Tsütokeemilised meetodid tegeleda keemiliste ja ensümaatiliste ainete tuvastamisega rakkudes, kasutades selleks värvireaktsioone. Tsütokeemilised preparaadid säilitavad rakustruktuuri, mis võimaldab rakke tuvastada ja uuritava ühendi rakusisest lokaliseerimist. Seetõttu eelistatakse hematoloogias mitte biokeemilisi, töömahukaid, väga heterogeense rakupopulatsiooni rakustruktuuri hävitavaid, vaid tsütokeemilisi meetodeid.
Tsütokeemia tõestas, et morfoloogiliselt identsete rakkude vahel on olulisi keemilisi ja ensümaatilisi erinevusi.
Glükogeen (CHIC reaktsioon) (PAS) - Hotchkiss - Mac Minus meetod
Schicki põhimõte. Polüsahhariidid tuvastatakse reaktsiooniga, mis oksüdeerib alkoholirühmi, mis muudetakse aldehüüdrühmadeks ja viimased tuvastatakse Schiffi reagendi värvireaktsiooni abil.
PAS-reaktsiooni reaktiivid: 1. Alkoholi-formaliini fikseeriv segu: 9 osa absoluutset etüülalkoholi + 1 osa 40% formaliini; hoida +4° juures.
2. Perioodhape, 1% vesilahus. Lahus on värvitu. Hoida pruunis klaaspudelis pimedas laboritemperatuuril. Koltunud lahus ei ole rakendatav.
3. Schiffi reaktiiv. Lahjendage keemistemperatuuril 1 g aluselist fuksiini 200 ml destilleeritud vees. Loksutage 5 minutit, jahutage temperatuurini 50 °C, filtreerige ja lisage 20 ml tavalist vesinikkloriidhapet. Jahutage temperatuurini 25 °C, lisage 2 g naatrium- või kaaliummetabisulfiti, mis annavad täielikult lahuse. Lahus peaks seisma ühe päeva pimedas ja külmas (+4 °). Seejärel lisage 2 g aktiivsütt, vestelge 1 min. ja filtreerida.
Saadud filtraat on selge ja värvitu. Lubatud on kergelt kollakas varjund; kui lahus muutub roosaks, muutub see kasutuskõlbmatuks. Hoida temperatuuril +4°C hermeetiliselt suletud pruunis klaaspudelis.
4. Roheline tuli -1% vesilahus.
5. Diastaas: inimese mittevedeldav sülg või 0,1% amülolüütilis-diastaatilise ensüümi lahus füsioloogilises soolalahuses.
Schicki reaktsiooni tehnika
1) määrde 10-minutiline fikseerimine alkoholi-formaliini seguga; destilleeritud veega pesemine;
2) oksüdeerimine 1% perioodilise happe lahusega, 10 min.; destilleeritud veega pesemine;
3) värvimine Schiffi reagendiga kaetud nõus pimedas ja külmas 2 tundi; voolava veega pesemine;
4) vastuvärvimine 1% rohelist valgust 1 minut; loputamine jooksva veega.
Juhtseade on kinnitatud määrima inkubeeriti diastaasiga, 60 min. toatemperatuuril glükogeeni selektiivseks eemaldamiseks. Pärast destilleeritud veega pesemist töödeldakse seda tavapärasel meetodil.
PAS-reaktsiooni tulemuste hindamine
Glükogeen, värvitud karmiinpunaseks - värviga, ilmub terade kujul või hajutatult. Reaktsiooni kontrollimiseks kasutatakse küpseid granulotsüüte. Lisaks glükogeenile CHIC annavad positiivse reaktsiooni ka teised süsivesikute iseloomuga ained, nagu mutsiin, mukoproteiinid, tserebrosiidid, fibriin. Glükogeen eristub nendest koostisosadest eeltöötlemisel diastaasiga, mille järel glükogeen enam ei värvu.
AT granulotsüüdid glükogeen on promüelotsüütide staadiumis juba hajutatud ja hakkab küpsedes suurenema. Normaalsetes tingimustes on lümfotsüüdid negatiivsed või 20% neist võib sisaldada mitut väikest glükogeeni terakest. Monotsüüdid on negatiivsed või peeneteralisusega.
