בעת אבחון זיהום HIV, נעשה שימוש ב-4 קבוצות של שיטות:
1. קביעת נוכחות נגיף, אנטיגנים שלו או עותקי RNA בחומרים מחולי או נגוע ב-HIV
2. אבחון סרולוגי המבוסס על זיהוי של נוגדנים ספציפיים לחלבוני HIV על פני השטח (gp 120 ו-gp 41) ופנימיים (עמ' 18 ועמ' 24).
3. זיהוי שינויים פתוגנומוניים (ספציפיים) לזיהום ב-HIV במערכת החיסון.
4. אבחון מעבדתי של זיהומים אופורטוניסטיים (מחלות הקשורות לאיידס).
1. אבחון וירולוגי.החומר לבידוד HIV הוא לימפוציטים מסוג T בדם, לויקוציטים של מח עצם, בלוטות לימפה, רקמת מוח, רוק, זרע, נוזל מוחי ופלסמה בדם. החומר המתקבל משמש להדבקה של תרבית מתמשכת של לימפוציטים מסוג T (H9). אינדיקציה של HIV בתרבית תאים מתבצעת על ידי CPP (היווצרות של סימפלסטים), כמו גם על ידי אימונופלואורסצנטי, מיקרוסקופיה אלקטרונית, על ידי פעילות טרנסקריפטאז הפוך בולטת. שיטות מחקר מודרניות מאפשרות לזהות לימפוציט נגוע אחד לכל 1000 תאים.
זיהוי אנטיגנים ויראליים בלימפוציטים T נגועים מתבצע באמצעות נוגדנים חד שבטיים
בשנים האחרונות, קביעת מספר עותקי ה-RNA של HIV בפלסמה בדם בשיטת תגובת שרשרת הפולימראז (PTCR), מה שמכונה עומס נגיפי, הייתה קריטית לקביעת הפרוגנוזה והחומרה של הדבקה ב-HIV. אם בחולים שאינם מקבלים טיפול, העומס הנגיפי נמצא מתחת לגבול הזיהוי (פחות מ-5000 עותקים של HIV RNA ב-1 מ"ל פלזמה), הדבר מצביע על התקדמות או התקדמות איטית. מידת ההדבקה היא מינימלית. עומס נגיפי גבוה (יותר מ-10,000 עותקי RNA ב-1 מ"ל של פלזמה) בחולים עם פחות מ-300 לימפוציטים CO4 ב-1 µl תמיד מצביע על התקדמות המחלה.
2. אבחון סרולוגי.כרגע זה הפופולרי ביותר.
חומר לחקור: 5 מ"ל. דם המופרין, שניתן לשמור בקירור 6-8 שעות לפני המסירה למעבדה, אך לא להקפיא.
לצורך אבחון סרולוגי של איידס, נעשה שימוש בעיקר בשיטות בדיקת אימונוסורבנטיות מקושרות אנזים עם מבחני אימונוסורבנט סטנדרטיים (ELISA). זוהי שיטת מיון. עקרון הפעולה מבוסס על העיקרון הקלאסי של ELISA ישיר. אימונוסורבנט הם טבליות פוליסטירן עם אנטיגן מומת מומת ספציפי המתקבל מ-HIV או באופן סינתטי. לאחר מכן מוסיפים את הסרום הנבדק בדילול. הדגירה מתבצעת בבארות עם אנטיגן. לאחר קשירה של AG ל-AT, חלבונים לא קשורים נשטפים שלוש פעמים, ולאחר מכן מוסיפים לבארות צימוד של נוגדנים לאימונוגלובולינים אנושיים עם תווית אנזים. היווצרות קומפלקס AG + AT ספציפי מזוהה על ידי החדרת מצע לאנזים (תמיסה של אורתופנילנדיאמין ומי חמצן). כתוצאה מכך, צבע המדיום משתנה ביחס לכמות הנוגדנים. תוצאות המחקר נלקחות בחשבון בספקטרופוטומטר. יש לחקור עוד סרחי דם עם נוגדנים ספציפיים לווירוס לפי ELISA על ידי אימונובלוטינג.
