בדיקת דם RPG: פרשנות התוצאות. מה מראה בדיקת הדם rpga מידע כללי על המחקר

בדיקות טרפונמל לעגבת. תיאור כללי.

על מנת לאבחן בצורה מהימנה עגבת ולזהות נוגדנים אנטי-עגבתים בגופו של המטופל (בסרום הדם או בנוזל השדרה), נעשה שימוש בטכנולוגיות מחקר מעבדתיות מיוחדות - מה שנקרא שיטות סרולוגיות.

בעת ביצוע בדיקות אבחון עבור עגבת, תגובות סרולוגיות שונות משמשות: אגלוטינציה, משקעים, אימונופלואורסצנטי, קיבוע משלים, בדיקת אנזים אימונו וכו'. כל התגובות הסרולוגיות הללו מבוססות על האינטראקציה של אנטיגנים ונוגדנים.

בדיקות סרולוגיות ספציפיות נקראות treponemalכי בדיקות אלו משתמשות ב-treponema pallidum או באנטיגנים שלו, כלומר באנטיגנים ממקור טרפונמלי. מטרתן של בדיקות טרפונמל היא לזהות נוגדנים ספציפיים למבנים האנטיגנים של הגורם הסיבתי של עגבת, כלומר נוגדנים המכוונים ספציפית נגד חיידקי ה-T. Pallidum עצמם, ולא נגד רקמות הגוף שנפגעו על ידי טרפונמה. ניתן לזהות נוגדנים אנטי-טרפונמאליים ספציפיים מקבוצת IgM כבר בסוף השבוע השני של המחלה.

7. תוצאות חיוביות שגויות ושליליות שגויות

תוצאות חיוביות של RV עבור עגבת אצל אנשים שאינם סובלים ממחלה זו נקראות חיוביות כוזבות. השכיחות של תוצאות חיוביות כוזבות אצל אנשים בריאים היא 0.2-0.25%. אם אחוז התוצאות החיוביות-שגויות הלא ספציפיות של RV באנשים בריאים הוא נמוך מאוד, אז במחלות מסוימות הוא יכול להיות גבוה.

ניתן לחלק את כל התוצאות הלא ספציפיות של תגובות סרולוגיות לקבוצות העיקריות הבאות:

1. מחלות הנגרמות על ידי נוכחות אנטיגנים נפוצים בפתוגנים דומים (ספירושטים): חום חוזר, פיהוק, בייל, פיינט, טרפונמה אוראלית, לפטוספירה.

2. תגובות חיוביות עקב שינויים בחילוף החומרים של שומנים ושינויים בגלובולינים בסרום. אלה כוללים תוצאות חיוביות בנשים הרות עם גאוט, הפרעות בהרכב השומנים כתוצאה מהרעלת עופרת, זרחן, לאחר נטילת נתרן סליצילט, דיגיטליס וכו'. תגובות אלו צריכות לכלול גם תגובות חיוביות במחלות זיהומיות מסוימות (טיפוס, מלריה, דלקת ריאות, צרעת , אנדוקרדיטיס, קולגנוזיס, אוטם שריר הלב, זעזוע מוח, סרטן, שחמת הכבד וכו')

3. טעויות התנהגות טכניות. בחירה שגויה של מינון המשלים, אי עמידה בתנאים ובתנאי האחסון של ריאגנטים, הרחקת דגימות ביקורת של סרום דם מהתגובה, שימוש במבחנות ומכשירים מזוהמים.

8. שינוי תגובת וסרמן

ישנם שינויים בתגובת וסרמן בגרסאות איכותיות וכמותיות, בקור, עם נוזל מוחי.

שינוי קרוואן בקורנראה רגיש יותר. מאפיין של המתודולוגיה להגדרת תגובת וסרמן בקור הוא משטרי הטמפרטורה התלת-פאזיים שבהם מתרחשת קשירת המשלים. תגובה זו היא גם לשים עם cardiolipin ואנטיגן treponemal.

בנוסף להערכה האיכותית של RW, יש שיטה לה הגדרה כמותיתעם דילולים שונים של סרום דם (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). טיטר ה-reagin נקבע לפי הדילול המרבי, שעדיין נותן תוצאה חיובית חדה (4+). ניסוח כמותי של RV חשוב באבחון של צורות מסוימות של עגבת ובניטור יעילות הטיפול.

9. היקף

ברוסיה, RSKt הוא חלק ממכלול הבדיקות הסרולוגיות הסטנדרטיות לעגבת (SSR).

התגובה של וסרמן עם אנטיגן טרפונמל וקרדיוליפין (RSKt) רגילה

  • אבחון של כל צורות העגבת,
  • שליטה על יעילות הטיפול,
  • בדיקות של אנשים שהיו במגע מיני עם חולה עם עגבת,
  • בדיקות של אנשים עם חשד קליני ואנמנסטי לעגבת
  • במהלך בדיקה מונעת לאיתור עגבת של חולים בבתי חולים פסיכיאטריים ונוירולוגיים, תורמים ונשים בהריון, לרבות אנשים שהופנו להפסקת הריון מלאכותית.

נכון לעכשיו, בהוראת משרד הבריאות של הפדרציה הרוסית, מומלץ להחליף את RSKT בשיטות טרפונמל רגישות יותר (ELISA או RPHA).

בחו"ל, תגובת וסרמן עם אנטיגן טרפונמל אינה בשימוש במעבדה קלינית במשך זמן רב ואינה נכללת ברשימת הבדיקות הסטנדרטיות המומלצות על ידי ארגון הבריאות העולמי.

קומפלקס של תגובות סרולוגיות קלאסיות (CSR)

DAC- זה קומפלקס תגובהמשמש לסרודיאגנוזה של עגבת כשיטה סטנדרטית. קומפלקס תגובות זה כולל את תגובת וסרמן עם אנטיגן קרדיוליפין (תמצית מלבו של שור מועשר בלציטין וכולסטרול) ואנטיגן טרפונמל (תרחיף של טרפונמות חיוורות תרבותיות אפתוגניות שטופלו באולטרסאונד), וכן תגובת מיקרו-משקעים (RMP). ) עם פלזמה או סרום מומת, אשר מונח עם אנטיגן קרדיוליפין

CSR הופכים לחיוביים באמצע התקופה הראשונית (החלוקה שלו לסרוננגטיבית וסרוחיובית נקבעת במדויק על ידי CSR), בתקופה המשנית CSR חיוביים ב-98-100% מהחולים, ובתקופה השלישונית - רק ב-60-70 %. כלומר, ככל שמשך המחלה עולה, החיוביות של ה-CSR פוחתת בהדרגה.

יתרונות ה-KSR:

1) זולות, פשטות ומהירות הגדרה. זה נכון במיוחד לתגובת המיקרו-משקעים: RMP היא כיום שיטת ההקרנה (ההקרנה) העיקרית;

2) בדיקות שאינן טרפונמאליות נוחות לשימוש כדי לעקוב אחר הריפוי של עגבת.

חסרונות ה-CSR:

1) סובייקטיביות של הערכה של תוצאות התגובות ("לפי העין");

2) רגישות נמוכה בצורות מאוחרות של עגבת;

3) חוסר ספציפיות בהשוואה לבדיקות מודרניות יותר. כאשר הם מבוצעים, לעתים קרובות מציינים תגובות חיוביות כוזבות (LPR).

LPR עשוי לנבוע מתגובתיות צולבת בין הספירושטה החיוורת לחיידקים אחרים, הפרעות בחילוף החומרים של שומנים וחלבונים, חוסר יציבות של קרום התא ויצירת נוגדנים עצמיים. LPR מופיעים בזיהומים חריפים (מלריה, מונונוקלוזיס זיהומיות וכו') וכרוניות (שחפת, צרעת, הפטיטיס, בורליוזיס וכו'), אוטם שריר הלב, שחמת כבד, קולגנוזות (במיוחד ב-SLE), אונקופתולוגיה, חיסון, שימוש בסמים, שימוש לרעה באלכוהול ובמזון שומני. חיובי כוזב עשוי להיות CSR בשבועות האחרונים של ההריון, לאחר הלידה ובחלק מהנשים במהלך הווסת. תוצאות CSR שליליות כוזבות עשויות להיות קשורות לזיהום ב-HIV.

RIT, RIBT - תגובת אימוביליזציה של טרפונמה חיוורת

בדיקת טרפונמה pallidum immobilization (TPI; Treponema pallidum immobilization test, TPI) היא שיטה קלאסית המשמשת לאיתור נוגדני טרפונמל ספציפיים. תגובת ה-RIBT משתמשת ב-treponema pallidum T. pallidum פתוגנית (זן ניקולס) הגדל באשכי ארנבת כאנטיגן. RIBT מבוסס על אובדן ניידות של טרפונמות חיוורות לאחר חשיפה לנוגדנים מסרום הדם והשלים של המטופל. התוצאות מוערכות על ידי מיקרוסקופ שדה כהה. למרות העובדה שבדיקת RIBT הוכנסה לפרקטיקה הקלינית כבדיקה ספציפית לעגבת, היא עמלנית, מורכבת טכנית, גוזלת זמן ויקרה לשימוש.

1. היסטוריה של שיטת RIBT

בדיקת טרפונמה pallidum immobilization (TPRT) היא למעשה הבדיקה הספציפית הראשונה לאבחון של עגבת. תגובה זו הוצגה ב-1949 על ידי החוקרים האמריקאים R.W. Nelson ו-M.M. Mayer ונדונה בפירוט במאמרים מדעיים בעשורים הבאים. ניסיונות לא מוצלחים להשתמש בטרפונמות חיות בבדיקות נעשו בעבר. בשל העובדה שנלסון הצליח ליצור סביבה שבה טרפונמות נשארו בת קיימא עד 8 ימים, המחקר שלו הוכתר בהצלחה.

2. עקרון שיטת RIBT

השיטה מבוססת על תופעת אובדן ניידות על ידי טרפונמות חיוורות בנוכחות נוגדנים אנטי-טרפונמאליים משובשים של סרום הדם הנחקר ומשלים בתנאים אנאירוביים. האנטיגן הוא טרפונמה חיוורת פתוגנית חיה המתקבלת מארנבות שנדבקו באופן מלאכותי בעגבת.

3. הגדרת מבחן RIBT

הסרום הבדיקה, המשלים והאנטיגן משתתפים בתגובה. סרום הדם של הנבדק מתווסף לטרפונמים חיים המתקבלים מרקמות אשך ארנבת לאחר זיהום מלאכותי. בנוכחות נוגדנים אנטי-טרפונמאליים-אימוביליזינים בסרום, טרפונמות חיוורות מפסיקות לנוע (מקומעות). נוגדני Immobilisin הם נוגדנים אנטי-טרפונמאליים מאוחרים.

התגובה מתבצעת עם סרה מושבתת בחום או עם דגימות של סרה מיובשות על נייר שעווה (טיפות יבשות). השבתת הסרום על ידי חימום מתבצעת למשך 30 דקות בטמפרטורה של 56 מעלות צלזיוס. לפני נטילת דם, הנבדק לא צריך לקבל תרופות, במיוחד תכשירי פניצילין. קבלת תרופות מבוטלת לתקופה של עיכוב אפשרי שלהם בגוף.

כאנטיגן, נעשה שימוש בחיידקים מזן ניקולס, המתקבלים מדלקת עגבת של ארנבת (דלקת אשכים) של 7-10 ימים. התקופה מרגע הגדרת התגובה ועד לרישום תוצאותיה נמשכת 18-20 שעות, לכן יש צורך בסביבת הישרדות כדי לשמור על הכדאיות והניידות הטובה של מיקרואורגניזמים.

RIBT משתמש בהשלמה של שפן ניסיונות. כדי להשיג השלמה, יש ליטול דם בתנאים סטריליים ממספר שפני ניסיונות.

במקרה של זיהום חיידקי, המשלים מושלך. לא יכול לשמש בתגובה של immobilization של treponema חיוור משומר משלים, tk. הוא רעיל למיקרואורגניזמים.

בתגובת האימוביליזציה משתמשים בעודף של משלים. הכמות שלו תלויה במידה רבה בסביבת ההישרדות של טרפונמה חיוורת.

RIBT ממוקם בקופסאות סטריליות, שהוקרן בעבר במנורת קוורץ קוטל חיידקים למשך 45-60 דקות. כל סרום דם נבדק בשתי מבחנות: מְנוּסֶהו לִשְׁלוֹט. בשתי המבחנות מוסיפים את סרום הבדיקה והאנטיגן בכמויות הנדרשות. משלים פעיל מוזגים לתוך המבחנה, ואותה כמות של סרום דם חזיר ניסיונות מומת מוזגת למבחנה. לאחר המילוי מערבבים את תכולת הצינורות בניעור עדין.

RIBT ממשיך בתנאים אנאירוביים. מבחנות עם מרכיבים מונחות במיקרו-אנארוסט, שממנו נשאב אוויר אטמוספרי על ידי משאבת ואקום ומזריקים תערובת גז מגליל (95 חלקי חנקן ו-5 חלקי פחמן דו חמצני). המיקרו-אנאירוסטט עם המבחנות ממוקם בתרמוסטט (35 מעלות צלזיוס) למשך 18-20 שעות.

הערכת התוצאות של RIBT מתבצעת לאחר הוצאת המבחנות מהתרמוסטט והמיקרו-אנאירוסטט (כלומר, לאחר ניסיון של 18-20 שעות). בעזרת פיפטת פסטר מורחים טיפה מתכולת המבחנה על שקף זכוכית, המכוסה בכיסוי כיסוי ונבדק בשדה הכהה של מיקרוסקופ (אובייקט 40, עינית 10X). מספר שדות ראייה נבדקים בחלקים שונים של ההכנה, תוך ספירת מספר הטרפונמות החיוורות הניידות והבלתי ניידות בכל אחת מהן. הספירה מתחילה עם התרופה מהביקורת, ולאחר מכן מהמבחנה.

בעת הגדרת התגובה, נעשה שימוש ב-5 מחקרי ביקורת: עם סרמים חיוביים ושליליים בדם בעליל, עם משלים והישרדות פעילים ובלתי פעילים עבור טרפונמה חיוורת. סרום דם שלילי בקרה משמש כדי לשפוט את מידת הניידות של טרפונמה חיוורת בניסוי זה. בקרת סרום דם חיובי - להערכת מידת הפעילות המשתקעת בתנאים של ניסוי זה. המחקר של משלים פעיל ובלתי מופעל והסביבה מתבצע כדי לקבוע את השפעתם על הניידות של טרפונמה חיוורת.

עם חוסר השלמה בניסוי, נוגדנים משתקים אינם מראים את פעילותם כראוי והטרפונמות נשארות ניידות. לכן, לאחר הניסוי, מבוצעת קביעת המשלים השיורי על מנת להעריך האם ניידות הטרפונמות החיוורות במבחנות נבעה מחוסר המשלים. לשם כך, נעשה שימוש במערכת המוליטית - תערובת של תרחיף של אריתרוציטים של ראם וסרום המוליטי מדולל הנשמר בתרמוסטט.

השלמה שארית נקבעת על ידי הוספת המערכת ההמוליטית בנפח הנדרש לכל צינור. הצינורות ממוקמים בתרמוסטט ב-37 מעלות למשך 45 דקות. במבחנות ניסיוניות צריך להופיע המוליזה של אריתרוציטים, במבחנות בקרה צריך להיות עיכוב בהמוליזה. היעדר המוליזה במבחנות מעיד על כמות לא מספקת של משלים, במקרים אלו יש לחזור על המחקר. בדיקה חוזרת של סרום הדם אינה מבוצעת רק אם מציינים 100% אימוביליזציה של טרפונמות חיוורות.

4. התחשבנות בתוצאות RIBT

את הטרפונמות המשובשות סופרים תחת מיקרוסקופ באמצעות מיקרוסקופיה של שדה כהה. החוקר נדרש להיות בעל מיומנות להעריך את התנועה של טרפונמות. עליו לשים לב לעוצמת התנועות שנעשות על ידי טרפונמה חיוורת. בחיידק זה לא תמיד ניתן לצפות בכיווצים ובתנועות כפיפה דמויי גל, לעיתים רק סיבוביות. אתה צריך גם להיות מסוגל להבחין בין תנועות פעילות של טרפונמות לתנועה עם זרימת נוזלים.

כדי להעריך את תוצאות התגובה, מחושב אחוז הקבוע של טרפונמות חיוורות, כלומר היחס בין טרפונמות ניידות ובלתי ניידות בניסוי (עם משלים פעיל) ובקרה (עם משלים לא פעיל) לפי הנוסחה:

X \u003d (M - C) × 100 / M

כאשר M הוא מספר הטרפונמות הניידות בבקרה; C - מספר הטרפונמות הניידות בניסוי; X - % immobilization. בעבודה מעשית, אחוז ההקפאה נקבע על פי טבלה שנקבעה מראש תוך שימוש בנוסחה לעיל.

התגובה של immobilization של treponema חיוור מוערך כמו

  • חִיוּבִיבמהלך immobilization 51 - 100% טרפונם,
  • חיובי חלש: 31 - 50% טרפונמה לא תנועתית,
  • מוטל בספק: 21 - 30% טרפונמה לא תנועתית,
  • שלילי: 0 - 20% טרפונמות לא תנועתיות.

התגובה של אימוביליזציה של טרפונמה חיוורת הופכת לחיובית בסוף היסוד הראשוני - תחילת התקופה המשנית של עגבת (משבוע 7-8 מרגע ההדבקה ועוד). יחד עם זאת, RIBT מועיל מעט לאבחון השלבים המוקדמים של עגבת, שכן נוגדנים המשתקעים טרפונמה חיוורת ונקבעים בתגובה מופיעים רק 3-6 שבועות לאחר ההדבקה. נוגדנים-אימוביליזינים שייכים לקבוצת האימונוגלובולינים IgG. הם מופיעים בדם מאוחר יותר מ-reagins (נוגדנים אנטיקרדיוליפין), מאוחרים יותר מנוגדנים לפלואורססין (מתגלים RIF ו-ELISA) ו-precipitins (RMP מתגלים).

בעתיד, RIBT נשאר חיובי. קיימת רגישות גבוהה של התגובה בצורות מאוחרות של עגבת. עם עגבת משנית, מאוחרת, נוירוסיפיליס, עגבת מולדת, תוצאת RIBT חיובית נרשמה ב-95-100% מהמקרים. עם עגבת שלישונית, עם נגעים ספציפיים של איברים פנימיים, מערכת העצבים, כאשר RV הוא לעתים קרובות שלילי, RIBT נותן תוצאות חיוביות ב 98-100% מהמקרים.

RIBT הוכר מזה זמן רב כבדיקה הספציפית ביותר לעגבת. לפי הספרות, הספציפיות של RIBT היא 99%, הרגישות נעה בין 79 ל-94%. לפי TsNIKVI, הרגישות של RIBT (בסך הכל, עבור כל שלבי העגבת) היא 87.7%.

7. היקף השיטה

היקף ה- RIBT מצטמצם בהדרגה עקב משך ההגדרה, העלות הגבוהה ועוצמת העבודה. RIBT הוא ניתוח די מורכב ויקר הדורש כוח אדם מיומן ונוכחות של ויוריום. בהקשר זה, השימוש בשיטה זו הצטמצם משמעותית בשנים האחרונות. בארה"ב, בדיקה זו משמשת כיום רק במעבדות מחקר.

בהתבסס על המורכבות והעלות הגבוהה של RIF ו-RIBT, הגיוני להשתמש בהם לאבחון של צורות מאוחרות וסמויות של עגבת. RIBT שומרת על מעמדה כ"בורר תגובה" באבחנה מבדלת של צורות סמויות מוקדמות של עגבת ותוצאות חיוביות שגויות. תגובה זו עשויה להיות שימושית באבחון נוירוסיפיליס וכאשר בדיקות סרולוגיות אחרות אינן עקביות.

