HIV-nakkuse diagnoosimisel kasutatakse 4 meetodite rühma:
1. Viiruse, selle antigeenide või RNA koopiate olemasolu määramine patsiendilt või HIV-nakkusega patsiendilt saadud materjalides
2. Seroloogiline diagnostika, mis põhineb HIV pinna (gp 120 ja gp 41) ja sisemiste (p 18 ja p 24) HIV valkude spetsiifiliste antikehade tuvastamisel.
3. Patognomooniliste (spetsiifiliste) HIV-nakkuse muutuste tuvastamine immuunsüsteemis.
4. Oportunistlike infektsioonide (AIDS-iga seotud haigused) laboratoorne diagnostika.
1. Viroloogiline diagnostika. HIV-i isoleerimise materjaliks on vere T-lümfotsüüdid, luuüdi leukotsüüdid, lümfisõlmed, ajukude, sülg, sperma, tserebrospinaalvedelik ja vereplasma. Saadud materjali kasutatakse T-lümfotsüütide (H9) pideva kultuuri nakatamiseks. HIV-i määramine rakukultuuris toimub CPP (simplastide moodustumine), samuti immunofluorestsentsi, elektronmikroskoopia, väljendunud pöördtranskriptaasi aktiivsuse abil. Kaasaegsed uurimismeetodid võimaldavad tuvastada ühe nakatunud lümfotsüüdi 1000 raku kohta.
Viiruse antigeenide tuvastamine nakatunud T-lümfotsüütides viiakse läbi monoklonaalsete antikehade abil
HIV-nakkuse prognoosi ja raskusastme määramisel on viimastel aastatel olnud määrava tähtsusega HIV RNA koopiate arvu määramine vereplasmas polümeraasi ahelreaktsiooni (PTCR) meetodil ehk nn viiruskoormusel. Kui ravi mittesaavate patsientide viiruskoormus on alla avastamispiiri (see on vähem kui 5000 HIV RNA koopiat 1 ml plasmas), näitab see progresseerumist või aeglast progresseerumist. Nakatumise aste on minimaalne. Kõrge viiruskoormus (üle 10 000 RNA koopia 1 ml plasmas) patsientidel, kelle CO4-lümfotsüüdid on alla 300 1 µl-s, viitab alati haiguse progresseerumisele.
2. Seroloogiline diagnoos. Praegu on see kõige populaarsem.
Uuritav materjal: 5 ml. hepariniseeritud veri, mida võib enne laborisse toimetamist hoida külmkapis 6-8 tundi, kuid mitte külmutada.
AIDS-i seroloogiliseks diagnoosimiseks kasutatakse peamiselt ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi meetodeid standardsete ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsidega (ELISA). See on sõelumismeetod. Toimimispõhimõte põhineb klassikalisel otsesel ELISA põhimõttel. Immunosorbendid on polüstüreenist tabletid immobiliseeritud inaktiveeritud viirusspetsiifilise antigeeniga, mis on saadud HIV-st või sünteetiliselt. Seejärel lisatakse testitud seerum lahjendatult. Inkubeerimine viiakse läbi antigeeniga süvendites. Pärast AG seondumist AT-ga pestakse seondumata valke kolm korda ja seejärel lisatakse süvenditesse inimese immunoglobuliinide vastaste antikehade konjugaat koos ensüümi märgistusega. Spetsiifilise AG + AT kompleksi moodustumine tuvastatakse ensüümi substraadi (ortofenüleendiamiini ja vesinikperoksiidi lahuse) sisestamisega. Selle tulemusena muutub söötme värvus võrdeliselt antikehade hulgaga. Uuringu tulemused võetakse arvesse spektrofotomeetril. Vere seerumeid, millel on ELISA järgi viirusspetsiifilised antikehad, tuleks täiendavalt uurida immuunblotanalüüsiga.
Immuunblotanalüüs on kinnitav test, kuna see tuvastab erinevate HIV-valkude vastaseid antikehi. See põhineb HIV-valkude esialgsel fraktsioneerimisel molekulmassi järgi (eraldamisel) polüakrüülamiidgeelelektroforeesiga, millele järgneb antigeenide ülekandmine nitrotselluloosmembraanile. Seejärel kantakse uuritav seerum membraanile. Sel juhul moodustavad spetsiifilised antikehad spetsiifilise antigeeniga kompleksi (gp.120, gp.41, p.24, p.18). Uuringu viimane etapp on erinevate HIV valkude vastaste antikehade tuvastamine. Selleks lisatakse süsteemi inimese valkude vastased antikehad, mis on märgistatud ensüümi või radioisotoopmärgisega. Seega tuvastatakse (või ei tuvastata) patsiendi seerumis viirusspetsiifilised antikehad kõigi või enamiku HIV-antigeenide vastu.
3. Immuunseisundi uuringud. Eesmärgiks tuvastada:
1) CD4 / CD8 rakkude suhte vähenemine (N 2 ja >, AIDSiga - 0,5 ja<);
2) CD4 rakkude sisalduse vähenemine (<200 клеток/мл.);
3) ühe laboratoorsete tunnuste, sealhulgas aneemia, leukopeenia, trombotsütopeenia, lümfopeenia olemasolu;
4) Ig A ja Ig G kontsentratsiooni tõus vereseerumis;
5) lümfotsüütide blastgranulatsiooni reaktsiooni vähenemine mitogeenidele;
6) GTZ nahareaktsiooni puudumine mitmele antigeenile;
7) ringlevate immuunkomplekside taseme tõus.
HIV-nakkuse diagnoosimine varases staadiumis on hädavajalik. Sellest sõltub ravi keerukus ja patoloogiliste tüsistuste areng. Praeguseks on sellise kohutava diagnoosi tuvastamiseks palju uuenduslikke uurimismeetodeid. Seda arutatakse edaspidi.
Millised meetodid on olemas HIV-nakkuse diagnoosimiseks?
Tegelikult on HIV-i diagnoosimiseks palju meetodeid. Keskmiselt jagunevad need alarühmadeks - laboriuuringud, diferentsiaaluuringud ja riistvara. Lisaks on vaja arvesse võtta diagnostiliste meetmete etappe. Sellest kõigest ja muudest aspektidest räägime lähemalt hiljem.Laboratoorsed diagnostikad
Vaadeldav diagnostiline meetod nõuab kõrgelt spetsialiseeritud laborit. Sellistel tingimustel saab tuvastada järgmised näidustused:- Määratakse antikehad, patogeenide antigeenid ja immuunkompleksid.
- Kui viirus avastatakse, siis seda kultiveeritakse ning tuvastatakse genoomne materjal ja ensüümid.
- Hinnatakse immuunsüsteemi funktsionaalsust.
- Teostatakse epidemioloogilist järelevalvet ja inimese immuunpuudulikkuse viiruse levimuse seiret.
- Uuritakse leviku dünaamikat ja määratakse populatsioon.
- Võimalik on määrata siirdamise ja vereülekande ohutuse aste.
Diferentsiaaldiagnoos
Seda haigust eristatakse erinevatel põhjustel:- HIV-nakkuse esimeste sümptomite ilmnemisel, mis on ägedas faasis, eriti kui esineb mononukleoositaoline sündroom. Diagnoos põhineb sellistel patoloogiatel nagu nakkuslik mononukleoos, süüfilis, punetised, adenoviirus, äge leukeemia, jersinioos, hüperkeratoos.
- Kui HIV läheb püsiva iseloomuga generaliseerunud lümfadenopaatia staadiumisse, siis eristatakse haigusi, mille puhul lümfisõlmed suurenevad. Näiteks lümfotsütaarne leukeemia, süüfilis, toksoplasmoos, lümfogranulomatoos. Selles faasis muutuvad patsiendi sümptomid selgemaks.
- Sekundaarsete patoloogiate tuvastamisel eristatakse immuunpuudulikkust, mis on tekkinud teatud ravimirühmade - kiiritusravi, glükokortikosteroidravimite ja tsütostaatikumide - võtmise taustal. Immuunsus väheneb oluliselt ka selliste haiguste korral nagu müeloom, lümfoidne leukeemia, onkoloogilised kasvajad jne.