סיכה חיסונית היא בדיקת אישור, שכן היא מזהה נוגדנים לחלבוני HIV שונים. הוא מבוסס על חלוקה ראשונית לפי משקל מולקולרי (הפרדה) של חלבוני HIV על ידי אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד ואחריו העברה של אנטיגנים לממברנת ניטרוצלולוזה. לאחר מכן מורחים את סרום הבדיקה על הממברנה. במקרה זה, נוגדנים ספציפיים יוצרים קומפלקס עם אנטיגן ספציפי (gp.120, gp.41, p.24, p.18). השלב האחרון של המחקר הוא איתור נוגדנים לחלבוני HIV שונים. לשם כך מוסיפים למערכת נוגדנים נגד חלבונים אנושיים המסומנים באנזים או בתווית רדיואיזוטופ. לפיכך, בסרום של המטופל, מתגלים (או לא מתגלים) נוגדנים ספציפיים לנגיף לכל או לרובם של אנטיגנים של HIV.
3. מחקרים על המצב החיסוני.מכוון לזהות:
1) ירידה ביחס של תאי CD4 / CD8 (ב-N 2 ו->, עם איידס - 0.5 ו<);
2) ירידה בתוכן של תאי CD4 (<200 клеток/мл.);
3) נוכחות של אחד מסימני המעבדה, לרבות אנמיה, לויקופניה, טרומבוציטופניה, לימפופניה;
4) עלייה בריכוז של Ig A ו-Ig G בסרום הדם;
5) ירידה בתגובה של פיצוץ גרנולציה של לימפוציטים למיטוגנים;
6) היעדר תגובת עור GTZ למספר אנטיגנים;
7) עלייה ברמת הקומפלקסים החיסוניים במחזור.
אבחון של זיהום ב-HIV בשלב מוקדם חיוני. מורכבות הטיפול והתפתחותם של סיבוכים פתולוגיים תלויים בכך. נכון להיום, ישנן שיטות מחקר חדשניות רבות לזהות אבחנה נוראה שכזו. זה מה שנדון בהמשך.
אילו שיטות קיימות לאבחון זיהום ב-HIV?
למעשה, ישנן שיטות רבות לאבחון HIV. בממוצע, הם מחולקים לתת-קבוצות - מחקר מעבדה, בדיקה דיפרנציאלית וחומרה. בנוסף, יש צורך לקחת בחשבון את השלבים של אמצעי אבחון. על כל זה ועל היבטים אחרים נדבר בפירוט רב יותר מאוחר יותר.אבחון מעבדה
שיטת האבחון הנבחנת דורשת מעבדה מתמחה במיוחד. בתנאים כאלה, ניתן לזהות את האינדיקציות הבאות:- נקבעים נוגדנים, אנטיגנים של פתוגנים ומתחמי חיסון.
- כאשר נגיף מתגלה, הוא עובר תרבית ומזהים חומר גנומי ואנזימים.
- הפונקציונליות של מערכת החיסון מוערכת.
- מתבצע מעקב וניטור אפידמיולוגי של שכיחות נגיף הכשל החיסוני האנושי.
- דינמיקת התפוצה נלמדת ונקבעת האוכלוסייה.
- ניתן לקבוע את מידת הבטיחות של השתלה ועירוי דם.
אבחון דיפרנציאלי
המחלה נבדלת מסיבות שונות:- בתסמינים הראשונים של הדבקה ב-HIV, שנמצאת בשלב ההחמרה, במיוחד אם יש תסמונת דמוית מונונוקלאוזיס. האבחנה מבוססת על פתולוגיות כגון מונונוקלאוזיס זיהומיות, עגבת, אדמת, אדנוווירוס, לוקמיה חריפה, ירסיניוזיס, היפרקרטוזיס.
