Az ELISA (enzyme-linked immunosorbens assay, ELISA - angol) a múlt század 60-as éveiben valahol máshol lépett be a gyakorlati orvoslás életébe. Kiinduló feladata a tudományos célú szövettani kutatás volt, amely egy élő szervezet sejtjeinek antigénszerkezetének felkutatására és azonosítására korlátozódott.
Az ELISA módszer specifikus (AT) és rokon antigének (AG) kölcsönhatásán alapul antigén-antitest komplex kialakulásával, amelyet egy enzim segítségével detektálnak. Ez a tény vezette a tudósokat arra az ötletre, hogy a módszert diagnosztikai célokra lehet használni egy adott fertőzésre adott immunválaszban részt vevő, különböző osztályokba tartozó specifikus immunglobulinok azonosítására. És ez áttörést jelentett a klinikai laboratóriumi diagnosztikában!
A módszert csak a 80-as évek elején kezdték aktívan alkalmazni, majd főleg speciális intézményekben. Az első ELISA analizátorokat vérátömlesztési központok és állomások, fertőző és nemi kórházak szállították, hiszen az afrikai kontinensen született félelmetes AIDS nálunk is a láthatáron jelent meg és azonnal csatlakozott a „régi” fertőzésekhez, azonnali intézkedéseket igényelt a diagnózis és rá ható terápiás gyógyszerek keresése.
Az ELISA módszer hatóköre
Az enzim immunoassay lehetőségei valóban széleskörűek. Ma már nehéz elképzelni, hogyan lehet nélkülözni az ilyen tanulmányokat, amelyeket az orvostudomány minden ágában szó szerint használnak. Úgy tűnik, hogy az ELISA képes az onkológiában? Kiderül, hogy lehet. És sok. Az elemzés azon képessége, hogy megtalálja a rosszindulatú daganatok bizonyos típusaira jellemző markereket, a daganat korai felismerésének hátterében áll, amikor is kis mérete miatt más módon még nem mutatható ki.
A modern klinikai laboratóriumi diagnosztika (CDL) a tumormarkerek mellett jelentős ELISA panelek arzenáljával rendelkezik, és különféle kóros állapotok (fertőző folyamatok, hormonális zavarok) diagnosztizálására, valamint a gyógyszerkészítmények monitorozására használja fel, hogy azonosítsa a páciensre gyakorolt hatásukat. test és mellesleg nemcsak az ember. Jelenleg az enzim immunoassay-t széles körben alkalmazzák az állatorvosi szolgálatban, mert "kistestvéreink" is fogékonyak számos betegségre, amelyektől esetenként nagyon szenvednek.
És így, Az ELISA érzékenysége és specificitása miatt vénából vett vérmintából meghatározhatja:
- Hormonális állapot (pajzsmirigy és mellékvese hormonok, nemi hormonok);
- Vírusos és bakteriális fertőzések jelenléte (HIV, B és C, chlamydia, szifilisz és, valamint sok más kórokozó mikroorganizmusok által okozott betegség);
- A fertőző folyamatot elindító mikroorganizmusok létfontosságú tevékenységének nyomai, amely sikeresen véget ért, és a kórokozó elleni immunválasz kialakulásának szakaszába lépett. Az ilyen nyomok, vagyis az antitestek sok esetben egy életen át keringenek a vérben, ami megvédi az embert az újbóli fertőzéstől.
Mi az IF lényege?
Az enzim immunoassay módszer lehetővé teszi nemcsak magának a kórokozónak a jelenlétét (kvalitatív elemzés), hanem annak kvantitatív tartalmát is a páciens vérszérumában.
A vírus vagy bakteriális dózis jelentősen befolyásolja a fertőzési folyamat lefolyását és kimenetelét, ezért a kvantitatív elemzés fontos szerepet játszik a különböző formájú és stádiumú betegségek diagnosztizálásában és kezelésében.
Ismerve azonban az enzimkapcsolt immunszorbens vizsgálatokat, mint ELISA-módszert, nem is gondolunk arra, hogyan képes lefedni a bolygónkon élő mikroorganizmusok ilyen széles körét, amelyek közül sok közvetlen veszélyt jelent az emberek egészségére és életére. állatokat. Az a tény, hogy az ELISA-nak számos opciója van (nem kompetitív és versengő - közvetlen és közvetett), amelyek mindegyike megoldja a saját problémáját, és így lehetővé teszi a célzott keresést.
Az egyik vagy másik osztályba tartozó immunglobulinok kimutatására hagyományos 96 lyukú polisztirol panelt (tablettát) használnak, amelynek üregeiben az adszorbeált rekombináns fehérjék a szilárd fázisban koncentrálódnak. A vérszérummal a lyukba került antitestek vagy antigének egy „ismerős” tárgyat találnak, és komplexet képeznek vele (AG - AT), amely az enzimkonjugátum által rögzítve a lyuk színének megváltozásaként nyilvánul meg. az eredmények olvasásakor.
Az enzimes immunoassay-t meghatározott specifitású tesztrendszereken végzik, amelyeket speciális laboratóriumokban készítenek és minden szükséges reagáló komponenssel felszereltek. A vizsgálatok elvégezhetők alátétekkel ("alátétek") és leolvasó spektrofotométerekkel, ahol a legtöbb kézi munka szükséges. Teljesen automata gépeken, megszabadítva a laboratóriumi asszisztenst a monoton csepegtetéstől, mosástól és egyéb rutinfeladatoktól, természetesen gyorsabb és kényelmesebb a munkavégzés, de nem minden laboratórium engedheti meg magának ezt a luxust, és folytathatja a munkát a régi módon - félautomata készülékeken.
Az ELISA eredményeinek értelmezése a laboratóriumi diagnosztikus orvos hatáskörébe tartozik, miközben szinte minden immunkémiai reakcióban rejlő tulajdonságot, hogy hamis pozitív vagy hamis negatív választ adjon, feltétlenül figyelembe kell venni.
Videó: modern enzim immunoassay
ELISA eredmények a szifilisz példáján
Az ELISA minden forma kimutatására alkalmas, és emellett szűrővizsgálatokban is használják. Az elemzéshez a beteg éhgyomorra vett vénás vérét használják. A munkában bizonyos specificitású lemezeket (AT osztályok A, M, G) vagy teljes antitesteket használnak.
Tekintettel arra, hogy a szifiliszben az antitestek meghatározott sorrendben képződnek, az ELISA könnyen megválaszolja a fertőzés időpontját és a folyamat melyik szakaszát, és a kapott eredmények dekódolása a következő formában bemutatható:
- Az IgM jelzi a fertőző folyamat időtartamát (krónikus gyulladásos betegségek súlyosbodása során jelentkezhet);
- IgA azt állítja, hogy a fertőzés több mint egy hónapja történt;
- Az IgG azt jelzi, hogy a fertőzés javában tart, vagy a közelmúltban kezelik, ami könnyen kideríthető az anamnézis gyűjtése során.
A szifilisz vizsgálatakor a negatív üregek (és a negatív kontroll) színtelenek maradnak, míg a pozitív (mint a pozitív kontroll) élénksárga színt mutat a teszt során hozzáadott kromogén színváltozása miatt. A szín intenzitása azonban nem mindig egyezik a kontrollal, vagyis lehet kissé halványabb vagy enyhén sárgás. Ezek kétséges eredmények, amelyeket általában újra kell vizsgálni a spektrofotométeren kapott mennyiségi mutatók kötelező figyelembevételével, de általában a szín egyenes arányos az immunkomplexek (antigének és antitestek) számával. egymáshoz).
A legizgalmasabb enzim immunoassay - ELISA HIV-re
A témával kapcsolatos elemzések, talán jobban, mint mások, a lakosság széles körét érdeklik, mert még nem lehet biztosan kijelenteni, hogy sok társadalmi probléma (prostitúció, drogfüggőség stb.) megszűnt volna. Sajnos a HIV nem csak az emberi társadalom ezen rétegeit érinti, különféle körülmények között fertőződhet meg, amelyek nem kapcsolódnak szexuális promiszkuitáshoz vagy droghasználathoz. De ha szükség van HIV-tesztre, akkor ne féljen attól, hogy mindenki megtudja, hogy meglátogatja egy ilyen laboratóriumot. Most a HIV-fertőzötteket törvény védi, és aki kételkedik, névtelen irodákhoz fordulhat, ahol a nyilvánosságtól és az elítéléstől való félelem nélkül megoldhatja a problémát.