RIBT הופך חיובי הרבה יותר מאוחר מאשר RIF ו-RV. לכן, הוא אינו משמש לאבחון צורות זיהומיות של עגבת.

RIBT, כמו RIF, הוא לאט מאוד שלילי בתהליך של טיפול אנטי עגבת. כתוצאה מכך, הוא אינו מתאים למעקב אחר התקדמות הטיפול האנטי עגבת.

תוצאות חיוביות כוזבות (FPR) ב-RIBT הן נדירות וצוינו בעיקר במספר טרפונמטוזות (הפה, פינטה, בייל), שאינן נמצאות ברוסיה, כמו גם בצרעת, סרקואידוזיס, SLE, שחפת, שחמת הכבד וכמה מחלות נדירות אחרות בעלות אופי לא עגבת. עם גיל החולים, מספר התוצאות החיוביות השגויות של RIBT עולה.

RIBT עשוי להיות חיובי כוזב אם סרום הבדיקה מכיל חומרים טרפונומידיליים (לדוגמה, פניצילינים, טטרציקלינים, אריתרומיצין) הגורמים לאי מוביליזציה לא ספציפית של טרפונמה חיוורת. ייתכן שהסיבה לכך היא שהמטופל נוטל אנטיביוטיקה טרפונמוצידית, ולכן הבדיקה אינה מתבצעת באנשים. שקיבלו אנטיביוטיקה בחודש האחרון. ניתן לבדוק דם עבור RIBT לא לפני שבועיים לאחר סיום הטיפול באנטיביוטיקה ותרופות אנטי-ספיליטיות אחרות.

9. שינויים בתגובה של immobilization של treponemas חיוור

בנוסף לטכניקה המיקרו-אנאירוסטטית, קיימת הגדרה מלנג' של RIBT לפי N.M. אובצ'יניקוב. תנאים אנאירוביים במהלך גיבוש התגובה נוצרים על ידי הנחת התערובת המגיבה במלנג'ר (מערבל לויקוציטים), ששני קצותיו סגורים בטבעת גומי. טכניקת התגובה המלאנג' מאפשרת לוותר על משאבת ואקום, צילינדר עם תערובת של חנקן ופחמן דו חמצני ומיקרו-אנארוסטט. במחקר השוואתי על חומר קליני גדול התקבלו תוצאות שאינן נחותות מהטכניקה האנארוסטטית הקלאסית.

10. תכונות, יתרונות וחסרונות של RIBT

RIBT היא שיטת אבחון מורכבת ויקרה מבחינה טכנית. הטכנולוגיה דורשת כספים משמעותיים לתחזוקה של ארנבות ובדיקות. מבחן ארוך זה משמש כיום בעיקר למטרות מדעיות. ברוב המדינות הזרות, במשך כמעט 40 שנה, נעשה שימוש מעשי ב-RIBT לא למטרות אבחון, אלא רק בעבודת מחקר.

חסרונות תגובה:

  • RIBT דורש עבודה עם טרפונמה פלידום חי פתוגנית של זן ניקולס, שנשאר מדבק לבני אדם למרות הסתגלות לארנבות
  • התגובה מורכבת, גוזלת זמן ויקרה
  • יש צורך ב-vivarium
  • נדרשים כוח אדם מיומן במיוחד כדי להגדיר את התגובה, לתעד את התוצאות ולתחזק את ה-vivarium
  • סובייקטיביות של הערכת תוצאות
  • חוסר אוטומציה
  • אין דרך לתקן את השיטה הסרולוגית הזו.
  • התגובה אינה ישימה על רקע של טיפול אנטי עגבת מתמשך
  • חוסר יכולת להשתמש כדי לשלוט בריפוי. RIBT בחולי עגבת יכול להישאר חיובי במשך שנים רבות (ואפילו לכל החיים), למרות הטיפול המלא שקיבל.
  • התגובה יכולה לתת תוצאות חיוביות שגויות בחולים עם גידולים ממאירים, סוכרת, צרעת, מחלות אוטואימוניות, דלקת ריאות, פתולוגיה קרדיווסקולרית חמורה.

היתרונות של RIBT הם:

1) רגישות גבוהה מספיק;

2) ספציפיות גבוהה.

RIF (תגובה אימונופלואורסצנטית)

ריאקציית אימונופלואורסצנציה (RIF) היא שיטת אבחון מפורשת לזיהוי אנטיגנים מיקרוביאליים או גילוי נוגדנים. בדיקות המבוססות על זיהוי אות פלורסנט נחשבות בין הבדיקות הטובות ביותר לעגבת.

1. תולדות השיטה

נוגדן טרפונמל פלואורסצנטי (FTA) פותח לראשונה בשנת 1957 על ידי Deacon וחב' (Deacon, Falcone והריס).

2. עקרון השיטה

שיטת RIF מבוססת על העובדה שאנטיגנים או חיידקים של רקמות המטופלים בסרה חיסונית עם נוגדנים המסומנים בפלואורכרומים יכולים לזהור בקרני UV של מיקרוסקופ פלואורסצנטי. חיידקים במריחה, שטופלו בסרום זוהר כזה, זוהרים לאורך הפריפריה של התא בצורה של גבול ירוק


כאנטיגן ב-RIF, משתמשים בהשעיה של טרפונמות חיוורות פתוגניות של זן ניקולס מאורכיטיס ארנבת, המיובשת על שקופית זכוכית ומתקבעת עם אצטון. סרום הדם של המטופל מתווסף לטרפונמות החיוורות המיובשות ומקובעות עם אצטון לכוס.

לאחר הכביסה, התכשיר מטופל בסרום המכיל נוגדנים נגד אימונוגלובולינים אנושיים המסומנים בפלואורסצין. שוב, התכשיר נשטף ונצפה במיקרוסקופ פלואורסצנטי. אם נסיוב הבדיקה מכיל נוגדנים אנטי-טרפונמאליים לפלוורסצאין, יצוין זוהר צהוב-ירוק של טרפונמה.

3. שיטת ביצוע המחקר בשיטת RIF

האנטיגן המקובע על שקף הזכוכית (treponema pallidum פתוגני) מעובד על ידי סרום הבדיקה. לאחר הכביסה, התכשיר מטופל בסרום אימונוגלובולינים ניאון אנטי-אנושי המסומן בפלואורוכרום. במקרה זה, הקומפלקס הניאון שנוצר (גלובולין אנטי-אנושי + fluorescein thioisocyanate) נקשר לגלובולין אנושי על פני השטח של טרפונמה חיוורת, ומספק זוהר של טרפונמה חיוורת תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

כדי לזהות קומפלקסים של אנטיגן-נוגדנים, נעשה שימוש בסרום זוהר, המייצג אימונוגלובולינים אנטי-מינים (אנטי-אנושיים) המצומדים עם FITC. נוכחותם של נוגדנים לטרפונמות בסרום נקבעת על ידי זוהר הטרפונמות כאשר נבדקים במיקרוסקופ פלואורסצנטי. הבדיקה מתבצעת בגרסאות איכותיות וחצי כמותיות.

4. התחשבנות בתוצאות

הדמיה של תוצאות ה-RIF מתבצעת באמצעות מיקרוסקופ פלורסנט. התוצאות מוערכות לפי מידת הזוהר של טרפונמות בתכשיר. בנוכחות נוגדנים, זוהר הטרפונמות נראה לעין, אך אם לא היו נוגדנים אנטי-טרפונמיים בסרום, אזי הטרפונמות אינן נראות לעין. מידת הזוהר של טרפונמה חיוורת מיובשת המקובעת לזכוכית מצוינת ב"פלוסים" (מ-"-" ל-"++++"). תוצאה שלילית - ללא זוהר או רמת רקע - 1+.

5. באילו תקופות של המחלה עדיף להשתמש

התגובה האימונופלואורסצנטית (RIF) רגישה למדי בכל שלבי ההדבקה, מסוף תקופת הדגירה ועד לעגבת מאוחרת. התקופה הראשונית של עגבת בקורס הקלאסי מתחילה 3-4 שבועות לאחר ההדבקה. RIF הופך חיובי בימים הראשונים של התקופה הראשונית או אפילו בסוף תקופת הדגירה, מהשבוע ה-3 לאחר ההדבקה. התוצאות של RIF נשארות חיוביות בכל התקופות, כולל בצורות מאוחרות.

RIF הופך חיובי מעט מוקדם יותר מאשר RW. על פי כמה דיווחים, RIF חיובי מתרחש ב-80% מהחולים עם עגבת סרוננגטיבית ראשונית. בתקופה המשנית, RIF חיובי בכמעט 100% מהמקרים. זה תמיד חיובי בעגבת סמויה ונותן 95-100% תוצאות חיוביות בצורות מאוחרות של המחלה ועגבת מולדת.

6. רגישות וסגוליות

תגובה אימונופלואורסצנטית (RIF) היא קבוצה של שיטות בעלות רגישות וסגוליות גבוהות. RIF רגיש בכל שלבי ההדבקה, מתקופת הדגירה ועד לעגבת מאוחרת. לפי ארגון הבריאות העולמי, הרגישות של RIF בעגבת ראשונית היא 70-100%, בעגבת משנית ומאוחרת - 96-100%, ספציפיות - 94-100%. לפי TsNIKVI, הרגישות של RIF בכל צורות העגבת היא 99.1%.

ניתן להגביר את הספציפיות של RIF על ידי טיפול מקדים של סרום הבדיקה עם סורבנט - אנטיגן טרפונמאל אולטרסאונד הקושר נוגדנים קבוצתיים (RIF-abs).

7. היקף השיטה

RIF חל:

  • כתגובה מאששת בעגבת מוקדמת, סמויה
  • לאבחון רטרוספקטיבי
  • להבדיל בין הצורות הסמויות של עגבת ותוצאות חיוביות שגויות של מחקרים על עגבת.
  • כבדיקת אישור לנוירוסיפיליס.

RIF נמצא בשימוש נרחב כבדיקת אישור, אך הוא אינו מיועד לשימוש שגרתי או להקרנה מכיוון שהוא קשה מבחינה טכנית להגדרה. כדי לבצע RIF, יש צורך ב-vivarium או לרכוש השעיה של treponemas חיוור פתוגניים, אשר מגביל את האפשרות של תגובה. עם זאת, בשנים האחרונות החלו להופיע מערכות בדיקה בשוק המקומי, המאפשרות את ביצוע התגובה בהיעדר ויוריום וזן מעבדתי משלו של טרפונמה פלידום פתוגני.

8. מקורות וגורמים לטעויות בימוי, חיוביות שגויות ושליליות שגויות

LPR בעת הגדרת RIF הם נדירים (עם collagenoses, borreliosis).

RIF עדיין נחשבת לאחת הבדיקות הטובות ביותר לעגבת, "תקן הזהב" של סרודיאגנוזיס. RIF בהשוואה ל-RIBT קל יותר להגדרה,

למרות הערך האבחוני הגבוה, הצורך להשתמש ב-T. pallidum חי, העלות הגבוהה ומשך המחקר מעכבים את ההחדרה הנרחבת של RIF לתרגול היומיומי. הגדרת התגובה היא מייגעת. בנוסף, הערכת התוצאות של ה-RIF היא סובייקטיבית.

יתרונות ה-RIFו-RIBT הם:

1) רגישות גבוהה (במיוחד עבור RIF);

2) ספציפיות גבוהה (במיוחד עבור RIBT).

חסרונות של RIFו-RIBT:

1) מורכבות טכנית, עלות גבוהה של שיטות.

2) הערכה סובייקטיבית של תוצאות, חוסר אוטומציה;

3) RIF ו-RIBT בחולים עם עגבת יכולים להישאר חיוביים במשך שנים רבות (ואפילו לכל החיים), למרות הטיפול המלא שקיבל. לכן, לא ניתן להשתמש בתגובות אלה כדי לשלוט בריפוי.

10. שינויים בשיטה

בפועל, עבור סרודיאגנוזיס של עגבת, נעשה שימוש במספר שינויים בתגובת האימונופלואורסצנטית והשתמשו בהם:

  • RIF-abs- השיטה הרגישה ביותר של serodiagnosis של עגבת, היא הופכת חיובית מוקדם יותר מאשר תגובות אחרות (מהשבוע השלישי מזיהום);
  • RIF-200(הנסיוב של המטופל מדולל 200 פעמים עם ההצגה) היא שיטה ספציפית ביותר לאבחון סרוד של עגבת.
  • RIF-10(דילול פי 10 מהסרום הנבדק) - שיטה רגישה יותר מ-RIF-200.
  • RIF-tsמתבצע עם משקאות חריפים.
  • RIF-abs-IgM- זיהוי של נוגדנים אנטי-טרפונמאליים מוקדמים מקבוצת IgM.

1. השינוי הנרחב ביותר RIF-abs- תגובה אימונופלואורסצנטית עם ספיגה. לפני הגדרת התגובה, הסרום של הנבדק מתרוקן בתערובת של טרפונמות לא פתוגניות כדי למנוע תגובות צולבות. נוגדנים קבוצתיים מוסרים מהנסיוב הנחקר באמצעות טרפונמות תרבותיות שנהרסו באולטרסאונד, מה שמגביר באופן משמעותי את הספציפיות של התגובה. מכיוון שהסרום הבדיקה משמש בדילול של 1:5, RIF-abs הוא רגיש ביותר.

האינדיקציות העיקריות לשימוש ב-RIF-abs בפרקטיקה הקלינית הן:

  • אבחון של צורות סמויות ומאוחרות של עגבת,
  • זיהוי של תוצאות חיוביות שגויות של CSR ו-RMP, במיוחד בחולים בהריון וסומטיים עם חשד לעגבת,
  • לקבוע אבחנה רטרוספקטיבית של המחלה.

RIF-abs אינו אינפורמטיבי במיוחד בהערכת תוצאות הטיפול: ב-85% מהחולים שקיבלו טיפול אנטי-ספיליטי הולם, תוצאות חיוביות של RIF נמשכות שנים רבות.

תגובה זו נקראת "תקן הזהב" עבור עגבת סרודיאגנוזיס. הוא משמש למקרי בוררות, אך נדרשת השעיה מרוכזת טריה של זן T. pallidum Nichols מאורכיטיס בן 7 ימים בארנב לתוצאה אמינה, שאסור להקפיא.

2. בברית המועצות הוא הותקן בשתי גרסאות - RIF-10ו RIF-200, כלומר עם דילול של סרום הבדיקה פי 10 ו-200. RIF-200 - סרום הבדיקה מדולל 200 פעמים כדי להפחית את מספר התוצאות החיוביות השגויות. זה מספק ספציפיות גבוהה של התגובה, אבל הרגישות שלה יורדת במקצת. RIF-10 רגיש יותר, אך לעתים קרובות יותר נותן תוצאות חיוביות לא ספציפיות, מאשר RIF-200, המאופיין בספציפיות גבוהה. RIF-10 רגיש יותר, RIF-200 ו-RIF-abs ספציפיים יותר.

הרגישות של RIF-200 ו-RIF-abs מוערכת ב-84-99%, והספציפיות היא 97-99%.

3. RIF-tsמתבצע עם משקאות חריפים. התגובה נקבעת באמצעות נוזל מוחי שלם לזיהוי נגעים ספציפיים של מערכת העצבים המרכזית.

4. תגובה RIF-abs-IgMמוצע לגילוי נוגדנים אנטי-טרפונמאליים מוקדמים מקבוצת IgM. ניתן להשתמש בתגובה זו לאבחון עגבת מולדת, צורות מוקדמות של עגבת, ולהבדיל בין מקרים של הדבקה חוזרת לבין התקפי סרבול.

ידועים שני שינויים של תגובה זו:

– FTA-ABS-IgM, מבוסס על שימוש בצמוד אנטי-IgM (נוגדנים המסומנים בפלואורסצין ל-IgM אנושי) בשלב השני של התגובה במקום גלובולין פלואורסצנטי אנטי-אנושי;

- הגרסה הרוסית של RIF-abs-IgM, המאופיינת בכך שמתווסף חומר סופח לסרום הדם הנבדק, מסיר נוגדני IgG ו-RIF-abs מונח עם שאר נוגדני ה-IgM.

אינדיקציות עיקריותלניסוח של RIF-abs-IgM הם:

- serodiagnosis של עגבת מולדת בהעדר ביטויים של עגבת מולדת על העור והריריות של הילד;

- אבחנה מבדלת של זיהום חוזר והישנות קלינית-סרולוגית או סרולוגית של עגבת, שבה RIF-abs-IgM יהיה שלילי, ו-RIF-abs - חיובי;

- הערכת יעילות הטיפול בעגבת נרכשת מוקדמת או מולדת: לאחר טיפול הולם, RIF-abs-IgM הופך לשלילי במהלך 3-6 החודשים הבאים.

ניתן להשתמש בתגובה זו כדי לזהות עגבת מולדת. ידוע שמולקולות IgM גדולות אינן יכולות לעבור דרך שליה בריאה. לכן, נוגדנים מסוג M נגד treponema pallidum עשויים להופיע בגופו של הילד או עקב הפרה של תפקוד המחסום של השליה, או שהם מיוצרים על ידי גופו של ילד עם עגבת. נוגדנים מקבוצת IgM מופיעים בדם של חולה עם עגבת כבר בשבועות הראשונים של המחלה, ונוגדנים מקבוצת IgG מופיעים מאוחר יותר. קביעה נפרדת של נוגדנים משתי הקבוצות שימושית ביותר באבחון של עגבת מולדת בילדים, שכן נוכחותם של נוגדנים מסוג IgM אצל ילד בחודש הראשון לחייו תצביע על כך שהם נוצרים על ידי גופו של ילד עם עגבת, בעוד שזיהוי של נוגדני IgG בלבד יצביע על המקור האימהי של האחרון.

הצהרה על התגובה 19S(IgM)-RIF-absכולל הפרדה ראשונית על ידי סינון ג'ל של מולקולות 19S IgM גדולות יותר מ

חלקים של מולקולות 7S IgG קטנות יותר. מחקר נוסף בתגובת RIF-abs של סרום דם המכיל רק את חלק ה-19S IgM,

מבטל את כל מקורות הטעויות האפשריים. אבל הטכניקה של הקמת תגובה זו מורכבת וגוזלת זמן, דורשת ציוד מיוחד והכשרה של מומחים.

תגובת הידבקות חיסונית (RIP, TPIA - Treponema pallida immunoadherence).

תגובה זו מבוססת על שימוש בתופעה שתיארה ריכנברג ב-1912. RIP מבוסס על העובדה ש-treponemas רקמות ארסיות, הרגישות על ידי נסיוב של חולה עם עגבת, בנוכחות משלים ואריתרוציטים, נצמדות לפני השטח של אריתרוציטים, ובמהלך הצנטריפוגה, נסחפות איתם לתוך המשקעים ונעלמים. מהסופרנטנט.

המרכיבים הבאים משמשים להגדרת התגובה: סרום בדיקה, אנטיגן, משלים, אריתרוציטים תורם, תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית. כאנטיגן, משתמשים בהשעיה של טרפונמה חיוורת של זן ניקולס.

הבדיקה הנרחבת ביותר ביחס לסרודיאגנוזה של עגבת, נחקרה על ידי סופרים מקומיים וזרים בשנות ה-50-60. נתונים על הערך של RIP כבדיקת אבחון היו סותרים. התגובה דרשה דיוק מרבי, שכן עם מזיגה לא מדויקת של מרכיבים, עם עודף או חוסר של חומר הבדיקה בהכנה, התקבלו תוצאות לא אמינות.

