootilise sündroomi, veritsevate maohaavandite, hüpotüreoidismi korral). Beeta-globuliinide sisalduse vähenemine tuvastatakse gopo-beeta lipoproteineemia korral.
Gamma - 12,8 - 19,0 (g-fraktsioon sisaldab Ig-d (IgG, IgA, IgM IgD, IgE), seetõttu täheldatakse AT ja autoantikehade tootmisel immuunsüsteemi reaktsiooni ajal g-globuliinide sisalduse suurenemist: viirus- ja bakteriaalsete infektsioonide, põletike, kollagenoosi, kudede hävimise ja põletustega.Põletikulise protsessi aktiivsust peegeldav märkimisväärne hüpergammaglobulineemia on iseloomulik krooniliselt aktiivsele hepatiidile ja maksatsirroosile.G-globuliinide fraktsiooni suurenemist täheldatakse 88–92% kroonilise aktiivse hepatiidiga patsientidest (ja 60–65% patsientidest on see väga väljendunud - kuni 26 g / l ja üle selle).Peaaegu samu muutusi täheldatakse väga aktiivse ja kaugelearenenud maksatsirroosiga patsientidel. maks, kõige selle juures ületab g-globuliini sisaldus sageli albumiini sisaldust, mida peetakse halvaks prognostiliseks märgiks.
Teatud haiguste korral on võimalik g-globuliini fraktsiooni sisenevate valkude süntees ja verre ilmuvad patoloogilised valgud - paraproteiinid, mis tuvastatakse elektroforeesiga. Nende muutuste olemuse selgitamiseks on vaja immunoelektroforeesi. Sarnaseid muutusi täheldatakse hulgimüeloomi, Waldenströmi tõve puhul.
G-globuliinide sisalduse vähenemine on esmane ja sekundaarne.
Primaarset hüpogammaglobulineemiat on kolm peamist tüüpi: füsioloogiline (3-5 kuu vanustel lastel), kaasasündinud ja idiopaatiline. Sekundaarse hüpogammaglobulineemia põhjused võivad olla mitmed haigused ja seisundid, mis põhjustavad immuunsüsteemi ammendumist.
Albumiinide ja globuliinide sisalduse muutumise suuna võrdlemine valgu üldsisalduse muutustega annab alust järeldada, et hüperproteineemia on sagedamini seotud hüperglobulineemiaga, hüpoproteineemia aga tavaliselt hüpoalbumineemiaga. Varem kasutati laialdaselt albumiini ja globuliini suhte arvutamist, see tähendab albumiini fraktsiooni suuruse ja globuliini fraktsiooni suuruse suhet. Tavaliselt on see näitaja 2,5-3,5. Kroonilise hepatiidi ja maksatsirroosiga patsientidel väheneb see koefitsient 1,5-ni ja isegi 1-ni albumiinisisalduse vähenemise ja globuliinifraktsiooni suurenemise tõttu. Viimastel aastatel on järjest rohkem tähelepanu pööratud prealbumiinide sisalduse määramisele, eriti kriitilises seisundis elustamispatsientidel, kes on parenteraalsel toitumisel. Prealbumiini kontsentratsiooni langus on varajane ja tundlik valgupuuduse test patsiendi kehas.)
A/G suhet kasutatakse tavaliselt albumiini ja globuliinide suhte indeksina.
Selle koefitsiendi muutusi võib täheldada maksatsirroosi, glomerulonefriidi, nefrootilise sündroomi, ägeda hepatiidi, süsteemse erütematoosluupuse korral.
Valkude kontsentratsioon vereplasmas sõltub nende sünteesi ja organismist eritumise kiiruse ning jaotusmahu vahelisest suhtest.
Maksas moodustuvad paljud valgud, plasmarakud ja lümfotsüüdid sünteesivad immunoglobuliine, makrofaagid - komplementsüsteemi valgud. Madala molekulmassiga valkude passiivne kadu toimub neeruglomerulite ja sooleseina kaudu. Mõned neist valkudest imenduvad uuesti või imenduvad ja lagunevad soole limaskestas. Enamik plasmavalke kataboliseeritakse pärast pinotsütoosiga omastamist kapillaaride endoteelirakkudes või mononukleaarsetes fagotsüütides.
Valkude füsioloogilised rollid verd on palju, peamised neist on järgmised:
· Säilitada kolloid-onkootilist rõhku, säilitades veremahu, sidudes vett ja hoides seda, takistades selle väljumist vereringest;
Osaleda vere hüübimisprotsessides;
· Säilitada vere pH püsivus, moodustades ühe vere puhversüsteemi;
Ühendades paljude ainetega (ChS, bilirubiin jne), aga ka ravimitega, viivad nad need kudedesse.