A HIV-fertőzés diagnosztizálására használt enzimes immunoassay az egyik elsődleges standard vizsgálat, amely azonban speciális feltételeket igényel, mivel a téma nagyon érzékeny.
A HIV ELISA-t célszerű elvégezni szexuális érintkezés, vérátömlesztés, egyéb fertőzéssel járó orvosi eljárások után, valamint az inkubációs időszak végén („szeronegatív ablak”), de szem előtt kell tartani, hogy ez az időszak nem állandó. 14-30 nap múlva érhet véget, de akár hat hónapig is eltarthat, tehát az átlagértéket 45-90 nap közötti intervallumnak tekintjük. A HIV-hez ugyanúgy adnak vért, mint más fertőzések esetén – vénából, éhgyomorra. Az eredmények a laboratóriumban felhalmozott anyag mennyiségétől és munkaterhelésétől függően (2-10 nap) lesznek készen, bár a legtöbb laboratórium még aznap vagy a következő napon ad választ.
Mi várható a HIV eredményektől?
A HIV-fertőzés ELISA-ja a vírus két típusa ellen mutat ki antitesteket: a HIV-1-et (gyakrabban Oroszországban és más európai és ázsiai országokban) és a HIV-2-t (gyakrabban Nyugat-Afrikában).
A HIV ELISA feladata az összes tesztrendszeren, de későbbi időszakban kimutatott G osztályú antitestek, valamint az új generációs rekombináns tesztkészleteken kimutatott A és M osztályú antitestek felkutatása, amelyek lehetővé teszik az antitestek legkorábbi kimutatását. szakaszaiban (az inkubációs időszak szeronegatív ablak). A következő válaszok várhatók az ELISA-tól:
- Elsődleges pozitív eredmény: a vért ugyanazon típusú, de lehetőség szerint eltérő sorozatú tesztrendszeren és más személy (laboratóriumi asszisztens) által újraellenőrzik;
- Az ismételt (+) új vérmintavételt jelent egy pácienstől, amelynek vizsgálata hasonló az elsődleges elemzéshez;
- A következő pozitív eredményt referenciaelemzésnek vetik alá, amely rendkívül specifikus tesztkészleteket (2-3 db) használ;
- Mindkét (vagy három) rendszerben pozitív eredményt küldünk immunoblot-vizsgálatra (ugyanaz az ELISA, de külön-külön, különösen nagy specificitású tesztkészleteken).
A HIV-fertőzésre vonatkozó következtetést csak az immunoblot alapján vonják le. A fertőzött személlyel teljes bizalmas beszélgetést folytatnak. Az orvosi titkok nyilvánosságra hozatala Oroszországban és más országokban is büntetőjogi büntetés hatálya alá tartozik.
A chlamydia és a citomegalovírus enzimes immunoassay-vel végzett elemzése szintén különösen népszerűvé vált, mivel lehetővé teszik a fertőzés időpontjának, a betegség stádiumának és a terápiás intézkedések hatékonyságának meghatározását.
A bevezetés során megfigyelhető a különböző osztályokba tartozó antitestek megjelenése is. a fertőző ágens által okozott kóros állapot különböző fázisaiban:
- Az IgM már a fertőzés után hét nappal kimutatható;
- Az IgA azt jelzi, hogy a fertőzés több mint egy hónapja él a szervezetben;
- Az IgG megerősíti a chlamydia diagnózisát, segít a kezelés nyomon követésében és hatékonyságának meghatározásában. Megjegyzendő, hogy a G osztályú antitestek a betegség időtartamától függetlenül a szervezetben maradnak és keringenek, ezért az elemzés helyes értelmezéséhez referenciaértékeket (normákat) kell figyelembe venni, amelyek az út, minden CDL esetében eltérő: figyelembe véve a tesztrendszer márkáját és a készletben található reagensek sajátosságait. A normaértékek az ELISA eredmény melletti űrlapba kerülnek.
Ami itt egy kicsit más: Az M osztályú antitestek körülbelül másfél hónap alatt jelennek meg, vagyis a pozitív eredmény (IgM+) az elsődleges fertőzés fázisában vagy a látens fertőzés reaktiválásakor kerül, és 4 hónaptól hat hónapig tart.
A G osztályú antitestek jelenléte jellemző az elsődleges akut fertőzés vagy újrafertőződés kezdetére. Az elemzés megállapítja, hogy a vírus jelen van, de nem ad tájékoztatást a fertőzési folyamat stádiumáról. Mindeközben az IgG titernorma meghatározása is nehézségeket okoz, hiszen ez teljes mértékben az adott személy immunállapotától függ, amit azonban a G osztályú immunglobulinok kimutatása határoz meg. szükségessé válik a G osztályú antitestek CMV-vel való kölcsönhatási képességének felmérése, annak későbbi „semlegesítése” érdekében (AT aviditás). A betegség kezdeti szakaszában az IgG nagyon rosszul kötődik a vírus antigénjéhez (alacsony aviditás), és csak ezután kezdenek aktivitást mutatni, ezért az antitestek aviditásának növekedéséről beszélhetünk.
Az enzim immunoassay előnyeiről még sokáig beszélhetünk, mert ezzel a módszerrel számos diagnosztikai problémát sikerült megoldani pusztán vénás vér felhasználásával. Nincs szükség hosszú várakozásra, aggodalmakra és problémákra a kutatási anyag felvételével kapcsolatban. Ezenkívül az ELISA tesztrendszerei folyamatosan javulnak, és nincs messze a nap, amikor a teszt 100%-os megbízhatóságot ad az eredményben.
Videó: a Moszkvai Állami Orvostudományi Egyetem oktatófilmje. Sechenov az ELISA alapjairól
A HIV a mi generációnk csapása. Milyen módszerek léteznek a HIV diagnosztizálására, részletes információk a HIV ELISA-tesztjéről. Hogyan kell venni, hogyan kell értelmezni az elemzés eredményeit.
Az emberi immunhiány vírus generációnk egyik legrettegettebb fertőzése.
A HIV romboló hatással van immunrendszerünkre,és ha a betegség előrehaladását nem állítják meg időben, akkor szerzett immunhiányos szindrómává alakulhat át. A HIV a szexuális kapcsolat során a partnerek közötti közvetlen érintkezés útján terjed a férfi és női nemi szerveken keresztül. A fertőzés másik oka lehet a vírus bejutása a véren keresztül. Ez a nem steril eszközök használatának, a fertőzött vér transzfúziójának köszönhető, sőt generációkon át: fertőzött anyától szoptatás alatti gyermeknek.
Eddig a tudósok szerte a világon azon töprengenek, hogy új generációs gyógyszereket hozzanak létre, amelyek képesek meggyógyítani az AIDS-et, azonban a tudományos fejlődés nagy üteme ellenére az emberi immunhiány vírusa továbbra is terjed a bolygón.
ELISA - egy módszer a HIV diagnosztizálására
A 20. század generációjának tudósai számos módszert dolgoztak ki a HIV diagnosztizálására, amelyek közül a legfontosabbat tartják. kapcsolt immunszorbens vizsgálat. A HIV ELISA-t viszonylag nemrégiben kezdték el - a kilencvenes évek elején - végezni. Idővel a módszer csiszolódott, új részletekre tett szert. Most az ELISA módszer megbízhatósága az egyik legmagasabb - körülbelül 98%. Ennek megfelelően ezt a módszert egyre gyakrabban alkalmazzák.
Az ELISA az első teszt, amellyel a páciens HIV-teszt során találkozik. Az ELISA módszer meghatározza az antitestek jelenlétét a vérben. Ha a teszt antitestek jelenlétét állapítja meg a vérben, akkor a vírus jelen van. Az ezzel a teszttel kapcsolatos információkat azonban más vizsgálatoknak is alá kell támasztani, mint például az immunblot (IB) és a legújabb generációs módszer, a polimeráz láncreakció (PCR).
Az antitestek speciális fehérjevegyületek, amelyeket a plazmasejtek termelnek a szervezetbe jutó fertőzésre adott reakció után (az antitestek a fertőzés után 1-2 hónappal kezdenek képződni).