- Kui HIV lokaliseerub suuõõnes, siis eristuvad suu limaskesta haigused.
Kiirdiagnostika
Tänaseks on välja töötatud isegi kiirtestid, tänu millele on 15 minuti pärast võimalik määrata HIV-nakkuse olemasolu. Neid on mitu liigid:- Kõige täpsem test on immunokromatograafiline. Test koosneb spetsiaalsetest ribadest, millele kantakse kapillaarveri, uriin või sülg. Kui tuvastatakse HIV-vastased antikehad, on ribal värv ja kontrolljoon. Kui vastus on eitav, on nähtav ainult joon.
- OraSure Technologies1 kodukasutuse komplektid. Arendaja – Ameerika. Selle testi on heaks kiitnud FDA.
- On ka teisi kiirteste, kuid need ei ole spetsialistide heakskiitu ja seetõttu ei ole need testi jaoks soovitavad.
Kui inimese immuunpuudulikkuse viiruse suhtes ilmneb positiivne reaktsioon, on vaja täiendavalt läbi viia asjakohane uuring kliinilises keskkonnas.
Varajane diagnoosimine
HIV varajane diagnoosimine on olemas selleks, et õigeaegselt määrata kindlaks immuunkahjustuse riskid. Tänu sellele peatatakse haigus algstaadiumis, mille tulemusena muude siseorganite nakatumine väheneb miinimumini.Patoloogia varases staadiumis iseseisvaks diagnoosimiseks pöörake tähelepanu sel juhul esinevatele sümptomitele:
polümeraasi ahelreaktsioon
PCR-i või polümeraasi ahelreaktsiooni kasutatakse nakkusetekitajate, sealhulgas HIV-viiruse määramiseks. Sel juhul tuvastatakse selle RNA ja patogeeni saab tuvastada väga varajases staadiumis (nakatusest peab mööduma vähemalt 10 päeva).See on üsna kallis diagnostika, kuid mõnel juhul võib see anda vale tulemuse. Seetõttu kasutatakse HIV-i skriinimisel lisaks muid meetodeid.
Polümeraasi ahelreaktsiooni kvantitatiivne ekspressioon on vajalik HIV-i ja tüsistuste, nagu AIDS, arengukiiruse määramiseks. See võimaldab õigeaegselt määrata HIV-nakkusega patsiendi eeldatava eluea prognoosi.
immuunbloteerimine
Immuunblotanalüüs on viimane meetod patsiendi uurimiseks enne täpset diagnoosi. Tehnika põhineb viirusvalkudega spetsiaalse riba (nitrotselluloosi) kasutamisel. Arst kogub veeniverd ja saadab selle seejärel töötlemiseks. Pärast seda protsessi eraldatakse vadakuvalgud molekulmassi ja laengu alusel geelitaoliseks aineks. Selleks kasutatakse aktiivse elektriväljaga seadmeid. Seejärel asetatakse ülaltoodud riba sellesse geeli ja blotitakse, st kuivatatakse. Seda tehakse spetsiaalses kambris.Tulemuse määrab verevalkude seondumine nitrotselluloosribale kantud valkudega. Kui patsiendi kehas on HIV, on üksikud jooned poolläbipaistvad. HIV-i olemasolust märku andvate joonte tuvastamiseks on teatud näitajad. Kuid on ka madalaid numbreid. Sel juhul on oht inimese immuunpuudulikkuse viiruse algfaasi tekkeks, onkoloogiliste kasvajate tekkeks, tuberkuloosiks ja vereülekandeks.
ELISA test
ELISA test viitab sõeluuringumeetodile HIV-kahtluse tuvastamiseks. Uuring viiakse läbi laboris. Seal tekivad spetsiifilised haigusvalgud, mis suudavad kinni püüda inimkeha toodetud valgud. Reaktiividega suhtlemisel indikaatori värvus muutub. Seega ei tuvastata patogeeni ennast, vaid viirusevastaseid antikehi. See test võimaldab tuvastada inimese immuunpuudulikkuse viiruse arengu varases staadiumis.ELISA teste on mitut tüüpi, kuid kasutatakse ainult uusimaid arendusi - 3. ja 4. põlvkond. Tehnika põhineb veenist verevedeliku kogumisel. On teatud ettevalmistus – patsient ei tohi süüa 8 tundi enne analüüsi. Seetõttu kogutakse verd hommikul tühja kõhuga.
Kuidas diagnoositakse inkubatsiooniperioodil?
HIV-viiruse inkubatsiooniperiood on 90 päeva. Selle intervalli jooksul on patoloogia olemasolu raske tuvastada, kuid seda saab teha PCR-i abil.Pärast seda on inimene aastaringselt arstide tähelepaneliku tähelepanu all ja läbib mitmeid uuringuid. Alles pärast seda perioodi on võimalik täpselt määrata diagnoos - HIV.
Laste diagnoosimise tunnused
Kui laps sünnib naisele, kellel on diagnoositud inimese immuunpuudulikkuse viirus, uuritakse last esimese 3 eluaasta jooksul. Fakt on see, et ema antikehad võivad sel perioodil olla lapse verevedelikus. Kuid samal ajal ei kinnita isegi vereanalüüsid nakatumist. Muidugi on palju juhtumeid, kus haigus tuvastatakse kohe pärast sündi. Lisateave HIV-nakkusega raseduse kohta.Esimesed HIV-testid lapsel tehakse teisel päeval pärast sündi. Seejärel pärast 2 kuu vanuseks saamist, seejärel iga 4 kuu järel.
Patoloogia tuvastamiseks lapsepõlves kasutatakse seroloogilisi uurimismeetodeid, PCR-i. Just viimast tüüpi haiguse diagnoosimine võimaldab tuvastada viiruse DNA ja RNA imiku esimestel elukuudel. Selleks kogutakse beebilt verd, mis asetatakse seejärel EDTA säilitusainet sisaldavasse katseklaasi. Lisaks hoitakse materjali 2 päeva temperatuuril, mis ei ületa 8 kraadi. Kuid vere külmutamine ei ole vastuvõetav. Kasutada võib ka kuiva verevedelikku, mis saadakse täisverest ja kuivatatakse.
Diagnostika etapid
Inimese immuunpuudulikkuse viiruse tuvastamise diagnostilised meetmed viiakse läbi kolmes põhietapis:- Eelsorteerimine ehk sõelumine.
- Viitediagnostika.
- Kinnitav etapp või ekspertdiagnostika.
Sõelumine – eelsorteerimine
Uuringu esialgne etapp võimaldab teil määrata kogu antikehade ensüümi immuunanalüüsi, st ELISA abil. Teavet viiruse esinemise kohta saate juba 3 kuud pärast nakatumist. Kuid oli juhtumeid, kui patogeeni tuvastati varasemates etappides - 3 nädala pärast.Peate teadma, et ELISA võib teatud tingimustel anda valepositiivse tulemuse. See võib olla lapse kandmise perioodil, autoimmuunhaiguste (psoriaas, reuma, luupus jne), Epstein-Bari tõve ja muude patoloogiate korral.
Viitediagnostika
Selles etapis kasutatakse erinevaid teste vähemalt kaks korda, kõige rohkem kolm korda. Kui kahel juhul on tulemus positiivne, on vajalik kinnitusetapp.Kinnitamise etapp - ekspert
Selles etapis tehakse diagnoos immuunblotanalüüsi abil. Antikehad määratakse patogeeni teatud valkude järgi. Tulemus on tavaliselt täpne, kuid on ka valepositiivse vastuse juhtumeid. See on võimalik AIDSi arengu lõppstaadiumis ja HIV-haiguse tuulevaikuse ajal. Seetõttu on oluline teatud aja möödudes läbida täiendav protseduur.Vead diagnostika ajal
Nii paradoksaalne kui see ka ei tundu, on võimalus saada valepositiivne tulemus. Tavaliselt juhtub see koduse testimise ajal, eriti juhtudel, kui kasutatakse kiirteste. Kliinilises keskkonnas on see võimalik ainult teatud haiguste või seisundite korral:
- raseduse periood;
- keha ristreaktsioon;
- autoimmuunsed patoloogilised häired;
- külmetushaigused ägedas staadiumis;
- onkoloogilised kasvajad;
- tuberkuloos;
- skleroos.