- אם HIV עובר לשלב של לימפדנופתיה כללית בעלת אופי מתמשך, אזי מחלות מובחנות בהן בלוטות הלימפה גדלות. לדוגמה, לוקמיה לימפוציטית, עגבת, טוקסופלזמה, לימפוגרנולומטוזיס. בשלב זה, הסימפטומים של המטופל הופכים בולטים יותר.
- אם מתגלות פתולוגיות משניות, כשל חיסוני מובחן, אשר נוצר על רקע נטילת קבוצות מסוימות של תרופות - טיפול בקרינה, שימוש בתרופות גלוקוקורטיקוסטרואידים ותרופות ציטוסטטטיות. החסינות מופחתת משמעותית גם במחלות כמו מיאלומה, לוקמיה לימפואידית, ניאופלזמות אונקולוגיות וכו'.
- אם HIV הוא מקומי בחלל הפה, אז מחלות של רירית הפה מובדלות.
אבחון מהיר
עד כה פותחו אפילו בדיקות מהירות, שבזכותן, לאחר 15 דקות, ניתן לקבוע נוכחות של זיהום ב-HIV. יש כמה מִין:- הבדיקה המדויקת ביותר היא אימונוכרומטוגרפית. הבדיקה מורכבת מרצועות מיוחדות עליהן מורחים דם נימי, שתן או רוק. אם מתגלים נוגדנים ל-HIV, אז לרצועה יש צבע וקו בקרה. אם התשובה היא לא, רק הקו נראה לעין.
- ערכות לשימוש ביתי של OraSure Technologies1. מפתח - אמריקה. בדיקה זו אושרה על ידי ה-FDA.
- ישנן בדיקות מהירות נוספות, אך אין להן אישור של מומחים, ולכן אינן רצויות לבדיקה.
אם מתגלה תגובה חיובית לנגיף הכשל החיסוני האנושי, יש צורך לבצע בנוסף בדיקה מתאימה במסגרת קלינית.
אבחון מוקדם
אבחון מוקדם של HIV קיים על מנת לקבוע בזמן את הסיכונים לנזק חיסוני. בשל כך, המחלה נעצרת בשלבים הראשונים, וכתוצאה מכך הזיהום של איברים פנימיים אחרים מצטמצם למינימום.על מנת לאבחן באופן עצמאי את הפתולוגיה בשלבים המוקדמים, שימו לב לתסמינים הקיימים במקרה זה:
תגובת שרשרת פולימראז
PCR או תגובת שרשרת פולימראז משמשת לקביעת כל גורם זיהומי, כולל נגיף ה-HIV. במקרה זה, ה-RNA שלו מתגלה, וניתן לזהות את הפתוגן בשלבים מוקדמים מאוד (חייבים לעבור לפחות 10 ימים לאחר ההדבקה).זהו אבחון יקר למדי, אך במקרים מסוימים הוא יכול לתת תוצאה שקרית. לכן, בעת בדיקת HIV, נעשה שימוש נוסף בשיטות אחרות.
יש צורך בביטוי כמותי של תגובת שרשרת הפולימראז כדי לקבוע את קצב ההתפתחות של HIV וסיבוכים, כגון איידס. זה מאפשר לך לקבוע בזמן את הפרוגנוזה לתוחלת החיים של חולה נגוע ב-HIV.