Säilitada veres normaalne katioonide tase, moodustades nendega mittedialüüsitavaid ühendeid (näiteks 40-50% seerumi kaltsiumist on seotud valkudega, oluline osa rauast, vasest, magneesiumist ja muudest mikroelementidest on samuti seotud valgud);
· mängida olulist rolli immuunprotsessides;
Serveeri aminohapete reservina;
· Täitma reguleerivat funktsiooni (hormoonid, ensüümid ja muud bioloogiliselt aktiivsed valkained).
Toliniko-diagnostiline väärtus
Normoproteineemia – normaalne üldvalgusisaldus
Hüpoproteineemia - üldvalgu vähenemine
Hüperproteineemia - kõrge valgusisaldus
Hüpoproteineemia
1. Toiduvalgu ebapiisav tarbimine, mida tavaliselt täheldatakse alatoitluse, nälgimise, kasvajate, söögitoru ahenemise, seedetrakti talitlushäirete korral (toidu valgukomponentide seedimise ja imendumise halvenemise tõttu), näiteks pikaajalise põletiku korral sooleprotsessid.
A.A. Pokrovski sõnul võib isegi toidu tasakaalustamata aminohappeline koostis mõnikord põhjustada hüpoproteineemiat.
Normaalsete eluprotsesside tagamiseks kasutab organism vereplasma valkude albumiinifraktsiooni. Albumiini suurenenud tarbimisega (peamiselt onkootilist vererõhku põhjustav) tekib nn onkootiline ehk näljane turse. Üldiselt kaasneb vereplasma valgusisalduse vähenemisega alla 5 g sageli hüpoproteineemilise koe turse.
2. Valkude biosünteesi protsesside vähendamine (krooniline parenhüümne hepatiit, ägedad ja kroonilised haigused, pikaajalised mädanemisprotsessid, pahaloomulised kasvajad, raske türeotoksikoos jne).
3. Valgu kadu organismis ägeda ja kroonilise verejooksu ajal koos kapillaaride seinte järsult suurenenud läbilaskvusega (mürgiste kahjustustega verevalkude vabanemisel kudedesse), hemorraagiate, ulatuslike eksudaatide moodustumisega, efusioonidega seroossetes õõnsustes, ja tursed.
Valkude (peamiselt albumiinide) vabanemine vereringest toimub siis, kui neerufiltri töö on häiritud orgaaniliste neeruhaiguste (eriti nefroos ja amüloidoos) tõttu, mille puhul leidub valku peaaegu alati uriinis, samuti põletuste korral.
4. Defektoproteineemia (albumineemia) - kaasasündinud tseruloplasmiini puudumine või ebapiisav sisaldus vereplasmas Wilsoni tõve korral.
5. Naistel imetamise ajal ja raseduse viimastel kuudel.
6. Nefrootiline sündroom
7. Kwashiorkor (äge valgupuudus)
8. Retentsioonisoola sündroom
Hüperproteineemia
1. Tõsine dehüdratsioon
2. Kergest vedelikukaotusest tingitud vere paksenemine, mis tekib tugeva kõhulahtisuse, suurenenud higistamise, alistamatu oksendamise, diabeedi insipiduse, koolera, soolesulguse, generaliseerunud kõhukelmepõletiku, raskete põletuste, veepuuduse korral.
3. Kroonilise polüartriidi ja mõne ja mõne kroonilise põletikulise protsessi korral.
4. Püsivat hüperproteineemiat kuni 12 g% ja üle selle täheldatakse hulgimüeloomi (plasmatsütoom), Vandelstromi makroglobulineemia korral, mille puhul kolju lamedates luudes ilmuvad täiendavad kolded ja "ebanormaalsete", patoloogiliste valkude - paraproteiinide moodustumine.
Hüpoproteineemia on peaaegu alati seotud hüpoalbumineemiaga ja hüperproteineemia hüperglobulineemiaga.
Keha kompenseerib hüpoalbumineemiat hüperglobulineemiaga (isegi kui puudub retikuloendoteliaalsüsteemi ärritus), et säilitada kolloidse osmootse rõhu taset. Vastupidi, globuliinide suurenemist kompenseerib hüpoalbumineemia.
Oluline diagnostiline väärtus on vereseerumi üksikute fraktsioonide vaheliste kvantitatiivsete seoste väljaselgitamine. Nende uuring võimaldab haigusi eristada ka siis, kui üldvalgu sisaldus seerumis on muutumatu.