Funktsioon - kui inimene on nakatunud viiruste ja seentega, võib ka testi tulemus olla vale. See kehtib eriti allergiliste seisundite korral.
Ettevalmistus testimiseks
Väga oluline on järgida HIV-testimiseks ettevalmistamise reegleid, sest sellest sõltub tulemuse saamise täpsus:- Kõigepealt peate külastama vastavat spetsialisti, et ta saaks teile täpsed juhised ettevalmistustoimingute kohta.
- Vereanalüüsid võetakse alati tühja kõhuga. Seetõttu ei saa te enne kliinikusse minekut midagi süüa. Teie viimane söögikord peaks olema hiljemalt kell 21.00.
- Katsepäeval on suitsetamine keelatud.
- Ärge jooge alkoholi eelmisel õhtul.
- Kui te võtate mingeid ravimeid, pidage kindlasti eelnevalt nõu oma arstiga. Kuna paljud ravimid on enne HIV-testide tegemist keelatud.
- Paar päeva enne analüüsi kogumist ei ole soovitatav teha ultraheliuuringut.
- Päev või paar enne protseduuri ei tasu süüa liigselt rasvaseid toite ja tarbida palju magusat.
HIV-nakkuse diagnoosimine (video)
Lisateavet HIV-i erinevate diagnostikameetodite kohta saate kvalifitseeritud spetsialistidelt. Selleks vaadake järgmist videot.Toodetud mitmel erineval viisil. Näib, et miski pole lihtsam kui selle haiguse tuvastamine vereproovide võtmise teel, ei. Kuid see pole nii. HIV-i diagnoosi saab tõepoolest sel viisil tuvastada, kuid edasised uuringud tehakse erinevate meetoditega. Neist sõltub suuresti, milline ravi patsiendile määratakse ja milliseid meetmeid hiljem võetakse. Kõige tavalisemate ja väga tõhusate meetodite hulgas on tavaks välja tuua skriininganalüüs ja immuunblotanalüüs. Igaüht neist tuleks üksikasjalikumalt käsitleda.
AIDSi diagnoos: sõeluuring
HIV-nakkuse diagnoosimise algstaadiumis kasutatakse skriininganalüüsi ehk ELISA uurimismeetodit. Selle meetodi väljatöötamise käigus loodi laboris kunstlikult viirusvalgud. Nad reageerivad antikehadele erilisel viisil. Viimased tekivad organismis siis, kui sinna ilmuvad kohutava haigusega nakatunud rakud. HIV-i laboratoorne diagnoos tehakse sel juhul kunstlike ensüümide abil. Antikehadega suheldes värvuvad need teatud värviga. Indikaatoriga riba asetatakse peale vere peale sattumist spetsiaalse aparaadi alla, mille abil saab kindlaks teha, kas inimesel on see haigus või mitte. HIV-i diagnoosimise kaasaegsed meetodid, sealhulgas ELISA, võimaldavad suure täpsusega kindlaks teha nakatumise fakti või selle puudumise. Kuid nagu kogu tehnoloogial, on sõelanalüüsi seadmel viga. Seetõttu võtab patsient vajadusel analüüsi uuesti.
Oluline on teada, et ELISA test on üks varasemaid meetodeid immuunpuudulikkuse viiruse esinemise määramiseks organismis. HIV-nakkus on diagnoos, mille saab avastada alles paar nädalat pärast nakatumist. Kui nakatunud rakud sisenevad vereringesse, hakkab keha immuunsüsteem aktiivselt vastu pidama. Tekivad antikehad, mis tuvastatakse laborianalüüsiga kahe-kolme nädala pärast. HIV-nakkuse varajane diagnoosimine ELISA testi abil võimaldab tuvastada inimese veres immuunpuudulikkuse viiruse vastaseid antikehi. See on selle peamine erinevus teistest kaasaegsetest meetoditest.
Väärib märkimist, et mõnel inimesel hakkavad selle haiguse vastased antikehad tootma hiljem. Nakatumise hetkest kuni selle protsessi alguseni võib kuluda kolm kuni kuus nädalat. Seetõttu soovitavad meditsiinieksperdid sõeluuringut teha neli kuni viis nädalat pärast kaitsmata vahekorda või muul põhjusel juhuslikku nakatumist kahtlustada.
Meetodid HIV-nakkuse laboratoorseks diagnoosimiseks ELISA abil on välja töötatud pikka aega. Praeguseks on teste neli põlvkonda. Kõige täpsemad ja tõhusamad neist on need, mis töötati välja viimati. HIV-nakkuse ja AIDSi laboratoorne diagnoosimine kolmanda ja neljanda põlvkonna ELISA testide abil viiakse läbi rekombinantsete valkude ja peptiidide abil. Nende testide tundlikkus organismi toodetud antikehade suhtes on 92–93%. Räägime Venemaa uurimismeetoditest. Eurooplased on õppinud tegema sarnaseid teste 99% tundlikkusega.
ELISA-l põhinevaid kaasaegseid HIV-nakkuse laboratoorse diagnoosimise meetodeid kasutatakse mitte ainult haiguse esinemise tuvastamiseks. Sõelanalüüsi abil on võimalik jälgida immuunpuudulikkuse viiruse levikut, samuti koguda analüüsimaterjali enne doonoritelt vere võtmist.
ELISA on standardne meetod HIV-nakkuse diagnoosimiseks: kuidas seda tehakse, miks see annab vale tulemuse?
HIV-i ja AIDSi diagnoosimine ELISA abil on standardne protseduur. Patsiendi veri võetakse veenist. Analüüsiks piisab viiest milliliitrist materjalist. Kliiniline 
2. ja 1. tüüpi HIV diagnoositakse vähemalt kaheksa tundi pärast sööki. Arstid soovitavad seda teha hommikul tühja kõhuga. Täieliku uuringu tulemused on teada kahe-kolme päeva pärast. Kiire sõelumine tehakse lühema ajaga. Tavaliselt kulub selleks vaid paar tundi. Viga sel juhul aga suureneb. HIV ekspressdiagnoos on vajalik erakorralistel juhtudel, näiteks kui patsient vajab kiiret operatsiooni. Selline analüüs tehakse tingimata enne plaanivälist kirurgilist sekkumist, sest kui patsiendil on immuunpuudulikkuse viirus, jälgivad arstid kõrgendatud turvameetmeid. HIV-nakkuse kliiniline diagnoosimine lühikese aja jooksul on vajalik ka juhul, kui teise patsiendi päästmiseks tuleb kiiresti võtta doonoriverd.
On juhtumeid, kus inimesel avastati AIDS või HIV, mille tulemusena see ei leidnud kinnitust või vastupidi. Miks see ELISA testi puhul juhtub? Valenegatiivne tulemus võib olla tingitud sellest, et veri ei olnud uuringuks korralikult ette valmistatud. Mõnikord on selle põhjuseks selle tara ebaõige teostamine. Valenegatiivne tulemus HIV-nakkuse diagnoosi kontrollimisel ei leia kinnitust ka siis, kui uuringu materjalid võeti liiga vara. Lõppude lõpuks peaks pärast nakatumist olema möödunud vähemalt kolm nädalat. On juhtumeid, kui immuunpuudulikkuse viiruse avastamise tulemus on valepositiivne. See on tingitud inimkeha immuun- ja hormonaalsüsteemide üldisest seisundist. Enamikul juhtudel on patsiendil haigused, mis on valepositiivse tulemuse tagajärg. Jutt käib alkohoolsest hepatiidist, mille puhul maks toodab spetsiaalseid ensüüme, mis võivad viia HIV-i vale diagnoosimiseni. Rasedus ja teatud autoimmuunhaigused koos hulgimüeloomiga võivad samuti põhjustada valepositiivse tulemuse. See nimekiri võib sisaldada dialüüsi saavatel patsientidel ja isikutel, keda vaktsineeriti vahetult enne HIV diferentsiaaldiagnoosimist.