A HIV okai
Az orvos beutalót ír Önnek elemzésre, ha kapcsolatba került HIV-fertőzött személlyel, vagy fennáll a fertőzés veszélye. A HIV-fertőzés kockázatának kitett emberek generációi a következők:
- egy hónapon belül injekciós kezelésen esik át;
- szexuális kapcsolat tartása speciális védelmi eszközök nélkül;
- szexuális érintkezés során átvitt fertőzések hordozói;
- betegek vérátömlesztés vagy injekció után, hogy felfedezzék a nyolcvanas években a véralvadás okát.
Ha kétségei vannak HIV-státuszával kapcsolatban, és félelmei vannak a fertőzés lehetőségével kapcsolatban, javasoljuk, hogy azonnal kérjen segítséget hazánk bármely egészségügyi intézményétől átfogó HIV-teszt elvégzéséhez. A vizsgálatok eredménye egy hónapon belül megérkezik. A HIV-fertőzés kockázatának kitett személyeknek 4 havonta ajánlott a szűrés.
Hogyan készítsünk elemzést
Nincs külön előkészület a HIV-vérvizsgálat elvégzésére, de jobb kövesse az egyszerű szabályokat:
- jobb, ha nem eszik este, hanem reggel éhgyomorra vesz egy elemzést;
- nem tanácsos a testet fizikai munkával terhelni;
- enni egészséges ételeket, tartózkodni a cigarettától és az alkoholtól egy ideig;
- a hamis vizsgálati mutatók kizárása érdekében ne végezzen elemzést a súlyos betegségek kezelése után.
Az RU 2515051 számú szabadalom tulajdonosai:
A találmány a biotechnológia és az orvostudomány területére vonatkozik. ELISA tesztrendszer a humán szérumban (plazmában) az 1-es típusú humán immundeficiencia vírussal (HIV-1), beleértve a HIV-1 O csoportot is, való fertőzés valószínű időpontjának meghatározására. A tesztrendszer az 1-es típusú humán immundeficiencia vírus (env HIV-1 és HIV-1 O csoport) antigénjein alapuló immunszorbenst, mintahígító oldatot (RRS) és kimutatási reagenseket (konjugátumok, kromogén/szubsztrát) tartalmaz. A találmány tárgya továbbá eljárás humán szérumban (plazmában) az 1-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-1), beleértve a HIV-1 O csoportot is, fertőzés valószínű időpontjának meghatározására, a beteg vérszérumának a leírt ELISA-val történő vizsgálatával. tesztrendszer. HATÁS: a találmány lehetővé teszi a HIV fertőzés valószínű időpontjának gyors és egyszerű meghatározását. 2 n.p. f-ly, 4 tab., 2 pr.
A TALÁLMÁNY a biotechnológia és az orvostudomány területére vonatkozik. Használható a humán szérumban (plazmában) az 1-es típusú humán immundeficiencia vírussal (HIV-1), beleértve a HIV-1 O csoportot is, való fertőzés valószínű időpontjának meghatározására.
A HIV-fertőzés terjedése továbbra is valódi probléma a modern világban. Mivel az időszerű és minőségi diagnosztika valódi eszköz a HIV-fertőzés területének csökkentésére, a modern társadalom fontos feladata egy hatékony tesztrendszer kidolgozása, amely képes meghatározni a fertőzés valószínű időtartamát.
A technika állása szerinti elemzések kimutatták, hogy számos, különböző szerzők által javasolt módszer és teszt létezik a HIV-fertőzés stádiumainak meghatározására különböző módszerek alkalmazásával. Ismert például egy molekuláris genetikai teszt, amely a perifériás vér vírusterhelésének polimeráz láncreakcióval (PCR) történő meghatározásán alapul (Kravchenko A.V., Serebrovskaya L.V., Golokhvostova E.L. és mások. Timazid Chividdel és invirázzal kombinálva a komplex terápiában - Epidemiológia és fertőző betegségek - 1998. - 5. sz. - 51-52. Ismert módszer a HIV-fertőzés stádiumainak felmérésére (Clinical Immunology and Allergology, ed. G. Lolor Jr. - M.: Practice, 2000. - S. 585-587), amely a szérum β 2 - szintjének meghatározásából áll. mikroglobulin. Leírnak egy módszert a HIV-fertőzés stádiumainak diagnosztizálására (V. V. Pokrovsky et al. "A HIV-fertőzés klinikai diagnózisa és kezelése". - M.: GOU VUNMC RF, 2001. - 11. o.), amely az abszolút szám meghatározásából áll. a CD4+ limfociták perifériás vérében. Ismert a HIV-fertőzés stádiumainak diagnosztizálására szolgáló módszer is, amely azon alapul, hogy a páciens vérszérumának enzimhez kötött immunszorbens vizsgálattal (ELISA) történő vizsgálatakor a kiindulási vérszérumminta optikai sűrűsége (OD) tükrözi a szintet. 10 percig 100 μl 3,5 M nátrium-izotiocianát oldattal inkubált kezdeti szérumminta OD-ja. Az OP 40%-os vagy annál kisebb csökkenésével A stádiumot diagnosztizálnak - generalizált lymphadenopathiát, az OP 40-60%-os csökkenésével - B stádium - baciláris angiomatózist, oropharyngealis candidiasist stb., és az OP 60%-kal vagy többel – C stádium – AIDS (RU 2251701).
Így a technika állása szerinti elemzés azt mutatta, hogy egyik létező forrás sem szolgálhat a legközelebbi analógjaként az igényelt találmánynak, mivel ezek a dokumentumok mindegyike olyan módszerekre és tesztekre vonatkozik, amelyek meghatározzák a HIV-fertőzés stádiumát, és a leírt források egyike sem. technikai döntéseket tartalmaz, amelyek célja a fertőzés valószínű időintervallumának meghatározása. Az igényelt találmány olyan tesztrendszerre vonatkozik, amely meghatározza a HIV-fertőzés valószínű időtartamát. A technika állása szerinti elemzés nem tárt fel hasonló, a probléma megoldására irányuló megoldásokat.
A jelen találmány tárgya "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" reagenskészlet az 1-es típusú humán immundeficiencia vírussal (HIV-1), beleértve a HIV-1 O csoportot is, humán szérumban (plazmában) való fertőzés valószínű időpontjának meghatározására. ). A teszt a HIV-pozitív minták további vizsgálatára szolgál, az immunblot megerősített pozitív eredményével. Lehetőség van meghatározatlan vagy negatív vizsgálati eredményű minták vizsgálatára az immunblotban, amelyben a HIV RNS és/vagy HIV-1 p24 antigén jelenléte igazolt.
A jelen találmány tárgyát képezi egy eljárás is ennek a "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" reagenskészletnek az 1-es típusú humán immundeficiencia vírussal (HIV-1) való fertőzés valószínű időzítésének meghatározására, beleértve a HIV-1 O csoportot. szérumban (plazmában) az emberi vérben.
Az igényelt találmány technikai eredménye az 1-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-1) fertőzés valószínű időpontjának meghatározása, beleértve a HIV-1 O csoportot, a teszt egyszerűsége, amely lehetővé teszi az igényelt találmány alkalmazását a HIV-fertőzés terjedésének dinamikájának epidemiológiai felügyelete, a szerokonverterek dinamikai kimutatása egy bizonyos populációban (nem-kor, a lakosság társadalmi csoportjai), valamint a HIV-fertőzés eseteinek és gócainak epidemiológiai vizsgálata.
A javasolt műszaki megoldás lényege abban rejlik, hogy a HIV-1 fertőzés valószínű periódusának meghatározása egy olyan tesztrendszerrel történik, amely az 1-es típusú humán immundeficiencia vírus (env HIV-1) antigénjein alapuló immunszorbenst tartalmaz. és HIV-1 O csoport), egy hígítóoldat-minták (RRS) és kimutatási reagensek (konjugátumok, kromogén/szubsztrát). A vizsgálati mintákat natív módon vizsgáljuk, és mintahígítóban hígítjuk. A vizsgálati eredmények szerint a mintákat "korai" és "késői" csoportokra osztják. "Korai" minták - a fertőzés valószínűsíthető időtartama a fertőzés pillanatától számítva legfeljebb 9 hónap, "késői" minták - a fertőzés valószínű időtartama a fertőzés pillanatától számított 9 hónap vagy több. A minta "korai" vagy "késői" kategóriájához való tartozását a hígított minta optikai sűrűségének (OD) százalékos csökkenésével becsülik meg a hígítatlan mintához viszonyítva.