Intensiivsus värvimine määratud poolkvantitatiivselt. Reaktsioonis kajastub CHIC glükogeeniindeksi või keskmise reaktsiooniindeksi (Astaldi) kujul. Normaalne glükogeeni indeks on vahemikus 0,10 kuni 0,30. Tavaliselt on ainult patoloogiliste lümfotsüütide koormusaste üle 3.
See oli loetletud Schicki reaktsioonimeetodina:
a) Teatud ägeda leukeemia tsütoloogiliste tüüpide diferentsiaaldiagnoosi tegemisel:
- Müeloblastid ja promüeluiit on PAS-negatiivsed või omandavad nõrga hajusa värvuse. Aueri kehad annavad positiivse reaktsiooni, mis pärast süljega seedimist nõrgeneb.
- Lümfoblastid ägeda leukeemia ja lümfosarkoomi korral annavad terava PAS-positiivse reaktsiooni terade või suurte glükogeeniplokkide kujul.
- Erütroblastid erütreemia ja ägeda erütroleukeemia korral annavad järsult positiivse hajutatud või granulaarse reaktsiooni, erinevalt tavalistest erütroblastidest, mis on PAS-negatiivsed;
- Monotsütoidsed blastid on ebajärjekindlalt nõrgalt positiivsed, peene granulaarsusega.
b) Kroonilise lümfoidse leukeemia diagnoosimiseks ja ravi efektiivsuse jälgimiseks: kõrgenenud glükogeeni tase viitab haiguse raskele vormile ja halvale prognoosile.
Glükogeeni kasv patoloogilistes lümfotsüütides - nähtus, mis ei ole leukeemiale iseloomulik, seda seletatakse metaboolse aktiivsuse suurenemisega mis tahes tüüpi lümfoidse proliferatsiooni korral.
c) Gaucheri rakkude eristamine teistest makrofaagidest akumulatsiooniga.
Schicki reaktsioon näitab antitoksiini vajaliku taseme olemasolu või puudumist veres, et kaitsta keha difteeria eest. Praegu kasutatakse seda reaktsiooni tundlikumate meetodite (RPHA) kasutuselevõtu tõttu harvemini.
Schicki reaktsioon viiakse läbi lastel, kes on vaktsineeritud difteeria vastu lõpetatud vaktsineerimise ja vähemalt ühe kordusvaktsineerimisega. 13-aastastel ja vanematel inimestel võib reaktsiooni tekkida ka teadmata vaktsineerimisajalugu. Difteeriavastase immuunsuse seisundit kontrollitakse mitte varem kui 6 kuud pärast viimast revaktsineerimist ja mitte varem kui kaks kuud pärast ägedat haigust.
Schicki reaktsioon pannakse ka difteeria suhtes ebasoodsatesse rühmadesse, äsja saabunud lapsed, kui vaktsineerimise kohta pole teavet. Negatiivse Schicki reaktsiooniga lapsi täiendavaid vaktsineerimisi ei tehta. Täiendavad vaktsineerimised, olenemata meeskonna immuunkihist, viiakse läbi positiivse ja kahtlase reaktsiooniga lastele.
Schicki reaktsiooni tulemused märgitakse ennetava vaktsineerimise arvestuskaardile (f. 63), kus on märgitud reaktsiooni määramise ja testimise kuupäev, toksiini seeria ja toksiini tootnud instituut.
Shiki reaktsiooni seadistamiseks kasutatakse lahjendatud aktiivset (kuumutamata) difteeriatoksiini. 0,2 ml sisaldab ühte Shik-annust.
Schicki reaktsiooni seadistamiseks tuleks kasutada ühegrammiseid (tuberkuliini) hoolikalt kontrollitud ja täpsete astmetega süstlaid, mis ei lase vedelikul süstla seinte ja selle kolvi vahele pääseda.
Rangelt keelatud on Shiki reaktsiooni läbiviimine ruumides, kus sel päeval tehti tuberkuloosivastane revaktsineerimine, samuti süstalde, nõelte ja muude tuberkuloosivastase immuniseerimise vahendite kasutamine.