Meetodid üldvalgu määramiseks vereseerumis
Üldvalgu kontsentratsiooni võrdlusväärtused vereseerumis - 65-85 g / l
1. Lämmastik
2. Seerumi erikaalu määramine
3. Kaal (gravimeetriline), kui verevalgud sadestatakse, kuivatatakse konstantse massini ja kaalutakse analüütilisel kaalul.
4. Refraktomeetriline
5. Kolorimeetriline
6. Neflomeetriline
7. Polarimeetriline
8. Spektromeetriline
1. Refraktomeeter IRF - 454 B2M
on mõeldud valgu määramiseks vereseerumis, tserebrospinaalvedelikus, ravimite kontsentratsiooni kontrollimiseks, uriini tiheduse mõõtmiseks.
2. Cobasintegra - KokkuvalkGen.2
Katse põhimõte: kahevalentne vask reageerib leeliselises lahuses valgupeptiidsidemetega, moodustades iseloomuliku purpurse biureedikompleksi.
3. Vereseerumi valgufraktsioonide määramine elektroforeesiga tselluloosatsetaatkilel.
Puhverlahus on ette nähtud vereseerumi valkude elektroforeetiliseks eraldamiseks tselluloosatsetaatmembraanidel, millele järgneb valgufraktsioonide densitomeetriline määramine.
MEETODI PÕHIMÕTE
Valkude elektroforeetilise eraldamise põhimõte põhineb vereseerumi valgu molekulide erineval liikumiskiirusel kindla intensiivsusega konstantses elektriväljas. Eraldatud valgufraktsioonid värvitakse värvainega. Valgufraktsioonide värvuse intensiivsus on võrdeline nende arvuga.
ANALÜÜSITUD PROOVID
Seerum ei sisalda hemolüüsi, lipeemiat ega ole ikteriline. Vereseerumi valgufraktsioonid püsivad tihedalt suletud katseklaasis 18-25 °C juures 8 tundi, 2-8 °C juures 3 päeva, 20 °C juures 1 kuu.
ANALÜÜS
1. Elektroforeesi läbiviimine
1.1. asetage kuivad membraanid ettevaatlikult elektroforeesipuhvri pinnale, vältides nende kiiret sukeldumist, ja hoidke neid, kuni need on täielikult niisutatud. Puhastage niisutatud membraane õrnalt paksu filterpaberi lehtede vahel, et vältida nende kuivamist. Enne proovide pealekandmist on soovitav läbi viia preforeesi faas. Selleks tuleb membraan asetada elektroforeesikambrisse ja vool 10 minutiks valitud režiimis sisse lülitada. Preforeesi faasi võib asendada membraani pikaajalise leotusega puhverlahuses (mitu tundi).
1.2. aplikaatori abil asetage analüüsitud vereseerumi proovid 2-3 cm kaugusele membraani katoodi servast. Asetage membraan elektroforeesikambrisse ja ühendage vool.
2. Elektroferogrammi töötlemine
2.1. värvaine Crimson S.
Pärast voolu väljalülitamist viige membraan ettevaatlikult 3-5 minutiks värvilahusesse, seejärel kaks korda 3 minutiks 5-7% äädikhappe lahusesse (kuni taust pleekib).
1.2. töödelda elektroforegrammi skanneri ja arvutiprogrammi abil.
4. tümooli test
Meetodi põhimõte:
Seerumi beeta-globuliinid, gamma-globuliinid ja lipoproteiinid sadestatakse tümoolreagendiga pH väärtusel 7,55. Sõltuvalt valgufraktsioonide kogusest ja omavahelisest suhtest tekib reaktsiooni käigus hägusus, mille intensiivsust mõõdetakse hägusus.
Kliiniline ja diagnostiline väärtus:
Tümooli test sobib paremini maksa funktsionaalseks uuringuks kui kolloidresistentsed proovid. Arvatakse, et see on positiivne 90-100% Botkini tõve juhtudest (juba preikterilises staadiumis ja anikterilises vormis) ja toksilise hepatiidi korral. Reaktsioon on positiivne posthepatiidi ja postnekrootilise, eriti ikterilise tsirroosi (erinevalt teistest tsirroosi vormidest), kollageenhaiguste, malaaria ja viirusnakkuste korral. Obstruktiivse kollatõve korral on see (75% juhtudest) negatiivne, millel on diferentsiaaldiagnostiline väärtus.