Ezek a példák a találmány specifikus megvalósítási módjainak illusztrálására szolgálnak, és nem korlátozzák a bejelentő jogait. A találmány minden lehetséges változata, beleértve azokat is, amelyek nem szerepelnek ebben a szakaszban, a bejelentő jogainak hatálya alá tartoznak.
Immunszorbensként HIV-1 és HIV-1 O csoport immundomináns env régióit tartalmazó rekombináns antigéneket használnak. A Konjugátum-1 rekombináns HIV-1 gp41 és HIV-1 gp41 O csoportú antigének keveréke biotinnal konjugálva. Az első szakaszban a vizsgálati mintákat, a kontrollmintákat és azok 1:101 arányú hígításait, valamint a PRS-t konjugátum-1-gyel inkubáljuk. A teszt- és kontroll pozitív mintákban jelenlévő specifikus antitestek a mikrolemez üregeiben adszorbeált antigénekhez és a biotinnal konjugált antigénekhez kötődnek, és stabil komplexeket képeznek. A felesleges mintákat és a konjugátum-1-et mosással távolítjuk el. A következő lépésben torma-peroxidázzal konjugált streptavidint (konjugátum-2) adunk a lyukakba. A konjugátum-2 kötődik a lyukban jelenlévő antigén-antitest-antigén komplexhez. A konjugátum-2 feleslegét mosással távolítjuk el, majd a kromogént/szubsztrátot adjuk a lyukakba. A megkötött konjugátum-2-vel rendelkező üregek kék színt kapnak, amely sárgára változik a stopoldat hozzáadásakor. Az eredményeket spektrofotométerrel rögzítjük.
Immunszorbensként a HIV-1 és HIV-1 O csoport immundomináns env régióit tartalmazó rekombináns antigéneket használnak. Egy konjugátumot használnak - az O csoportba tartozó rekombináns HIV-1 gp41 és HIV-1 gp41 antigének keverékét, torma-peroxidázzal konjugálva . A vizsgálat során a mintákat, a kontrollokat és azok hígításait, valamint a PPC-t a konjugátummal inkubáljuk a lemez antigénnel bevont üregeiben. A kapott stabil komplex a felesleges minta és a konjugátum eltávolítása után kromogén/szubsztrát hozzáadásával nyilvánul meg. Ez kék színűvé válik, amely sárgára változik, amikor a leállító oldatot hozzáadják. Az eredményeket spektrofotométerrel rögzítjük.
A vizsgált minták "korai" vagy "késői" hovatartozását a minta hígítása során az OD %-os csökkenésével becsüljük meg, amelyet a következő képlettel számítunk ki:
%. P R S O P
ahol az OPsr. RRS - az OP RRS átlagos értéke (az OP RRS több értékéből számítva).
A vizsgált mintákat "korainak" kell tekinteni: ha az OD csökkenése > 40%.
A vizsgált mintákat "későnek" kell tekinteni: ha az OD csökkenése ≤40%.
Az 1. táblázatban látható egy példa az OD %-os csökkenésének kiszámítására minta hígítása során.
Az eredmények rögzítéséhez és feldolgozásához kényelmes az Excel program használata. Az alkalmazás használatával automatikusan elvégezheti a számításokat. A teszteredmények feldolgozására szolgáló program a készlethez csatolt lemezen található, illetve megtalálható a cég honlapján.
A teszt kidolgozása és értékelése során a szerokonverziós panelek (BBI, Inc., Zeptometrix, USA) és HIV-pozitív vérszérum (plazma) mintáit használtuk, amelyekben megállapították a fertőzés valószínűségét. Az 1-es típusú humán immundeficiencia vírussal (HIV-1), beleértve a HIV-1 O csoportot is, a szerokonverziós panelek által megállapított valószínűsége 100% (az adatokat a 2. táblázat tartalmazza), szérumminták alapján. a feltételesen megállapított fertőzési periódussal rendelkező egyének (n=129) 94%-a (3., 4. táblázat; részadatok).
| 2. táblázat | ||
| A HIV-pozitív szérum/plazma minták szerokonverziós panelekkel meghatározott vizsgálati eredményei | ||
| Szerokonverziós panel | Napok az első vérvételtől | Teszt eredménye "DS-IFA-HIV-AT-TERM" |
| BBI PRB 914 | 31 | "korai" |
| BBI PRB 916 | 35 | "korai" |
| BBI PRB 925 | 49 | "korai" |
| BBI PRB 929 | 28 | "korai" |
| BBI PRB 930 | 10 | "korai" |
| BBI PRB 931 | 42 | "korai" |
| BBI PRB 934 | 11 | "korai" |
| BBI PRB 941 | 25 | "korai" |
| BBI PRB 942 | 14 | "korai" |
| BBI PRB 944 | 16 | "korai" |
| BBI PRB 947 | 20 | "korai" |
| BBI PRB 951 | 19 | "korai" |
| BBI PRB 952 | 21 | "korai" |
| BBI PRB 955 | 14 | "korai" |
| BBI PRB 965 | 21 | "korai" |
| BBI PRB 966 | 51 | "korai" |
| BBI PRB 968 | 35 | "korai" |
| BBI PRB 969 | 77 | "korai" |
| ZMC HIV 6243 | 33 | "korai" |
| ZMC HIV 6247 | 30 | "korai" |
| ZMC HIV 9014 | 31 | "korai" |
| ZMC HIV 9017 | 35 | "korai" |
| ZMC HIV 9018 | 33 | "korai" |
| ZMC HIV 9021 | 57 | "korai" |
| ZMC HIV 9022 | 29 | "korai" |
| ZMC HIV 9032 | 55 | "korai" |
| ZMC HIV 9077 | 104 | "korai" |
| ZMC HIV 9079 | 95 | "korai" |
| ZMC HIV 12008 | 42 | "korai" |
A "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" teszt felmérte a különböző altípusú HIV-1 elleni antitesteket tartalmazó vérszérum (plazma) minták vizsgálatának lehetőségét, beleértve a HIV-1 O csoportot is: referencia panel QCS 42-28-327 - 03R (GISC) (A, B, C altípus) (kivéve a HIV-2 elleni antitesteket tartalmazó 24. számú mintát), 1. nemzetközi referencia panel HIV-ellenes (NIBSC kód: 02/210) (A, B, C altípusok, E) (kivéve a HIV-2 elleni antitesteket tartalmazó 5. számú mintát), HIV-1 O csoport elleni antitesteket tartalmazó szérum (plazma) minták (1342, K00175, K00259; BioMex). Az eredmények arra utalnak, hogy a „DS-ELISA-HIV-AT-TERM” tesztben lehetőség nyílik a HIV-1 különböző altípusaihoz, köztük az O csoporthoz tartozó HIV-1 antitesteket tartalmazó vérszérum (plazma) minták vizsgálatára.
A "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" reagenskészlet specifitását donorvér szérumminták (n=352) vizsgálatával határoztuk meg, amely ELISA-vizsgálat negatív eredményt mutatott. A specificitás 100% volt. Ezenkívül 255 (ELISA-vizsgálatban negatív) vérszérummintát teszteltek:
■ 167 vérszérumminta terhes nőktől és fertőző betegségekben szenvedő betegektől;
■ 128 vérszérum minta különböző nem fertőző betegségekben szenvedő betegektől.
A specificitás 100% volt.
A kapott adatok azt mutatják, hogy a kifejlesztett "DS-ELISA-HIV-AT-TERM" tesztrendszer nagy hatékonyságú az 1-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-1), beleértve a HIV-1 O csoportot is, fertőzés valószínű időpontjának meghatározásában. szérum (plazma) emberi vér.
1. ELISA tesztrendszer a humán szérumban (plazmában) az 1-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-1), beleértve a HIV-1 O csoportot is, való fertőzés valószínű időpontjának meghatározására, azzal jellemezve, hogy vírusantigéneken alapuló immunszorbenst tartalmaz 1-es típusú humán immunhiány (env HIV-1 és HIV-1 O csoport), mintahígító oldat (RRS) és kimutatási reagensek, amelyek konjugátumok, kromogén/szubsztrát.