Sõeluuringu analüüsist rääkides on oluline märkida, et see uurimismeetod nõuab kinnitust. Enne HIV-i diagnoosi panemist saadavad arstid patsiendi alati immuunblotanalüüsile.
HIV-nakkuse laboratoorse diagnoosimise peamised meetodid: immuunblotanalüüs
AIDS, mille diagnoosimine ja ravi on omavahel tihedalt seotud, avastatakse korraga mitmel viisil. Nagu eespool mainitud, ei piisa diagnoosi lõplikuks kindlakstegemiseks ühest ELISA-testist. HIV-nakkuse diferentsiaaldiagnostikat täiendab sel juhul immuunblotanalüüs. Kaasaegses meditsiinis nimetatakse seda lõplikuks diagnoosi kinnitavaks meetodiks. Sel juhul kasutatakse uuringuteks patsiendi veres sisalduvaid valke. Need eraldatakse spetsiaalses geelis, misjärel on laboritöötajatel võimalus uurida vere molekulaarset koostist.
HIV-i diagnoosimise aeg selle meetodiga on üks kuni kolm päeva. Uurimiseks võetakse katsealuse veenist verd, mis asetatakse geeliga testrile. Kahtluse alla seatud tulemus võib ilmneda raseduse, onkoloogiliste protsesside esinemise, tuberkuloosi ajal. Valenegatiivne reaktsioon testile võib tekkida, kui uuring on tehtud valesti ja kui see viiakse läbi liiga vara. Nakatumise hetkest peab mööduma vähemalt kolm nädalat. Lõppude lõpuks, pärast mida HIV diagnoositakse, sõltub see otseselt immuunsuse seisundist.
Muud AIDSi ja HIV diagnoosimise meetodid
AIDS-i kiiritusdiagnostika meetodeid kasutatakse reeglina terminaalses või sekundaarses staadiumis. Nende abiga on võimalik kindlaks teha muutusi, mis tekivad organismis sekundaarsete haiguste või oportunistlike infektsioonide tõttu.
HIV-i bioresonantsdiagnostikat, mida nimetatakse ka mittelineaarseks skaneerimiseks, kasutatakse immuunpuudulikkuse viiruse tuvastamiseks peamiselt erakliinikutes. Ametlik meditsiin peab seda meetodit ebapiisavalt täpseks ja tõhusaks. Võib-olla võimaldab mittelineaarse diagnostika täiustamine tulevikus tuvastada selle kohutava diagnoosi juba inkubatsiooniperioodil.
HIV-nakkuse diagnoosimine: seroloogiline meetod ja selle omadused
See on suhteliselt uus tehnika, mille puhul HIV-nakkuse diagnoosimise laboratoorsed kriteeriumid põhinevad antigeen-antikeha põhimõttel. Immuunpuudulikkuse viiruse puhul otsitakse inimkehas viiruse vastaseid antikehi. Selleks kasutatakse kunstlikult saadud antigeeni, millele peavad reageerima antikehad. HIV-nakkuse spetsiifilised seroloogilised markerid põhjustavad spetsiifilisi muutusi vere koostises. Tuleb märkida, et see uurimismeetod on kõige tõhusam ägedas staadiumis, mis lõpeb serokonversiooniga. Sellele järgneb asümptomaatiline varjatud periood, mille jooksul pole antigeeni lihtne leida.
HIV-nakkuse etalondiagnostika: kirjeldus ja tunnused
HIV-i kontrollväärtusi peetakse diagnoosi kindlakstegemisel kõige täpsemaks. See uurimismeetod ühendab ELISA testi ja immuunblotanalüüsi. HIV-diagnostika referentlabor võimaldab proovide võtmist ja järgnevat töötlemist korraga kahel viisil. See võimaldab teil saada kõige täpsema tulemuse ühe päeva jooksul. Referentlaboris saadud analüüsi uuesti kontrollimine on vajalik ainult siis, kui ELISA testi ja immuunblotanalüüsi andmed on omavahel vastuolus. See on üsna haruldane juhtum, mis esineb kõige sagedamini ülalkirjeldatud kaasuvate haigustega inimestel.
HIV-nakkuse kliiniline ja laboratoorne diagnostika sellel on kolm suunda:
- HIV-nakkuse fakti tuvastamine, HIV-nakkuse diagnoosimine.
- Haiguse kliinilise kulgu staadiumi kindlaksmääramine ja sekundaarsete haiguste tuvastamine.
- Haiguse kliinilise kulgemise prognoos, retroviirusevastaste ravimite ravi efektiivsuse ja kõrvaltoimete laboratoorne jälgimine.
1. HIV-nakkuse tuvastamine, HIV-nakkuse diagnoosimine
HIV-nakkuse määramiseks kasutatakse järgmisi spetsiifilisi näitajaid: HIV-vastased antikehad, HIV-antigeenid, HIV RNA ja proviiruse DNA. HIV-vastased antikehad määratakse ensüümi immuunanalüüsi (ELISA) või immunoblotanalüüsi abil, mis on sisuliselt ELISA tüüp. HIV-i antigeenid (valgud) määratakse ELISA abil. Polümeraasi ahelreaktsiooni (PNR) ja bDNA molekulaargeneetiliste meetodite abil on võimalik määrata HIV RNA ja proviiruse DNA. Täiendava nukleiinhapete hübridiseerimismeetodi kasutamine spetsiifiliste DNA-sondidega võimaldab teil kontrollida PCR-i käigus saadud DNA järjestuste spetsiifilisust. PCR tundlikkus - viiruse geenide tuvastamine ühes viiest tuhandest rakust.
Esmase nakatumise ajal täheldatakse nakatunute veres HIV-markerite järgmist dünaamikat. Esimesel kuul suureneb replikatsiooniprotsessi aktiveerumise tagajärjel järsult viiruskoormus (HIV RNA sisaldus plasmas), seejärel viiruse leviku ja sihtrakkude massilise nakatumise tõttu veres ja lümfis. sõlmedes, muutub võimalikuks proviiruse DNA määramine. Ülima diagnostilise väärtusega on sihtraku genoomi integreeritud proviiruse DNA tuvastamise fakt.
Viiruse koormus peegeldab replikatsiooniprotsessi intensiivsust nakatunud rakkudes. Esmase nakatumise perioodil on erinevate HIV alatüüpidega nakatumisel viiruskoormuse tase erinev, kuid selle muutuste dünaamika on ligikaudu sama. Niisiis, kui nakatunud alatüübiga B, näiteks kui esimesel kuul pärast nakatumist on viiruskoormuse väärtus 700 koopiat / ml, siis 2. kuul väheneb see 600-ni, 3-ndal - 100-ni. 4. - kuni 50 koopiat / ml. Sellist dünaamikat täheldatakse HIV-i spetsiifiliste antikehade sisalduse suurenemise taustal veres. Proviraalse DNA sisaldust HIV-nakkusega patsientide vere mononukleaarsetes rakkudes iseloomustab suhteline püsivus esimese 6 kuu jooksul koos mõningate alatüüpide kerge kõikumisega. Seega ei ole RNA ja DNA koormused identsed.