סיכה חיסונית
סיכה חיסונית היא השיטה האחרונה לבדיקת מטופל לפני אבחנה מדויקת. הטכניקה מבוססת על שימוש ברצועה מיוחדת (ניטרוצלולוזה) עם חלבונים ויראליים. הרופא אוסף דם ורידי, ואז שולח אותו לעיבוד. לאחר תהליך זה, חלבוני מי גבינה מופרדים לחומר דמוי ג'ל המבוסס על משקל מולקולרי ומטען. לשם כך, נעשה שימוש בציוד עם שדה חשמלי פעיל. לאחר מכן, הרצועה שלעיל מונחת בג'ל הזה ומספיגת, כלומר, נתון לספיגה. זה מתבצע בתא מיוחד.התוצאה נקבעת על ידי קשירת חלבוני הדם לחלבונים המיושמים על רצועת הניטרוצלולוזה. אם קיים HIV בגוף החולה, אז קווים בודדים שקופים. ישנם אינדיקטורים מסוימים לזיהוי קווים המאותתים על נוכחות HIV. אבל יש גם מספרים נמוכים. במקרה זה, קיים סיכון להתפתחות השלב הראשוני של נגיף הכשל החיסוני האנושי, היווצרות גידולים אונקולוגיים, שחפת ועירוי דם.
מבחן ELISA
בדיקת ELISA מתייחסת לשיטת הבדיקה לבדיקת חשד ל-HIV. המחקר מתבצע במעבדה. שם נוצרים חלבוני מחלה ספציפיים המסוגלים ללכוד חלבונים המיוצרים על ידי גוף האדם. בעת אינטראקציה עם ריאגנטים, צבע המחוון משתנה. לפיכך, לא מתגלה הפתוגן עצמו, אלא נוגדנים לנגיף. בדיקה זו יכולה לזהות וירוס כשל חיסוני אנושי בשלבי התפתחות מוקדמים.ישנם מספר סוגים של בדיקות ELISA, אך נעשה שימוש רק בפיתוחים האחרונים - דור 3 ו-4. הטכניקה מבוססת על איסוף נוזל דם מוריד. יש הכנה מסוימת - המטופל לא אמור לאכול 8 שעות לפני הבדיקה. לכן, דם נאסף על בטן ריקה בבוקר.
כיצד מתבצעת האבחנה בתקופת הדגירה?
תקופת הדגירה של נגיף ה-HIV היא 90 יום. במהלך מרווח זה, קשה לזהות נוכחות של פתולוגיה, אך ניתן לעשות זאת באמצעות PCR.לאחר מכן, לאורך כל השנה, האדם נמצא בתשומת לב צמודה של רופאים ועובר בדיקות מרובות. רק לאחר תקופה זו ניתן לקבוע במדויק את האבחנה - HIV.
תכונות של אבחון בילדים
אם נולד ילד לאישה שאובחנה כחולה בנגיף כשל חיסוני אנושי, התינוק נבדק במהלך 3 השנים הראשונות לחייו. העובדה היא שהנוגדנים של האם יכולים להיות בנוזל הדם של התינוק בתקופה זו. אך יחד עם זאת, אפילו בדיקות דם אינן מאשרות זיהום. כמובן, ישנם מקרים רבים בהם המחלה מתבססת מיד לאחר הלידה. למידע נוסף על הריון עם זיהום ב-HIV.הבדיקות הראשונות ל-HIV אצל ילד נלקחות ביום השני לאחר הלידה. לאחר מכן לאחר שהגיע לחודשיים, לאחר מכן כל 4 חודשים.
כדי לזהות פתולוגיה בילדות, נעשה שימוש בשיטות בדיקה סרולוגיות, PCR. סוג האבחון האחרון של המחלה הוא שמאפשר לזהות את ה-DNA וה-RNA של הנגיף בחודשים הראשונים לחייו של התינוק. לשם כך, נאסף דם מהתינוק, אשר מונח לאחר מכן במבחנה המכילה את החומר המשמר EDTA. יתר על כן, החומר מאוחסן במשך יומיים בטמפרטורה שאינה עולה על 8 מעלות. אבל הקפאת דם אינה מקובלת. ניתן להשתמש גם בנוזל דם יבש, המתקבל מדם מלא ומיובש.
שלבי האבחון
אמצעי אבחון לגילוי נגיף כשל חיסוני אנושי מתבצעים בשלושה שלבים עיקריים:- מיון מקדים, הלא הוא הקרנה.