2. Módszer a humán szérumban (plazmában) az 1-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-1), beleértve a HIV-1 O csoportot is, fertőzés valószínű időpontjának meghatározására, a fertőzés időtartamától függően különböző antitestszintek alapján , beleértve a vizsgálati minta két részre történő szétválasztását és az egyik rész hígítását; a beteg vérszérummintájának mindkét (natív és hígított) részének vizsgálata az (1) bekezdésben leírt enzimes immunológiai vizsgálati rendszer alkalmazásával; natív és hígított minták optikai sűrűségének (OD) meghatározása és RRS; az OP RRS átlagértékének kiszámítása; a hígított minta OD-értékének százalékos csökkenésének kiszámítása a hígítatlanhoz viszonyítva a képlet szerint
%. P R S O P
ugyanakkor a fertőzés valószínűsíthető periódusa "korainak" minősül, ha az OD csökkenése > 40%, és "későinek" - ha az OD csökkenése 40%.
Hasonló szabadalmak:
A találmány biokémiai adatbázisokat használó számítógépes eljárásra vonatkozik új fehérjevegyületek kifejlesztésére. A tervezést a kezelő végzi egy speciálisan megírt PROTCOM programmal, amely a fehérje-pentafragmentumok adatbázisán alapul.
A találmány a biotechnológia területére vonatkozik, és eljárás O-glikozilált fehérjék kimutatására proteomikai és foszfoproteomikai analízisre készített sejthomogenizátumokban.
A találmány a biotechnológia és immunológia területére vonatkozik. Egy monoklonális antitestet és annak antigénkötő részeit biztosítjuk, amelyek specifikusan kötődnek a makrofág migrációs gátló faktor (MIF) C-terminális vagy központi régiójához.
A találmány a molekuláris biológia és az orvosi diagnosztika területére vonatkozik. Az amiloid állapotú fehérjék kimutatására olyan módszert javasolnak, amelyben élesztőtenyészet vagy emlős szövet lizátumából mintát nyernek, ionos detergenst adnak a mintához, az amiloid formában lévő fehérjéket cellulóz-acetát membránra koncentrálják. és kimutatásuk aptamerek, konjugátumaik vagy a fehérjék amiloid formájára specifikus antitestek felhasználásával történik.
A találmány biotechnológiára, különösen enzim-immunvizsgálatokra vonatkozik, és eljárás beépített kontrollminták előállítására a TORCH-csoport fertőzéseinek meghatározására szolgáló enzim-immunoassay tesztrendszerekhez.
A találmány az orvostudományra, nevezetesen a nőgyógyászatra vonatkozik, és felhasználható probiotikus laktobacillus-törzseket tartalmazó készítmények egyedi kiválasztására hatékony intravaginális terápia céljából.
ANYAG: a találmányok csoportja szenzor-analizátor reagens összetételre vonatkozik, amely alkalmas a folyékony mintában lévő analit koncentrációjának meghatározására, a folyékony mintában lévő analit koncentrációjának meghatározására, valamint az analizátor alkalmazására szolgáló módszerre. szenzor reagens összetétele szitanyomással.
ANYAG: A találmányok csoportja állatgyógyászattal kapcsolatos, és Quil A vagy tisztított frakciója, koleszterin, dimetil-dioktadecilammónium-bromid (DDA), poliakrilsav (CARBOPOL) és CpG és/vagy N-(2-dezoxi-2) kombinációját tartalmazó adjuváns készítményekre vonatkozik. -L-leucilamino-p-D-glükopiranozil)-N-oktadecildodekánamid-acetát; az ilyen adjuváns készítmények előállítására szolgáló eljárás, és az ilyen adjuváns készítmények alkalmazása különböző antigéneket tartalmazó immunogén és vakcina készítményekben.
A jelen találmány a biotechnológia és az orvostudomány területére vonatkozik. Egy olyan módszert javasoltak egy olyan daganat felszínén expresszált tumorantigén ellen irányuló antitest és funkcionális fragmenseinek előállítására, amely rezisztens legalább egy daganatellenes vegyülettel szemben, amely egy zúzott homogenizátum és/vagy szuszpenzió immunizálására való felhasználásán alapul. vagy ilyen daganatokból származó sejtlizátum. Szintén figyelembe kell venni a találmány szerinti eljárás alkalmazását monoklonális antitestek és funkcionális fragmenseik, az ezzel a módszerrel nyert, nukleinsavaikat kódoló monoklonális antitestek, expressziós vektor, gazdasejt és az ezek felhasználásával ellenanyagok előállítására szolgáló eljárás. , valamint ezen antitestek kiválasztására képes hibridómák, antitestek és funkcionális fragmenseik felhasználása gyógyszerek előállítására, daganatellenes készítmény és gyógyszerként való felhasználása. A találmány további alkalmazásra találhat rezisztens daganatok kezelésében. 16 n. és 26 z.p. f-ly, 7 ill., 4 pr., 6 tab.
A találmány a biotechnológia és az orvostudomány területére vonatkozik. ELISA tesztrendszer az 1-es típusú humán immundeficiencia vírussal (beleértve a HIV-1 O csoportot is beleértve) való fertőzés valószínű időpontjának meghatározására emberi vérszérumban. A tesztrendszer az 1-es típusú humán immundeficiencia vírus antigénjein alapuló immunszorbenst, a minták hígítására és a reagensek kimutatására szolgáló oldatot tartalmaz. A találmány tárgya továbbá eljárás az 1-es típusú humán immundeficiencia vírussal, beleértve az O csoportú HIV-1 vírussal való fertőzés valószínű időpontjának meghatározására humán vérszérumban, a páciens vérszérumának a leírt enzim-immunoassay rendszer alkalmazásával történő vizsgálatával. HATÁS: a találmány lehetővé teszi a HIV fertőzés valószínű időpontjának gyors és egyszerű meghatározását. 2 n.p. f-ly, 4 tab., 2 pr.
A.P. OBRYADINA, T.I. ULANOVA
LLC "Diagnosztikai rendszerek Tudományos és Termelő Egyesület",
Nyizsnyij Novgorod
"DS-ELISA-HBeAg" és "DS-ELISA-anti-HBe" ENZIMIMMUNTESZT-RENDSZEREK AZ AKUT ÉS KRÓNUS HEPATITIS B SPECIFIKUS DIAGNOSZTIKAI ÉS ELŐREJELZÉSÉRE
A hepatitis B egy vírusos fertőző betegség, amelyet súlyos
gyulladásos májbetegség. A halálozások körülbelül 1%-a ben következik be
a betegség akut periódusa, az esetek 4-10% -ában krónikussá alakul át
folyamat lehetséges kialakulását későbbi cirrhosis a máj és az elsődleges
hepatocarcinomák.
Az akut hepatitis B előfordulási gyakoriságának csökkenő tendenciája ellenére továbbra is kialakul egy epidemiológiailag veszélyes betegcsoport, akiknél először diagnosztizálnak krónikus vírusos hepatitist, valamint a betegség kórokozóját hordozók csoportja. Továbbra is kedvezőtlen prognózis kapcsolódik a hepatitis B magas előfordulási gyakoriságához a reproduktív korú lakosság körében, valamint a serdülők körében.
Ezért a hepatitis B kezelésének, megelőzésének és diagnosztizálásának kérdései ma különösen aktuálisak.. Jelenleg az enzim immunoassay módszereket széles körben alkalmazzák a fertőzés markereinek kimutatására. A HBV legfontosabb szerológiai markerei közé tartozik az e-antigén (HBeAg) és az e-antigén elleni antitestek (anti-HBe). A HBeAg magas vérfertőzéssel jár, ami a hepatitis B vírus (HBV) aktív replikációját jelzi. Megállapítást nyert, hogy a magas HBeAg titerek magas DNS-polimeráz aktivitásnak felelnek meg, és mindig a teljes Dane-részecskék kimutatásával kombinálódnak. Ha a HBeAg-ot tartalmazó szérum egy egészséges ember vérébe kerül, a fertőzés kockázata sok nagyságrenddel nagyobb, mint a szerokonverzió után.
Akut hepatitis B esetén a HBeAg a fertőző folyamat korai szakaszában már a betegség első klinikai megnyilvánulásainál kimutatható a vérben, egy héttel a HBsAg megjelenése után. A ciklikus lefolyású akut hepatitis B-t (AHB) a HBeAg rövid távú keringése jellemzi. Hamarosan, az icterikus periódus 2-3 hetében megjelenik az anti-HBe, ami lehetővé teszi a betegség kedvező kimenetelének előrejelzését.
Az anti-HBe 2-5 évig, ritkábban több hónapig kering a vérben.