ברוסיה בוצע מחקר מקיף על ידי L.V. Sazonova, שהשיגה תוצאות דומות ב-RIP ו-RIT באמצעות תרחיף שהוכן טרי של טרפונמות חיוורות פתוגניות של זן ניקולס. עם זאת, השימוש באנטיגן שחומם או נשמר עם פנול עיוות בחדות את תוצאות התגובה והפך את האנטיגן ללא יציב. המלץ על בדיקה זו כדי להחליף את RIT L.V. סזונובה חשבה שזה בלתי אפשרי.

ג.פ. Avdeeva, באמצעות משטרי טמפרטורה וזמן אחרים בהכנת האנטיגן, השיגה תוצאות שונות במחקר של RIP. לדבריה, הרגישות של תגובה זו גבוהה יותר מהרגישות של KCP ו-RIT, אך נחותה במקצת מ-RIF, והספציפיות של RIP, RIT ו-RIF קרובה.

עם זאת, היעדר שחרור ייצור של האנטיגן עבור RIP לא אפשר מחקר רחב יותר של בדיקה זו והכנסתה לפועל.

תגובת RPHA של hemagglutination פסיבי

תגובת המגלוטינציה פסיבית (RPHA)היא בדיקה סרולוגית נפוצה הנטועה היטב בפרקטיקה במעבדה. יש רמת יעילות גבוהה למדי במחקר.

1. היסטוריה של שיטת RPHA

לראשונה, G.Blumental and W.Bachman (1932) דיווחו על השימוש ב-RPHA לאבחון של עגבת. בשנת 1965, הוצעה תגובה עקיפה או פסיבית להמגלוטינציה לאבחון עגבת. שינוי תגובה באמצעות אנטיגנים שונים דווח על ידי T. Ratlev בשנים 1965 - 1967. המיקרו-מודיפיקציה של RPGA הוצעה על ידי Sokh R.M. ומחברים שותפים ב-1969. מערכת הבדיקה המסחרית הראשונה פותחה על ידי המדענים היפנים Tomisava et. אל. בשנת 1969

2. עקרון שיטת RPHA

מההשעיה ההומוגנית המוכנה של אריתרוציטים "טעונים" באנטיגנים, כאשר מוסיפים את סרום הבדיקה המכיל נוגדנים, משקע משקעים בצורה של פתיתים. המשקע שנוצר מורכב מאריתרוציטים "מודבקים" על ידי נוגדנים, והוא נקרא "המגלוטינה". השעיה של אריתרוציטים מוכנה מראש ומסופקת כחלק ממערכות בדיקות אבחון.

תהליך הדבקת תאי דם אדומים, שעל פני השטח שלהם נמצאים אנטיגנים, נקרא "המגלוטינציה". ההתקשרות מתרחשת תחת פעולתם של נוגדנים ספציפיים (אגלוטינינים). התגובה נקראת "פַּסִיבִי", כי אנטיגנים של אריתרוציטים עצמם אינם מגיבים, והאריתרוציטים עצמם מבצעים פונקציית אינדיקטור עזר בלעדית.


תגובת ההמגלוטינציה הפסיבית (העקיפה) היא סוג של תגובת אגלוטינציה שבה אריתרוציטים (מהיוונית háima - דם) משמשים כנשאים של אנטיגנים, ולא חלקיקים אחרים. באופן כללי, בתגובת האגלוטינציה בפעולת נוגדנים, חיידקים או תאים אחרים נצמדים זה לזה ומשקעים - לאו דווקא אריתרוציטים, אלא, למשל, חלקיקי לטקס, חיידקים או חלקיקי גוף אחרים נושאי אנטיגן.

בתגובת ההמגלוטינציה הפסיבית לאבחון עגבת, אריתרוציטים של איל או ציפור המצופים באנטיגנים של טרפונמה חיוורים משמשים כאנטיגן. כאשר מוסיפים סרום המכיל נוגדנים ספציפיים, אריתרוציטים נצמדים זה לזה (אגלוטינציה).

התגובה של RPHA מכונה שיטות אימונולוגיות, בגלל. הוא מבוסס על האינטראקציה הספציפית של האנטיגן של treponema pallidum הפתוגני עם נוגדן. בהתאם ל"תיאוריית הסריג" האגלוטינציה היא תוצאה של "הצלבה" של מולקולות אנטיגן פני השטח עם מולקולות נוגדנים (אימונוגלובולינים).

3. הצהרה על התגובה של המאגלוטינציה פסיבית

RPHA מונח בטבליות פלסטיק או במבחנות עם דילולים של סרום הדם של המטופל, אליהם מתווסף אבחון אריתרוציטים.

תהליך השילוב של אנטיגן עם אריתרוציטים נקרא רגישות, והאנטיגן הגופני המלאכותי המתקבל בדרך זו נקרא אריתרוציטים רגישים. אבחון אריתרוציטים נקראים אריתרוציטים רגישים על ידי אנטיגן.

להכנת האבחון נעשה שימוש באדמית של איל או ציפור (בדרך כלל עוף) שטופלו תחילה בפורמלין ולאחר מכן בטאנין, שעברו רגישות באנטיגן אולטרה-סאונד של טרפונמה פלידום פתוגני (זן ניקולס) או חלבונים רקומביננטיים של טרפונמה פלידום (TpN15, TpN17, TpN47). ניתן להשתמש גם באריתרוציטים של כבשים שעברו רגישות לאנטיגן בעל צלילים של treponema pallidum מתורבת.

סרום בלבד (אין להשתמש בפלזמה). דגימות עם המוליזה ועכורות אינן מתאימות. אריתרוציטים לא רגישים משמשים כבקרה שלילית (כדי למנוע נוכחות של נוגדנים אנטי אריתרוציטים). בכל סדרת הפקות השתמש בבקרות חיוביות ושליליות.

דגימות של סרום הדם הנחקר ואריתרוציטים בבדיקה מוכנסות לבארות (תאים) של הטבליה האימונולוגית. אם נסיוב הדם של המטופל מכיל נוגדנים אנטי-טרפונמאליים ספציפיים, אזי כאשר מוסיפים את הסרום הנבדק לבאר עם האנטיגן, נוצרים קומפלקסים של אנטיגן-נוגדנים הקשורים לפני השטח של הנשאים (אריתרוציטים). מבחינה ויזואלית, זה מתבטא בהדבקה של תאי דם אדומים, כלומר, hemagglutination, אשר גלוי לעין בלתי מזוינת. קומפלקסים חיסוניים "נוגדנים-אנטיגן-אריתרוציטים", היורדים בהדרגה בהשפעת כוח הכבידה, מפוזרים על פני כל פני השטח של קרקעית הבאר ויוצרים תמונה אופיינית של "מטריה הפוכה".

בהתאם לכמות הנוגדנים הכלולה בדגימת הבדיקה, תמונת "המטריה ההפוכה" משתנה מהמקסימום, התופס את כל פני השטח של קרקעית הבאר, לאזור קטן בחלק המרכזי והנמוך ביותר שלה (עם הארה ב- המרכז והיווצרות טבעת אינטנסיבית יותר של אריתרוציטים מיושבים לאורך הפריפריה).

קומפלקסים חיסוניים אינם נוצרים אם אין נוגדנים ספציפיים בדגימה או כאשר מוסיפים אריתרוציטים בקרה (שלמות) לתגובה. במקביל, אריתרוציטים מתאספים בהדרגה בנקודה הנמוכה ביותר של קרקעית הבאר, ויוצרים דמות בצורת כתם קומפקטי או "כפתור", לפעמים עם הארה קלה במרכז.

אם סרום הדם האנושי מכיל נוגדנים אנטי-אריתרוציטים, אזי בכל מקרה תיווצר ה"מטרייה" - הן בתגובה עם אריתרוציטים נבדקים והן עם אריתרוציטים בקרה. במקרה זה, טכנולוגיות רפואיות אחרות מומלצות לאיתור נוגדנים אנטי-טרפונמאליים ספציפיים.

תיתכן תופעת הפרוזון (חוסר האפשרות לתגובה עקב עודף נוגדנים), שמתבטלת על ידי דילול הסרום.

4. התחשבות בתוצאות של תגובת ההמגלוטינציה הפסיבית

התוצאות של RPGA נלקחות בחשבון חזותית לאחר 60-120 דקות בעת הגדרת המיקרו-שיטה ולאחר 2-4 שעות או למחרת בעת הגדרת המקרווריאנט. כאשר משתמשים באריתרוציטים של עופות גדולים יותר (גרעיניים), מתקבלת תמונה ברורה יותר, והתוצאות מתועדות במועד מוקדם יותר.

אפשר לקבוע את הטיטר (טיטר גבוה TPHA ≥ 1:2 560).

תוצאות המחקר מוערכות לפי מערכת 4+ (מ-"-" ל-"++++") לפי גודל הסרט שנוצר. כאשר מתרחשת אגלוטינציה, אריתרוציטים ממוקמים על פני החור בצורת "מטריה", ובתוצאה שלילית, אריתרוציטים מחליקים בחופשיות למטה ומצטברים בתחתית במרכז החור בצורת "כפתור". ".

ההערכה המקובלת על התוצאות של RPGA:

4+ - RPHA חיובי. אריתרוציטים צמודים בצורת "מטריה" מצפים באופן שווה את כל פני החור;

3+ - RPHA חיובי. אריתרוציטים מרפדים את כל פני החור, אך חלקם "מחליקים" למרכזו. במקביל נוצרת טבעת בולטת לאורך הפריפריה של הפיקדון;

2+ - RPHA חיובי חלש. אריתרוציטים יוצרים סרט על שטח קטן של החלק התחתון של הבאר, ויוצרים טבעת צפופה של משקע אריתרוציטים עם הארה ניכרת במרכז;

1+ - RPHA בלתי מוגדר, אריתרוציטים יוצרים משקעים רופפים בתחתית הבאר עם קצוות מטושטשים ולומן קל במרכז;

(–) - RPHA שלילי, כל אריתרוציטים שוכבים בתחתית הבאר בצורה של משקעים קומפקטיים ("כפתורים" או צלצולים) על רקע סביבתי נקי (ללא שקיעה גרגירית מסביב).

בתרגול זר, התוצאות של RPGA מוערכות גם כתגובתיות (במקרה של היווצרות אגלוטינטים), כתגובתית חלשה (אם התצורות אינן משמעותיות) ואינן תגובתיות (אם לא נצפתה אגלוטינציה).


התחשבנות בתוצאות התגובה יכולה להתבצע באופן אוטומטי באמצעות מנתחים מיוחדים. בנוסף למחקר איכותני, כל מערכות הבדיקה מספקות ניתוח כמותי עם קביעת טיטר.

5. באילו תקופות של המחלה עדיף להשתמש ב-RPHA

RPHA הופך חיובי באמצע התקופה הראשונית (7-8 שבועות מרגע ההדבקה, 3-4 שבועות לאחר הופעת צ'אנקר קשה) ונשאר חיובי במשך שנים לאחר הטיפול.

עם רמה גבוהה מאוד של נוגדנים לטרפונמה בנסיוב הנחקר (האופייני ביותר לעגבת משנית), תיתכן תוצאה שלילית שגויה של TPHA (מה שנקרא תופעת "פרוזון").

נוגדנים ספציפיים לאגלוטינין מתגלים בדמם של אנשים שהחלימו מעגבת במשך זמן רב, ולכן לא ניתן להמליץ ​​על RPGA לאבחנה מבדלת של זיהום חוזר או לקביעת חומרת התהליך הזיהומי.

RPGA אינו משמש כדי לשלוט בריפוי, כי. עשוי להישאר חיובי שנים רבות לאחר ההחלמה. יחד עם זאת, ניתן להשתמש בה כשיטה נוספת (ל-RMP או RPR) לניטור יעילות הטיפול, בחינת הדינמיקה של הירידה בטיטרי הנוגדנים. תנאי מוקדם לכך הוא שימוש באותה מערכת בדיקת RPHA כמו בבדיקה הראשונה (לפני הטיפול) של המטופל, וכן במחקר באותה מעבדה.

6. רגישות וסגוליות של RPHA

RPHA נחשבת לבדיקה רגישה וספציפית ביותר. תגובה זו היא בדיקה אבחנתית חשובה בכל צורות העגבת, אך היא רגישה במיוחד בצורות מתקדמות של המחלה. הרגישות של RPHA משתנה בהתאם לשלב המחלה. עם עגבת ראשונית, הרגישות של RPHA היא 76% (ומעלה), עם עגבת משנית - עד 100%. עם מוקדם סמוי - 97%, עם עגבת מאוחרת - 94%, עם סגוליות של 98-100%. רגישות נמוכה יותר בצורות טריות של המחלה נובעת מהיווצרות מאוחרת יותר של אגלוטינינים.

על פי המוסד הממלכתי "TsNIKVI Roszdrav", הרגישות של RPHA באבחון של צורות שונות של עגבת הייתה 99.4%. רוב החוקרים מציינים 98-99% ספציפיות של RPHA.

מבחינת רגישות וסגוליות, RPHA אינו נחות, ובצורות מאוחרות ועגבת מולדת, הוא אפילו עולה על RIF ו-RIBT.

7. היקף היישום של שיטת RPGA

TPHA יכול לשמש גם כבדיקת סקר וגם כבדיקת אישור; ניתן להשתמש בגרסה חצי כמותית עם חישוב טיטר נוגדנים. פותחה שיטה כמותית להגדרת RPHA, מיקרו-שיטה וכן תגובת מיקרו-המגלוטינציה אוטומטית.

8. תכונות, יתרונות וחסרונות של RPHA

על פי הספרות, RPGA תפסה בעקביות עמדה מובילה בפרקטיקה הקלינית ברוב מדינות העולם. TPHA היא הבדיקה הנפוצה ביותר במרפאות STI בחו"ל.

טכניקת RPGA קלה לביצוע, אינה דורשת ציוד מיוחד: נדרשת רק לוחית להמגלוטינציה כדי להגדיר אותה. המחקר לא אורך זמן רב; התגובה היא מאוד רגישה וספציפית. אישור השיטה בפרקטיקה הקלינית הראה שהיא פשוטה במיוחד, זולה ורגישה. כמו ELISA, RPHA פשוט לביצוע, אינו דורש כוח אדם מיומן וציוד מיוחד, והאוטומציה שלו אפשרית.

יתרונות מבחן RPGA:

  • קל להגדיר ולפרש,
  • אינו דורש ציוד מיוחד,
  • זמן להגיע לתוצאה - 45 דקות,
  • מתאים להקרנה המונית (צריך רק 25 μl של סרום בדילול של 1:20),
  • רמה גבוהה של סטנדרטיזציה,
  • נוכחות של בקרות פנימיות,
  • חיי מדף ארוכים
  • מחיר מקובל
  • אפשרות לבצע אוטומציה של הנהלת חשבונות.

יש לציין גם את החסרונות של RPGA:

  • האפשרות של תגובות לא ספציפיות בנוכחות נוגדנים אנטי-אריתרוציטים,
  • חוסר מתאם בין טיטר ושלב העגבת,
  • תגובה חיובית מאוחרת יותר בשלבים המוקדמים של עגבת,
  • האפשרות של תגובות חיוביות כוזבות אצל אנשים שנטלו אלכוהול, מכורים לסמים,
  • רגישות לרטט וטמפרטורה במעבדה.

היתרונות של RPGA בהשוואה ל-RIBT ו-RIF הם:

  • שימוש במערכות בדיקה תעשייתיות,
  • האפשרות להפוך את התגובה לאוטומטית,
  • אין צורך לעבוד עם טרפונמה חיוורת חיה,
  • מבטל את הצורך ב-vivarium.

9. מקורות וגורמים לשגיאות בהגדרת RPHA, תוצאות חיוביות שגויות ושליליות שגויות

התגובה של המגלוטינציה פסיבית היא מחקר פשוט יחסית; בעת ביצועו, יש צורך לעקוב אחר כל ההמלצות של יצרני האבחון וכללי העבודה במעבדת האבחון הקלינית. הטעויות שנעשו עלולות להוביל להופעה ולרישום של תוצאות כוזבות-שליליות וחיוביות כוזבות של התגובה. תוצאות חיוביות כוזבות של RPGA עשויות לנבוע מהשפעת הגורם האנושי וגורמים ביולוגיים.

ניתן לקבל תוצאות חיוביות כוזבות

  • במחקר של סרום דם של חולים עם טרפונמטוזות לא מין,
  • בגלל גורם שגרוני
  • עקב תגובה צולבת של נוגדנים עם האנטיגן הטרפונמאלי, הנוצרים במהלך הפרעות מטבוליות שונות סיסטמיות או הנגרמות על ידי תרופות ותרופות,
  • עקב רמות חריגות של אימונוגלובולינים;
  • ביילודים - עקב היווצרות בגוף העובר או הילד של נוגדני IgM ל-IgG של האם, מה שמקשה על פרשנות התוצאות ואבחון עגבת מולדת.

שגיאות שנגרמו מהשפעת גורם ההשתתפות האנושית על המחקר:

  • מיקרופלטים מזוהמים
  • פיפטציה לא נכונה
  • רטט במעבדה
  • טמפרטורת האוויר במעבדה היא מחוץ לטווח הטמפרטורות: 18-25 מעלות

השגיאות הטכניות האופייניות ביותר בהגדרת RPGA, המובילות לתוצאות לא אמינות, כוללות:

  • דילול לא מדויק של מרכיבים,
  • הפרת טמפרטורה,
  • הפרה של זמן הדגירה של ריאגנטים,
  • הפרה של תנאי החלת ריאגנטים על הטאבלט,
  • חוסר עקביות של ה-pH של התמיסות עם אלה הנדרשים,
  • זיהום של כלי זכוכית מעבדה.

הנקודות הטכניות הבאות יכולות להיות גם מקור לשגיאות בעת הגדרת RPGA:

  • הרחקה מניסוח התגובה של סרת דם בקרה;
  • ריכוז לא אחיד של אריתרוציטים באבחון עקב ערבוב לא מספיק לפני השימוש;
  • הפרה של התנאים וההגבלות של אחסון אריתרוציטים אבחון ושליטה; שימוש בערכות שפג תוקפן;
  • השימוש במבחנות מזוהמות, קצות פיפטות, פיפטות, לוחות אימונולוגיים, תמיסות בעת הגדרת תגובות;
  • אי דיוקים בדילול הראשוני של דגימת סרום דם;
  • יסודיות לא מספקת בביצוע דילולים כפולים רצופים;
  • אי עמידה במשטר הטמפרטורה ובזמן הדגירה;
  • נוכחות של רעידות חוץ וניעור של הצלחת האימונולוגית במהלך הדגירה;
  • הפרה של שיטת הגדרת RPGA, המתבטאת בסירוב לבצע את המחקר עם אריתרוציטים בקרה.

השימוש בפלסמת דם המכילה נוגדי קרישה המסוגלים לגרום לאגלוטינציה של אריתרוציטים לא ספציפיים (RPHA) עלול להוביל לתוצאות שלא ניתן לפרש.

מספר תוצאות חיוביות שגויות ושליליות שגויות קטן מאשר בבדיקות סרולוגיות אחרות. LPR במצב של RPHA הם נדירים ואפשריים עם טרפונמטוזות (פיהוק, בייל, ליטר). כמו כן, נרשמו תוצאות חיוביות שגויות (פחות מ-1% בסך הכל) במכורים לסמים, בחולים עם מונונוקלאוזיס זיהומיות, בורליוזיס, צרעת, עם קולגנוזיס, שחמת כבד, לימפוסרקומה, וגם בנשים הרות.