- אבחון התייחסות.
- שלב אישור או אבחון מומחה.
הקרנה - מיון מראש
השלב המקדים של הבדיקה מאפשר לקבוע את סך הנוגדנים באמצעות אנזים immunoassay, כלומר, ELISA. ניתן לקבל מידע על הימצאות הנגיף כבר 3 חודשים לאחר ההדבקה. אבל היו מקרים של זיהוי הפתוגן בשלבים מוקדמים יותר - לאחר 3 שבועות.אתה צריך לדעת ש-ELISA יכולה, בתנאים מסוימים, לתת תוצאה חיובית שגויה. זה יכול להיות בתקופת לידת ילד, עם מחלות אוטואימוניות (פסוריאזיס, שיגרון, זאבת וכו'), מחלת אפשטיין-בר ופתולוגיות אחרות.
אבחון התייחסות
בשלב זה נעשה שימוש בבדיקות שונות לפחות פעמיים, לכל היותר שלוש פעמים. אם בשני מקרים התוצאה חיובית, נדרש שלב אישור.שלב האישור - מומחה
בשלב זה, האבחון מתבצע באמצעות סופג חיסון. נוגדנים נקבעים על פי חלבונים מסוימים של הפתוגן. התוצאה בדרך כלל מדויקת, אך ישנם מקרים של תגובה חיובית כוזבת. זה אפשרי עם השלב הסופני של התפתחות האיידס ובמהלך ההפוגה של מחלת ה-HIV. לכן, חשוב לעבור הליך נוסף לאחר זמן מסוים.שגיאות במהלך האבחון
פרדוקסלי ככל שזה נראה, ישנה אפשרות לקבל תוצאה חיובית כוזבת. זה קורה בדרך כלל במהלך בדיקות ביתיות, במיוחד במקרים בהם נעשה שימוש בבדיקות מהירות. בסביבה קלינית, זה אפשרי רק עם מחלות או מצבים מסוימים:
- תקופת ההריון;
- תגובה צולבת של הגוף;
- הפרעות פתולוגיות אוטואימוניות;
- הצטננות בשלב החריף;
- ניאופלזמות אונקולוגיות;
- שַׁחֶפֶת;
- טָרֶשֶׁת.
תכונה - אם אדם נגוע בווירוסים ופטריות, אז גם תוצאת הבדיקה עלולה להיות שקרית. זה נכון במיוחד במצבים אלרגיים.
הכנה לבדיקה
חשוב מאוד להקפיד על כללי ההכנה לבדיקת HIV, מכיוון שהדיוק של קבלת התוצאה תלוי בזה:- ראשית עליך לפנות למומחה המתאים כדי שיוכל לתת לך הנחיות מדויקות לגבי פעולות ההכנה.
- בדיקות דם נאספות תמיד על קיבה ריקה. לכן, לפני שאתה הולך למרפאה, אתה לא יכול לאכול כלום. הארוחה האחרונה שלך צריכה להיות לא יאוחר מ-21:00.
- אסור לעשן ביום הבדיקה.
- אין לשתות אלכוהול בלילה הקודם.
- אם אתה נוטל תרופות כלשהן, הקפד להתייעץ עם הרופא שלך לפני כן. מכיוון שתרופות רבות אסורות לפני ביצוע בדיקות HIV.
- לא מומלץ לבצע בדיקת אולטרסאונד מספר ימים לפני איסוף הניתוח.
- לא כדאי לאכול מזונות שומניים יתר על המידה ולצרוך הרבה ממתקים יום-יומיים לפני ההליך.