A HBeAg-antiHBe szerokonverzió kezdete az aktivitás meredek csökkenését jelzi
fertőző folyamat. A HBeAg kimutatása a betegek vérében a betegség 2 hónapja után a kóros folyamat krónikusságát jelzi. Ebben az esetben az anti-HBe kialakulhat sok évvel a HBcAg elleni antitestek megjelenése után, vagy egyáltalán nem mutatható ki.
Az anti-HBe megjelenésének kedvezőtlen prognosztikai értéke lehet
A HBV akut periódusa súlyos formákban, ami megfelel a mag előtti zóna mutációjának
a HBV "e-" törzs kialakulása.
cél ez a munka nagyon érzékeny és specifikus fejlesztése volt
ELISA tesztrendszerek HBeAg és anti-HBe kimutatására és főbb jellemzőik értékelésére.
Anyagok és metódusok.
1. Enzim immunoassay tesztrendszer "DS-ELISA-HBeAg". Érvényes tesztindítás
a rekombináns HBeAg poliklonális kecske antitestjei, amelyeket az NPO Diagnostic Systems, Nyizsnyij Novgorod, szilárd fázison adszorbeálnak, és egy konjugátum, amely poliklonális kecske antitest a rekombináns HBeAg ellen, torma-peroxidázzal jelölt, amelyet az NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod gyárt. Az elemzési séma egylépcsős "szendvics", a teljes reakcióidő 1,5 óra. A szérummintát hígítatlanul elemzik.
2. ELISA tesztrendszer "DS-ELISA-anti-HBe". A teszt alapja az
rekombináns HBeAg (AHBV 102), amelyet az NPO Diagnostic Systems gyárt,
Nyizsnyij Novgorod, szilárd fázison adszorbeálva és torma-peroxidázzal készült anti-IgG konjugátum, a Sorbent Service, Moszkva. A reakció két szakaszban megy végbe. A tesztszérumot 1/10-es hígításban az immobilizált antigénhez adjuk, majd inkubálás és a nem kötött komponensek eltávolítása után a specifikus immunkomplexeket torma-peroxidázzal jelölt humán IgG elleni egér monoklonális antitestek segítségével detektáljuk.
3. A kifejlesztett tesztrendszerek értékeléséhez 2178 szérummintát használtunk
vér. Ebből 480 minta egészséges donortól származott. 1680 minta képviseli
a hepatitis B vírus különböző markereit tartalmazó vérszérumminták.
Idővel tizennyolc mintát vettek olyan betegektől, akiknél akut vírusos hepatitis B klinikai diagnózisa volt. Korábban minden mintát megvizsgáltak HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc jelenlétére az NPO Diagnostic Systems, Nyizsnyij Novgorod által gyártott tesztrendszerekkel: "ELISA-HBsAg / m", "DS-ELISA-HBeAg", " DS-ELISA-anti-HBe", "ELISA-anti-HBc".
4. A kifejlesztett tesztrendszerek összehasonlító értékelését a
kereskedelmi gyógyszer "Monolisa HBe", amelyet a BIO-RAD, Franciaország gyárt;
Eredmények és vita. Az NPO "Diagnostic Systems" 2 új diagnosztikai készletet fejlesztett ki: "DS-ELISA-HBeAg" és "DS-ELISA-anti-HBe". A "DS-ELISA-HBeAg" tesztrendszer a hepatitis B vírus e-antigénjének kimutatására szolgál az emberi vér szérumában (plazmában) enzim-immunoassay segítségével, és specifikus diagnózisra, a fertőző folyamat aktivitásának meghatározására használható. , amely előrejelzi a hepatitis B súlyosságát és kimenetelét.
A "DS-ELISA-anti-HBe" tesztrendszert a hepatitis B vírus e-antigénje elleni IgG antitestek kimutatására tervezték humán szérumban (plazmában) és
a fertőző folyamat lefolyásának előrejelzésére és a hepatitis B folyamatban lévő terápia nyomon követésére használják.
Az új tesztek specifitásának tanulmányozásához megbecsültük az eloszlást
tartalmazó és nem tartalmazó vérszérumminták optikai sűrűsége (OD).
HBeAg vagy anti-HBe. Egészséges donorok vérszérummintáit és a hepatitis B vírus különböző markereire kiválasztott vérszérummintákat használtuk.
vérátömlesztési állomások. A vizsgálat eredményei a két populáció jelentős elkülönülését mutatták ki. A HBeAg-t nem tartalmazó szérumminták OD értékei 0,011 és 0,111 között, a HBeAg-t tartalmazó szérumminták fő csúcsa 2,186 és 3,186 között mozgott (1a ábra).
1a. Tartalmazó és nem tartalmazó szérumminták OD megoszlásaHBeAga "DS-ELISA-" tesztrendszerbenHBeAg»
Az alacsony OD (0,3-0,6) szérumok csoportjának megfelelő csúcs valószínűleg a fertőzési folyamat korai szakaszában vett szérumminták.
Már a lappangási időszakban is rendszeresen regisztrálják a HBsAg-t és a HBeAg-t a betegek vérében, ami megerősíti potenciális epidemiológiai veszélyüket.
Az anti-HBe-t nem tartalmazó szérumminták optikai sűrűségtartománya
0,002 és 0,122 közötti tartományban volt, és az anti-HBe-t tartalmazó szérumminták fő OD csúcsa 2,431 és 3,231 között volt (1b. ábra).
Rizs. 1b. Az anti-H-t tartalmazó és nem tartalmazó szérumminták OD eloszlásaLenni, a "DS-ELISA-anti-" tesztrendszerbenHBeAg»
Az anti-HBe pozitív minták OD eloszlásának jellemzőit tanulmányoztuk.
szérum, amely ( n=78), és nem tartalmaz HBsAg-t ( n=56). 
Rizs. 2a. HBe-pozitív szérummintákat tartalmazóHBsAga "DS-ELISA-anti-" tesztrendszerbenHBe».
2b. Az OP anti-HBe-pozitív szérumminták, amelyek nem tartalmaznak HBsAga tesztrendszerben "DS-ELISA-anti-HBe».
A HBsAg-t nem tartalmazó anti-HBe-pozitív szérumminták 87%-ának optikai sűrűsége 0,41 és 0,81 között volt (2b. ábra). Ugyanakkor a HBsAg-t tartalmazó anti-HBe-pozitív szérumminták mindössze 14%-ának volt OD ebben a tartományban (2a. ábra). Ismeretes, hogy a késői lábadozás fázisában, ahol a HBsAg-re negatív reakció lép fel, fokozatosan csökken a HBeAg elleni antitest-titer (2b. ábra). Ezért lehetséges, hogy az anti-HBe-pozitív minták túlnyomó koncentrációja 0,8-nál kisebb OD-nek felel meg.
A kapott adatok a pozitív és a szétválasztás megbízhatóságát jelzik
negatív vérszérumminták a betegség stádiumától függetlenül. A "DS-ELISA-HBeAg" és a "DS-ELISA-antiHBe" tesztrendszerek érzékenységének és specificitásának vizsgálatát a "Monolisa HBe" teszttel ("BIORAD", Franciaország) összehasonlítva végeztük (1. táblázat).
Asztal 1
Az érzékenység és a specificitás összehasonlító jellemzői
tesztrendszerek DS-ELISA-HBeAg és DS-ELISA-antiHB
| Index | A HBeAg definíciója | Az anti-HBe definíciója |
||
| NPO "DS", DS-ELISA-HBeAg | BIO-RAD, "Monolisa HBe" | NPO "DS", DS-ELISA-antiHBe | BIO-RAD, |
|
| Mennyiség kutatott minták | 67 | 67 | 32 | 32 |
| Kiderült pozitív minták | 47 | 47 | 16 | 16 |
| Kiderült negatív minták | 20 | 20 | 16 | 16 |
Az 1. táblázatban látható adatok 100%-os egyezést mutatnak az eredmények között.
Ismeretes, hogy a HBeAg és az anti-HBe kombinált indikációja, különösen azok kvantitatív értékelése, további prognosztikai értékkel bír. Az anti-HBe titer gyors növekedése az aktív humorális immunválaszt jellemzi, és gyakorlatilag kiküszöböli a krónikussá válás veszélyét. Elemeztük a HBeAg/anti-HBe tartalom változását akut vírusos hepatitis B klinikai diagnózisú betegek vérszérummintáiban (2. táblázat).