Süstekoha nahk pühitakse 70% etüülalkoholiga niisutatud vatiga. Toksiini (0,2 ml) süstitakse intradermaalselt peopesa pinna keskossa, tavaliselt vasakusse küünarvarre. Sissejuhatus viiakse läbi aeglaselt teadaoleva pingega, mis on iseloomulik intradermaalsele vedeliku süstimisele. Süstimine tehakse süstla väga väikese kalde all küünarvarre suunas, peaaegu paralleelselt naha pinnaga. Nõela lõige peaks täielikult sisenema nahka ja paistma läbi epidermise. Süstekohta peaks moodustuma umbes 1 cm läbimõõduga valkjas, hästi piiratud vesiikul (papuul), mis jätab jäljendi juuksefolliikulisse ("sidrunikoor"). See mull (papule) taandub 10-15 minutiga. Kui toksiini süstimisel vesiikul (papuul) ei teki või see kaob liiga kiiresti, viitab see sellele, et süst on tehtud valesti, sügavalt ning nahaaluselt sattunud toksiin ei pruugi reaktsiooni põhjustada. Selle tulemusena võidakse saada vale tulemus.
Reaktsioon registreeritakse 72 või 96 tunni pärast. Tulemusi hinnatakse järgmiselt:
a) Shiki reaktsioon on positiivne, kui toksiini süstekohas ilmneb punetus ja infiltratsioon. Reaktsiooniaste on näidatud: "+" - kui punetuse läbimõõt on 1 -1,5 cm, (+ +" - kui 1,5 - 3 cm, "+ + +" - kui üle 3 cm;
b) Shiki reaktsioon on negatiivne, kui toksiini süstekohas puudub punetus ja infiltratsioon;
c) Schicki reaktsioon on kaheldav, kui punetus ja infiltraat toksiini sisseviimisel ei ole selgelt väljendunud või kui reaktsioon on väljendunud, on punetuse läbimõõt ligikaudu 0,5 cm (tähistatud "±").
Schicki reaktsiooni formuleerimise vastunäidustused: spasmofiilia, epilepsia, pustuloossed haigused, kokkupuude viirusliku hepatiidiga patsientidega, bronhiaalastma.
Schicki reaktsioon võib olla abiks ebatüüpilise difteeria ja teiste difteeriabatsillide samaaegse kandmisega seotud haiguste diferentsiaaldiagnostikas (juhul, kui Schicki reaktsioon asetatakse enne difteeriavastase seerumi manustamist).
Viimase kahe aasta jooksul läbi viidud uuringud Shiki testi diagnostilise väärtuse kohta tiitrimismeetodil vastavalt V. I. Ioffe'ile, 1/40, 1/10, 1/5 DLM difteeriatoksiiniga (1, 4 ja 8 nahaannust), viisid. järeldusele, et immuunsuse kõrguse määramine aitab diferentsiaaldiagnostikas.
Enamikul toksikogeensete difteeriabatsillide kandjatel määratakse intensiivne antitoksiline immuunsus, mis väljendub negatiivsetes reaktsioonides mitte ainult ühele, vaid ka 4 ja 8 toksiini nahadoosile (K. V. Blumenthal).
Mõnel difteeriaga patsiendil, kellel oli enne seerumi manustamist võimalik määrata immuunsuse seisundit Schicki reaktsiooni abil, osutus viimane ühe nahadoosi korral positiivseks.
Seega, kui kahtlase kliinilise pildi ja toksikogeensete difteeriabatsillide tuvastamise korral annab Schicki test tavapärases seades (1/40 DLM toksiinist) positiivse tulemuse, on difteeria oletus mõistlikum.
Aglutinatsioonireaktsioonist võib abi olla ka diferentsiaaldiagnostikas, kuna difteeria korral on 2.-3. nädalaks alates haiguse algusest regulaarne antikehade tõus veres, samas kui samaaegne kandmine autorite hinnangul ei anna antikehade märkimisväärne suurenemine näidatud perioodidel.
Kokkuvõtteks olgu öeldud, et difteeria diagnoosi tagasilükkamine difteeriabatsillide avastamisel kõigil juhtudel peab olema piisavalt põhjendatud veenvate kliiniliste andmetega.
Arvestades, et sellistel juhtudel on diferentsiaaldiagnostikas sageli suuri raskusi, eriti kohalikule arstile, on soovitatav need patsiendid suunata diagnostikaosakondadesse. Diagnostikavoodite puudumisel saab difteeria diagnoosi panna alles pärast konsulteerimist kogenud arstiga.