Inkubatsioonifaasis ei moodustu mõnda aega spetsiifilisi HIV-vastaseid antikehi koguses, mis oleks piisav olemasolevate laborimeetoditega määramiseks. Enne antikehade tuvastamist täheldatakse väga lühikest aega veres Nef-valgu, mis represseerib replikatsiooniprotsessi, ja struktuurse valgu p24 ilmumist. P24 antigeen on verest tuvastatav ensüümimmunosorbentanalüüsiga juba 1-2 nädalat pärast nakatumist ja määrata kuni 8. nädalani, seejärel väheneb selle sisaldus järsult. Lisaks täheldatakse HIV-nakkuse kliinilise käigus p24 valgu sisalduse teistkordset tõusu veres. See langeb AIDSi tekke perioodile. Vabade (antikehadega mitteseotud) p24 tuumvalkude kadumine verest ja spetsiifiliste antikehade ilmumine HIV valkude vastu tähistavad serokonversiooni algust (joonis 9.6).
Vireemia ja antigeneemia põhjustavad spetsiifiliste IgM klassi antikehade moodustumist (anti-p24, anti-gp41, anti-gp120, anti-gp160). IgM ja IgG klasside vabad antikehad p24 valgu vastu võivad ilmneda alates 2. nädalast, nende sisaldus suureneb 2-4 nädala jooksul, saavutades teatud taseme, mis püsib kuude (IgM) ja aastate jooksul (IgG) (joonis 9.7). ).
Täieliku serokonversiooni ilmnemine, kui perifeerses veres registreeritakse HIV p24, gp41, gp120, gp160 struktuurvalkude vastaste IgG klassi spetsiifiliste antikehade kõrge tase, hõlbustab oluliselt HIV-nakkuse diagnoosimist. HIV-vastased antikehad ilmnevad 90–95% nakatunutest 3 kuu jooksul pärast nakatumist, 5–9% -l - 3 kuni 6 kuu jooksul alates nakatumise hetkest ja 0,5–1% -l hiljem.
Vaatamata sellele, et HIV-vastased antikehad ilmuvad viimasena, on seni peamiseks laboratoorseks diagnostiliseks näitajaks spetsiifiliste antikehade tuvastamine ELISA ja immunoblotanalüüsiga.
Tabelis 9.2 esitatud andmed [saade] ja 9.3 [saade] , näitavad selgelt kaasaegsete ELISA testisüsteemide kõrget tundlikkust HIV-vastaste antikehade tuvastamisel, mis ületab immunoblotimise tundlikkuse. Mõnel juhul saab ELISA esmase positiivse tulemuse saamisel seda kinnitada immunoblotanalüüsiga alles 2-3 nädala pärast.
| Tabel 9.3. Näide serokonversiooni jälgimisest (vastavalt H. Fleuryle, 2000) | |||||
| Määratlemise hetk | p24 antigeen, pg/ml | HIV valkude vastased antikehad | |||
| ELISA, OD arr/OD cr** | Immunoblotanalüüs | ||||
| HIV DUO | Gen ekraan | Vormiriietus | |||
| Patsient 1 | |||||
| Eelkõige | 17 | 1,24 | vähem kui 1 | vähem kui 1 | * |
| 4 päeva pärast | 67 | 1,36 | 1,85 | vähem kui 1 | - |
| 7 päeva pärast | * | 2,33 | 6,84 | vähem kui 1 | - |
| 2 päeva pärast | * | 6,77 | 15,0 | 4,8 | gp160 |
| Patsient 2 | |||||
| Eelkõige | 400 | 13 | vähem kui 1 | vähem kui 1 | - |
| 5 päeva pärast | 450 | 18 | 2,11 | vähem kui 1 | - |
| 10 päeva pärast | * | 33 | 12,19 | 2,9 | gp160 |
| Märkus: * - pole määratud ** - uuritava seerumi proovi optilise tiheduse ja optilise tiheduse kriitilise (lävi) väärtuse suhe |
|||||
Uurides HIV-nakkusega (HIV-nakatunud) patsiente maailma juhtivate ettevõtete immunoblot-testisüsteemide abil, tuvastatakse gp160 ja p24/25 vastased antikehad kõigil juhtudel, muude valkude vastased antikehad tuvastatakse 38,8-93,3% juhtudest (tabel 1). 9.4 [saade] ).
Raskused antikehade tuvastamisel HIV-nakkusega patsientidel võivad tekkida massilise vireemia ja antigeneemia perioodidel, kui veres olemasolevad spetsiifilised antikehad on seotud viirusosakestega ning replikatsiooniprotsess on ees uute viirusevastaste antikehade tekkest. See olukord võib nakkusprotsessi ajal tekkida ja minna.
Algselt nõrgenenud immuunsüsteemiga patsientidel ilmnevad vireemia ja antigeneemia varem ning püsivad kõrgel tasemel kuni haiguse lõpptulemuseni. Sellistel patsientidel on HIV-vastaste vabade antikehade sisaldus madal kahel põhjusel - antikehade ebapiisav tootmine B-lümfotsüütide poolt ja antikehade seondumine virioonide ja lahustuvate HIV-valkude poolt, mistõttu tuleb infektsiooni määramiseks testida kõrgendatud tundlikkusega süsteeme. või on vaja analüüsimeetodite modifikatsioone, mis hõlmavad antikeha immuunkompleksidest vabanemise etappi.
Kõige sagedamini toimub HIV-vastaste antikehade sisalduse vähenemine näidatud põhjustel lõppstaadiumis, kui HIV-vastaseid antikehi lõikekoha seerumis ei pruugita ensüümi immuunanalüüsi meetoditega ega immunoblotanalüüsiga (Western blot) püüda. Lisaks spetsiifiliste HIV-antikehade ilmnemisele iseloomustab immuunvastust esimese 4 kuu jooksul nakatunud CD4+ sisalduse vähenemine veres ja CD8+ rakkude arvu suurenemine. Lisaks stabiliseerub CD4 ja CD8 retseptoreid kandvate rakkude sisaldus ja jääb mõnda aega muutumatuks. CD8-lümfotsüütide sisalduse suurenemine on kaitsereaktsioon, kuna. rakust sõltuvat tsütotoksilisust teostavad CD8+-lümfotsüüdid, mis on suunatud HPV-ga nakatunud rakkude hävitamisele. Esialgu reageerivad tsütotoksilised lümfotsüüdid (CTL) viiruse Nef regulatoorsele valgule, mis mängib esimestel kuudel olulist rolli viiruse (RNA) koormuse vähendamisel HIV-nakkusega inimese plasmas. Seejärel moodustub CTL vastus teistele, sh. HIV struktuurvalgud, mille tulemusena 12 kuud pärast nakatumist suureneb cptotoksiline toime märkimisväärselt.
HIV-nakkuse laboratoorse diagnoosimise skeemid
Võttes arvesse HIV-nakkuse spetsiifiliste markerite antud dünaamikat, on praktikas soovitatav järgida järgmisi täiskasvanute laboridiagnostika skeeme (joonis 9.8-9.10).
Skeemid kajastavad HIV-nakkuse esmase laboratoorse diagnoosimise kolme peamist etappi:
- Sõelumine.
- Viide.
- Ekspert.
Laboratoorse diagnostika mitme etapi vajadus tuleneb eelkõige majanduslikest kaalutlustest. Nii on näiteks ühe ekspertuuringu läbiviimise maksumus kodumaiste testsüsteemide abil immunoblotanalüüsiga kuni 40 USA dollarit, skriining (ELISA abil) on umbes 0,2, see tähendab, et suhe on 1:200.
Esimeses etapis (joonis 9.8) testitakse katsealuseid HIV-vastaste antikehade suhtes, kasutades ühte ELISA-testisüsteemi, mis on loodud mõlemat tüüpi viiruse – HIV-1 ja HIV-2 – antikehade tuvastamiseks.
Kavandatavates katsesüsteemides kasutavad tootjad antigeense alusena viiruse lüsaati, rekombinantseid valke ja sünteetilisi peptiide. Igal loetletud HIV-i antigeensete determinantide kandjatel on oma eelised ja puudused. Seetõttu tuleks ligikaudu võrdse maksumusega testsüsteemide valimisel eelistada kõrgeima tundlikkusega (soovitavalt 100%) komplekte. Sama hinna ja tundlikkusega testimissüsteemide hulgas on soovitatav peatuda maksimaalse spetsiifilisusega katsesüsteemidel.