אבחון של זיהום ב-HIV (וידאו)
אתה יכול ללמוד עוד על שיטות אבחון HIV השונות מאנשי מקצוע מוסמכים. כדי לעשות זאת, צפו בסרטון הבא.מיוצר בכמה דרכים שונות. נראה שאין דבר קל יותר מאשר לזהות את המחלה הזו באמצעות דגימת דם, לא. אבל זה לא כך. את האבחנה של HIV אכן ניתן לזהות בצורה זו, אך מחקר נוסף מתבצע בשיטות שונות. זה תלוי במידה רבה בהם איזה טיפול יירשם למטופל, ואילו אמצעים יינקטו לאחר מכן. בין השיטות הנפוצות והיעילות ביותר, נהוג לייחד ניתוח סקר וספיגה חיסונית. כל אחד מהם צריך להיחשב ביתר פירוט.
אבחון איידס: ניתוח סקר
ניתוח סקר או שיטת מחקר ELISA משמשת בשלב הראשוני של אבחון זיהום HIV. במהלך פיתוח שיטה זו נוצרו חלבוני וירוס באופן מלאכותי במעבדה. הם מגיבים בצורה מיוחדת לנוגדנים. האחרונים מיוצרים בגוף כאשר מופיעים בו תאים נגועים במחלה איומה. אבחון מעבדה של HIV במקרה זה מתבצע באמצעות אנזימים מלאכותיים. באינטראקציה עם נוגדנים, הם מוכתמים בצבע מסוים. רצועה עם מחוון, לאחר קבלת דם עליה, מונחת מתחת למנגנון מיוחד, שבעזרתו ניתן לקבוע אם לאדם יש מחלה זו או לא. שיטות מודרניות לאבחון HIV, כולל ELISA, מאפשרות לקבוע את עובדת הזיהום או היעדרו בדיוק גבוה. אבל, כמו כל טכנולוגיה, במנגנון לניתוח מיון יש שגיאה. לכן, במידת הצורך, הניתוח נלקח מחדש על ידי המטופל.
חשוב לדעת כי בדיקת ELISA היא אחת השיטות המוקדמות ביותר לקביעת הימצאות נגיף כשל חיסוני בגוף. הידבקות ב-HIV היא אבחנה שניתן לזהות רק מספר שבועות לאחר ההדבקה. כאשר תאים נגועים חודרים לזרם הדם, המערכת החיסונית של הגוף מתחילה להתנגד באופן פעיל. נוצרים נוגדנים, שמתגלים בבדיקת מעבדה לאחר שבועיים או שלושה. אבחון מוקדם של הידבקות ב-HIV באמצעות בדיקת ELISA מאפשר לזהות נוגדנים לנגיף הכשל החיסוני בדם אנושי. זהו ההבדל העיקרי שלו משיטות מודרניות אחרות.
ראוי לציין כי אצל אנשים מסוימים, נוגדנים למחלה זו מתחילים להיווצר במועד מאוחר יותר. מרגע ההדבקה ועד תחילת תהליך זה, זה יכול לקחת בין שלושה לשישה שבועות. לכן מומחים רפואיים ממליצים לבצע בדיקות סקר ארבעה עד חמישה שבועות לאחר יחסי מין לא מוגנים או סיבה אחרת לחשד לזיהום בשוגג.
שיטות לאבחון מעבדתי של זיהום ב-HIV על ידי ELISA פותחו במשך תקופה ארוכה. נכון להיום, ישנם ארבעה דורות של מבחנים. המדויקים והיעילים שבהם הם אלו שפותחו לאחרונה. אבחון מעבדה של זיהום ב-HIV ואיידס באמצעות בדיקות ELISA מהדור השלישי והרביעי מתבצע באמצעות חלבונים ופפטידים רקומביננטיים. הרגישות של בדיקות אלו לנוגדנים המיוצרים על ידי הגוף היא 92 - 93%. אנחנו מדברים על שיטות מחקר רוסיות. האירופים למדו לעשות בדיקות דומות ברגישות של 99%.