"Difteeria lastel", M.E. Sukhareva, K.V. Blumenthal
BL-i tuvastamist follikulaarse stenokardia tüüpilises kliinilises pildis, kui mandli limaskesta alt paistavad läbi mädased folliikulid, nagu hirsiterad, võib samuti kergesti käsitleda kaasuva kandumisena, sest difteeria rünnakute saared on alati paikneb limaskesta pinnal. Kroonilise tonsilliidiga kaasneb sageli enam-vähem pikaajaline difteeriabatsillide kandmine ja selle tõttu on sageli vaja eristada ebatüüpilist difteeria ...
Kogenud arstil ei ole raske diagnoosida seen-mandlipõletikku (põhjustatud leptotriksist) koos difteeriabatsillide kandmisega, kuna neelu mükoosi kliiniline ilming sisuliselt ei sarnane difteeriaprotsessiga; kuid ilmselt soodustavad samad põhjused, enamasti krooniline ninaneelu kahjustus, samaaegselt seene pikaajalist taimestikku ja difteeriabatsillide kandumist. Keerulisem diferentsiaaldiagnostika...
8-aastane Luda P. viidi haiglasse. I. V. Rusakova 9. septembril 1960 diagnoosiga “neelu difteeria?”. Tüdruk on difteeria vastu korralikult immuniseeritud, ta põeb sageli tonsilliiti. Ta jäi haigeks 5. septembril, temperatuur 37,5°, peavalu, mõõdukas kurguvalu. 6.-7.septembril oli temperatuur 38-39° piires, enesetunne halb, valu kurgus püsis ....
Difteeriabatsillide tuvastamine külvamisel neelust või ninast, millel on tüüpiline gripi laudja või ülemiste hingamisteede katarriga laudja kliiniline pilt, ei saa olla otsustavaks argumendiks laudja difteeria etioloogia kasuks. Sellistel juhtudel on vajalik isoleeritud mikroobide tuvastamine, kuid BL-i kandumine neelus või ninas, millega kaasneb mittedifteeria laudjas, on täiesti võimalik. Siin on väljavõte ajaloost...
8-aastane Borja B. paigutati haigla difteeriadiagnostika osakonda. I. V. Rusakova 27. septembril 1960 diagnoosiga “neelu difteeria?”. Poiss on difteeria vastu korralikult immuniseeritud. Haige uuesti tonsilliidiga. Haigestus 24. IX, temperatuur 39,5°, külmavärinad, kurguvalu. 25. IX vaatas lapse arst üle: temperatuur püsis kõrge, täheldati neelu eredat hüpereemiat, kollakas, lõtv, kuid üsna ulatuslik ...
Toksiinid (kreeka keelest toxikon - mürk), bakteriaalse päritoluga ained, mis võivad pärssida füsioloogilisi funktsioone, mis põhjustab loomade ja inimeste haigusi või surma. Keemilise olemuselt on kõik toksiinid valgud või polüpeptiidid. Erinevalt teistest orgaanilistest ja anorgaanilistest mürgistest ainetest põhjustavad toksiinid allaneelamisel antikehade teket.
Mõnede nakkushaiguste (difteeria, sarlakid) puhul kasutatakse laste immuunsuse intensiivsuse ja vastuvõtlikkuse määramiseks nahasiseseid teste, milles kasutatakse sobivaid lahjendatud toksiine. Positiivne reaktsioon (lokaalne nahapõletik toksiini manustamispiirkonnas) tuleneb toksiini toksilisest toimest nahakudedele. Reaktsiooni negatiivset tulemust seletatakse naha sisse viidud toksiini neutraliseerimisega vastava immuunorganismis sisalduva antitoksiiniga selleks piisavas koguses.
Toksiinid saadakse toksikogeensetest mikroobitüvedest (difteeriabacillus või sarlakid streptokokk) nakatamise teel vedelale toitainekeskkonnale (koldepuljong), millele järgneb filtreerimine läbi bakterifiltrite. Saadud toksiinidest valmistatakse diagnostilised toksiinid Shika (difteeria) ja Dick (sarlakid). Toksiinid süstitakse intradermaalselt, koguses 0,2 ml (Shika) ja 0,1 ml (Dick), küünarvarre sisepinna keskossa.
Anatoksiinid on toksogeensete mikroorganismide puljongikultuuride filtraadid, mis on eritöötluse tõttu kaotanud mürgisuse, kuid säilitanud suures osas algsete toksiinide antigeensed ja immunogeensed omadused.