Viiruslüsaadi põhjal loodi esimesed testisüsteemid HIV-nakkuse laboratoorseks diagnoosimiseks. 1980. aastatel iseloomustas selliseid katsesüsteeme tundlikkus alla 100% ja madal spetsiifilisus, mis väljendus suures arvus (kuni 60%) valepositiivsetes tulemustes.
Virioni moodustumisel lümfotsüütide kultuuris tekib selle ümbris välismembraanist ja seepärast sisaldab see I ja II klasside peamise histo-sobivuse kompleksi antigeene. See asjaolu põhjustab valepositiivseid reaktsioone juhul, kui patsientide veres on histo-sobivuse alloantigeenide vastaseid antikehi.
Hiljem tehti viiruse saamiseks ettepanek kasutada makrofaagide kultuuri, milles viiruseosakesed moodustuvad peamiselt rakusiseselt pungudes mitte raku välismembraanilt, vaid endoplasmaatilise retikulumi membraanidelt. See tehnoloogia on vähendanud valepositiivsete tulemuste arvu.
Ensüüm-immunoanalüüse peetakse üheks parimaks kõige olulisemate omaduste – tundlikkuse ja spetsiifilisuse – poolest, mille osaks on puhastatud viiruslüsaadi kombinatsioon sünteetiliste peptiididega, mis on viiruse valkude antigeenide suhtes kõige olulisemad piirkonnad või kasutatakse rekombinantseid valke.
Katsesüsteemi tundlikkus sõltub ka komplektide teiste komponentide omadustest. Seega võimaldavad testimissüsteemid, mis kasutavad konjugaate, mis tunnevad ära mitte ainult IgG klassi, vaid ka IgM ja IgA antikehi, tuvastada serokonversiooni varasemat faasi. Tundub paljutõotav kasutada testisüsteeme, mis suudavad samaaegselt määrata nii viirusevastaseid antikehi kui ka p24 antigeeni, mis muudab HIV-nakkuse laboratoorse diagnoosi veelgi varasemaks.
Esialgset positiivset tulemust tuleb uuesti kontrollida, testides proovi uuesti samas testimissüsteemis, kuid eelistatavalt teises partiis ja erineva labori assistendi poolt. Kui teisel uuringul saadakse negatiivne tulemus, tehakse uuring kolmandat korda.
Pärast positiivse tulemuse kinnitamist on soovitav uuesti verd võtta ja esmaselt uurida HIV-vastaste antikehade suhtes. Korduv vereproov aitab ära hoida viga, mis on põhjustatud sondide ebatäpsest märgistamisest ja saatekirjade täitmisest.
Sõelumisetapis positiivne seerum saadetakse võrdlusuuringutesse, mis viiakse läbi kahe või kolme väga spetsiifilise ELISA testisüsteemiga. Kahe positiivse tulemuse korral viiakse läbi ekspertuuring immunoblotanalüüsiga.
ELISA testisüsteemide kasutamine referentsdiagnostikas, mille abil on võimalik eristada spetsiifilisi HIV-1 ja HIV-2 antikehi, hõlbustab edasist tööd ja võimaldab koheselt uurida positiivset proovi ekspertstaadiumis, kasutades vastavat immunoblotanalüüsi (HIV- 1 või HIV-2).
Labori ekspertarvamus HIV-nakkuse kohta väljastatakse ainult positiivse Western blot tulemuse alusel. Ekspertdiagnostika läbiviimisel on vaja kasutada 1990. aastal WHO ekspertide rühma poolt välja pakutud HIV geenide ja geeniproduktide nomenklatuuri (tabel 9.5). [saade] ).
Immunobloti ribade spetsiifilisust tuleks hinnata väga hoolikalt ja hoolikalt, kasutades kontrollseerumite (positiivsete ja negatiivsete) uuringute tulemusi, mis viiakse läbi paralleelselt eksperimentaalsete proovide uurimisega, ja immunoblotproovi, millel on tähis. HIV valkudest (tootja poolt testimissüsteemi külge kinnitatud). Saadud tulemuste tõlgendamine peaks toimuma vastavalt katsesüsteemile lisatud juhistele. Reeglina on positiivsuse kriteeriumiks env geeni poolt kodeeritud kahe valgu (prekursor, välimine või transmembraanne) antikehade kohustuslik olemasolu ja kahe teise struktuurse HIV geeni – gag ja pol ( gag ja pol () võimalik antikehade olemasolu. Tabel 9.6 [saade] ).
| Tabel 9.6. HIV-1 ja HIV-2 immunoblotanalüüsi tulemuste tõlgendamiskriteeriumid (WHO, 1990) | |||
| Tulemus | HIV-1 | HIV-2 | |
| Positiivne | +/- pol bändid +/- gag triibud | 2 rada env (prekursor, välimine gp või transmembraanne gp) +/- pol bändid +/- gag triibud |
|
| Negatiivne | HIV-1 spetsiifiliste ribade puudumine | HIV-2 spetsiifilisi ribasid pole | |
| Ebakindel | Muud profiilid ei ole positiivsed ega negatiivsed | ||
Kahtlase tulemuse saamise korral tuleb immunoblotanalüüsi tulemuste lõplikuks selgitamiseks kasutada soovituste loendit (tabel 9.7). [saade] ).
| Tabel 9.7. Soovitused määramatute immunoblotanalüüsi tulemuste lõplikuks selgitamiseks (WHO, 1990) | |
| HIV valkudele vastavate ribade olemasolu | Tulemuse tõlgendamine, edasised tegevused |
| HIV-1 | |
| Ainult p17 | |
| Ainult p24 ja gp160 | Selline ebatavaline pilt võib ilmneda serokonversiooni alguses. Proovi tuleks kohe uuesti testida. Sama profiili saamise korral on 2 nädalat pärast esimese proovi võtmist vajalik võtta teine proov immunoblotanalüüsis. |
| Muud profiilid | Need profiilid (gag ja/või pol ilma env-ta) võivad viidata serokonversioonile või mittespetsiifilistele reaktsioonidele. |
| HIV-2 | |
| Ainult p16 | Võib liigitada negatiivseks, ei vaja täiendavaid määratlusi |
| I lane env gag/rolliga või ilma | Sama proovi tuleks uuesti testida, kasutades erinevat partiid reaktiive. |
| Ainult p24 või gp140 | See ebatavaline profiil võib ilmneda serokonversiooni alguses. Proovi tuleks kohe uuesti testida. Sama profiili saamise korral tuleb 2 nädalat pärast esimese proovi võtmist võtta teine proov immunoblotanalüüsiks. |
| Muud profiilid | Need profiilid (gag ja/või pol ilma env-ta) võivad viidata serokonversioonile või mittespetsiifilistele reaktsioonidele. |
Venemaa AIDSi ennetamise ja tõrje teadusliku ja metoodilise keskuse soovituste kohaselt loetakse positiivseks tulemuseks antikehade olemasolu vähemalt ühe valkude gp41, gp120, gp160 vastu kombinatsioonis teiste spetsiifiliste HIV-nakkuste vastaste antikehadega. 1 valku või ilma nendeta. Need soovitused põhinevad kogemustel haiglas paiknevatest fookustest pärit laste seerumite puhul, kus sageli tuvastati ainult ühe viiruse ümbrise valgu vastaseid antikehi.
Suurem osa esialgselt uuritud ELISA seropositiivsetest patsientidest kuulub püsiva generaliseerunud lümfadenopaatia (PGL) faasi või asümptomaatilise faasi. Seetõttu määratakse immunoblotil (nitrotselluloosi riba, millele HIV-valgud on immobiliseeritud) tavaliselt järgmine HIV-1 antikehade kombinatsioon: env geeni poolt kodeeritud ümbrisvalkude gp160, gp120 ja gp41 vastased antikehad kombinatsioonis antikehadega p24 tuumvalgud (valgu nukleokapsiid, mida kodeerib gag geen) ja p31/34 (endonukleaas, mida kodeerib pol geen).