Obstruktiivse kollatõve korral muutub test positiivseks ainult siis, kui protsessi komplitseerib parenhüümne hepatiit. Obstruktiivse kollatõve eristamiseks parenhümaalsest ikterusest on tümoolitesti kasutamine Bursteini testiga (beeta- ja pre-betalipoproteiinide jaoks) väga oluline.
Parenhümaalse kollatõve korral on mõlemad testid positiivsed, obstruktiivse kollatõve korral on tümooli test negatiivne ja Burshteini test on järsult positiivne.
FROMkasutatud kirjanduse loetelu
1. Spetsiifilised valgud kliinilises laboridiagnostikas: küsimused ja vastused. - Töpfer G., Toma R., Tsavta B., M., 2004. - 96s
GLÜKOPROTEIDID (glükoproteiinid) - biopolümeerid, mis koosnevad kovalentselt seotud peptiidi (valgu) ja süsivesikute komponentidest. Juhtudel, kui G. molekuli süsivesikute osa koosneb glükoosijäägist või -jääkidest, nimetatakse G. glükoproteiinideks. G. leidub loomade, bakterite ja taimede kehas ning moodustavad kõige ulatuslikuma ja paremini uuritud süsivesikuid sisaldavate ühendite klassi. G. on osa rakumembraanist, ringlevad vereringes transpordimolekulidena – näiteks transferriin, tseruloplasmiin (vt Veri). Glükoproteiinide hulka kuuluvad mõned hormoonid, ensüümid ja immunoglobuliinid. Ühe esimesi ettepanekuid selle kohta, miks valgud vajavad süsivesikute komponenti, tegi Eylar (E. H. Eylar, 1965). Arvestades üsna suurt hulka G., leidis ta, et nad on kõik väljaspool rakku, vereringes, süljes, piimas ja muudes saladustes. Sellele faktile tuginedes pakkus ta välja hüpoteesi, mille kohaselt süsivesikute komponent on omamoodi pass, peale to-rogo saamist peab valgumolekul tingimata rakust lahkuma. Hiljem saadi aga andmed, mis näitavad, et paljud rakusisesed valgud on G. ning on osa erinevatest rakusiselistest membraanidest ja tsütoplasmaatilisest membraanist. Lisaks leiti erinevatest saladustest ja vereseerumist glükosüülimata valke (albumiin, a-laktalbumiin, kümotrüpsinogeen jne). Seega ei saa Eilari hüpotees pretendeerida universaalsele lahendusele küsimusele süsivesikute komponendi rollist. Edasistes uuringutes leiti, et kui siaalhape lõhustatakse ensümaatiliselt paljude seerumi G. süsivesikute osast (tseruloplasmiin, haptoglobiin, fetuiin, orosomukoid), siis nende asialoglükoproteiinide poolestusaeg lüheneb mitmest. kümnetest tundidest kuni mitme minutini. Sel juhul seonduvad kõik need asialoglükoproteiinid parenhümaalsete maksarakkude membraanidega.
Paljud glükoproteiinid - hormoonid (nt gonadotroopsed ja folliikuleid stimuleerivad hormoonid) kaovad pärast siaalhappe eemaldamist väga kiiresti vereringest ja nagu seerum G., on maksarakkudes. Selle tulemusena ei seostu hormoon sihtrakkude ja selle bioliga, toime väheneb järsult.
Glükoproteiinide määramise biokeemilised meetodid
Biolis, vedelikes, veres ja uriinis on segu erinevatest G-st. Nende kõigi isoleerimiseks puhtal kujul on vaja pikka aega keerukat tehnikat, mis muudab selle kasutamise seeriauuringuteks keeruliseks. Seetõttu on praktikas kõige levinum G. kogumääratlus vastavalt ühele neis sisalduva süsivesikute osa komponendist - heksoosid, heksosamiinid, fukoos, siaal-to-tam või võime anda joodi reaktsioon - sellele - Schiffi reagendile (vt Schiffi reaktiiv).
Enim kasutatavad meetodid G. määramiseks võib jagada kahte põhirühma: keemilised ja elektroforeetilised. Eriuuringute jaoks kasutatakse kromatograafilisi, polarograafilisi ja radioimmunoloogilisi meetodeid.
Enamik keemiat. meetodid põhinevad G. molekuli süsivesikute osa määramisel, kasutades erinevaid värvireaktsioone, mis põhinevad monosahhariidi interaktsioonil väävelhappega, moodustades furfuraali derivaadi (näiteks reaktsioonid ortsiini, antrooni, trüptofaani, karbasooli, difenüülamiiniga, resortsinool, alfa-naftool). Sellised reaktsioonid annavad ühe loetletud ühendiga või aromaatse lämmastikalusega värvilise saaduse. Moodustunud värvilise toote kogus määratakse fotoelektrokolorimeetria abil. Kõige täpsem on heksooside määramise meetod, kasutades värvireaktsiooni ortsiini või resortsinooliga; kõige tundlikum on alfanaftooli kasutav meetod, mida aga sagedamini kasutatakse indikatiivsetes uuringutes.