Inimese või looma kehasse sattudes põhjustavad toksoidid antitoksilise immuunsuse moodustumist, see omadus võimaldab neid kasutada nende nakkushaiguste ennetamiseks, mis põhinevad patogeenide poolt vabanevate eksotoksiinide toimel, samuti hüperimmuniseerimiseks. loomad – antitoksiliste seerumite tootjad.
Olenemata toksoidi tüübist määravad selle immunogeensuse ja antigeensuse algse toksiini vastavad omadused. Seetõttu pööratakse neid ravimeid tootvates laborites suurt tähelepanu toksiinide moodustumise optimaalsete tingimuste loomisele.
Kõrge tugevusega toksiinide saamiseks on vaja tüvesid, mis eristuvad eriti väljendunud võimega moodustada kunstlikes tingimustes ctoksiine. Kõik toksikogeensete bakterite tüved ei oma neid omadusi. Tootmise eesmärgil kasutatakse tüvesid, mis on kohandatud tehiskeskkonnaga ja säilitavad püsivalt võime moodustada ctoksiine.
Toksiini moodustavate ainete kultuure säilitatakse kas kuivatatud olekus või söötmel, mis on seda tüüpi bakterite jaoks optimaalne. Enne kasutamist masspartiide inokuleerimiseks passiveeritakse tüved toksiini saamiseks kasutatud söötmel.
Kui muud asjaolud on võrdsed, määrab toksiinide tugevuse söötme kvaliteet, mistõttu laborid pööravad tähelepanu söötme ettevalmistamisele. Tooraine, kemikaalid ja muud söötme koostisained alluvad kõige põhjalikumale kontrollile tootmisinstituutide biokeemilistes laborites.
Toksiinide moodustamiseks kasutatakse vedelat toitainekeskkonda, milleks on lihavesi ja liha peptiline (Martini puljong, Ramoni sööde) või trüptiline (paavsti sööde) seedimise saadused.
Liha hüdrolüüsi protsessi kontrollitakse amiini lämmastiku üldsisalduse ja valgu lõhustamiskoefitsiendi määramisega, mis arvutatakse amiinlämmastiku ja üldlämmastiku suhtest. Kasutatakse ka lihavaba kaseiini, poolsünteetilisi söötmeid.
Toksiinide moodustamiseks mõeldud toitekeskkonnale lisatakse süsivesikuid (glükoos, maltoos või nende segu). Süsivesikute kääritamisel vabaneb suur hulk energiat, mis on vajalik arenevas kultuuris toimuvateks sünteesiprotsessideks. Süsivesikute lisamine suurendab järsult keskkonnas tekkivate toksiinide tugevust.
Lisaks süsivesikutele on toksiinide moodustumiseks minimaalsetes annustes vaja teatud metalle. Difteeriabatsilli toksiinide teket pärsib raua liig keskkonnas samal määral kui selle puudumine. Optimaalsete rauakoguste olemasolul keskkonnas suureneb toksiinide moodustumine järsult.
Toksiini moodustumine toimub täies ulatuses söötme teatud pH juures. Samal ajal muutub kultuuri kasvamise ajal pH väärtus ja võib jõuda selliste näitajateni, mis pärsivad toksiini moodustumist.
Selle keskkonna kõrvaldamiseks lisatakse soovitud pH väärtuse säilitamiseks puhveraineid. Üks sellistest puhveromadustega ainetest on naatriumatsetaat, mida lisatakse puljongile koguses 0,5-0,75%.
Sõltuvalt toksiini tootva mikroobi bioloogilistest omadustest kasutatakse erinevaid kasvutingimusi ja eelkõige reguleeritakse söötme õhutamist. Difteeriabatsill moodustab maksimaalse õhutuse tingimustes toksiini, vastupidi, teetanuse batsill ja teised toksogeensed anaeroobid ei vaja hapnikku. Vastavalt sellele kasvatatakse kultuuri esimesel juhul õhukeses söötme kihis, millel on suur õhuga kokkupuutepind, teisel juhul valatakse sööde kõrge kihi ja mitmesuguste hapnikuadsorbentide (vatt, kuivad erütrotsüüdid) lisatakse.