2. táblázat
A HBeAg/anti-HBe szerokonverzió dinamikája akut hepatitis B-ben szenvedő betegeknél
| Megvizsgálták beteg | A vérvétel napja* | HBeAg | HWe-ellenes Ref./Opt. | Anti-HBc | anti- HBc IgM |
|
| 1 | 1,4+ | 2,1+ | + | + | + |
|
| 12 | 0,5- | 1,0+ | + | + | + |
|
| 21 | 0,3- | 1,3+ | + | + | + |
|
| 1 | 1,2+ | 1,2+ | + | + | + |
|
| 5 | 0,4- | 1,0+ | + | + | + |
|
| 13 | 0,2- | 2,5+ | + | + | + |
|
| 1 | 1,2+ | 0,6- | + | + | + |
|
| 21 | 0,2- | 4,6+ | + | + | + |
|
| 30 | 0,2- | 9,7+ | + | + | + |
|
| 1 | 2,1+ | 0,5- | + | + | + |
|
| 8 | 0,6- | 1,1+ | + | + | + |
|
| 28 | 0,3- | 2,8+ | + | + | + |
|
| 1 | 0,7- | 2,2+ | + | + | + |
|
| 8 | 0,3- | 2,2+ | + | + | + |
|
| 15 | 0,3- | 2,8+ | + | + | + |
|
| 38 | 0,2- | 3,0+ | + | + | + |
|
| 6 | 1 | 1,1+ | 4,4+ | + | + | + |
| 14 | 0,5- | 3,8+ | + | + | + |
* a kórházi felvételtől
Minden szérummintát teszteltünk szerológiai markerek jelenlétére.
OGV: HBsAg, anti-HBc, anti-HBc IgM. A megfigyelési időszak 13 és 38 nap között változott. Az 1., 2. és 6. betegekben az anti-HBe már a HBeAg titer csökkenésének hátterében is kimutatható volt. A 3. és 4. betegekben az anti-HBe a HBeAg vérszérumból való eltűnése után jelent meg a 21. és 8. napon. Az 5. számú beteg vérszérumában a HBeAg kimutatásának elemzése a kórházba történő felvételkor negatív eredményt mutatott. Ugyanakkor az anti-HBe-re való átállást már a vizsgálat első napján regisztrálták.
Minden alany tendenciát mutatott a HBeAg elleni antitestek titerének növekedése felé
vérszérum, amely lehetővé teszi a klinikai folyamat kedvező dinamikájának előrejelzését
az OGV megnyilvánulásai és a gyors gyógyulás.
Az új tesztrendszerek tanulmányozása megmutatta azok magas diagnosztikai megbízhatóságát. A DS-ELISA-HBeAg" és a "DS-ELISA-antiHBe" összehasonlítás eredménye 100%-os egyezést mutatott a "Monolisa HBe" teszttel.
A hepatitis B-ben szenvedő betegek szérummintáinak vizsgálatában dinamikában, tesztekben
megerősítette a magas érzékenységet és specificitást.
A vizsgálati minták és a konjugátum rövid inkubációs ideje (1 óra) lehetővé teszi, hogy a lehető legrövidebb időn belül meghatározzuk a terápiás intézkedések helyes taktikáját. Az elkészített tesztrendszerek könnyen felállíthatók, gazdaságosak (a HBeAg meghatározásához 50 µl szérum, az anti-HBe meghatározásához 10 µl szérum szükséges). A tesztek kiváló minőségi jellemzői lehetővé teszik azok sikeres alkalmazását a fertőzési folyamat lefolyásának előrejelzésében és a hepatitis B folyamatban lévő terápia monitorozásában.
IRODALOM
1.Mayer K.P. Hepatitis és a hepatitis következményei / K.P. Mayer.– M., GEOTAR, Medicina, 1999.- C.720
2.Onishchenko G.G. A vírusos hepatitis terjedése, mint nemzetbiztonsági veszély / G.G. Onishchenko, L.A. Dementieva // Mikrobiológiai folyóirat. –2003.-4. sz.- P.93-99.
3.Sorinson S.N. Vírusos hepatitis / S.N.Sorinson. - Szentpétervár, Teza, 1997.- 306 p.
4. Baumeister M. Hepatitis B vírus és antigénspecifikus epitópok és a kereskedelmi forgalomban kapható anti-HBe immunoassays korlátai / M. Baumeister // Journal of Medical Virology.- 2000.-N 60.- P.256-263.
5.Kane M. Globális program a hepatitis B fertőzés leküzdésére / M. Kane// Vaccine. - 1995.-N131(1. melléklet).- R.47-6. Shunichi SzoO. Hepatitis B vírustörzsek mutációkkal a Core Promoterben fulmináns hepatitisben szenvedő betegeknél / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Annals of Internal Medicine. - 1995.- N122.- R.241-248.
7. Ou J.-H. A hepatitis B vírus e antigén molekuláris biológiája./ J.-H.Ou // Journal of Gastroenterology and Hepatology. - 1997.- 12. sz. (1. melléklet) - R. 178-187.
8.Tiollais P. A hepatitis B vírus. / P.Tiollais, C.Pourcel, A.Dejean // Természet. - 1985. - P.317, 489-495
Megjelent: Zh. "Klinikai laboratóriumi diagnosztika" - 2005.-№6-S.-34-37
A HIV-fertőzés ELISA-val végzett vérminták vizsgálata az egyik legkorábbi és legmegbízhatóbb diagnosztikai módszer. Az enzim immunoassay azon kevés tanulmányok egyike a PCR mellett, amelyek nagy valószínűséggel megerősítenek vagy cáfolnak egy olyan szörnyű diagnózist, mint a HIV-fertőzés vagy az AIDS. Amióta a Szovjetunióban felfedezték az immunhiányos vírussal való fertőzés első eseteit, és ez 1983. Nem találtak fel olyan gyógyszert, amely teljesen meggyógyítaná ezt a fertőzést, valamint vakcinát ellene, de ez az eljárás aktív fejlesztés alatt áll. Eközben csak a HIV-fertőzés korai diagnosztizálása teszi lehetővé a kóros folyamat ellenőrzése alatt tartását.
Információs kirándulás a HIV-fertőzésről
A humán immunhiányos vírus egy retrovírus, amely a betegség lassú lefolyását okozza. A szervezetbe behatolva az immunhiányos vírus elsősorban a nyirokszövetet érinti. Az egészséges immunitás T-limfocitákat termel, hogy felismerje az újonnan érkező vírust. Ezután adjon tájékoztatást az antitesteknek, milyen jelek alapján ismerje fel és semmisítse meg az immunhiányos vírust. Az immunhiányos vírus "felismerésének" folyamata a CD4 receptor fehérjék segítségével történik. De éppen ebben a szakaszban figyelhető meg valami furcsa, valami, ami sok éven át nem engedte, hogy legyőzzük a 20. század pestisét.
A CD4 immunitás sejtje érintkezésbe kerül az immunhiányos vírussal, hogy felismerjen egy idegen ágenst. Ebben a pillanatban az immunhiányos vírus a limfocita membránhoz tapad, összeolvad a receptorhéjjal, és egy kapszulát juttat be genetikai információival és specifikus vírusfehérjékkel az immunsejtbe. És a sejt, amelyet az immunhiány-vírus kiszámítására küldenek, mostantól maga is megfertőződik. De minden sajnos nem egy cellával történik, hanem nagyon nagy léptékben. Az emberi immunrendszer a már "korábbi" és mára fertőzött sejtekre válaszul új antitesteket hoz létre. De az immunhiányos vírusok a korábban leírt séma szerint újra és újra elfogják a védősejteket.
Így az emberi immunitás ördögi körbe kerül. Az egyetlen módja annak, hogy segítsünk a szervezetnek, egy nagyon aktív antiretrovirális fertőzés (HAART) végrehajtása. És váltson át egy teljesen egészséges életmódra és táplálkozásra, amely nagy immunitási erőforrásokat szabadít fel a felesleges munkától. A tudósok szerte a világon összefogtak, és folyamatosan kutatásokat végeznek a HIV-fertőzés hatékony gyógymódjának keresése érdekében.