Peaaegu kõik aminosahhariidide määramiseks kasutatavad meetodid põhinevad Elson-Morgani (1933) klassikalisel meetodil. Meetodi põhimõte seisneb selles, et aminosuhkur reageerib kuumas kergelt leeliselises lahuses atsetüülatsetooniga. Samal ajal moodustub pürroolide segu, mis annab reagendiga para-dimetüülaminobensaldehüüdiga punase värvuse, mille intensiivsus määratakse fotomeetriliselt 530 nm juures. Glükoosamiin annab peaaegu sama värvi kui galaktoosamiin; mannosamiiniga on värvumine mõnevõrra nõrgem. Glükoosamiinvesinikkloriidi kasutatakse peamiselt kalibreerimiskõvera koostamiseks.
Fukoosi määramiseks kasutatakse reaktsiooni, mille käigus G. väävelhappega interaktsiooni produktile lisatakse vesinikkloriidtsüsteiini.
See reaktsioon on peaaegu kõigi metüülpentoosi määramiseks kasutatavate meetodite aluseks (vt Dische meetod).
Sialhappe tuvastamiseks ja kvantitatiivseks määramiseks pakutakse mitmeid meetodeid: ortsinoloogiline meetod Biali reagendiga, resortsinooli meetod, tiobarbituuriga meetod, difenüülamiini reaktsioon ja Hessi meetod (vt Hessi reaktsioon). Kõige tundlikum ja spetsiifilisem on meetod tiobarbituurhappega. G. elektroforeesi võtsid esimest korda kasutusele E. Koiw, A. Gronwall 1952. aastal. Kirjeldatud on mitmeid selle meetodi modifikatsioone; enamiku nende ühiseks puuduseks on meetodi võrdlev keerukus või elektroforegrammide tausta märkimisväärne värvumine. Elektroforeesi G läbiviimise meetodi ja tehnika põhimõte on sama, mis vereseerumi valgufraktsioonide elektroforeetilisel eraldamisel paberil (vt Elektroforees).
Glükoproteiini fraktsioonide tuvastamiseks on välja pakutud mitmeid meetodeid; värvimine toluidiinsinise, kolloidraua, tsantsiiniga jne. Kuid kõige levinum meetod glükoproteiinide värvimiseks Schiffi reagendiga, mis põhines reaktsioonil (jood to - fuksia väävel - see), pakkus algselt välja Hotchkiss (R. D. Hotchkiss) ja Mac-Manus (J. F. A. McManus) G. värvimiseks gistol, lõigud. Selle meetodi põhimõte seisneb selles, et G. süsivesikute komponendid oksüdeeritakse joodilahusega - teie aldehüüdideks ja aldehüüdid tulevad päevavalgele Schiffi reagendi abil. Kvantitatiivseks määramiseks elueeritakse värvilised fraktsioonid elektroforegrammidest, millele järgneb eluaatide fotomeetria või määratakse densitomeetria abil (vt).
Tervel inimesel on erinevate autorite andmetel G. fraktsioonide suhteline sisaldus (%) järgmine: albumiin - 10,4-16,6; alfa 1 -globuliin - 14,2-18,3; alfa 2 -globuliin - 24,8-31,8; beeta-globuliin - 21,7-25,0; uglobuliin - 16,0-19,2.
Suurim süsivesikute protsent on globuliinide fraktsioonides, eriti alfa2- ja beetaglobuliinides (vt Globuliinid).
Paljutõotav on immunoelektroforeesi meetod (vt.), samuti elektroforeesi meetod polüakrüülamiidgeelis (PAGE), mille lahutusvõime võib olla 10 korda suurem kui paberil elektroforeesi lahutusvõime.
Glükoproteiinide määramise tulemused on suure diferentsiaaldiagnostilise väärtusega sidekoe, südame-veresoonkonna haiguste puhul, läks.- kish. trakt, maks, neerud, kopsud. Samal ajal on nende ainete sisalduse muutuste uurimine vereseerumis ja muudes bioolides, vedelikes, lisaks kiilule, suur tähtsus praeguse patooli, protsessi, ravi efektiivsuse ja prognoosi jaoks. Põletikuliste protsesside – äge reuma, tuberkuloos, kopsupõletik, pleuriit – korral suureneb kõigi G. fraktsioonide, eriti alfa 1 – ja alfa 2 globuliinide sisaldus vereseerumis. Suurima tähtsusega on G. absoluutse ja suhtelise sisalduse määramine vereseerumis reuma korral. G. kontsentratsioon vereseerumis suureneb ka glomerulonefriidi, kasvajate, nekroosi ja sageli diabeedi korral.