Kasvutemperatuur ja selle kestus on erinevate mikroobide puhul erinev. Toksiini moodustumise protsessile on omane vajadus täiusliku temperatuuri kontrolli järele inkubaatoris. Temperatuuri kõikumised mõjutavad negatiivselt toksiini tugevust. Seetõttu on termostaadid, milles toimub toksiinide moodustumine, varustatud täpsete termostaatidega.
Igal üksikjuhul määrab kultuuri kultiveerimise kestus toksiini moodustumise intensiivsusega antud söötme seerias. Kasvatamise lõpetamise aja küsimuse lahendamiseks määratakse toksiini iH tugevus söötmes erinevatel kultiveerimisperioodidel.
Kui toksiini tugevus saavutab maksimumi, eraldatakse see mikroobikehadest, filtreerides läbi spetsiaalsete bakteriaalsete filtrite (anaeroobsed mikroorganismid) või tavaliste paberfiltrite (diphtheria bacillus).
Toksiliste filtraatide vanatoksiini translatsioon viiakse läbi pikaajalisel kokkupuutel formaliiniga temperatuuril 39–40 °C. Formaliin ühineb toksiini aminohapete, polüpeptiidide ja valkude vabade aminorühmadega ning kaotab seetõttu oma toksilised omadused. Vanatoksiini toksiini üleminek toimub 3-4 nädala jooksul. Toksoidi õigeks moodustamiseks on oluline toksiini pH. Kõige soodsam on keskkonna neutraalne või kergelt aluseline reaktsioon.
Anatoksiine iseloomustab loomadele täielik kahjutus. Mittetäieliku neutraliseerimise korral võivad aga neisse jääda toksiinijäägid, mis põhjustavad tundlikus organismis hiliseid kahjustusi. Seetõttu jälgitakse toksoidide ohutuse kontrollimisel loomi pikka aega. Toksoidide kahjutus on pöördumatu. Ükski mõju ei too kaasa kaotatud toksilisuse taastamist.
Anatoksiinid säilitavad peaaegu täielikult toksiinide antigeensed omadused. Seda saab kontrollida erinevate meetoditega in vitro (flokulatsioonireaktsioon, toksoidi sidumisreaktsioon) ja loomkatsetega, kus toksoidi sissetoomine põhjustab vastavate antitoksiinide teket ja antitoksilise immuunsuse tekke.
Anatoksiinid on püsivad; taluvad korduvat külmutamist ja sulatamist, taluvad kõrget temperatuuri ja on pikaajalisel ladustamisel stabiilsed.
Anatoksiinid sisaldavad lisaks spetsiifilistele valkudele ka ballastaineid, millest neid saab erinevatel meetoditel vabastada. Need põhinevad toksoidide võimel sadestuda, kui need on küllastunud neutraalsete soolade, raskmetallide soolade, hapetega (soolhape, trikloroäädikhape, metafosforhape), samuti etüül- ja metüülalkoholi juuresolekul madalatel temperatuuridel. Neid meetodeid kasutatakse praegu puhastatud kontsentreeritud toksoidide saamiseks.
Toksoidid adsorbeeritakse erinevatele lahustumatutele ainetele (fosforisoolad, alumiiniumhüdroksiid), sellest valmistatakse sorbeeritud toksoidid, mida iseloomustab hilinenud imendumine organismis, mille tulemusena on võimalik saada intensiivsem immuunsus.
Oma kahjutuse, kõrge antigeensuse ja immunogeensuse tõttu on toksoidid kõige väärtuslikum vahend mitmete haiguste ennetamiseks ja raviks.
Praeguseks on saadud toksoide: difteeria, teetanus, botuliin, stafülokokk, düsenteeria, gaasigangreeni patogeenide tekitatud toksiinidest, aga ka maomürgist.
Bakteriaalsed või nakkuslikud allergeenid on tapetud mikroobirakkude või nendest eraldatud erinevate fraktsioonide suspensioon ja neid kasutatakse diagnostiliste preparaatidena, et tuvastada organismi ülitundlikkust nakkushaiguste patogeenide suhtes.
Bakteriaalseid eksotoksiine (difteeria, sarlakid) kasutatakse nahatestides, et määrata antitoksilist immuunsust nende haiguste suhtes.