תוצאות שליליות כוזבות של התגובה עשויות לנבוע מתחרות בין נוגדני IgM ו-IgG. תוצאות שליליות כוזבות אפשריות גם בחולים הנגועים ב-HIV.

10. שינויים בשיטת RPHA

ישנם שינויים מיקרו ומקרו של הגדרת RPGA, הראשון משמש לעתים קרובות יותר בגלל הכלכלה, מהירות ההגדרה ולקחת בחשבון את התוצאות.

כמו כן, פותח מתחם אבחון אוטומטי לניתוח תמונה, שאיפשר לבצע הערכה אוטומטית כמותית של התוצאות ולבטל סובייקטיביות בפרשנות הנתונים שהתקבלו. מתחם החומרה-תוכנה מזהה את התמונה, מעבד את הנתונים ונותן את התשובה ביחידות יחסיות.

קוראים ומנתחים אוטומטיים משמשים גם לאוטומציה של הקלטת תוצאות RPGA.

TPPA (Treponema pallidum particle agglutination) - בדיקת צבירה של חלקיקים מלאכותיים לאיתור נוגדנים ל-Treponema pallidum

תיאור קצר של בדיקת TPPA

נכון להיום, נעשה שימוש בשינוי בשיטת ההמגלוטינציה הפסיבית - TPPA (Treponema pallidum particle agglutination) לאבחון עגבת, שבה אנטיגן ה-treponema החיוור מקובע על חלקיקי ג'לטין. מכיוון שלחלקיקי פולימר מלאכותיים אין אנטיגנים משלהם הקובעים את הפעילות הביולוגית, אז לערכות לסרודיאגנוזיס של עגבת המבוססות עליהם יש סיבה להיחשב מתקדמות יותר. השימוש בחלקיקים מלאכותיים אינרטיים מבחינה ביולוגית ממזער אגלוטינציה לא ספציפית הנראית בדרך כלל עם נשאים אחרים.

TPPA משמש לאבחון סרולוגי של נוגדנים לסוגים ותת-מינים שונים של טרפונמות פתוגניות. בדיקה זו יכולה לשמש לאיתור נוגדנים לגורמים הגורמים של עגבת, חצי ליטר, בז'ל ופיהוק.

הליך הלימוד הוא פשוט מאוד ואינו דורש ציוד מיוחד - משתמשים במיקרופלטים סטנדרטיים בצורת "U". הבדיקה מבוססת על אגלוטינציה של חלקיקי ג'לטין שעברו רגישות לאנטיגנים T. pallidum, נוגדנים המצויים בסרום הדם של המטופל.

TPPA היא בדיקת טרפונמל מאששת המועילה הן למספרי דגימות קטנים והן להקרנה המונית. TPPA משמש בחו"ל כבדיקת אישור וכדי להחליף את בדיקת המיקרו-המגלוטינציה MHA-TP (בדיקת מיקרו-המגלוטינציה לנוגדנים ל-T. pallidum).

הרגישות של בדיקת TPPA היא בין 85% ל-100%, בעוד שהספציפיות היא בין 98% ל-100%. הרגישות של TPPA עבור עגבת ראשונית היא 88%, עבור עגבת סמויה משנית ומאוחרת 98%-100%.

אם משתמשים ב-TPPA לאבחון עגבת, נוגדנים לסוגים אחרים של טרפונמה (כגון T. pallidum endemicum, pertenue או carateum) עלולים לגרום לתוצאות חיוביות שגויות. ישנן מספר שיטות להסרת נוגדנים אלו מדגימות סרום לפני תחילת הבדיקה.

עקרון מבחן TPPA

TPPA היא שיטת אגלוטינציה פסיבית עבור חלקיקי ג'לטין בסרום או פלזמה אנושית. סרום המכיל נוגדנים לטרפונמה פתוגנית מגיב עם חלקיקי ג'לטין שעברו רגישות עם האנטיגן של טרפונמה חיוורת של זן ניקולס, הנתון לאולטרסאונד. כתוצאה מהתגובה, נוצר סרט חלק של חלקיקי ג'לטין צמודים בבאר של צלחת המיקרוטיטר.


אם אין נוגדנים, החלקיקים מתיישבים בתחתית הבאר של הצלחת ויוצרים "כפתור" קומפקטי של חלקיקים לא צמודים. בארות בקרה עם חלקיקי ג'לטין לא רגישים צריכות להראות גם "כפתור" קומפקטי כל כך עבור כל סרום, כלומר ללא אגלוטינציה.

יישום מבחן TPPA

TPPA הוא מבחן אוניברסלי שניתן להשתמש בו בהצלחה באותה מידה הן בבחינה מונעת חובה של קבוצות אוכלוסייה לאיתור עגבת (הקרנה), והן במוסדות דרמטובנרולוגיים מיוחדים. היתרון של בדיקת TPPA הוא הרגישות הגבוהה שלה, שאינה נחותה מבדיקות קלאסיות, שעד לאחרונה היו "תקן הזהב" לסרודיאגנוזיס של עגבת. יתרונות נוספים של הבדיקה כוללים יכולת שחזור גבוהה, כמו גם הפשטות והמהירות של הגדרת התגובה.

בדיקת TPPA משמשת לאשש תוצאות חיוביות של בדיקות סקר לא-טרפונמליות לאיתור עגבת, כגון בדיקת VDRL, ולהערכת חולים עם בדיקות לא-טרפונמל שליליות אך עם סימנים או תסמינים המצביעים על עגבת מאוחרת. השימוש ב-TPPA כבדיקת הסקר היחידה לאיתור עגבת אינו מומלץ.

בנוסף, ניתן להשתמש בבדיקת האגלוטינציה TPPA לבדיקת דגימות נוזל מוחי באבחון של נוירוסיפיליס. במקרה זה, כמו בבדיקות סרולוגיות אחרות, יש לבצע את פרשנות התוצאות עם השילוב המחייב עם אינדיקטורים ותסמינים אחרים של המחלה.

תוצאות בדיקת TPPA

התוצאה מוערכת לפי מערכת ה"פלוסים" - מ-(-) עד (2+). תוצאות הבדיקה גלויות לעין בלתי מזוינת ומתפרשות כדלקמן:

דרגת צבירה ציון במבחן פרשנות
חלקיקים צמודים מרפדים היטב את תחתית הצלחת 2+ חִיוּבִי
טבעת גדולה משמעותית עם שוליים חיצוניים לא אחידים וצבירה היקפית 1+ חִיוּבִי
החלקיקים יוצרים טבעת קומפקטית עם רווח במרכז וחלקים חלקים
גבולות חיצוניים		 ± חיובי חלש
החלקיקים יוצרים טבעת קומפקטית במרכז הבאר עם פער קל במרכז וגבול חיצוני חלק. – שלילי
חלקיקים יוצרים "כפתור" במרכז החור עם גבול חיצוני חלק – שלילי


התוצאות נרשמות כדי לקבוע התאמה לתיאור לעיל. יש לבדוק שוב דגימות המציגות תוצאה בלתי מוגדרת (±). במקרה שדגימה מראה תוצאה בלתי ברורה במספר בדיקות TPPA, מומלץ ללמוד בשיטות אחרות.

אין להתייחס לתוצאות הניתוח בנפרד. לדוגמה, בשלב מוקדם של הדבקה, מספר הנוגדנים עדיין קטן מדי, כתוצאה מכך TPPA ושיטות רבות אחרות חסרות רגישות. לכן, אם יש חשד לעגבת, גם אם תוצאות הבדיקה שליליות, יש לבחון מחדש את הדגימות. כדי לבצע אבחנה, יש צורך לקחת בחשבון את התסמינים הקליניים שיש למטופל, ההיסטוריה הקלינית ונתונים נוספים.

כמו בבדיקת TPHA, ניתן לראות תופעת פרוזון ותוצאה שלילית כוזבת עבור TPPA אם דגימת הסרום מכילה טיטר נוגדנים גבוה מדי.

אליסה - אליסה

Assay Immunosorbent Enzyme-linked (ELISA; ה-Enzyme Linked Immunosorbent assay, ELISA) היא אחת מהשיטות הרבות לאבחון סרולוגי של מחלות זיהומיות. בדיקת אנזים חיסונית (ELISA) ב-serodiagnosis של עגבת היא בדיקה לאיתור נוגדנים מדרגות M, G ו-A (IgM, IgG, IgA) נגד אנטיגנים של טרפונמה חיוורת. אפשר לבצע ELISA עם נוזל מוחי.

כניסתה של מבחן אימונוסורבנטי מקושר אנזים (ELISA) לפועל במקום תגובת וסרמן ובדיקות קרדיוליפין אחרות שיפרה משמעותית את איכות האבחון במעבדה של עגבת. יתרון משמעותי בשיטה זו הוא האפשרות לבצע אוטומציה של תהליך המחקר, מה שמפחית את השפעת הגורם האנושי.

1. היסטוריה של שיטת ELISA

העקרונות הבסיסיים של בדיקת אנזים אימונו על פני השטח של נשא בפאזה מוצקה פותחו על ידי E. Engvar et al. (1971), B.Van Weeman and A.Schuurs (1971). בדיקת האנזים החיסונית שפיתחו הוצעה לראשונה לאבחון עגבת בשנת 1975 על ידי J. Veldkamp ו-A. Visser, שהעריכו את הפוטנציאל של בדיקה אוטומטית זו. ELISA החל להיות בשימוש נרחב באבחון של עגבת בשנות ה-80, כאשר פותחו ואושרו בדיקות אבחון ושיטות בדיקה סטנדרטיות. בברית המועצות, הטכניקה של ELISA לאבחון עגבת פותחה על ידי V.N. Bednova, A.V. Babiy ו-A.V. Kotrovsky (1982, 1983).

2. עקרון שיטת ELISA

Assay immunosorbent-enzyme-linked (ELISA) לפי מנגנון התגובה קרוב ל-RIF (אותם נוגדנים מתגלים). התגובה של אנזים immunoassay מכונה תגובה אימונולוגית המבוססת על אינטראקציה מאוד ספציפית של אנטיגנים של treponema pallidum עם הנוגדנים של חולה עם עגבת.

בתרגול עגבת, גרסה עקיפה של ELISA משמשת בעיקר. העיקרון של וריאנט התגובה העקיפה הנפוץ ביותר הוא כדלקמן. על פני בארות של צלחת פוליסטירן, קומפלקסים חיסוניים קבועים, אשר נוצרים במהלך האינטראקציה של נוגדנים של חולה עם עגבת עם אנטיגנים של treponema חיוור. לאחר מכן, הם מתגלים בתגובת צבע באמצעות מצומדים ספציפיים ותוספי מצע-כרומוגניים מתאימים.

הליך ביצוע הבדיקה הוא כדלקמן: הסרום של המטופל מונח על נשא מוצק עם אנטיגן מחובר אליו. בנוכחות נוגדנים בו נוצר קומפלקס אנטיגן-נוגדנים על פני הנשא. כדי "להביע" את תוצאות התגובה, נעשה שימוש בנוגדנים אנטי-מינים ל-Ig אנושי המצומדים בסמני אנזימים. במקרה של תגובה חיובית, האנזים המחובר לקומפלקס האנטיגן-נוגדנים מפרק את המצע שנוסף למערכת, וכתוצאה מכך נוצרת צביעת צבע בעוצמה שונה.

בתגובה, קביעת הקומפלקס של AG ו-AT הנספגים על הפאזה המוצקה מתבצעת באמצעות נוגדנים אנטיגלובולינים המסומנים באנזים, בהתאם לתגובת הצבע של האנזים עם הסובסטרט.

בתגובה, קביעת קומפלקס האנטיגנים והנוגדנים הנספגים על השלב המוצק מתבצעת באמצעות נוגדנים אנטיגלובולינים המסומנים באנזים.

ELISA מציגה את האפשרות לזהות Ig בסרום של מחלקות שונות. קיימות מערכות בשוק המאפשרות לקבוע בנפרד IgM ו-IgG וסך נוגדנים.

לאנטיגנים ספציפיים המשמשים ל-ELISA עשויים להיות מקור שונה:

קולי במיוחד- הם מתקבלים כתוצאה מהרס של תא החיידק T.pallidum על ידי אולטרסאונד או שיטה אחרת;

רקומביננטי- הם מתקבלים על ידי טכנולוגיות הנדסה גנטית על ידי החדרת לגנום של תא חיידקי (לדוגמה, Escherichia coli E.Coli) את הגן האחראי לסינתזה של אנטיגן T.pallidum מסוים, ואחריו צמיחת מסת החיידק של המיקרואורגניזם המייצר, הרס תאים אלה, בידוד וטיהור האנטיגן;

פפטיד- מתקבל כתוצאה מסינתזה כימית רציפה של אפיטופים אנטיגנים של חלבוני T.pallidum.

הגוף מסוגל ליצור נוגדנים כמעט לכל חלק במולקולת האנטיגן. בתגובה חיסונית רגילה, זה בדרך כלל לא מתרחש. לפפטיד אימונוגני אחד או יותר המבודדים מאנטיגן חלבוני יש אנטיגניות מיוחדת, ורוב הנוגדנים נוצרים במיוחד עבורם. הם מפתחים את התגובה החיסונית האינטנסיבית ביותר. האינפורמטיבי ביותר ב-ELISA הראה אזורים אימונודומיננטיים של חלבונים של טרפונמה חיוורת עם משקל מולקולרי של 15 kD, 17 kD ו-47 kD. תמצית דטרגנט או סוניקטה של ​​טרפונמות פתוגניות של זן ניקולס שימשה כאנטיגן.

3. שיטת ביצוע המחקר בשיטה

העיקרון של השיטה הוא לזהות קומפלקס אנטיגן-נוגדנים ספציפי הנספג על הפאזה המוצקה (משטח בארות של צלחת פלסטיק) עם נוגדנים אנטיגלובולינים המסומנים באנזים (פרוקסידאז) באמצעות תגובת צבע עם מצע, שהוא מכמת ספקטרופוטומטרית.

האנטיגנים המשמשים לרגישות בארות צלחת הפוליסטירן יכולים להיות:

  • lysate- מתקבל כתוצאה מהרס של טרפונמה חיוורת על ידי אולטרסאונד;
  • פפטיד- מתקבל כתוצאה מסינתזה כימית של שברי חלבונים של טרפונמה חיוורת ובעלי תגובתיות אנטיגנית הדומה לחלבונים המקוריים של הפתוגן;
  • רקומביננטי- מתקבל באמצעות שיטות הנדסה גנטית, הנושאים דטרמיננטים אנטיגנים זהים לטרפונמה חיוורת.

בתרגול עגבת, בדרך כלל משתמשים בגרסה עקיפה של ELISA.

4. התחשבנות בתוצאות

ב-ELISA, כדי להמחיש את תגובת האנטיגן-נוגדן, משתמשים בתגובת אנזים (פוספטאז אלקליין או פרוקסידאז חזרת) עם מצע, המשנה את צבעו. עוצמת הצבע קובעת את החיוביות של התגובה (מ-"-" ל-"++++"). את התוצאות של ELISA ניתן להעריך חזותית על מערכת 4 נקודות או בצורה אינסטרומנטלית בצורה של אינדיקטורים דיגיטליים של צפיפות אופטית המתקבלים על גבי קוראים מיוחדים (כגון Multiscan) באורך גל של 492 ננומטר. כי הערכת התוצאות מתבצעת בצורה ספקטרופוטומטרית, זה לא כולל פרשנות סובייקטיבית.

5. באילו תקופות של המחלה עדיף להשתמש

תנאי חיוביות ELISA - מהשבוע הרביעי מההדבקה. התוצאות של ELISA (כמו גם RIF) הופכות לחיוביות בימים הראשונים של המחזור הראשוני או בתום הדגירה ונשארות חיוביות בכל התקופות. ELISA חשוב במיוחד באבחון מוקדם של עגבת - ניתן לקבל תוצאות חיוביות של נוגדנים כבר בתום תקופת הדגירה של המחלה (כלומר 4-6 שבועות לאחר ההדבקה).

6. רגישות וסגוליות

ELISA היא בדיקה רגישה וספציפית ביותר, וזה היתרון שלה. ELISA מבחינת מנגנון תגובה, רגישות וסגוליות קרובה ל-RIF, tk. אותם נוגדנים לוקחים חלק בשתי התגובות. רוב החוקרים מציינים ספציפיות ורגישות גבוהה בכל שלבי המחלה. הרגישות של גרסאות ELISA שונות, לפי G.A. Dmitriev, מגיעה ל-98-100%, והספציפיות היא 96-100%. לפי TsNIKVI, הרגישות של ELISA לעגבת היא 99.1% (הזמנה מס' 87 M3 של הפדרציה הרוסית).

הווריאציה של ELISA שלב מוצק (בדיקת אימונוסורבנטית מקושרת אנזים, ELISA) היא אחת הבדיקות הסרולוגיות הרגישות ביותר, המאפשרת זיהוי של 0.0005 מיקרוגרם/מ"ל של נוגדנים ו-0.000005 מיקרוגרם/מ"ל של אנטיגנים.

7. היקף השיטה

מומלץ להשתמש בשיטה בעת בדיקת נשים בהריון, אנשי קשר, תורמים ונציגי קבוצות סיכון. ELISA יכולה לשמש הן כבדיקת סקר והן כבדיקת אישור. בזמן קצר יחסית של ההיסטוריה שלה, ה-ELISA התפתח מבדיקה אינדיקטיבית לבדיקה מאשרת. באבחון של עגבת, הבדיקה משמשת גם כבדיקת אישור לדגימות המראות תוצאות חיוביות באמצעות בדיקות שונות שאינן טרפונמאליות ו-TPHA.

ניתן להשתמש בשיטת ELISA בגרסה כמותית עם חישוב מדד החיוביות, או התגובתיות, המאפשרת להעריך את רמת הנוגדנים בדגימה.

נכון לעכשיו, ברוסיה, השימוש באנזים אימונואסאי לאבחון עגבת מוסדר על ידי צו משרד הבריאות של הפדרציה הרוסית מס' 87 מיום 26 במרץ 2001 "על שיפור האבחנה הסרולוגית של עגבת" (נספח מס' 87). 1 "הגדרת בדיקות סקר ואבחון לעגבת"). בצו, מתוכנן להחליף את RSK במתחם הסריאאקציות (SSR) ב-ELISA ו-RPHA.

8. מקורות וגורמים לטעויות בימוי, חיוביות שגויות ושליליות שגויות

Assay immunoassay אנזים הוא מחקר מורכב רב-שלבי, שבו יש צורך לעקוב בקפדנות אחר כל ההמלצות של יצרני ערכות האבחון, הכללים להתאמת ותצורת הציוד המשמש במחקר.

הנקודות הבאות יכולות להיות מקור השגיאות בעת הגדרת ELISA:

מחקר בתגובה של היפרליפידמי, סרום דם המוליזה או דגימות עם סימנים של גידול חיידקים;

אין לתרגל הקפאה כפולה או יותר של דגימה של חומר ביולוגי; במידת הצורך, בדיקה חוזרת, השתמש בסרום מצינור כפול;

הפרת התנאים וההגבלות של אחסון התמיסה החיסונית ותמיסת הכביסה; שימוש בערכות בדיקה שפג תוקפן;

יישום של רכיבי תגובה מערכות אבחון אחרות;

הפרת זמן שלבי התגובה;

ייבוש הבארות של הצלחת האימונולוגית במהלך שלבי התגובה;

שימוש חוזר בכלי פלסטיק (מגשי פלסטיק) להכנת תערובת של כרומוגן ומצע;

אי עמידה בתדירות הבקרה המטרולוגית של פרמטרי הפעולה של המכשירים המשמשים (מכונת כביסה וספקטרופוטומטר);

השימוש בכלי זכוכית מעבדתיים מזוהמים בעת הגדרת תגובות: צלוחיות, גלילי מדידה, מבחנות, פיפטות, קצות פיפטה;

חוסר יסודיות בביצוע דילולים של דגימות של חומר ביולוגי;

שגיאות בעת הכנסת דגימה של חומר ביולוגי לבאר המתאימה של הטאבלט;

שגיאות בעת העברת תוצאות המחקר ליומן הרישום, פרוטוקול המחקר או טופס התשובות.