Histokeemilised meetodid glükoproteiinide määramiseks kudedes
Gistokhim, G. tuvastamismeetodid põhinevad nende reaktiivsete rühmade, nagu 1,2-glükoolrühmade ja ka siaal-to-t karboksüülrühmade tuvastamisel. G. fikseerimiseks on võimalik kasutada 10% formaliini lahust t° 0 kuni 4° 24-48 tunni jooksul. On olemas fikseerimismeetodid, mille käigus lisatakse formaliinile mõned soolad, aga ka erinevad katioonsed detergendid (vt), mis aitavad kaasa polüsahhariidide paremale säilimisele ja nende hilisemale histokeemilisele diferentseerumisele. Eelistada tuleks sektsioonide külmkuivatamise meetodit, millele järgneb parafiini manustamine. Polüsahhariidide tuvastamiseks on olemas märkimisväärne hulk histokeemilisi meetodeid ja nende modifikatsioone, kuid mitte kõik neist pole piisavalt usaldusväärsed ja praktilises mõttes kättesaadavad. Kõige usaldusväärsem kontrollreaktsioonide kohustusliku kasutamisega ja keemia seisukohast õigustatud on McManus-Hotchkiss-Shabadashi meetod. Meie riigi laborites kasutatakse kõige sagedamini Shabadashi modifikatsiooni. Meetod põhineb polüsahhariidide 1,2-glükoolrühmade oksüdeerimisel joodisoolaga, millele järgneb aldehüüdide identifitseerimine, mis on saadud fuksia ja väävli reaktsiooni tulemusena (Schiffi reaktiiv). Muko- ja glükoproteiinide lokaliseerimise piirkondades tekib erineva intensiivsusega lillakaspunane värvumine. Lisaks nendele ühenditele paljastab reaktsioon ka glükogeeni, glükolipiidid ja vabad aldehüüdid. Mittespetsiifilised aldehüüdid võivad ilmneda ka küllastumata sidemetega ühendite oksüdeerumise tulemusena materjali fikseerimisel formaliiniga. Seetõttu on usaldusväärsete tulemuste saamiseks vajalik hoolikas histokeemiline kontroll: esiteks on vaja välistada vabade ja mittespetsiifiliste aldehüüdide olemasolu ning nende olemasolul viia läbi blokeerimisreaktsioon. Linnase diastaasi (äärmuslikel juhtudel sülje amülaasi) abil saab glükogeeni olemasolu välistada.
Vajalikud reaktiivid: kristalne aluseline fuksia (või nn aluseline fuksia fuksia väävelhappe jaoks), 1 N. HCl, kaalium- või naatriummetabisulfit (K 2 S 2 O 5 või Na 2 S 2 O 5), perioodiline või parem kaaliumisool (KIO 4), kõrgelt puhastatud linnasediastaas, hüdroksüülamiinvesinikkloriid. Atsetüülimisreaktsiooni jaoks: veevaba püridiin ja atseetanhüdriid, 0,1 N. söövitav kaalium (KOH), neuraminidaasi ravim. Lipiidid eemaldatakse töötlemisel erinevate lahustitega (nt kloroformi ja metüülalkoholi kuum segu).
Definitsiooni edenemine. Katse- ja kontrolllõike töödeldakse kaaliumperjodaadi lahusega, pestakse kiiresti dest. vees ja asetatakse Schiffi reagendisse, seejärel pestakse värskelt valmistatud bisulfiti lahusega (10 ml 10% kaaliummetabisulfiti lahust, 10 ml 1 n. HCl ja 200 ml destilleeritud vett). Sektsioone pestakse põhjalikult suures koguses vees, dehüdreeritakse alkoholis, puhastatakse ksüleenis ja paigaldatakse neutraalsesse Kanada palsamisse.
Glükoolirühmade atsetüülimisreaktsioon ja neuraminidaasi kasutamine kinnitavad saadud tulemuste usaldusväärsust.