Allergilisi nahateste kasutatakse paljude nakkushaiguste diagnoosimiseks, millega kaasneb organismi allergiline ümberstruktureerimine. Olenevalt allergeeni sissetoomise viisist võib rakendada nahateste – tundlikkuse määramisel teatud ravimite, keemiliste ainete suhtes; skarifikatsioon - leibkonna, õietolmu, epidermise allergeenide ja intradermaalse tundlikkuse määramisel - bakteriaalsete ja seente allergeenide suhtes tundlikkuse määramisel.
Organismi reaktsioonide diagnostiline väärtus allergeenidele on nakkusprotsessi ajal erinev. Nakkusprotsessi alguses näitab positiivne reaktsioon ainult nakatumist konkreetse patogeeniga ja selle suhtes allergilist seisundit ning seda ei saa pidada diagnostiliseks. Haiguse kõrgpunktis võetakse diagnostilise analüüsina arvesse allergiatesti. Mõne nakkushaiguse järel püsib mitmeks aastaks allergia vastava patogeeni suhtes, mille avastamine viitab infektsioonile. Positiivse reaktsiooni korral allergeenile, mida võetakse arvesse 20 minuti pärast ning seejärel 24 ja 48 tunni pärast (harva 7 päeva), on süstekohas põletustunne, punetus, turse ja võib tekkida vesiikul. .
Diagnostilistel eesmärkidel kasutatavad allergeenid on keemilise olemuse ja tootmismeetodite poolest erinevad.
Järgnevalt kirjeldatakse mõningaid laialt levinud diagnostilisi ravimeid.
1. Tuberkuliin. Praegu on allergiliste tuberkuliinitestide tegemiseks saadaval kolm ravimit:
alttuberculin Koch, kuiv puhastatud tuberkuliin (PPD) ja puhastatud tuberkuliin standardlahjenduses.
Alttuberculin Koch (ATK) on kollakaspruun vedelik, mis saadakse 5-6-nädalase glütseriini-liha-peptooni puljongis kasvatatud mükobakterite kultuuri aurustamisel 1/10-ni esialgsest mahust. Kochi vana tuberkuliin sisaldab mükobakterite jäätmeid ja lagunemissaadusi ning toitainekeskkonda. Ravim peab sisaldama vähemalt 90 000 TU (tuberkuliiniühikut) 1 ml kohta.
Kuivpuhastatud tuberkuliin (PPD) – (Derivatum protei nos purificatum tuberculini mammalinii) on valgupreparaat, mis saadakse Mycobacterium tuberculosis'e kultuuri filtraadist keemilise sadestamise ja järgneva puhastamisega. 1 ml puhastatud kuiva tuberkuliini sisaldab 50 000 ühikut. Ravimit kasutatakse intradermaalsete Mantouxi testide, Kochi subkutaansete testide ja muude testide jaoks.
Puhastatud standardlahjenduses tuberkuliin (PPD-2) valmistati tuberkuliinipulbrist, lahjendades seda lahustis (tween-80), mis tagab ravimi bioloogilise aktiivsuse stabiliseerumise - 2 või 5 TU 0,1 ml-s.
Seda kasutatakse ainult intradermaalsete Mantouxi testide määramiseks.
Puhastatud tuberkuliinide eeliseks on nende suurem tundlikkus ja standardiseeritus.
Tuberkuliinidiagnostika viiakse läbi elanikkonna, eriti laste ja noorukite tuberkuloosi nakatumise väljaselgitamiseks; tuberkuloosi vastu vaktsineeritavate inimeste valikul; vaktsineerimise efektiivsuse määramine jne.
Tuberkuliini massidiagnostikas kasutatakse intradermaalset Mantouxi testi, kasutades puhastatud tuberkuliini standardlahjenduses.
Kui uuritav ei ole nakatunud mycobacterium tuberculosis'ega, täheldatakse negatiivset reaktsiooni; kui infiltraadi suurus on 2-4 mm, on test kaheldav, seega tuleks reaktsiooni korrata 3-4 nädala pärast. Kui infiltraat on üle 5 mm, loetakse reaktsioon positiivseks.
2. Tulariin sisaldab 3% glütseroolis temperatuuril 70°C kuumutamisel tapetud mikroorganisme, seda kasutatakse nahasiseseks manustamiseks tulareemia diagnoosimisel alates 3.-5. haiguspäevast. Tulariini testi kasutatakse ka vaktsineerimisjärgse immuunsuse määramiseks.