Nem is olyan régen kísérletet végeztek a CCR5 fehérjével, amely az emberek bizonyos részének szervezetének veleszületett immunitását biztosítja a HIV-fertőzéssel szemben. A tudósok önkéntesek véranyagát génterápiának vetették alá, hogy a CCR5-öt bejuthassák a T-segédsejtekbe. Ez az összes betegnél a retrovírus DNS számának jelentős csökkenéséhez vezetett. Egy betegnél pedig ezzel a módszerrel teljesen eltüntették az immunhiányos vírust. E kísérlet alapján továbbra is csak egyetlen esetben feltételezhető a 20. század szörnyű pestisjárványa feletti sikeres győzelem.
2016 óta ez a tevékenység jelentősen előrehaladt. Lenyűgöző eredményeket értek el az immunhiányos vírus kilencven százalékos elpusztításával az izomszövet által kiválasztott antitestek támadásával, megkerülve az elfogott immunitást. Ennek érdekében egy speciális gént ültettek be kísérleti élőlények izomszövetébe, amely ugyanezeket a gyilkos sejteket termelte a HIV-fertőzés elpusztítására. De ezt a módszert még nem alkalmazták emberekben, bár a következő években tervezik.
Ráadásul nincs értelme elveszteni a kedvet. És jobb, ha az immunhiányos vírust a lehető legkorábban azonosítják, ami ELISA segítségével megtehető, ha fennáll a fertőzés veszélye. És ha a diagnózis megerősítést nyer, tartsa fenn immunitását a HAART segítségével, amíg a HIV-fertőzés új gyógymódját nyilvánosságra nem hozzák.
A HIV-fertőzés diagnosztizálása
A HIV-fertőzés ELISA módszere az immunhiányos vírus elleni antitestek kimutatására irányul emberi vérmintában. A szervezetbe kerülve a retrovírusok, amelyek magukban foglalják a HIV-fertőzést is, nem kezdik el azonnal a CD4 immunsejtek (T-limfociták) aktív befogását. De nem szabad megvárnia, amíg az agresszív szerek halálos tevékenységet kezdenek a szervezetben. Nem titok, hogy bármely betegség esetén, és a HIV-fertőzés sem kivétel, minél korábban kezdik a terápiát, annál hatékonyabb a kezelés.
Ami a humán immunhiányos vírust illeti, a teljes gyógyulás eseteit hivatalosan nem jegyezték fel. De ez egyáltalán nem jelenti azt, hogy fel kell adnia, és hagynia kell a betegséget. A HIV-fertőzöttek akár 75-80 évig is élnek, feltéve, hogy a kezdeti stádiumban észlelik őket, és folyamatos fenntartó terápiában részesülnek.
A HIV-fertőzés diagnosztizálására szolgáló enzim-immunoassay módszer nagy, körülbelül 97–99%-os megbízhatósággal rendelkezik. De ez a kis, 1–3%-os rész adhat álpozitív vagy fals negatív eredményt a HIV-fertőzés ELISA-val történő diagnosztizálásában. Ebből a célból az enzim immunoassay indikációinak végleges megerősítésére vagy cáfolatára az immunblot (IB) nevű analízist alkalmazzák.
Mik az ELISA és IB módszerek a HIV fertőzésre
A 4. generációs HIV-fertőzés enzimes immunoassay-je nemcsak a patogén sejtek felkutatására és azonosítására irányul, hanem számuk meghatározására is. Ezért egy enzim-immunoassay kvalitatív és kvantitatív tesztelést is kombinál. A HIV-fertőzés 4. generációs ELISA módszere a feltételezett fertőzés pillanatától számított hat hétig az eredmények 100%-os megbízhatóságát mutatja.
Az enzim immunoassay specifikus antitestek és rokon antigének kölcsönhatásán alapul. Egy speciális enzimnek köszönhetően jön létre az „antigén-antitest” kombináció. Ennek a HIV-fertőzéssel szembeni immunglobulinok kimutatására szolgáló reakció végrehajtásához vérmintát helyezünk egy 96 lyukú polisztirol panelbe, amelyben a rekombináns fehérjék szilárd formában vannak (szorbeáltak). A vérszérumot tartalmazó tartályban található antigének vagy antitestek felismerik az általuk ismert tárgyat, és azzal az „AT-AG” vegyületet alkotják. Az 1-es és 2-es típusú immunhiányos vírusok elleni antitestek megállapítására a HIV AG-AT DS IFF tesztjét is használják.
Az ELISA módszer előnyei a 4. generációs HIV-fertőzésre:
- Nagy megbízhatóság, több mint 96%. A hamis eredményeket gyakrabban nem maga az elemzés, hanem a nem megfelelő előkészítés vagy a közelmúltban fellépő légúti betegség okozza.
- Az immunglobulinok jelenlétének és mennyiségének meghatározása.
- A HIV-terápia eredményének nyomon követésének képessége.
- A HIV-teszt eredményeinek megszerzésének sebessége, amely több óra, ha diagnosztikai központban végzik.
- Az immunhiányos vírus szerológiai ablakában informatív a HIV-fertőzés négy elemzése, amelynek immunenzimatikus reaktivitása szignifikánsan magasabb, mint elődei.
Az immunoblot egy szűrés, amelyet az antigén típusának meghatározására alkalmaznak. Az IB szűrővizsgálatot a HIV-fertőzés ellenőrző tesztjeként használják 5-7 héttel az ELISA után. Az IB módszer az elektroforézis alkalmazásán alapul az immunhiányos vírusok antigénjeinek elválasztására. Az antigének elválasztási folyamata lehetővé teszi a specifikus immunglobulinok kimutatását a HIV-fertőzés minden egyes specifikus antigénjére.
Az immunoblot-vizsgálatot akkor alkalmazzák, ha a HIV-fertőzés enzim immunoassay tesztje egymás után kétszer hamis pozitív vagy fals negatív eredményt mutat. Gyanú merülhet fel a HIV-fertőzés jellegzetes tüneteinek hiányában vagy éppen ellenkezőleg. Bár itt is lehetnek különféle változatok.
A HIV-fertőzés ELISA-eredményeinek értelmezése
Abban az esetben, ha az ELISA pluszt az IB-szűrés pozitívnak igazolja, kétségtelen, hogy a beteg szervezetében immunhiányos vírus van. De ha például az IFF pozitív a HIV-re, és az immunblot negatív, akkor arra a következtetésre jutnak, hogy a fertőzés „mínusz”, vagyis hiányzik.
Csak ilyen helyzetben küldik a beteget további vizsgálatra, hogy biztosan kizárják az immunhiányos vírust.
A HIV 4. generációs „mínusz” enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatával és pozitív immunoblottal lehetséges, hogy egy másik fertőzés is jelen van a szervezetben. Lehetséges, hogy valakinek valamilyen autoimmun betegsége, onkológiai folyamata van, néha a bőr vagy az ízületek pikkelysömöre ad hamis pozitív eredményt mind az ELISA, mind az IB.
Egy másik lehetőség, amikor a HIV-fertőzés enzim immunoassay tesztje „mínusz” eredményt mutat, az immunoblot pedig szintén „mínusz” értékű, itt csak örülni lehet az immunhiányos vírus hiánya miatt. De ha a HIV-fertőzésben rejlő specifikus jelek vannak, vagy ha valaki szoros kapcsolatban áll HIV-pozitív beteggel. Ezután további diagnosztikát is kell végezni, például polimeráz láncreakciót (PCR). Ezenkívül a kétes „mínusz” vagy „plusz” jelzések esetén a páciensnek 4, lehetőleg 6 hónap elteltével ajánlott újra vért venni.
A T-limfociták számának normája és eltérése HIV-fertőzésben:
- A T-sejtek normája 1000-2900 µl.
- AIDS korai 500-200 µl.
- AIDS késői, kevesebb, mint 200 µl.
A betegséget könnyebb megelőzni, mint gyógyítani – ez mind közismert bölcsesség. A szabad erkölcs elterjedése óta a társadalomban számos nemi betegség jelent meg. A HIV-fertőzést és az AIDS-et még mindig gyógyíthatatlan betegségek közé sorolják. Az átvitel módja főként szexuális és vér útján történik. Lehetetlen száz százalékosan megvédeni egyetlen betegségtől. Sok előre nem látható helyzet adódik még azoknak is, akik erkölcsös és tiszta életmódot folytatnak. A HIV-fertőzés és más veszélyes fertőzések megnövekedett kockázata esetén a vérdiagnosztika felbecsülhetetlen értékű.
Kapcsolatban áll