Bibliograafia Anasashvili A. Ts. Vere seerumi ja uriini glükoproteiinid, M., 1968, bibliogr.; Widershine G. Ya. Süsivesikuid sisaldavad ühendid, nende biosüntees ja roll loomarakus, Molek. biol., t. 10, nr 5, lk. 957, 1976, bibliogr.; Glükoproteiinid, toim. A. Gottschalk, tlk. inglise keelest, kd 1-2, M., 1969; D ere-vitskaja V. A. Glükoproteiinide keemia, Usp. biol. chem. toim. B. N. Stepanenko, 8. kd, lk. 168, Moskva, 1967; Ühtsete kliiniliste laboratoorsete uurimismeetodite kasutamise juhend, toim. V. V. Menšikov, Moskva, 1973. Pierce E. Histokeemia, tlk. inglise keelest, lk. 741 ja teised, M., 1962; Histo-tsütokeemilise analüüsi põhimõtted ja meetodid patoloogias, toim. A. P. Avtsyna ja teised, lk. 7, L., 1971; Spiro R. G. Glycoproteins, Advanc. Protein Chem., v. 27, lk. 349, 1973, bibliogr.
G. Ya. Wiederschein; A. Ts Anašašvili (met. uurimused), R. A. Simakova (põhimõtted).
Glükoproteiinid sai oma nime sõnast "glucos" – magus, sest leiti, et need sisaldavad süsivesikuid. Proteesirühma esindavad erinevad süsivesikud ja nende derivaadid, selle side valguga on kovalentne, süsivesik-peptiid.
Nüüdseks on kindlaks tehtud, et peaaegu kõik valgud (välja arvatud verealbumiinid) sisaldavad vähesel määral süsivesikuid ja seetõttu kuuluvad glükoproteiinide hulka vaid need valgud, mille süsivesikute kontsentratsioon on üle 4%.
Kõik glükoproteiinid on suure molekulmassiga (kuni mitu miljonit D), happeliste omadustega, vees lahustuvad, neutraalsete soolade ja leeliste nõrgad lahused, hapete poolt sadestuvad ja kõrge viskoossusega. Need on termostabiilsed, kuna nende koostises sisalduvad süsivesikud suurendavad oluliselt molekulide vastupidavust erinevatele kemikaalidele ja kuumusele, kaitsevad neid proteaaside toime eest, määrates seeläbi glükoproteiinide bioloogilise rolli. Süsivesikud annavad valkudele suurema spetsiifilisuse, tänu nendele rühmadele suudavad glükoproteiini makromolekulid ära tunda teisi struktuure.
Glükoproteiine leidub suurtes kogustes sidekoe rakkudevahelises aines, vereplasmas, süljes ja muudes saladustes, tsütoplasmaatilistes ja erinevates intratsellulaarsetes membraanides, tsütosoolis. Glükoproteiinide roll on mitmekesine. Nad transpordivad hüdrofoobseid aineid ja metalliioone; membraaniretseptorite osana tagavad nad rakukontaktide spetsiifilisuse, mõjutavad kudede diferentseerumist, osalevad immunoloogilistes reaktsioonides, täidavad kaitsvat rolli, kattes limaskestade membraane.
Need jagunevad tõelisteks glükoproteiinideks ja proteoglükaanideks. See jaotus põhineb valguosa ja proteesirühma erineval % suhtel, samuti proteesirühma struktuuril.
1. Tõelised glükoproteiinid, struktuur, esindajad: mutsiinid; immunoglobuliinid; veregrupi määravad valgud; hormoonid; transpordivalgud; ensüümid; retseptorid, nende tähtsus, jaotus.
Tõeliste glükoproteiinide osana valguosa moodustab umbes 80% ja proteeside rühma osakaal on umbes 20%. Tõelistes glükoproteiinides esindavad proteesirühma polüsahhariidid, millel pole korrapärast struktuuri. Tõeliste glükoproteiinide proteesrühma kuuluvad mitmesugused monosahhariidid ja nende aminoderivaadid, neuramiin- või siaalhapped erinevates kombinatsioonides ja vahekordades, s.o. tõeliste glükoproteiinide proteesiline osa ei ole korrapärase struktuuriga. Tõelised glükoproteiinid on kehas laialt levinud ja täidavad mitmesuguseid funktsioone.
Tõeliste glükoproteiinide hulka kuuluvad: mutsiinid, veregrupi määravad valgud; retseptorid, ensüümid, hormoonid, transportvalgud.