3. Brucellin – on kõigi kolme Brucella tüübi 3-nädalase (kuumusega surmatud) puljongikultuuri filtraat.
Ravimit manustatakse rangelt intrakutaanselt brutselloosi diagnoosimisel ja vaktsineeritud inimeste immuunsuse määramisel (Burne'i nahatest).
4. Toksoplasmiin on antigeenne kompleks, mis saadakse toksoplasmoosi tekitajaga intraperitoneaalselt nakatunud hiirte kõhuõõne eksudaadist. Preparaat ei tohi sisaldada elujõulist toksoplasmat.
Toksoplasmiini kasutatakse toksoplasmoosi kahtlusega haiguste diagnoosimiseks - sünnituspatoloogia, silmakahjustuse, ebaselge etioloogiaga palaviku jms korral.
5. Antraksiin – preparaat, mis sisaldab siberi katku batsillide hüdrolüüsil saadud valgu-polüsahhariidi-nukleiinhappe kompleksi. Antraksiini kasutatakse siberi katku patsientide diagnoosimiseks, allergilise seisundi määramiseks immuniseeritud inimestel ja inimestel, kellel on see infektsioon olnud. Allergiline test on positiivne juba haiguse esimestel päevadel.
6. Düsenteeria – on kahe düsenteeria tekitaja Shigella Flexneri ja Sonne valgufraktsioon ning seda kasutatakse täiendava diagnostilise vahendina seedetrakti haiguse düsenteeria etioloogia kahtluse korral igas vanuses inimestel.
7. Bakteriaalsed allergeenid mikroorganismidest nagu stafülokokid, streptokokid, pneumokokid, katarraalsed Neisseria, Escherichia, Enterococcus, Proteus, pseudodifteeria batsillid saadakse puhastatud termostabiilsete fraktsioonidena 5-6-päevase kultuuri puljongist (VerzhiAndokovi meetod) ) või looduslike preparaatide kujul - inaktiveeritud bakterisuspensioon, mis sisaldab ainevahetusprodukte. Puhastatud bakteriaalsed allergeenid on mikroorganismidest ekstraheeritud valgud (kuni 83%) vähese suhkrute ja nukleiinhapete seguga.
Preparaadid on mõeldud keha ülitundlikkuse tuvastamiseks mikroorganismide suhtes, millest need pärinevad.
Bakteriaalseid eksotoksiine (difteeria ja sarlakid) kasutatakse antitoksilise immuunsuse määramiseks difteeria vastu Schicki reaktsioonis ja sarlakid Dicki reaktsioonis.
Difteeriatoksiin valmistatakse puhastatud eksotoksiinist pärast kaheaastast kokkupuudet, lahjendades glütserooli-želatiini segus nii, et 0,2 ml sisaldab merisea jaoks 1/40 Dim. Toksiini süstitakse 0,2 ml annuses rangelt intradermaalselt küünarvarre peopesa pinna keskossa. Positiivse reaktsiooni korral toksiinile (st subjektil antitoksilise immuunsuse puudumisel) ilmneb süstekohta 72–96 tunni pärast infiltraat ja erüteem 15–30 mm. Seetõttu on vajalik täiendav vaktsineerimine difteeria vastu.
Lapsed, kellel on negatiivne Schicki reaktsioon (paiksete muutuste puudumisel, mis on tingitud süstitud toksiini neutraliseerimisest antitoksiinidega), ei saa täiendavaid vaktsineerimisi.
Skarlatinaalne toksiin (erütrogeenne) on streptokoki termostabiilne nukleoproteiin, mis on konserveeritud fenooliga (0,2%) või mertiolaadiga (lahjenduses 1:10 000). Scarlet toksiini doseeritakse nn nahadoosidena ja üheks nahadoosiks võetakse selline kogus toksiini, mis küülikule nahasiseselt manustades põhjustab põletikku (15-20 mm). Sarlakite vastase immuunsuse intensiivsuse määramiseks süstitakse lastele rangelt intradermaalselt skarlatinaalset toksiini annuses 0,1 ml (üks nahaannus küülikule). Reaktsiooni arvestamine toimub 18-24 tunni pärast.
Positiivne reaktsioon, mis näitab immuunsuse puudumist sarlakite vastu, on erüteemi teke süstekohas, mille suurus on 20–30 mm või rohkem ja millel on järsult positiivne reaktsioon.