יישום קפדני של המלצות ההוראות לשימוש בערכות בדיקה אבחנתיות, אימות קבוע של הדיוק של מכשירי פיפטה והתקנים אוטומטיים, שימוש בבקרים פנימיים חיוביים ושליליים מאפשרים קבלת תוצאות ELISA ברות שחזור.

9. תכונות, יתרונות וחסרונות

ELISA היא אחת השיטות המודרניות והמבטיחות של עגבת סרודיאגנוזיס בשל הפשטות, יכולת השחזור והזמינות שלה. גילוי נוגדנים באמצעות ELISA היא שיטת אבחון אידיאלית המתאימה לבדיקה בו-זמנית של מספר רב של דגימות. בשל יתרונותיו, הוא צבר פופולריות בכל המדינות.

טכנולוגיית המחקר של ELISA מספקת עמידה בכל ההמלצות של יצרני ערכות בדיקות אבחון מסחריות ואת יסודיות הליך המחקר. כדי לבצע מחקר ב-ELISA, יש צורך לרכוש ציוד מיוחד נוסף. טכניקת ההגדרה אורכת זמן רב יותר בהשוואה ל-RMP, RPR ו-RPGA.

הנוכחות של אוטומציה של מספר שלבים או כל התהליך בכללותו מאפשרת לך לבחון בו זמנית מספר רב של דגימות של חומר ביולוגי עם רמה גבוהה של סטנדרטיזציה של המחקר, תוך מזעור המרכיב הסובייקטיבי בהערכת התוצאות, אפשרות לאחסן פרוטוקולי מחקר קבועים, המאפשרת לאחסן את נתוני המחקר ולהתייחס אליהם שוב לניתוח רטרוספקטיבי.

יתרונות:

  • מאפשר קביעה מובחנת ומוחלטת של נוגדני IgM ו-IgG לגורם הסיבתי של עגבת.
  • רגישות גבוהה וסגוליות המתקרבות ל-100%,
  • יכולת שחזור
  • אפשרויות אוטומציה

היתרונות של ELISA כוללים סגוליות גבוהה (96-100%) ורגישות (98-100%) שצוינו על ידי רוב החוקרים.

הנוכחות של אוטומציה של מספר שלבים או כל התהליך בכללותו מאפשרת לך ללמוד בו זמנית זרימה עם מספר רב של דגימות של חומר ביולוגי עם רמה גבוהה של סטנדרטיזציה של המחקר, תוך מזעור האלמנט הסובייקטיבי בהערכה של תוצאות, אפשרות לאחסן פרוטוקולי מחקר קבועים המאפשרים לך לאחסן נתוני מחקר ולהתייחס אליהם שוב לניתוח רטרוספקטיבי.

החסרונות המשמעותיים של שיטות ידניות, כולל קביעת נוגדנים לאנטיגנים T. pallidum על ידי ELISA, הם:

~ טעויות אפשריות של כוח אדם במהלך המחקר (פיקוח, רשלנות, הפרת טכנולוגיה);

~ חוסר האפשרות לסטנדרטיזציה מלאה של תהליך המחקר עם גרסה ידנית של ELISA;

~ סיכון מוגבר להידבקות בכוח אדם.

10. שינויים בשיטה

לצד ה-ELISA העקיף הקלאסי, השיטה מוכרת גם. לכידת ELISA. הוא הוצע בשנת 1989 על ידי O. E. Ijsselmudien et al. כדי לזהות נוגדנים מסוג IgM לאנטיגנים Tr. פלידום. לשיטה יש סגוליות ורגישות גבוהה.

נוגדנים מטוהרים לאימונוגלובולינים אנושיים מסוג M נספגים על פני בארות הטבליה, ולאחר הדגירה של סרום הבדיקה, כל ה-IgM נקשר לנשא. הנוכחות בין IgM הקשורים ספציפיים לאנטיגנים Tr. pallidum מזוהה באמצעות אנטיגנים Tr. pallidum מצומד עם אנזים.

שיטה זו מאפשרת לך לזהות נוגדנים לא רק של מחלקת IgM, אלא גם של מחלקות IgG, IgA. לשם כך, בארות הטבליות עוברות רגישות עם נוגדנים מטוהרים בזיקה ממעמד מסוים נגד אימונוגלובולינים אנושיים. במקביל, נוגדנים מסוג זה נתפסים מהנסיוב, וגילוי נוגדנים ספציפיים לטרפונמל מתבצע על ידי שילובם עם מצומד, שהוא שילוב של אנטיגן טרפונמל עם אנזים.

השימוש ב-ELISA לכוד מפחית את הסיכון לתגובות חיוביות שווא המתווכות על ידי גורם דם שגרוני, תגובות צולבות בין אימונוגלובולינים מדרגות M ו-G. כאשר בודקים ילודים, במקרה זה, תוצאות בדיקות חיוביות כוזבות הקשורות לגילוי IgM המכוונת נגד IgG antitreponemal של האם אינם נכללים גם כן.

כמו גרסאות ELISA בחו"ל נמצאים בשימוש נרחב בדיקת אנזים חיסונית (EIA)ומערכת ICE עגבת. באחרון, תערובת של נוגדנים ל-IgM ו-IgG, כמו גם שלושה חלבוני T. pallidum רקומביננטיים, נספגה בבארות הצלחת. תוצאות חיוביות נבדקות באותה מערכת בדיקות בשתי חזרות כדי להנפיק את התוצאה הסופית.

ברוסיה פותחו מספר מערכות בדיקה לאיתור סרודיאגנוזיס של עגבת על ידי ELISA עם ריאגנטים ביתיים. למערכות אלו יש ספציפיות ורגישות גבוהה.

בנוסף לאמור לעיל, קיימות גם אפשרויות ELISA נוספות, כולל כאלו המאפשרות זיהוי ישיר של הפתוגן בדם (ELISA ישיר), dot-ELISA עם התגובה על רצועות ניטרוצלולוזה, ELISA עם דם נימי וכן אימונובלוטינג, או Western Blot, עם זיהוי בו-זמנית של נוגדנים למרכיבים שונים של הפתוגן.

שינוי מודרני משופר של ELISA הוא אימונובלוטינג.

ICA (ניתוח אימונוכימילומינסצנטי), ICL (אימונוכימילומינסצנטי)

עם התפתחות אבחון מעבדה בהקשר למודרניזציה של שירותי הבריאות בפדרציה הרוסית, אוטומציה של מחקר מעבדה נכנסה לפרקטיקה של מעבדות, מה שמאפשר לתקן את השלבים האנליטיים של המחקר. זה משפר את איכות האבחון. עם כניסת האוטומציה, החלו להשתמש בשיטות היי-טק חדשות בעלות רגישות וסגוליות גבוהות, כגון בדיקת כימי-לומינסצנציה חיסונית (CLIA)

Chemiluminescence הוא תהליך פליטת פוטון במהלך המעבר של מוצרים נרגשים אלקטרונית של תגובות כימיות חמצוניות למצב האנרגיה הראשוני. במהלך תגובת הכימילומינסנציה, משתחררת כמות משמעותית של אנרגיה, והתפוקה הקוונטית של האור הנפלט גבוהה למדי. מבין כל השיטות הלא איזוטופיות, כימילומינסנציה מספקת את הרגישות הגבוהה ביותר. עבור שיטות אימונומטריות, הרגישות של chemiluminescence גבוהה בסדרי גודל מזו של בדיקת רדיואימוניות.

השיטה של ​​immunochemiluminescence (ICL) מצאה כעת את יישומה באבחון של סמני גידול, מחלות אוטואימוניות, סוכרת, סמני לב, הורמונים (תירואיד, יותרת הכליה, הורמוני מין נשיים וזכריים), דלקות לפידים, צהבת נגיפית, וירוסי קבוצת הרפס.

בהתבסס על שיטת האימונוכימילומינסנציה, פותחו מספר מערכות בדיקה רגישות וספציפיות במיוחד (98-100%) לאבחון עגבת, המשמשות בעיקר בחו"ל.

בשיטה, ליפופרוטאינים רקומביננטיים המתקבלים בשיטות הנדסה גנטית משמשים כאנטיגנים, שהם אנלוגים שלמים לאנטיגנים T.pallidum.

בהתבסס על תוצאות מחקר קליני, שיטת ICA הוכרה ומומלצת לשימוש באבחון מעבדתי של עגבת בפדרציה הרוסית כבדיקת סקר ואישור אם למעבדות יש את הציוד המתאים. בשנת 2012, ICA נכללה כבדיקת סקר ואישור לאבחון של עגבת בהנחיות הקליניות לניהול חולים עם זיהומים המועברים במגע מיני וזיהומים אורוגניטלים.

לפיכך, השימוש ב-ICA ההייטק, שנכנס לפרקטיקה של אבחון מעבדה עולמי ומבית עם כניסת האוטומציה, מספק את היתרונות הבאים:

  • הדרת השפעתם של גורמים סובייקטיביים בשלב האנליטי של המחקר
  • בטיחות הצוות בעת ביצוע מחקרים של חומר ביולוגי שעלול להיות נגוע
  • הגדלת מהירות השגת התוצאות על ידי המטופל
  • סטנדרטיזציה מחקרית ובקרת איכות מחקרית
  • אספקת תוצאות אמינות לחולים
  • מחקר מעבדה קליני באיכות גבוהה.

מבחינת רגישות, שיטת ה-ICA דומה לשיטת הרדיואימוניות, ומבחינת קלות הביצוע, בטיחות כוח האדם ופרמטרים רבים נוספים היא עולה עליה.

שיטת ה-ICA, בעלת רגישות וסגוליות גבוהות (98–100%), מאפשרת לכמת את רמת הנוגדנים לגורם הגורם לעגבת, וניתן להשתמש בה כדי לאשר זיהום וסקר עגבת. מגבלות שימוש: לא ניתן להשתמש בו כדי לפקח על יעילות הטיפול, עלול לתת תוצאה חיובית שגויה.

אימונוכרומטוגרפיה (ICH).

חדשות יחסית לשימוש בפדרציה הרוסית הן שיטות לזיהוי נוגדנים ספציפיים לטרפונמה המבוססות על שיטות אימונוכרומטוגרפיה (ICH). כמו בשיטת ICA, ליפופרוטאינים רקומביננטיים המתקבלים בשיטות הנדסה גנטית (לדוגמה, אנטיגנים Tp15, Tp17, Tp47) והפפטיד TmpA הביוסינתטי משמשים כאנטיגנים. האנטיגנים המפורטים משמשים גם בשילובים שונים כחלק מחומרים אימונוסורבים ב-ELISA ובאימונובלוטינג.

שיטת ICG מאפשרת לקבוע במהירות את התוכן של נוגדנים ספציפיים לטרפונמה לגורם הסיבתי של עגבת בדגימות סרום ודם מלא ללא שימוש בציוד מעבדה מיוחד ומשמשת במתן טיפול רפואי ראשוני, כולל אינדיקציות אפידמיולוגיות.

מגבלות שימוש: לא ניתן להשתמש בו כדי לפקח על יעילות הטיפול, עלול לתת תוצאה חיובית שגויה.

PBT (בדיקות מהירות פשוטות ליד המיטה)

יחסית לאחרונה, בסרודיאגנוזיס של עגבת, החל להתפתח כיוון לפיתוח של מה שנקרא בדיקות מהירות פשוטות (PBT), או בדיקות ליד מיטת החולה (Point-of-care - ROC). בדיקות מהירות פשוטות ליד המיטה, או בדיקות אימונוכרומטוגרפיות, מאפשרות לקבוע במהירות את תכולת הנוגדנים הספציפיים לטרפונמה לגורם הסיבתי של עגבת בדגימות סרום ודם מלא ללא שימוש בציוד מעבדה מיוחד ולשמש בטיפול רפואי ראשוני, כולל עבור אינדיקציות אפידמיולוגיות. מגבלות שימוש: לא ניתן להשתמש בו כדי לפקח על יעילות הטיפול, עלול לתת תוצאה חיובית שגויה.

בדיקות אלו מבוססות על איתור אימונוכרומטוגרפי של נוגדנים לאנטיגנים טרפונמאליים של טרפונמה חיוורת ומבוצעות על רצועות; במקרה זה, ניתן להשתמש גם בדם מלא וגם בסרום (Herring A., Ballard R. et al, 2006). מתכונת הבדיקות מאפשרת לערוך מחקר בהיעדר ציוד מיוחד וללא שימוש בחשמל. עם זאת, בשל הרגישות והספציפיות הנמוכות יחסית, בדיקות אלו טרם מצאו את יישומן הרחב בפועל.

אימונובלוטינג (כתם מערבי)

בשנים האחרונות הופיעו שיטות מחקר שמטרתן איתור וניתוח תכולת הנוגדנים. עבור כל אנטיגןטרפונמה חיוורת בנפרד. שיטה אחת כזו היא שיטת הספיגה החיסונית (או ספיגה, אימונובלוטינג, ווסטרן כתם), המשמשת לקביעת נוגדני IgG או IgM לטרפונמה חיוורת. השיטה של ​​immunoblotting היא שינוי של אנזים immunoassay - גרסה של ELISA.

Immunoblotting היא אחת השיטות המודרניות ביותר של עגבת סרודיאגנוזיס ונמצאת בשימוש פעיל בחו"ל. הוא קיבל את שמו ("סימון מערבי") כתגובה הומוריסטית לשמות של טכניקות זיהוי DNA ("סיכה דרומית") ו-RNA ("סיכה צפונית").

1. תולדות השיטה

אימונובלוטינג (Western blot) משמש לקביעת נוגדני IgG או IgM לאנטיגנים של טרפונמה חיוורים (Herremans M. et al., 2007).

2. אימונובלוט קלאסי

אימונובלוט קלאסי(Western Blot Analysis) משלב בדיקת אנזים אימונו ושימוש בשיטה אלקטרופורטית. אנטיגנים חלבוניים של הסוכן הסיבתי של עגבת מופרדים באופן ראשוני על ידי אלקטרופורזה ומועברים לנשא - קרום ניטרוצלולוזה (רצועה). העברה זו נקראת סופג. לאחר מכן נשא זה עם נקודות מופרדות (כתמים) מטופל בסרום הבדיקה ונוגדנים ל-IgG או IgM המסומנים באנזימים או בחומרים רדיואקטיביים. השיטה כוללת שימוש בחלבוני טרפונמה טבעיים או רקומביננטיים.


אלקטרופורזההוא הפרדה של תרכובות טעונות על בסיס ניידותן בשדה אלקטרופורטי. כאשר הפרש פוטנציאל מוחל במדיום כלשהו, ​​מולקולות טעונות חיוביות נעות לעבר אלקטרודה בעלת מטען שלילי, ומולקולות טעונות שלילי נעות לעבר אלקטרודה חיובית.

רוב החלבונים הכדוריים מורכבים בצורה כזו שרוב הקבוצות הטעונות, כלומר ההידרופיליות, ממוקמות על פני החלבון, בעוד שהשאריות הלא טעונות והידרופוביות טבולות בתוך הכדור. בשדה חשמלי, בהתאם למטען שלהם, חלבונים נודדים לעבר אלקטרודה בעלת מטען הפוך.

הפרדה אלקטרופורטית של חלבונים מתבצעת במדיום ג'ל סינטטי המבוסס על פוליאקרילאמיד. כדי להפריד חלבונים בהתאם למשקל המולקולרי שלהם, לפני אלקטרופורזה, תערובת החלבונים מודגרת מראש בנוכחות סודיום דודציל סולפט (SDS).

מחקרים מפורטים של מדענים זרים וובר ואוסבורן (1969) הראו כי לאחר טיפול כזה, הגורם היחיד שיכול להשפיע על ניידות החלבונים בג'ל פוליאקרילאמיד (PAAG) הוא גודל החלבון, או יותר נכון משקלו המולקולרי. זה איפשר ליישם את שיטת האלקטרופורזה ב-SDS-PAGE בנוכחות SDS לקביעה מדויקת למדי של המשקל המולקולרי של חלבונים ופפטידים. בספרות זרה, שיטה זו כונתה SDS-PAGE (אלקטרופורזה של ג'ל סודיום דודקיל סולפט-פוליאקרילאמיד).

פרופיל תגובתיות בבדיקת WB הקלאסית עם אנטיגנים טבעיים (שיטת אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד עם סודיום דודציל סולפט). (1) - תוצאה חיובית בקרה, (2) - תוצאה שלילית בקרה, (3-6) - דגימות קליניות.

בבדיקות לעגבת בשיטה זו, שטוהרו והושמדו בעבר למרכיביה, טרפונמה חיוורת נתונה לאלקטרופורזה בג'ל פוליאקרילאמיד או אגרוז. במקביל, האנטיגנים הכלולים בהרכבו מופרדים לפי משקל מולקולרי.

לאחר מכן, על ידי אלקטרופורזה אנכית, האנטיגנים מועברים לרצועה של ניטרוצלולוזה, המכילה כעת ספקטרום בלתי נראה של להקות אנטיגניות האופייניות לטרפונמה חיוורת.

במהלך הניתוח, חומר הבדיקה (נסיוב, פלזמת הדם של המטופל וכו') מוחל על רצועת ניטרוצלולוזה (רצועה). אם יש נוגדנים ספציפיים בדגימה, אז בתהליך הדגירה הם נקשרים בחוזקה לרצועות האנטיגניות המתאימות (משלימות) להן לחלוטין ויוצרות קומפלקס "אנטיגן-נוגדן".

לאחר הסרת אימונוגלובולינים לא קשורים במהלך שטיפת הרצועה, דגירה עם מצומד - לאחר מכן נוגדנים מסומנים באנזים לאימונוגלובולינים אנושיים (נוגדנים לאימונוגלובולינים אנושיים או ל-IgM), שבמהלכה נצמדים נוגדנים המסומנים באנזים לאנטיגן-נוגדן הקיים. קומפלקסים על פני הממברנה.

לאחר הסרת המצומד הבלתי קשור במהלך הדגירה עם תמיסת הסובסטרט, האנזים יוצר אינטראקציה עם המצע, וכתוצאה מכך מתפתחת תגובת צבע - צביעה של חלקי הממברנה (בצורת פסים) שבהם נמצאים אנטיגנים בודדים של טרפונמה חיוורת. נמצא, נוגדנים אליהם היו בסרום הבדיקה. עוצמת הצביעה תלויה בכמות הנוגדנים הקשורים מהנסיוב. תוצאת התגובה מוערכת חזותית.

הנוכחות של להקות באזורים מסוימים של צלחת ניטרוצלולוזה מאשרת את הנוכחות בסרום הנחקר של נוגדנים לאנטיגנים מוגדרים בקפדנות של טרפונמה חיוורת.

לחומרים החיסוניים 15, 5, 17, 44.5, 47 kD שנקבעו בשיטה זו יש משמעות אבחנתית בעגבת. Ig G immunoblotting דומה ברגישות ובספציפיות ל-RIF עם ספיגה (RIF abs). Ig M-immunoblotting יכול לשמש כבדיקת אבחון לעגבת מולדת.