Mutsiinid- need on suuõõnes paiknevad limavalgud, mis katavad kõiki limaskesti. Need koosnevad lihtsast valgust ja proteeside rühma kuuluvad monosahhariidid, heksosamiinid, siaal- ja neuramiinhapped erinevates kogustes ja erinevates kombinatsioonides. Mutsiinide koostises olevatest monosahhariididest on: glükoos, galaktoos, fukoos jne. Mutsiinide viskoossus oleneb siaalhapete hulgast. Mutsiinide väärtus: kaitsev - katab seedetrakti, hingamisteede, kuseteede limaskestad - kaitseb neid kuivamise ning füüsikaliste ja keemiliste tegurite mõju eest.
Veregrupi määravad valgud.
Valgud, mis määravad vere rühmaspetsiifilisuse vastavalt proteesirühma struktuurile, kuuluvad tõeliste glükoproteiinide hulka, kuid erinevad neist kõrge (kuni 85%) süsivesikute sisalduse, atsetüülglükoosamiini proteesrühma olemasolu molekulis, ja valguosa väga omapärane konstruktsioon, mis ilmselt on seotud süsivesikute ahelate teatud konformatsiooni säilitamisega. Valguosa eripära seisneb selles, et 2/3 kõigist aminohapetest on 4 aminohapet: tre, pro, ser, ala, st. valkude kvantitatiivne koostis, olenemata nende spetsiifilisusest, on väga sarnane. Nende valkude antigeense aktiivsuse määrab järgmine süsivesikute järjestus süsivesikute ahela otstes: D-galaktoos-N-atsetüülglükoosamiin-D-galaktoos-N-atsetüülglükoosamiin. Veregrupp sõltub sellest, milline süsivesik on selle fragmendi külge kinnitatud. Aine H puhul on see fukoos, aine A puhul on see fukoos ja N-atsetüülgalaktoosamiin, mis määrab A-spetsiifilisuse, aine B puhul on see fukoos ja terminaalne galaktoos, mis määrab B-spetsiifilisuse. Seega võib fukoosi, N-atsetüülgalaktoosamiini või galaktoosi terminaalsele fragmendile kinnitamisega saavutada erinevusi süsivesikute ahelate spetsiifilisuses ning ainet H võib pidada rühmaspetsiifiliste ainete A ja B eelkäijaks. Rühma täielik seroloogiline reaktiivsus. spetsiifilised ained on võimalikud ainult siis, kui säilib nende ühendite kogu molekuli terviklikkus.
Retseptorid paikneb membraanide välispinnal, tsütoplasma organellide membraanides. Mõned ensüümid ja mõned hormoonid sisaldavad süsivesikuid ning glükoproteiinide hulka kuuluvad ka valgud nagu transkortiin, haptoglobiin, immunoglobuliinid.
2. Proteoglükaanid, struktuur, esindajad, tähendus.
Proteoglükaani molekulis on seevastu valkude osakaal 2-2,3% kuni 10% ja süsivesikute osa 90-98%. Proteoglükaanid on tavalised süsivesikud.
Proteoglükaanid - kompleksvalgud, leidub sidekoe põhiaines. Sest need sisaldavad suures koguses happeid proteesrühma kujul, nad on polüanioonid ning osalevad vee ja katioonide jaotumises ja difusioonis. Alusmembraanina osalevad proteoglükaanid toitainete jaotuses. Kombineerides struktuurvalkudega, moodustavad nad "molekulaarsõela" ja moodustavad ka jagatud ruume (domeene), milles vesi asub, nende vaheseinte tõttu vesi ei liigu. Rakkude ja kudede maht sõltub proteoglükaanidest. Nende valkude proteeside rühma nimetatakse glükoosaminoglükaanideks (GAG). Need jagunevad kolme tüüpi: hüaluroon, kondroitiinväävelhape, hepariin.
4. Proteesirühm proteoglükaanid - glükosaminoglükaanid - (GAG-id) kondroitiin väävelhape, hüaluroonhape, hepariin. Struktuuri mõiste, tähendus.
Proteoglükaanid sisaldavad väikest (2–5%) valguosa ja proteesirühma, mida esindavad glükoosaminoglükaanid (GAG). Viimased on korrapärase struktuuriga, st koosnevad vahelduvatest disahhariididest, mille hulka kuuluvad uroonhapped ja atsetüülheksosamiinid (joonis 7). GAG-e on 6 tüüpi - hüaluroonhape, kondroitiinsulfaadid A, B, C, kerataansulfaadid ja hepariin, mis erinevad üksteisest uroonhapete olemuse, heksosamiinide, sulfatsiooniastme, monomeere ühendava keemilise sideme tüübi poolest, molekulmass, omadused. Tabelis on toodud inimkudede peamised glükoosaminoglükaanid.
Tabel Glükoosaminoglükaanide keemiline koostis