Positiivsed reaktsioonid ainult gag- ja/või pol-valkudega võivad ilmneda serokonversiooni varases faasis ja viitavad ka HIV-2 põhjustatud infektsioonile või mittespetsiifilisele reaktsioonile.
Kui saadakse küsitav tulemus, on võimalik HIV-nakkuse fakti selgitamiseks kasutada erinevaid metoodilisi võtteid.
Sõltuvalt tehnilistest võimalustest (diagnostikakomplektide ja reaktiivide olemasolu, erivarustusega varustus ja personali väljaõpe) viib ekspertlabor läbi täiendavaid diagnostilisi uuringuid (joonis 9.10).
Mõnel juhul on soovitatav kasutada molekulaargeneetilisi meetodeid HIV-i geneetiliste järjestuste määramiseks seerumis, vere lümfotsüütides või lümfisõlmede punktsioonides. PCR-iga saadud DNA järjestuste spetsiifilisust saab kontrollida nukleiinhapete hübridiseerimisel spetsiifiliste DNA-sondidega.
Radioimmunosadestamise (RIP) ja kaudse immunofluorestsentsi (IFl) meetodeid saab kasutada ka küsitavate immunoblotitulemustega seerumite lõplikuks kontrollimiseks.
HIV RNA tuvastamine plasmas kvalitatiivse või kvantitatiivse meetodiga ei ole HIV-nakkuse diagnoosimisel oluline. Sellist tulemust tuleks kinnitada standardmeetoditega, nagu immunoblotanalüüs, 2–4 kuud pärast esialgse küsitava või negatiivse vastuse saamist.
HIV-i isoleerimine rakukultuuris on ülim tõde. Meetod on aga keeruline, kallis ja seda tehakse ainult spetsiaalselt varustatud uurimislaborites.
CD4+ rakkude sisaldus veres on mittespetsiifiline näitaja, kuid vastuolulistel juhtudel (ELISA "+", immunoblot "-", HIV-nakkuse / AIDS-i kliiniliste tunnuste olemasolu) võib seda kasutada juhisena. asjatundliku otsuse tegemiseks. Kui laboris on võimalik teha ainult immunoblotimist, tuleb järgida tabelis 1 toodud soovitusi. 9.7 ja joonisel fig. 9.9.
Isikud, kelle seerumis on küsitavad (määratlemata) tulemused ekspertiisis, välja arvatud juhtudel, kui tuvastatakse ainult p17 (HIV-1) või p16 (HIV-2) antikehad, tuleks uuesti analüüsida 6 kuu jooksul (pärast 3 kuud). Tõelise HIV-nakkuse korral täheldatakse 3-6 kuu pärast antikehade spektris "positiivset" suundumust - täiendavat antikehade moodustumist viiruse teiste valkude vastu. Vale reaktsiooni iseloomustab ebaselge immunoblotmustri püsimine pikka aega või kahtlaste ribade kadumine. Kui pärast määratud ajavahemikku on korduva immunoblotanalüüsi tulemused negatiivsed või jäävad kahtluse alla, siis võib HIV-nakkusega seotud riskifaktorite, kliiniliste sümptomite või muude tegurite puudumisel pidada isikut HIV-vastaste antikehade suhtes seronegatiivseks. 1 ja HIV-2.
Valepositiivsed tulemused, mis tulenevad HIV-i ümbrikusse kuuluvate histo-ühilduvuse alloantigeenide vastaste antikehade sisaldusest patsientide veres, ilmuvad immunoblotil gp41 ja gp31 tasemel ribadena. Muude mittespetsiifiliste reaktsioonide (näiteks p24 suhtes, mida sageli esineb autoimmuunsete protsessidega inimestel) põhjuseid ei ole veel selgitatud.
ELISA testsüsteemide tootmise tehnoloogia täiustamine on võimaldanud saavutada kõrge tundlikkuse - kuni 99,99%, samas kui immunoblotmeetodi tundlikkus on 97%. Seetõttu võib negatiivne immunobloti tulemus koos positiivsete ELISA tulemustega viidata serokonversiooni esialgsele perioodile, mida iseloomustab spetsiifiliste antikehade madal tase. Seetõttu on vaja uuringut korrata 1,5–2 kuu pärast, st serokonversiooni lõpuleviimiseks kuluva aja möödudes, et saavutada veres spetsiifiliste antikehade kontsentratsioon, mis on piisav immunoblotanalüüsiga tuvastamiseks.
Uuringu positiivset tulemust (tulemusi) HIV-nakkuse laboratoorse diagnoosimise võrdlus- või ainult sõeluuringu etapis, st positiivset tulemust mis tahes ensüümi immuunanalüüsi testimissüsteemis, mida lõpuks ei kinnitata ekspertmeetoditega, tõlgendatakse kui ristküliku olemasolu. -reaktiivsed antikehad uuritud antikehade veres. Ristreaktiivsus viitab antikehade seondumisele HIV valkude või peptiidide mittespetsiifiliste saitidega, mida kasutatakse testisüsteemis antigeense alusena, mille puhul saadakse positiivne tulemus.
Immuunpuudulikkuse ja HIV-nakkuse kliiniliste tunnuste puudumisel peetakse selliseid isikuid HIV-vastaste antikehade suhtes seronegatiivseks ja nad tuleks registreerida.
HIV-nakkuse lõplik diagnoos tehakse ainult kõigi kliiniliste, epidemioloogiliste ja laboratoorsete andmete põhjal. Ainult raviarstil on õigus teavitada patsienti HIV-nakkuse diagnoosist.
HIV-nakkuse kinnitava (ekspert-) laboratoorse diagnoosimise peamine meetod on immunoblotanalüüs. Arvestades aga selle madalamat tundlikkust võrreldes ELISA-ga, on mitmed teadlased teinud ettepaneku kasutada HIV-vastaste spetsiifiliste antikehade olemasolu lõplikuks kindlaksmääramiseks mitme testisüsteemi kombinatsiooni. Näiteks G. van der Groen et al. pakkus välja alternatiivi immunoblotanalüüsi meetodile HIV-nakkuse laboratoorse diagnoosimise sõeluuringu etapi positiivsete tulemuste kontrollimiseks. See hõlmab materjali paralleelset uurimist kolmes testsüsteemis, mis põhinevad erinevatel meetoditel spetsiifiliste HIV-antikehade tuvastamiseks (mitmed ELISA variandid, aglutinatsioonireaktsioon), kasutades erineva iseloomuga antigeene. Autorid said valida sellised testsüsteemide kombinatsioonid, mille kasutamine annab 100% tundlikkuse ja spetsiifilisuse võrreldes immunoblotanalüüsi tulemustega.
Selle ekspertdiagnostika meetodi odavus on vaieldamatu eelis, kuid teabe puudumine selle kohta, milliste viiruse spetsiifiliste valkude puhul on patsiendi veres antikehi, ei võimalda hinnata reaktsiooni spetsiifilisust igal üksikjuhul. kui antikehade spektri muutuste jälgimine serokonversiooni varases staadiumis.
HIV-nakkuse laboratoorsel diagnoosimisel HIV-nakkusega emadelt sündinud lastel on oma eripärad. Alates sünnihetkest võivad pikka aega (kuni 15 kuud) selliste laste veres ringelda HIV-vastaste emade antikehad. Platsentaarbarjääri läbivad ainult IgG klassi immunoglobuliinid, seetõttu võib IgM ja IgA klassi HPV-spetsiifiliste mupoglobuliinide tuvastamine lapsel kinnitada nakatumist, kuid negatiivne tulemus ei saa viidata HIV puudumisele.
Alla 1 kuu vanustel lastel ei ole veel HPV replikatsiooni ja PCR on ainus kontrollimeetod. P24 antigeeni määramine üle 1 kuu vanustel lastel on samuti kinnitav meetod.