3. Immunoblot בפורמט אימונואסאי ליניארי

בדיקת אימונו ליניארית (line immunoassay, LIA) מאפשרת לקבוע בו זמנית נוגדנים לאנטיגנים של טרפונמה חיוורים בסרום או פלזמה אנושית. אנטיגנים מורחים מראש על רצועות בדיקה (רצועות), המסופקות כחלק מערכות אבחון מסחריות.

הרצועות עשויות ממברנת ניטרוצלולוזה, ממברנת פוליאמיד עם גב פלסטיק או ממברנת ניילון עם גב פלסטיק. במהלך הייצור, מספר אנטיגנים נפרדים מונחים על רצועת הבדיקה כשורות אנטיגנים נפרדים. בנוסף לאנטיגנים של עגבת אלו, מורחים ארבעה קווי בקרה נוספים על כל נתיב: סטרפטווידין ובקרות (3+, 1+ ו-± קו חתך).

עבור הרצועות נעשה שימוש באנטיגנים מלאכותיים המתקבלים בהנדסה גנטית - חלבונים רקומביננטיים או מבני פוליפפטיד סינתטיים. אלו הם אנלוגים של אנטיגנים פני השטח של טרפונמה חיוורת - TpN15, TpN17, TpN47 ו-TmpA עם משקל מולקולרי של 15, 17, 47 kDa ו-44.5 (TmpA), כאשר kDa=kiloDaltons. בעזרתם נקבעים נוגדנים בסרום למרכיבים אימונודומיננטיים שונים של הפתוגן.

הדגירה של דגימת הבדיקה מתבצעת בקובטה, בה מניחים גם את רצועת המחוון. נוגדנים ל-T. pallidum נקבעים על ידי קשירה לאנטיגנים המודפסים על רצועות הבדיקה. אם יש בדגימה נוגדנים ספציפיים ל-T. pallidum, הם יוצרים קשרים עם קווי אנטיגן בודדים. כאשר הנוגדנים הכלולים בסרום הבדיקה מקיימים אינטראקציה עם אנטיגנים נפרדים מסוג T. pallidum הממוקמים על רצועת הבדיקה, נוצר קומפלקס אנטיגן-נוגדנים בצורה של פסי צבע הניתנים לזיהוי חזותית.

כאשר לוקחים בחשבון את התוצאות של אימונובלוטינג, התגובתיות של הסרום לכל אחד מהאנטיגנים מוערכת בנפרד. תגובה חיובית כוללת מתקבלת כאשר מתקבלת תוצאה בו-זמנית עם שניים או שלושה מהאנטיגנים המוצגים.

הליכי המחקר מתבצעים באופן ידני או על מנתח מיוחד, תוך פרשנות התוצאות באמצעות תוכנת מחשב מיוחדת למחלות זיהומיות.

בשל דרגת הטיהור הגבוהה של אנטיגנים רקומביננטיים וזיהוי בו-זמנית של נוגדנים לדטרמיננטים האימונוגניים ביותר של פתוגן העגבת, לשיטה יש רגישות וסגוליות גבוהות.

4. התחשבנות בתוצאות

כדי לקרוא את עוצמת הצביעה של להקות אנטיגניות על רצועות, פותחו פוטומטרים, שפעולתם מבוססת על השתקפות אות, מה שמבטל הערכה סובייקטיבית ומספק הזדמנות פוטנציאלית לאוטומציה.

5. באילו תקופות של המחלה עדיף להשתמש

בדיקות בשיטת Western blot יכולות לזהות נוגדנים ספציפיים לאנטיגנים של Treponema pallidum בשלב מוקדם מאוד של המחלה. המשמעותיים ביותר באבחון של עגבת הם נוגדנים לאנטיגנים של טרפונמה חיוורת TpN15, TpN17, TmpA ו-TpN47. אנטיגנים אלו הם חלבוני ממברנה בעלי משקלים מולקולריים של 15, 17, 44.5 ו-47 kDa, בהתאמה.

כאשר טרפונמה pallidum מוכנס לגוף האדם, נוגדנים אנטי-עגבתים מופיעים בסדר הזה: ראשית, מתפתחת תגובה חיסונית לאנטיגנים של TpN17, לאחר מכן ל-TpN47, אחרי TpN15 ואחרי הכל TmpA. כאשר לוקחים בחשבון את תוצאות הבדיקה, מוערכת התגובתיות של הסרום לכל אחד מהם בנפרד. לדוגמה, כאשר בכתם ליניארי יש תגובתיות רק לקו האנטיגני TpN17 ו-TpN47, זה אומר שהמחלה נמצאת בשלב מוקדם. ככל שהקווים האנטיגנים הופכים לתגובתיים, כך הזיהום מתקדם יותר. בטיפול בעגבת, דפוס התגובתיות בבדיקה זו משתנה.

קביעת IgM לחלבונים עם משקל מולקולרי של 15.17, 41, 47 kDa מאפשרת לזהות 29.2% מהחולים עם עגבת משנית, 12.5% ​​עם עגבת סמויה מוקדמת ו-8.0% עם עגבת סרורית. החיפוש אחר IgG לאותן מולקולות מאופיין ברגישות של 61.6% ל-seroresistant ו-100% לעגבת סמויה משנית ומוקדמת.

6. רגישות וסגוליות

על פי הספרות, הרגישות והספציפיות של הבדיקה גבוהות מאוד - 99.6-100% ו-99.3-99.5%, בהתאמה. בשיטה הקלאסית זה מושג באמצעות הפרדה אלקטרופורטית של חלבונים, גליקו וליפופרוטאינים והספציפיות המקסימלית של זיהוי סרה חיסונית או נוגדנים חד שבטיים. בתנאים אופטימליים, אימונובלוטינג יכול לזהות אנטיגן בכמויות של פחות מ-1 ng בנפח הבדיקה.

גם הרגישות של הכתם הליניארי היא 99.6% והספציפיות היא בין 99.3% ל-99.5%.

לדברי מומחים, אימונובלוטינג עם אנטיגנים רקומביננטיים ספציפיים מאוד דומה ברגישות ובספציפיות ל-RIF abs.

על פי נתוני ספרות זרה ותוצאות מחקר ב-TsNIKVI, לשיטת האימונובלוטינג יש רגישות גבוהה (98.8-100%) וסגוליות (97.1-100%) באבחון של עגבת.

7. היקף השיטה

אימונובלוטינג (אימונובלוט) היא שיטת התייחסות מאוד ספציפית ורגישה מאוד. רגישות גבוהה וספציפיות מאפשרות לשיטה זו להיחשב כבדיקת אישור לעגבת. ניתן להשתמש בשיטה כדי לאשר את האבחנה, כמו גם אם בדיקות טרפונמל אחרות נותנות תוצאות מפוקפקות ומנוגדות. Western blotting יכול לאשר את האבחנה בחולים עם תוצאות בדיקה חיוביות או בלתי מוגדרות, כולל אלו שהתקבלו באמצעות TPHA או ELISA.

8. מקורות וגורמים לטעויות בימוי, חיוביות שגויות ושליליות שגויות

תוצאות חיוביות כוזבות הן נדירות מאוד. גם תוצאות שליליות כוזבות הן נדירות למדי ונצפו בחולים עם ליקויים חיסוניים - לעתים קרובות יותר בנגועים ב-HIV ועם השפעת "חלון" אבחנתי עקב עיכוב בסינתזת הנוגדנים, כמו גם טעויות בשלב השלב.

השימוש במערכות בדיקה מודרניות מכתיב את השמירה המדויקת על כל הדרישות הן לחומר והן לביצועי התגובה. בעיקרון, מקור הטעויות הוא הפרה של הסדר והטכנולוגיה של המחקר (במיוחד עבור הכתם המערבי הקלאסי), אי ציות להמלצות של יצרני ערכות הבדיקה. . כמו כן, ניתן לבצע טעויות באיסוף, מסירה, אחסון דגימות סרום דם וכן בביצוע הבדיקות. בנוסף לדגימות פגומות, סיבות אפשריות אחרות כוללות שימוש בערכות בדיקה שפג תוקפן ושגיאות בניתוח תוצאות הבדיקה.

9. תכונות, יתרונות וחסרונות

ייחודו של האימונובלוט טמון בתכולת המידע הגבוהה שלו ובאמינות התוצאות.

הבדיקה אינה דורשת אנטיגנים מטוהרים במיוחד, סרחי התייחסות ובקרה. זיהוי יעד נוגדן מבוסס על המשקל המולקולרי של החלבון שאיתו מגיבים נוגדנים מהנסיוב של המטופל. בתגובה אחת ניתן לזהות קישור של נוגדנים למספר אנטיגנים, שכל אחד מהם ניתן לאפיין מדויק. בשל כך, לאימונובלוטינג יש מספר יתרונות על פני שיטות אחרות לאיתור נוגדנים, שתוצאותיהן תלויות בסטנדרטיזציה, רגישות, איכות המצע, חוסר יציבות או אי מסיסות של אנטיגנים מסוימים.

השיטה ניתנת לשחזור בקלות, קלה יחסית לביצוע ולפרש את התוצאות, מאפשרת לקבוע את ספקטרום הנוגדנים למספר אנטיגנים מסוג T. pallidum בבת אחת ולהעריך את תרומתם של נוגדנים בעלי סגוליות שונה לתגובה הכוללת.

השימוש באנטיגנים רקומביננטיים ופפטידים מטוהרים מאוד ממזער את התגובתיות הלא ספציפית של סרה. השימוש בשיטה מאפשר להימנע משיטות גוזלות זמן וסובייקטיביות המסוכנות לחוקר (השתלת זני G. pallidum, עבודה עם T. pallidum הפתוגני בניסוח התגובה). זה קובע את העדפת שיטת האימונובלוטינג על פני בדיקות טרפונמל אחרות (RIF ובעיקר RIBT) לאבחון של עגבת.

10. שינויים בשיטה

קיימות מספר מערכות בדיקה מסחריות המבוססות על שיטה זו. חלקם בפורמט כתם מערבי, מורכבים מרצועות שעליהן מועברים רכיבי חלבון של T. pallidum, המופרדים קודם לכן על ידי אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד.

אחרים נמצאים בפורמט כתם ליניארי, מורכבים מרצועות שעליהן נספגים פוליפפטידים רקומביננטיים וסינתטיים בצורה של קווים נפרדים - אנלוגים של אנטיגנים משטחים של T. pallidum, TpN15, TpN17, TpN47 ו-TmpA.

תוצאות הכתם המערבי קשות יותר לפירוש מכיוון שהרצועות מציגות מגוון רחב של נוגדנים, שרבים מהם ספציפיים לקבוצה. לעומת זאת, הפרשנות של תוצאות כתם ליניארי היא פשוטה; בנוסף, קווי בקרה נוספים המודפסים על הרצועה מאפשרים הערכה חצי כמותית של רמת הנוגדנים לארבעת האנטיגנים של T. pallidum.

טכנולוגיית xMAP

xMAP היא טכנולוגיה חדישה המאפשרת לבצע מחקרים מולטי-פרמטריים על ידי זיהוי בו-זמנית של מספר אנליטים בדגימה ביולוגית אחת. מיקרוספרות צבעוניות מצופות בריאגנטים לכידה (אוליגונוקלאוטידים, נוגדנים, אנטיגנים) משמשות כשלב המוצק.

דגימת הבדיקה מתווספת לתמיסה המכילה את המיקרוספירות. האנליטים שהתגלו בדגימה נקשרים למיקרוספרה המקבילה, ולאחר מכן מוסיפים לתמיסה חומר זיהוי (זיהוי נוגדנים, תווית פלורסנטית). כדי לזהות את האנליט המנותח, משתמשים במערכת של שני לייזרים, המאפשרת הן הערכה איכותית של נוכחות אנליט בדגימה (לשם כך משתמשים בלייזר אדום שמסווג מיקרוספירות לפי צבע) והן הערכה כמותית של תוכן אנליט בדגימה (בשביל זה נעשה שימוש בלייזר ירוק).


המחקר מתבצע באופן אוטומטי על מנתחים כגון ביו-פלקס 200 (ביו-רד), ביו-פלקס2200 (ביו-רד), לומינקס100 (לומינקס), לומינקס200 (לומינקס) המצויד בתוכנה.

הביצועים של טכנולוגיית xMAP עולים באופן משמעותי על הביצועים של מבחן אימונוסורבנטי קלאסי (ELISA) עם כמות קטנה משמעותית של חומר ביולוגי.

טכנולוגיית xMAP, בעלת רגישות אנליטית גבוהה, משמשת כיום לפתרון מגוון רחב של בעיות קליניות. בעזרתו, בדגימה אחת של חומר ביולוגי, מתבצע זיהוי סימולטני של מרקרים ידועים, סמני לב, סמנים של השלב החריף וסוכרת, מגוון רחב של ציטוקינים, כימוקינים וגורמי גדילה. זיהוי סימולטני של מספר אנליטים בדגימה ביולוגית אחת יכול להפחית משמעותית את זמן בדיקת המטופל. עד כה פותחו מספר מערכות בדיקה לאיתור נוגדנים לפתוגנים של STI, בפרט זיהום עגבת, בשיטת xMAP.

"על סמוטכנייה"
קבלת פנים בתיאום מראש! שבת ראשון.

עגבת היא מחלה זיהומית הנגרמת על ידי ה-Spirochete Treponema pallidum, הנוטה למהלך כרוני מתקדם, עם מחזוריות ברורה של תסמינים קליניים.

הדומיננטיות של העברה מינית על פני מגע ומעבר שליה מציבה מחלה זו במספר מחלות המועברות במגע מיני (STDs, STIs). בנוסף לשיטות אלה של העברת זיהום, המסלול המלאכותי (מהלטינית "artificio" - שנוצר באופן מלאכותי) משחק תפקיד מיוחד.

זה אופייני למוסדות רפואיים, מיושם בעיקר בבית חולים. זיהום מתרחש במהלך עירויי דם, פעולות כירורגיות שונות, שיטות אבחון פולשניות.

למרות ההסגר של דם התורם, הבעיה של גילוי עגבת אצל תורמים בשלבים שונים של המחלה עדיין רלוונטית.

לכן, אמצעי אבחון עבור עגבת דורשים סטנדרטיזציה, הכנסת שיטות זיהוי רגישות ואינפורמטיביות חדשות, כמו גם מזעור טעויות ופרשנות שגויה של תוצאות הבדיקה.

    תראה הכול

    1. סיווג שיטות אבחון מעבדתיות

    לאבחון של עגבת יש כמה תכונות ושונה מהאבחנה של זיהומים חיידקיים אחרים. המבנה המורכב והתכונות האנטיגניות של טרפונמה חיוורת גורמים לשגיאות בפרשנות התוצאות של בדיקות סרולוגיות.

    בדיקת דם לעגבת מוצעת ל-3 קבוצות עיקריות של חולים:

    1. 1 סינון ובדיקה רפואית מניעתית של קבוצות אוכלוסייה (כולל הריון, רישום במרפאה לפני לידה, העסקה ורישום ספר רפואי וכדומה).
    2. 2 סקר בקבוצות סיכון (מין לא מוגן עם אדם שנדבק בעגבת, אנשים לאחר מגע מיני כפוי, נגועים ב-HIV וכן הלאה).
    3. 3 אנשים עם תסמינים או חשודים בזיהום עגבת.

    כל שיטות המעבדה מחולקות באופן מותנה לישירות ולעקיף.

    1.1. שיטות ישירות

    1. 1 זיהוי של Treponema pallidum בשדה האפל (מיקרוסקופיה של שדה אפל).
    2. 2 הדבקה של חיות ניסוי (גידול בחיות מעבדה).
    3. 3 PCR (תגובת שרשרת פולימראז).
    4. 4 בדיקה של DNA או הכלאה של חומצת גרעין.

    1.2. שיטות עקיפות

    תגובות סרולוגיות הן שיטות אבחון מעבדתיות המבוססות על זיהוי של נוגדנים (בקיצור AT) לאנטיגנים של טרפונמה חיוורת (בקיצור AG). הם חיוניים לאישור האבחנה.

    1. 1 בדיקות לא טרפונמאליות:
      • תגובת וסרמן (RSK);
      • תגובת מיקרו-משקעים (MR, RMP) והאנלוגים שלה, המפורטים להלן;
      • בדיקת פלזמה מהירה מחדש (RPR, RPR);
      • בדיקה עם טולואידין אדום וסרום (TRUST);
      • מבחן לא טרפונמלי של המעבדה לחקר מחלות מין - VDRL.
    2. 2 בדיקות טרפונמל:
      • R-tion של immobilization של Treponema pallidum - RIBT / RIT;
      • R-tion של immunofluorescence - RIF, FTA (דילול של sera RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
      • R-tion של hemagglutination פסיבי (RPHA, TRPGA, TPHA);
      • ELISA (ELISA, EIA);
      • אימונובלוטינג.

    איור 1 - אלגוריתם סרודיאגנוזיס של עגבת

    1.3. שיטות היסטומורפולוגיות

    שיטות אלה מצטמצמות לזיהוי התכונות של ההיסטומורפולוגיה של גילויי עגבת. תשומת לב מוקדשת לדקויות של מבנה הצ'אנקר הקשה. עם זאת, אבחנה מבדלת של זיהום באמצעות היסטולוגיה קשה מאוד. היסטומורפולוגיה משמשת עם בדיקות מעבדה וקליניות אחרות.

    2. מיקרוסקופ שדה כהה של Treponema pallidum

    שיטה זו מבוססת על זיהוי ישיר של טרפונמה חיוורת בחומר הנחקר באמצעות מיקרוסקופ ומכשירים מיוחדים (לרוב פריקה של שחיקות וכיבים, לעתים רחוקות יותר נוזל מוחי ומצעים אחרים).

    בעזרת צלקת, גרידה, סחיטה משחיקות ומפגמים כיבים, מתקבל exudate, ואז התכשיר המוכן נבדק במיקרוסקופ.

    בדרך כלל, טרפונמות חיוורות מתגלות בתכשיר המתקבל מהצ'נקר, ממוקדי עגבת רעננה משנית, חוזרת משנית, כמו גם נקודתיות של בלוטות הלימפה, השליה.

    בהתבסס על תופעת הזוהר של חלקיקים קטנים בשדה חשוך כשהם פוגעים בקרן אור (תופעת Tyndall), השיטה מאפשרת להבדיל באופן מושלם את הגורם הסיבתי של עגבת מטרפונמות אחרות על סמך הבדלים מורפולוגיים והבדלים בדרכים החיידק זז.

    למיקרוסקופיה, נעשה שימוש במעבה מיוחד של שדה כהה ברזולוציה האופטית המתאימה. התרופה מתקבלת בשיטת טיפה מרוסקת (טיפת חומר מונחת על שקף זכוכית נקי ללא שומן ומכוסה בכיסוי דק מאוד).

    שמן טבילה ירד על כיסוי הכיסוי. על ידי סיבוב הצינור וסיבוב עדשת ההגדלה, מותאמת התאורה הרצויה.

    בשדה האפל של המיקרוסקופ מתגלים תאי דם, תאי אפיתל והגורם הגורם לעגבת. טרפונמה חיוורת נראית כמו ספירלה, דקה מאוד, מקרינה צבע כסוף, עם תנועות חלקות.

    איור 2 - מיקרוסקופ שדה כהה כדרך לדמיין טרפונמה חיוורת בחומר הנחקר. מקור תמונה - CDC

    יש להבחין בין Treponema pallidum לבין טרפונמות אחרות, כולל Tr. refringens, אשר ניתן למצוא באורופרינקס וברירית איברי המין. חיידק זה עושה תנועות כאוטיות, בעל תלתלים רחבים וא-סימטריים, גסים למדי. בנוסף, Treponema pallidum מובחן מ-Tr. Microdentium, Tr. בוקאליס וטר. וינסנטי.

    הדמיה של חיידקים בשדה חשוך מתווספת לפעמים על ידי תגובת פלואורסצנציה. לשם כך מוסיפים לחומר המקומי נוגדנים אנטי-טרפונמאליים המסומנים בצבע ניאון. במקרה זה נוצר קומפלקס הנקרא אנטיגן-נוגדן (בקיצור AG-AT), שהוא האובייקט לבדיקה באמצעות מיקרוסקופ זוהר.

    3. שיטת תגובת שרשרת פולימראז (PCR)

    PCR, שפותח ב-1991 כדי לזהות את מולקולת החומצה הדאוקסיריבונוקלאית (DNA) של treponema pallidum, הוא רגיש וספציפי ביותר, המאפשר זיהוי של שברי DNA של הפתוגן.

    ניתוח זה מבוסס על העתקת קטעים קצרים של DNA spirochete pallidum, אשר עונה על הפרמטרים שצוינו וקיים בדגימה. כל זה נעשה בתנאים מלאכותיים (במבחנה). התגובה מתבצעת במכשיר - מגבר, המספק מחזוריות של מחזורי טמפרטורה. מתרחש קירור, ואחריו חימום המבחנות עם שגיאה של 0.1˚С.

    תבנית ה-DNA מחוממת במשך 2 דקות בטמפרטורה של 92-98 מעלות צלזיוס (הטמפרטורה המקסימלית משמשת אם הפולימראז יציב תרמי). בחימום, גדילי ה-DNA מתפצלים עקב פירוק קשרי מימן ביניהם. בשלב החישול, טמפרטורת התגובה יורדת כדי לקשור את הפריימר לתבנית הגדילה הבודדת.

    החישול נמשך כ-30 שניות, במהלכן מסונתזים מאות נוקלאוטידים. המולקולות החדשות שסונתזו מועתקות על ידי הפולימראז, וכתוצאה מכך, השברים הספציפיים של חומצה דאוקסיריבונוקלאית גדלים פי כמה. הגילוי הבא של שברים מתבצע באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל אגר.

    אבחון PCR של עגבת הוא עדיין ניסיוני באופיו, אך הוא מוצדק כאשר מתגלה זיהום מולד, במקרים אבחוניים קשים, או עם תכולה מינימלית של טרפונמה חיוורת בחומר הבדיקה.

    4. הכלאה של DNA

    הכלאת DNA מתבצעת במבחנה ומתבססת על חיבור מלא או חלקי של שתי מולקולות DNA חד-גדיליות למולקולה אחת. במקרה של התאמה מלאה של שברים משלימים, האיחוד קל. אם ההתאמה המשלימה היא חלקית, אז האסוציאציה של שרשראות DNA מתרחשת לאט. בהתבסס על זמן היתוך השרשרת, ניתן להעריך את מידת ההשלמה.

    כאשר DNA מחומם בתמיסת חיץ, קשרי מימן נשברים על ידי בסיסים חנקניים המשלימים, כתוצאה מכך, שרשראות DNA מתפצלות. לאחר מכן, תכשיר מתקבל משתי חומצות דאוקסיריבונוקלאיות דנטוריות. עם התקררות, האזורים החד-גדיליים מתחדשים. נוצר מה שנקרא היברידית DNA.

    השיטה מאפשרת להעריך ולנתח את קצב החישול, תוך התחשבות בתכונות (דמיון והבדלים) של ה-DNA בין מינים או בתוך מין.

    השימוש בבדיקת DNA מורכב מהכלאה של קטע DNA מסומן עם אזור DNA ספציפי כדי לזהות רצפי נוקלאוטידים משלימים. קבוצה של אטומים בלתי רוויים (כרומופורים) או איזוטופים רדיואקטיביים משמשת לתיוג הבדיקה.

    בדיקת ה-DNA משמשת לזיהוי הטרוגני והומוגני של חומצות גרעין. תפקיד הבדיקה הוא לקבוע את האזורים שבהם התרחש היתוך בדיקה של מטרה. לזיהוי במערכת הומוגנית יש יתרון ביכולת לעקוב אחר הכלאה של מולקולות DNA בזמן אמת.

    מהות השיטה מצטמצמת לדנטורציה ורנטורציה של DNA (איחוד מחדש של שרשראות DNA). תהליך הרנטורציה של חומצת גרעין ובדיקת DNA מסתיים ביצירת "היברידית".

    רצפים ספציפיים של חומצות גרעין מתכלאים עם בדיקת DNA וכך מתגלים ומאפשרים להעריך את כמות ה-DNA בחומר הבדיקה.

    5. זיהום של חיות מעבדה

    הרגישות הגבוהה של ארנבות ל-Treponema pallidum (כ-99.9%) מאפשרת להשתמש בהם באבחון של זיהום עגבת.

    הדבקה של ארנבות מתבצעת במרכזי מחקר ומהווה "תקן הזהב" להערכת רגישותן של שיטות אחרות.

    נחזור למבחנים טרפונמלים ולא טרפונמלים, שכן משתמשים בהם לרוב. שקול את היתרונות והחסרונות שלהם, כמו גם שגיאות בפרשנות התוצאות.

    6. בדיקות לא טרפונמאליות

    אלו הן בדיקות לקביעת נוגדני IgG ו-IgM לאנטיגן קרדיוליפין מתוקנן. החיסרון המשמעותי שלהם הוא הספציפיות הנמוכה יחסית שלהם.

    עלות נמוכה וקלות ביצוע מאפשרים לסווג בדיקות אלו כבדיקות אבחון מיון הנחוצות לקביעת אבחנה מוקדמת וסריקה בקרב האוכלוסייה.

    מבחנים לא טרפונמליים הם שניתנים בעת רישום ספר רפואי, הגשת מועמדות לעבודה, רישום במרפאה ללידה.

    פגמים:

    1. 1 רגישות מינימלית בשלב של עגבת ראשונית - 70%;
    2. 2 רגישות מינימלית בשלב של עגבת מאוחרת - 30%;
    3. 3 אפשרות לתוצאות שגויות-שליליות וחיוביות שגויות;
    4. 4 המורכבות של יישום ה-RSC.

    יתרונות:

    1. 1 עלות נמוכה יחסית של ייצור מבחן;
    2. 2 קבל תגובה מהירה;
    3. 3 אפשרות ליישום שלהם להקרנה.

    השגת דגימות חיוביות שגויות או חיוביות חלשות אפשרית במקרים הבאים:

    1. 1 הפרה של טכנולוגיית הביצוע, בעת חסימת מתחם AG-AT.
    2. 2 לחולה יש מחלות אוטואימוניות (דלקת מפרקים שגרונית, שיגרון, סקלרודרמה, זאבת אדמנתית מערכתית, סרקואידוזיס וכו').
    3. 3 ניאופלזמות ממאירות.
    4. 4 זיהומים ויראליים וחיידקיים.
    5. 5 מחלות אנדוקריניות (דלקת בלוטת התריס אוטואימונית, סוכרת).
    6. 6 הריון.
    7. 7 שתיית אלכוהול.
    8. 8 אכילת מזון שומני.
    9. גיל 9.

    כפי שניתן לראות מהרשימה, יש מספיק סיבות לתוצאה לא נכונה. לכן, יש להתייחס לזה בזהירות רבה. הבה נבחן שתי דוגמאות נוספות יחד עם RSC. זוהי תגובת מיקרו-משקעים ו-VDLR (השינוי שלה).

    7. תגובת קיבוע משלים (RSK, Wasserman, RW)

    זוהי בדיקה המבוססת על יכולתו של המשלים להיקשר למתחמי AG-AT. הקומפלקס המתקבל מזוהה באמצעות מערכת המוליטית. אנטיגן קרדיוליפין מגביר באופן משמעותי את הרגישות של הדגימה.

    רגישה היא תגובת קולמר, המורכבת מביצוע בתנאי טמפרטורה שונים. לפיכך, השלב הראשון של תגובת קולמר ממשיך בטמפרטורה של 20˚С למשך חצי שעה, השלב השני בטמפרטורה של 4-8˚С למשך 20 שעות. במהלך זמן זה, מתרחשת כריכת משלים.

    בעת ביצוע RSK, ניתן להשיג תוצאות חיוביות בחדות. הסיבה היא כנראה טיטר נוגדנים גדול בסרום לא מדולל. במקרה זה, הדגימות ממוקמות במינונים יורדים.

    כדי להבדיל בין שלבי העגבת ולהעריך את יעילות הטיפול האנטי עגבת, נקבעת כמות הנוגדנים בסרום.

    החיוביות של המדגם מוערכת באמצעות הצלבות; כמו כן, בתגובות Wasserman, Colmer ו-Cann, דילול בסרום מצוין.

    8. תגובת מיקרו-משקעים

    מכיוון שהמורכבות של ביצוע הבדיקות הנ"ל גבוהה, פותחה שיטה מואצת לסרודיאגנוזיס של עגבת, מה שנקרא שיטת אקספרס, תגובת המיקרו-משקעים (בקיצור MR, RMP), לרוחב הכיסוי של בדיקות רפואיות של קבוצות אוכלוסייה שונות .

    זה מבוצע עם אנטיגן קרדיוליפין וחומרי עזר. היתרון שלו הוא איסוף דם היקפי למחקר. זה מאיץ באופן משמעותי הן את הטכניקה עצמה והן את עבודתם של עוזרי מעבדה.

    איור 2 - תגובת מיקרו-משקעים (סכימה)

    MR דורש פלזמה או סרום מומת של המטופל (הם מכילים נוגדנים). לאחר מכן, הפלזמה ממוקמת בבארות המסומנות. לאחר מכן, מוסיפים טיפת אנטיגן קרדיוליפין לחומר הבדיקה, מערבבים ומנערים. כתוצאה מכך מופיעים פתיתים אופייניים בסרום של האדם הנגוע, בעוצמתם משתנים.

    זוהי בדיקת איכות. הכימות משתמש ב-10 דילולים של סרום הממוקמים ב-10 בארות שסומנו כראוי. ב-MR איכותי, התגובה מצוינת בצורה של הצלבות (פלוסים) או מינוס, ב-MR כמותי מצוין כיטר הנוגדנים (1:2, 1:4 וכן הלאה).

    נוכחותם של פתיתים נחשבת כתגובה חיובית או חיובית חלשה. הופעתו של פלקולטה אפשרית גם בהיעדר מחלה, לכן, ההערכה הסופית של התוצאה המתקבלת מתבצעת לאחר מחקר בקרה או תגובות אחרות (RIBT, RIF, ELISA, RPHA).

    9. VDR

    השיטה המומלצת על ידי ארגון הבריאות העולמי ליצירת תגובה עם אנטיגן בעל אופי ליפואידי (AH) נחשבת בצדק לטובה בין שאר הבדיקות הלא-טרפונמאליות הסטנדרטיות. פותח בארה"ב, ג'ורג'יה במעבדה למחלות מין (Veneral Diseases Research Laboratories).

    קיצור המוסד שימש כשם המדגם - VDRL. VDRL הוא שינוי של MP. סרום של חולה עם עגבת מושבת ומונח על שקף זכוכית. האנטיגן המשמש מורכב מקרדיוליפין, כולסטרול ולציטין באחוזים שונים. התשובה נרשמת כמעט מיד.

    קצף מובהק מתרחש בנוכחות נוגדנים בסרום. הסרום הופך לתגובתי 4 שבועות לאחר ההדבקה. כדי להעריך את כמות הנוגדנים, הסרום מדולל מראש באופן אקספוננציאלי.

    יתרונות VDR:

    1. 1 רגישות גבוהה יחסית;
    2. 2 ספציפיות גבוהה יחסית;
    3. 3 קלות היישום;
    4. 4 עלות נמוכה של ריאגנטים;
    5. 5 קבל תגובה מהירה.

    החיסרון של VDRL הוא שיעור חיובי שווא גבוה יחסית.

    הסיבות שלהם הן כולן אותן מחלות המפורטות לעיל.

    בדיקות טרפונמל מבוצעות עם אנטיגנים ספציפיים של Treponema pallidum. הם נחוצים וחובה לביסוס האבחנה הסופית. זוהי תגובה אימונופלואורסצנטית (RIF), תגובת המאגלוטינציה עקיפה (IPHA), בדיקת אנזים חיסונית (ELISA) וכו'.

    לאחר תוצאה חיובית של בדיקה לא טרפונמלית (RPR, MP, VDRL), יש לבצע תמיד בדיקות טרפונמל (לעתים קרובות יותר שילוב - RPHA, ELISA, RIF).

    בדיקות טרפונמל קשות יותר לביצוע מבדיקות מהירות ועולות יותר כסף.

    10. RIF

    תגובה זו (בקיצור RIF) משמשת לאבחון עגבת, כולל צורות סמויות, ולבדיקה חוזרת של דגימות חיוביות ושגויות.

    RIF מבוסס על זוהר של נוגדנים מסומנים בשילוב עם קומפלקס אנטיגן-נוגדנים מתחת למנורת קוורץ. השיטה החלה להיות בשימוש בשנות ה-60 והיא התבלטה בקלות היישום שלה ובסגוליות גבוהה (שנחותה מעט מ-RIBT).

    יש לו מספר שינויים: RIF-10, RIF-200 ו-RIF-abs.

    ה-RIF הרגיש ביותר בדילול הוא פי 10, והשאר ספציפיים יותר. RIF מתבצע בשני שלבים. סרום הדם של המטופל מתווסף ל-AG. נוצר מתחם AG-AT, אשר נחקר בשלב הבא. הקומפלקס המסומן עם פלואורכרום מזוהה לאחר מכן במיקרוסקופיה. אם לא נצפה זוהר, זה מצביע על היעדר נוגדנים ספציפיים בסרום הדם.

    RIF-200 הוא היקר ביותר מבין כל הדילולים. השיטה נועדה לאבחן צורות שונות של עגבת, במיוחד עגבת סמויה, ולבדוק מחדש דגימות חיוביות.

    11. RIBT

    Treponema pallidum immobilization reaction (בקיצור RIBT, RIT) היא אחת הבדיקות הסרולוגיות המורכבות הדורשות מאמץ משמעותי ועלויות כספיות. משתמשים ב-RIBT פחות ופחות, אבל הרלוונטיות שלו נשארת באבחון של עגבת סמויה.

    יש לו חשיבות רבה בזיהוי תוצאות חיוביות כוזבות בנשים בהריון והוא מבוסס על אימוביליזציה של חיידקים בנוכחות אימוביליזינים - נוגדנים מאוחרים.

    התוצאה מוערכת על האחוז (%) של טרפונמה מקובעת באמצעות טבלה מיוחדת:

    1. 1 מ-0 עד 20 - בדיקה שלילית.
    2. 2 מ-21 עד 50 - בדיקה חיובית חלשה.
    3. 3 מ-50 עד 100 - תגובה חיובית.

    תוצאות חיוביות כוזבות אפשריות גם עם RIBT. אז, תשובה לא נכונה אפשרית עם זיהום עם טרפנמה טרופית, כמו גם עם שחפת, שחמת הכבד, סרקואידוזיס וחולים סניליים.

    12. RPGA

    בדיקת דם זו לעגבת נקראת בדיקת המגלוטינציה פסיבית (בקיצור דם ל-TPHA, TPHA).

    האנטיגן ל-TPHA מוכן מאריתרוציטים של ראם המצופים בשברי טרפונמה חיוורת (שמתקבלת מארנבות נגועים (ראה איור 4)). לצורך ניתוח, נעשה שימוש בדם ורידי (פלזמה או סרום מומת) של המטופל.

    כאשר מוסיפים אנטיגן לסרום של חולה עם עגבת, נוצר קומפלקס AG-AT שמוביל לאגלוטינציה של תאי דם אדומים. אגלוטינציה נקבעת באופן סובייקטיבי על ידי עוזר מעבדה.

    איור 3 - סכימה של RPHA (תגובת המוגלוטינציה פסיבית)

    המדגם מוערך כחיובי כאשר מופיעים אגלוטינים בעלי צבע ורוד אחיד. צבע המשקע באדום מעיד על שקיעת אריתרוציטים. RPHA הוא רגיש מאוד ומאוד ספציפי.

    12.1. תגובת מיקרו-המגלוטינציה

    זוהי גרסה פשוטה של ​​RPGA. שונה מהדגימה שתוארה לעיל בכך שיש פחות אנטיגן, מדלל וסרום דם לביצוע התגובה. ניתן להעריך את הדגימה 4 שעות לאחר הדגירה בסרום. הוא משמש בהקרנה ובבדיקות המוניות לעגבת.

    13. בדיקת אנזים חיסונית

    בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים (בקיצור ELISA) מבוססת על תגובה ספציפית של אנטיגן-נוגדנים. חומר ביולוגי (סרום הדם של המטופל, נוזל מוחי) מוכנס לתוך הבארות, שעל פני השטח המוצקים שלהן קבועים אנטיגנים של טרפונמה חיוורת. חומר הבדיקה עובר דגירה, ואז נוגדנים שלא נקשרו לאנטיגנים נשטפים (ראה איור 5).

    זיהוי הקומפלקס המתקבל מתבצע בשלב התסיסה באמצעות סרום חיסוני המסומן באנזים. במהלך תגובה כימית, האנזים צובע את הקומפלקסים המתקבלים. עוצמת הצביעה תלויה בכמות הנוגדנים הספציפיים בדם המטופל ונרשמת על ידי ספקטרופוטומטר.

    איור 4 - סכימה של ELISA (בדיקת אימונו אנזימטית)

    רגישות ELISA היא יותר מ-95%. השיטה משמשת באופן אוטומטי לחקר קבוצות אוכלוסייה שנקבעו: תורמים, נשים בהריון ואחרות, כדי להבהיר את האבחנה במקרה של בדיקות חיוביות ושגויות שאינן טרפונמאליות.

    14. אימונובלוטינג

    אימונובלוטינג היא שיטה רגישה ביותר, שינוי של ELISA פשוט. התגובה מבוססת על אלקטרופורזה עם הפרדה של אנטיגנים טרפונמה חיוורים.

    חומרים חיסוניים מופרדים מועברים לנייר ניטרוצלולוזה ומוצגים ב-ELISA. לאחר מכן מדגרים את הסרום ונוגדנים לא קשורים נשטפים. החומר המתקבל מטופל באימונוגלובולינים המסומנים באנזים (IgM או IgG).

    15. הערכה קלינית של תוצאות אבחון מעבדה של עגבת

    בטבלה 1 להלן, הבאנו את התוצאות האפשריות של הניתוחים ואת פרשנותם. כפי שניתן לראות בטבלה, הערך העיקרי בפענוח הוא הערכה מקיפה של מבחנים.

    טבלה 1 - פענוח תוצאות תגובות סרולוגיות (בדיקות דם לעגבת). לחץ על הטבלה לצפייה

    תגובתיות הבדיקות מוערכת גם על ידי "צלבים":

    1. 1 התגובה המקסימלית (בדיקה חיובית מאוד) מסומנת על ידי 4 הצלבות.
    2. 2 דגימה חיובית מסומנת על ידי 3 הצלבות.
    3. 3 תגובה חיובית חלשה מסומנת על ידי שני הצלבים.
    4. 4 הצלב אחד מצביע על תוצאה מפוקפקת ושליליה.
    5. 5 תשובה שלילית מסומנת בסימן מינוס.

    הבעיה של אופטימיזציה של האבחון המעבדתי של עגבת לא איבדה את הרלוונטיות שלה עד היום. שיטות אבחון מודרניות, למרות רצונם של מדענים להביא את האבחון לרגישות ולספציפיות הגבוהות ביותר האפשריות, דורשות בדיקת בקרה וגישה פרטנית.