HIV-vastaste antikehade puudumine vastsündinutel ei tähenda, et viirus poleks platsentaarbarjääri läbinud. Igal juhul kuuluvad HIV-nakkusega emade lapsed laboratoorsele diagnostilisele uuringule ja jälgimisele 36 kuu jooksul alates sünnist.
HIV-nakkuse markerite laboratoorsete testide tulemused nõuavad hoolikat tõlgendamist ja neid tuleks arvesse võtta ainult koos epidemioloogiliste ja kliiniliste uuringute andmetega. Teisest küljest tuleb märkida, et hoolimata kaasaegsete meetodite kõrgest tundlikkusest ei saa negatiivsed testitulemused täielikult välistada HIV-nakkuse esinemist. Seetõttu saab negatiivse testitulemuse, näiteks immunoblotanalüüsi abil, formuleerida ainult HIV-1 ja HIV-2 spetsiifiliste antikehade puudumisena.
HIV-nakkuse diagnoosimine seronegatiivsetel patsientidel
HIV-nakkuse laboratoorses diagnostikas kasutatavate testsüsteemide kvaliteet paraneb iga aastaga ja nende tundlikkus suureneb. HIV-i suur varieeruvus võib aga viia uute tüüpide tekkeni, mille antikehi ei pruugi olemasolevad testimissüsteemid ära tunda. Lisaks on teada peremeesorganismi immuunsüsteemi ebatüüpilise humoraalse vastuse juhtumid viirusele. Niisiis teatas L. Montagnier 1996. aastal kahest AIDS-i põdevast patsiendist, kelle veres ei leitud viimastel aastatel spetsiifilisi antikehi, diagnoos tehti kliiniliste andmete ja laboratoorsete andmete põhjal, mida kinnitas ainult HPV isoleerimine. 1 rakukultuuris. Sellistel juhtudel on vaja kasutada WHO soovitusi, mille kohaselt on HIV-nakkuse kliiniline diagnoosimine täiskasvanutel ja lastel võimalik, kui esineb üks 12 AIDS-i defineerivast haigusest:
- söögitoru, hingetoru, bronhide, kopsude kandidoos;
- ekstrapulmonaalne krüptokokoos;
- krüptosporidioos koos kõhulahtisusega üle ühe kuu;
- tsütomegaloviiruse kahjustus mis tahes organitele (välja arvatud maks, põrn ja lümfisõlmed ja lisaks neile vanemal kui 1 kuu vanusel patsiendil):
- herpes simplex viiruse põhjustatud infektsioon, mis püsib üle 1 kuu vanemal kui 1 kuu vanusel patsiendil;
- aju lümfoom alla 60-aastastel patsientidel;
- lümfotsüütiline interstitsiaalne kopsupõletik alla 13-aastasel lapsel;
- Mycobacterium avium intracellulare või M. Kansassii rühma kuuluvate bakterite põhjustatud levinud infektsioon;
- pneumocystis kopsupõletik;
- progresseeruv multifokaalne leukoentsefalopaatia;
- kesknärvisüsteemi toksoplasmoos üle 1 kuu vanustel patsientidel.
Ühe sellise haiguse esinemine võimaldab diagnoosida HIV-nakkust HIV-vastaste antikehade esinemise laboratoorse vereanalüüsi puudumisel või isegi siis, kui saadakse seronegatiivne tulemus.
Allikas: meditsiinilabori diagnostika, programmid ja algoritmid. Ed. prof. Karpištšenko A.I., Peterburi, Intermedica, 2001
AIDSi saab tuvastada ainult spetsiaalsete testidega. Testimisprotsess ise seisneb antikehade tuvastamises, mida organism toodab vastusena viiruse ilmnemisele. AIDSi diagnoosimise laboratoorsed meetodid hõlmavad nelja testi, mida kasutatakse selle haiguse tuvastamiseks.
Esimene - ELISA (ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs) on kõige levinum diagnostiline meetod. Selle analüüsi abil saab määrata organismis kogunenud antikehade koguse. Tavaliselt on see võimalik ainult siis, kui viirus on vereringesse sattunud ja sellest on möödunud kolm kuud. Nagu praktika tulemused näitavad, annab üks protsent juhtudest valenegatiivse või valepositiivse tulemuse.
Valenegatiivne tulemus on võimalik, kui viirusevastaseid antikehi pole veel välja kujunenud või kui AIDS on lõppstaadiumis, st viirus on veres olemas, kuid seda on nii palju, et antikehad ja CD-4 rakud praktiliselt puuduvad. Negatiivse tulemuse kontrollimiseks võite ELISA uuesti teha, kuid alles 3 kuu pärast.
Enamikul juhtudel annab valepositiivne tulemus küsitluse krooniliste autoimmuun-, nakkus-, onkoloogiliste ja muude haiguste all kannatavate patsientide kohta. Valepositiivsed tulemused võivad ilmneda ka rasedatel naistel. Seetõttu kontrollitakse iga positiivset tulemust tingimata uuesti, kuid ainult immunobloti abil - see on tundlikum test.
Kui immunobloti tulemus on positiivne, eriti pärast ELISA tulemust, on usaldusväärsus 99,9% ja see on meditsiinilise testi maksimaalne täpsus (peale mis tahes).
Teine on immunoblot (täielik immuunblotanalüüs). See test tuvastab spetsiifiliste HIV-antikehade olemasolu. Sel juhul on tulemus negatiivne, positiivne, kaheldav (seda nimetatakse ka määramatuks).
Kahtlane tulemus võib viidata HIV-i esinemisele vereringes, mille vastu kehas pole veel kogu antikehi välja kujunenud. Sel juhul ilmnevad HIV-vastased antikehad seerumis 1-3-6 kuu pärast. üksteise järel, alates hetkest, mil saadi esimene küsitav tulemus. Kui tulemused kinnitatakse, viitab see HIV-nakkusele algstaadiumis
Selle testi ebamäärane tulemus võib näidata vastupidist. HIV-nakkust ennast ei ole, kuid inimese kehas elavad HIV-vastaste antikehadega sarnased antikehad. Reeglina tekib küsitav tulemus rasedatel, tuberkuloosihaigetel, retsipientidel, vähihaigetel ja ka korduvalt vereülekannet (s.o. vereülekannet) saanud patsientidel. Patsienti, kelle selle testi tulemus näitas ebakindlust, jälgib nakkushaiguste spetsialist kuus kuud ja testib 1-3-6 kuu pärast.
Kolmas on PCR (polümeraasi ahelreaktsioon). See AIDS-i diagnoos võimaldab teil määrata viiruse DNA ja RNA. See on üsna tundlik ja tõhus reaktsioon, mis võimaldab teil saada tulemuse DNA uurimisega. Sel juhul võetakse ühest rakust DNA ja seda uuritakse iseloomulike DNA järjestuste korrutamisega
See test kehtib:
- määrata, milline viirus organismis on (on HIV 1 ja HIV-2);
- HIV-i olemasolu või puudumise kindlakstegemiseks;
- viiruskoormuse määramiseks ja jälgimiseks;
- HIV-nakkusega emale sündinud vastsündinu HIV staatuse määramiseks.
See test on ülitundlik: see suudab tuvastada viiruse isegi siis, kui oletatavast nakatumise hetkest on möödunud kümmekond päeva. See testi kõrge tundlikkus reageerib ka teistele infektsioonidele, mistõttu annab see sageli valepositiivseid tulemusi. Selle testi tulemused ei ole lõpliku diagnoosi aluseks.
Selle testi läbiviimiseks on vaja kõrgelt kvalifitseeritud meditsiinitöötajaid ja keerukaid laboriseadmeid. See on kallis test, mistõttu seda tasuta HIV-testimises ei kasutata.
Neljas on kiirtest. Seda testi kasutatakse peamiselt erakorralistel juhtudel - sünnituse ajal, tervislikel põhjustel operatsiooni ajal. Kiirtesti tulemust kinnitab tavaliselt rutiinne HIV-test.