    תכונה של זיהום עגבת היא תופעת ה-seroresistance, שלא קיבלה הסבר מדעי. האבחנה נעשית לאחר בדיקה מלאה של החולה בשיטות אפידמיולוגיות, קליניות, מעבדתיות.

    על רקע ההתפתחות הכלכלית והטכנית של הרפואה, חלה התקדמות גם בפיתוח קריטריונים חדשים לאבחון עגבת. כל זה יאפשר לכם לטפל במהירות, בהצלחה ובדייקנות בחולים.

כעת נעשה שימוש בערכות בדיקה סטנדרטיות לביצוע RPGA.

יש להם את כל מה שאתה צריך לניתוח:

  • בקבוקון עם אריתרוציטים, אשר על פני השטח מכילים אנטיגנים של treponema חיוור של זן ניקולס.
  • אותה יכולת, אבל עם כדוריות דם אדומות "נקיות" (דרושות לשליטה).
  • תמיסת חוצץ לדילול הסרום של המטופל (נסביר להלן מדוע זה נעשה).
  • סרום מאדם שידוע שיש לו עגבת משמש גם כשליטה (K+).
  • סרום מאדם בריא ידוע (K–).
  • צלחת פלסטיק עם בארות ממוספרות לערבוב דגימות והערכת תוצאות.

כל ערכת בדיקה מכילה אספקה ​​של ריאגנטים לקביעת מספר מסוים של דגימות. בדרך כלל - 100. לכן, סרום נשמר לעיתים עד לאיסוף המספר הנדרש של דגימות למחקר.

טכניקת ניתוח RPGA

בדיקת המגלוטינציה פסיבית יכולה לספק שני סוגים של תוצאות:

  • אֵיכוּתִי.נותן תשובה לשאלה האם יש נוגדנים לפתוגן בדגימת הבדיקה.
  • כמותי.מאפשר להעריך את עוצמת הסינתזה של אימונוגלובולינים ובכך לעקוב אחר פעילות הזיהום.

ככלל, תחילה מתבצעת הערכה איכותית, ונבחרות דגימות חיוביות למחקרים כמותיים.

האלגוריתם לזיהוי פשוט של זיהום הוא כדלקמן:

  • מינונים שווים של דגימות בדיקה מתווספות לבארות הצלחת. לכל מטופל מוקצת שורה של שש בארות.
  • בשתי הטיפות הראשונות של הפלזמה שלו מדולל במאגר 1:20.
  • הזוג הבא משמש כפקד, מניחים בו סרום K+. ועוד שתי בארות לחומר K–.
  • לאחר מכן, אריתרוציטים המסומנים באנטיגן מתווספים לבאר הראשונה של כל זוג. בשני - האריתרוציטים נקיים.
  • הטבליה מנערת במשך זמן מה כדי לערבב היטב את הריאגנטים ונשארת לבד. המינימום הוא 45 דקות. זה יכול להיות כל הלילה.

התוצאות מוערכות ויזואלית. אם התגובה שלילית, האריתרוציטים מתיישבים בתחתית הבאר הכדורית.

זה אמור להתרחש בשתי בארות המכילות דגימות של מטופלים והן שבהן נוספו RBCs טהורים של בקרת מערכת בדיקה.

עם תוצאה חיובית, אריתרוציטים אינם מתאספים במקום אחד, אלא מופצים באופן שווה לאורך תחתית הבאר. תמונה דומה צריכה להיות כאשר אריתרוציטים המסומנים באנטיגן סטנדרטי מעורבבים עם דגימת מטופל וסרום K+. לפיכך, התגובה נשלטת, מה שמונע תוצאות כוזבות.

כימות של RPGA

דגימות עם תוצאה חיובית נלקחות ומדללות מספר פעמים בתמיסת חיץ (טיטרציה). לפני כל דילול, הסרום נשמט לתוך הבאר המתאימה של הטבליה ומעליו מצוינת מידת הדילול הכולל. לאחר מכן מוסיפים אריתרוציטים עם אנטיגן טרפונמה לדגימות ונקבע באיזה טיטר עדיין נצפתה תוצאה חיובית. זוהי בדיקת דם כמותית לעגבת RPGA, היא מראה את ריכוז הנוגדנים לפתוגן.

התוצאות מוערכות באופן הבא:

  • 4+ פירושו שאריתרוציטים מרפדים את תחתית הבאר בשכבה אחידה. הופעת קצה מקומט מעידה על ריכוז גבוה של נוגדנים בדגימת הבדיקה. התגובה חיובית.
  • 3+ נקבע אם העיגול ברור, אך חלק מהאריתרוציטים "מתנקזים" למרכז. התמונה דומה למטריה מורחבת, נחשבת לתגובה חיובית.

  • 2+ נראה כמו טבעת רחבה עם נטייה להתבהר במרכז. חיובי חלש.
  • 1+ פירושו תוצאה מפוקפקת. בתוך החור טבעת צרה. דורש חזרה תוך 1-2 שבועות.
  • בניתוח שלילי, תאי הדם האדומים יוצרים כפתור במרכז החור.

עם זאת, ישנם מקרים של עגבת עמידים לסירוסי, שבהם נראה שהמחלה נעלמה, והנוגדנים נמשכים זמן רב. לכן, RPGA דורש לפעמים אישור בשיטות אחרות.

אם אתה צריך לעבור RPHA ולעבור כל בדיקה לאיתור עגבת, צור קשר עם רופאי מין מוסמכים.

ניתוח RPHA הוא טכניקה שהיא אחת החשובות מבין בדיקות הדם האחרות. בעזרתו, אתה יכול לקבוע התפתחות של מחלות לא נעימות בעלות אופי מעיים זיהומיות. אבל לעתים קרובות הניתוח משמש כדי לזהות עגבת. למחקר דיוק ואמינות גבוהים.

RPHA מייצג תגובת hemagglutination פסיבית.

RPHA מבוסס על תופעת האגלוטינציה של אריתרוציטים, שבה אנטיגנים - ריאגנטים RPHA - נספגים על פני השטח כאשר מוסיפים להם סרום דם של חולה עגבת.

לאחר שילוב של סרום של אדם נגוע עגבת עם מגיב RPHA, מתרחשת אגלוטינציה (הצמדה או הדבקה) של אריתרוציטים והם משקעים. מידת ההידבקות תלויה ישירות בהצטברות ובצפיפות הנוגדנים בסרום הדם, מסיבה זו, RPGA עוזר לא רק לזהות נוכחות של נוגדנים, אלא גם לזהות את מספרם.

התוצאה מחולקת לזיהום ראשוני ומשני, המתבטא בביטוי של נוגדנים שונים. בראשי, IgM מופעל, במשני, IgG. הדיוק של המחקר לשלב השני הופך אפילו יותר ספציפי. אם בשלב הראשון מדובר על כ-96%, הרי שבשני הוא יכול להגיע עד ל-99%.

הניתוח טוב כמחקר עצמאי, אך עדיף להשתמש בו כשיטת אישור לאחר מחקר חיובי לא ספציפי.

בשל הדיוק הגבוה שלו, נעשה שימוש יותר ויותר בניתוח זה כדי לאשר או להפריך את הופעתו של חולה עם עגבת.

כמו כן, לאמינות רבה יותר, לאחר RPHA, ניתן לבצע בדיקת אישור נוספת, למשל, בדיקת אנזים "טרפונמל" חימונית.

באופן כללי, האבחון מתבצע תמיד בצורה מורכבת, לא באמצעות סוג אחד בלבד של בדיקה, אלא על ידי שילוב של שיטות משלימות שונות.

שאל את שאלתך לרופא לאבחון מעבדה קלינית

אנה פונייבה. היא סיימה את האקדמיה הרפואית של ניז'ני נובגורוד (2007-2014) והתמחות באבחון מעבדה קליני (2014-2016).

מינוס קטן או, ליתר דיוק, תכונה של הניתוח היא הרגישות שלו גם לאחר ריפוי המחלה. התוצאה נשמרת חיובית לאורך כל חייו של אדם שלקה בעגבת. מסיבה זו, RPHA אינו משמש לאבחון מחלה מוקדמת או מאוחרת. אי אפשר גם להשתמש בניתוח זה כדי לקבוע את יעילות הטיפול.

עם כל תוצאה חיובית, קיים חשד לזיהום. אבל מדי פעם יכולה להתרחש תגובה חיובית כוזבת. נכון, הנוכחות הכמותית שלו לרוב אינה עולה על 3% והיא נגרמת ממספר סיבות שאינן מדבקות.

בכל מקרה, יש לאשר את הניתוח על ידי מחקרים נוספים אחרים.

צפו בסרטון בנושא זה

כיצד מתבצע המחקר

דם נלקח בדרך הרגילה מוריד.

בדיקת דם שנערכה היטב מסייעת לאתר פתוגנים של מחלות מורכבות שונות בגוף כבר בשלבי התפתחותם המוקדמים, ולעיתים אף לפני הופעת התסמינים הקליניים של המחלה. לעתים קרובות מאוד, רופאים רושמים למטופלים ניתוח לתגובת צבירה. בהמשך נעסוק בעובדה שמדובר בבדיקת דם RPHA, מתי משתמשים בה ועל מה היא יכולה לספר?

עקרון הפעולה

תגובת ההמגלוטינציה העקיפה (הנקראת גם תגובת ההמגלוטינציה הפסיבית, הידועה גם כ-RPHA, RNHA) מתרחשת כאשר האריתרוציטים הסופחים את האנטיגן נחשפים לסרום חיסוני המתאים לאנטיגן זה.

מחקרים הראו ששיטה זו עדיפה משמעותית על בדיקות סרולוגיות אחרות בספציפיות וברגישות. לכן, הוא משמש לעתים קרובות כדי לזהות מחלות הנגרמות על ידי חיידקים או rickettsiae. תמציות חיידקים, אנטיגנים מטוהרים של חיידקים שונים, רכיבים של חיסונים חיידקיים יכולים לשמש כאנטיגנים לניתוח כזה.

לאחר כניסת חיידק פתוגני לגוף האדם, מתחילים להיווצר בו נוגדנים ספציפיים ולא ספציפיים, היוצרים תגובה חיסונית מסוימת. במקרה של עגבת, הנחשבת נגרמת על ידי treponema pallidum, מיוצרים בדם אנושי ספירושטה גרם שלילי, נוגדנים לא טרפונמלים או טרפונמלים. מחקרי אבחון מעבדה מבוססים על איתור שלהם, אשר אמור לאשר או להפריך את נוכחותו של הגורם הסיבתי של הנגיף בגוף.

עם RPHA, אריתרוציטים, שעל פני השטח שלהם נספחו אנטיגנים של טרפונמה חיוורת, במקרה של תוספת של סרום עם נוגדנים לטרפונמה מחומר של אדם נגוע בעגבת, נצמדים זה לזה, כלומר, מתרחשת הצבירה שלהם.

מהימנות המחקר

חשוב לזכור כי נוגדנים ל-palidum spirochete מתחילים להופיע בגוף של אנשים נגועים 2-4 שבועות לאחר ההדבקה, ובמקרים מסוימים ניתן להאריך תקופה זו עד 6 שבועות.

מסיבה זו, רגישות האנליזה ל-RPHA בשלב הראשוני של התפתחות המחלה היא כ-86%, וזה נחות משמעותית מהדיוק באבחון החולים בשני השלבים הבאים. רגישות הניתוח עבור חולים כאלה, כמו גם עבור נשאים של עגבת סמויה, מגיעה ל-99-100%.

עם זאת, לתגובה של המגלוטינציה פסיבית יש סגוליות גבוהה מאוד, המגיעה לרמה של 96-100%.

זה מאפשר להשתמש בבדיקה זו כדי לאשר את האבחנה במקרה של תגובה חיובית של מחקר ראשוני שאינו טרפונמלי, למשל, תגובה של מיקרו-משקעים של סרטן שלפוחית ​​השתן.

בהתחשב בכך שהרגישות של בדיקות טרפונמל, כולל TPHA, עולה באופן משמעותי על הרגישות של שיטות שאינן טרפונמל, בדיקות כאלה הפכו יותר ויותר לבדיקות סקר לאיתור עגבת. עם זאת, כאשר מתקבלת תגובת סקר חיובית, נדרשת ניתוח ספציפי נוסף (טרפונמל) להבהרת האבחנה, אך לא TPHA.

פענוח הניתוח

כאשר מוסיפים לריאגנט שבאמצעותו המחקר מתבצע סרום עם נוגדנים לטרפונמה מחומר של אדם נגוע בעגבת, מתרחשת אגלוטינציה של אריתרוציטים, וכתוצאה מכך הם משקעים.

מספר אריתרוציטים הנצמדים מושפע מרמת הנוגדנים בסרום. לכן, hemagglutination פסיבי לא רק מראה נוכחות של נוגדנים, אלא גם מאפשר לך להגדיר את מספרם. תוצאת המחקר מיוצגת על ידי רמת טיטר הנוגדנים.

תגובה חיובית מצביעה על נוכחות הפתוגן בגוף המטופל. עם זאת, במהלך תהליך האבחון עלולות להופיע תגובות חיוביות כוזבות, שמספרן סטטיסטית אינו עולה על רמה של 0.05-2.5% מסך המחקרים.

תגובה חיובית של TPHA אצל אנשים שאינם נגועים בעגבת עלולה להתרחש אם יש:

  • מחלות רקמת חיבור מערכתיות,
  • בדם של החולה נוגדנים לפתוגנים הדומים לטרפונמה חיוורת,
  • פתולוגיות פיזיולוגיות, כגון אוטם שריר הלב,
  • הפטיטיס B או C
  • מחלות אונקולוגיות,
  • טיפוס, לפטוספירוזיס, שחפת,
  • זיהום ב-HIV
  • אטיולוגיה של קרציות בורליוזיס,
  • פציעות או שברים נרחבים,
  • הֵרָיוֹן,
  • במקרה של הזרקות סמים.

ברוב המקרים, תגובות חיוביות כוזבות מלוות בטיטר נמוך. טיטר גבוה אופייניים לשלב המשני של המחלה ולעגבת סמויה בעבר. עם זאת, הם יכולים להופיע גם עם תגובה חיובית כוזבת בחולים עם ניאופלזמה ממאירה.

אצל אנשים שחלו בעגבת לפחות פעם אחת, התגובה של RPHA נשארת חיובית עד סוף חייהם.

חריגים נדירים הם אותם מצבים שבהם המחלה התגלתה בשלב מוקדם של התפתחות, ולאחר מכן בוצע טיפול אינטנסיבי ויעיל. לכן, לא ניתן להשתמש בניתוח של TPHA כדי להעריך את הדינמיקה של החלמה או אבחון השוואתי של שלבים מוקדמים או מאוחרים של המחלה.

עם קבלת תגובה חיובית, יש צורך לבחון בני משפחה של החולה ואנשים שקיימו עמו מגע מיני.

ניתן לקבל תגובה שלילית במקרים הבאים:

  • לאדם אין עגבת,
  • דם שנלקח בצורה לא נכונה למחקר,
  • 2-4 שבועות חלפו מאז ההדבקה, ועדיין לא החל ייצור הנוגדנים.

בכל מקרה, יש להעריך את תוצאת המחקר בשילוב עם אינדיקטורים מעבדתיים ואנמנסטיים נוספים.

למי מוצג הניתוח?

הרופא עשוי לכוון תרומת דם לחולי RPHA במקרים הבאים:

  • בנוכחות ביטויים קליניים של עגבת: פריחות כיבית, בלוטות לימפה מוגדלות, התקרחות מפושטת ואחרים,
  • אם אתה חושד בזיהום אפשרי במקרה של מגע עם אנשים שכבר חולים,
  • תורמים שמוכנים לתרום דם,
  • אנשים שעוברים בדיקות מניעה שנתיות או עורכים ספרים סניטריים,
  • חולים עם בדיקת סקר חיובית,
  • לפני הכניסה לבית חולים,
  • במהלך הבדיקה הטרום ניתוחית
  • לאיתור פתוגנים של סלמונלוזיס, דיפטריה, דיזנטריה בשיטת ביצוע RPHA עם האבחון המתאים.

הליך מחקר

דגימת דם ורידי המוגשת על ידי המטופל נשלחת לבדיקה. כדי לא להגיע למסקנה שגויה, על המטופל להיות אחראי להתכונן לניתוח. על מנת שתוצאות הבדיקה יהיו אמינות, יש לפעול לפי ההמלצות הבאות:

  • הניתוח צריך להיעשות רק על בטן ריקה.
  • ביום הניתוח ניתן לשתות מים מינרליים ללא גז בכמויות מינימליות.
  • אין לעשן לפחות 30 דקות לפני הבדיקה, אך עדיף להגדיל את הזמן הזה למספר שעות.
  • מוטל איסור ישיר על צריכת משקאות אלכוהוליים.
  • מטופלים שצריכים להשתמש באופן קבוע בתרופות כלשהן צריכים בהחלט ליידע את הרופא המפנה על כך.
  • אם אתם חשים ברע או חשים ברע, יש להודיע ​​לאחות שנוטלת את דגימת הדם או לרופא במרפאת החוץ שבה אתם צריכים לבצע את הבדיקה.

      • היו אחראיים לא רק לשאלה היכן לגשת למבחן, אלא גם להכנה לבחינה.

      אבחון של מחלות זיהומיות אחרות

      לא צריך לחשוב שמחקר כזה כמו RPGA יכול להתבצע רק כדי לזהות את הגורם הסיבתי של עגבת בגוף.

      ניתוח עם אבחון סלמונלה מאפשר לזהות נוכחות של זיהום במערכת העיכול - סלמונלה. החל מהיום הרביעי לאחר ההדבקה, הגוף מייצר נוגדנים לאנטיגנים של סלמונלה, אותם ניתן לאתר בשיטת RPGA. תוצאה שלילית מצביעה על היעדר זיהום, וטיטר חיובי, העולה מ-1:200 ל-1:800 בשלב החריף, יצביע על נוכחותו.

      שיטת ביצוע RPHA עם סמן דיפתריה מאפשרת אבחון דיפתריה והערכת חסינות לאחר חיסון. נוגדנים מתחילים להיווצר על ידי מערכת החיסון כבר למחרת לאחר ההדבקה, ונשארים בגוף למשך מספר שבועות. הרגישות של ניתוח זה עולה על שיטת המחקר הבקטריולוגית. טיטר 1:80 מאשר נוכחות של דיפתריה בגוף.

      הסמן הדיזנטרי ב-RPHA מזהה בצורה המדויקת ביותר שיגלוזיס (דיזנטריה בסילארית), גם בהשוואה לשיטת האבחון המעבדתית באמצעות תרבית חיידקים. אם החולה אינו מקבל טיפול איכותי, אז המחלה זורמת לתהליך כרוני, בו מתרחשות לעיתים קרובות הישנות. הניתוח מאפשר לאבחן את השלב החריף והכרוני של השלשול, לזהות את הגורם לדיזנטריה, להבחין בין שיגלוזיס חיידקי לסרטן המעי הגס, הפרעות אנדוקריניות או דלקת של המעי הגס. תגובה שלילית מצביעה על היעדר חיידק, ומאשרת את נוכחותו עם טיטר של 1:80 לתינוקות או 1:320 למבוגרים.

      ביצוע מחקר עם סמן חצבת מאפשר לקבוע את המחלה עם חצבת. בדיקה כזו יכולה להוות חלופה לניתוח HI המבוצע לעתים קרובות לאבחון חצבת.

      אז, בדיקת דם RPHA - מה זה? לסיכום, אנו יכולים לומר בבטחה כי זוהי שיטה מודרנית, רגישה ואמינה ביותר לאבחון מחלות שונות של אטיולוגיה בקטריולוגית.

      בקשר עם