שיטות מודרניות לאבחון מעבדתי של זיהום ב-HIV המבוסס על ELISA משמשות לא רק כדי לזהות את נוכחות המחלה. בעזרת ניתוח סקר ניתן לעקוב אחר התפשטות נגיף הכשל החיסוני וכן לאסוף חומר בדיקה לפני נטילת דם מתורמים.
ELISA היא שיטה סטנדרטית לאבחון הדבקה ב-HIV: כיצד היא מתבצעת, מדוע היא נותנת תוצאה שקרית?
אבחון של HIV ואיידס על ידי ELISA הוא הליך סטנדרטי. הדם של החולה נלקח מוריד. חמישה מיליליטר של חומר מספיקים לניתוח. קלינית 
אבחנה של HIV מסוג 2 ו-1 מתבצעת לפחות שמונה שעות לאחר הארוחה. רופאים ממליצים לעשות את זה בבוקר על בטן ריקה. תוצאות המחקר המלא ידועות תוך יומיים או שלושה. ההקרנה המהירה מתבצעת בפחות זמן. בדרך כלל, זה לוקח רק כמה שעות. עם זאת, השגיאה במקרה זה גדלה. אבחנה מפורשת של HIV נחוצה במקרים חירום, למשל, כאשר מטופל זקוק לניתוח דחוף. ניתוח כזה מבוצע בהכרח לפני התערבויות כירורגיות לא מתוכננות, מכיוון שאם למטופל יש וירוס של כשל חיסוני, הרופאים מקפידים על אמצעי אבטחה מוגברים. אבחון קליני של זיהום ב-HIV בפרק זמן קצר נחוץ גם במקרה שבו יש ליטול דם מהתורם במהירות כדי להציל חולה אחר.
ישנם מקרים שבהם אדם אובחן כחולה איידס או HIV, וכתוצאה מכך הוא לא אושר, או להיפך. מדוע זה קורה במקרה של בדיקת ELISA? תוצאה שלילית כוזבת עשויה לנבוע מהעובדה שהדם לא הוכן כראוי למחקר. לפעמים הסיבה לכך היא ביצוע לא נכון של הגדר שלו. תוצאה שלילית כוזבת באימות האבחנה של זיהום ב-HIV אינה מאושרת גם אם החומרים למחקר נלקחו מוקדם מדי. אחרי הכל, לאחר ההדבקה היה צריך לעבור לפחות שלושה שבועות. ישנם מקרים שבהם התוצאה של גילוי נגיף הכשל החיסוני היא חיובית שגויה. זה נובע מהמצב הכללי של המערכת החיסונית וההורמונלית של גוף האדם. ברוב המקרים, למטופל יש מחלות שהן תוצאה של תוצאה חיובית כוזבת. אנחנו מדברים על דלקת כבד אלכוהולית, שבה הכבד מייצר אנזימים מיוחדים, שיכולים להוביל לאבחנה לא נכונה של HIV. הריון ומחלות אוטואימוניות מסוימות, יחד עם מיאלומה נפוצה, עלולים גם הם לגרום לתוצאה חיובית כוזבת. רשימה זו עשויה לכלול חולים בדיאליזה ואנשים שחוסנו זמן קצר לפני האבחנה המבדלת של HIV.
אם כבר מדברים על ניתוח מיון, חשוב לציין ששיטת מחקר זו דורשת אישור. רופאים, לפני ביצוע אבחנה של HIV על בסיסו, תמיד שולחים את המטופל לניקוי חיסוני.
השיטות העיקריות לאבחון מעבדתי של זיהום ב-HIV: סופג חיסון
איידס, שהאבחון והטיפול בו קשורים זה לזה, מתגלה בכמה דרכים בו-זמנית. כאמור, בדיקת ELISA אחת אינה מספיקה כדי לקבוע סופית את האבחנה. אבחנה מבדלת של זיהום ב-HIV במקרה זה מתווספת על ידי ספיגה חיסונית. ברפואה המודרנית היא נקראת שיטת האבחון המאששת הסופית. למחקר במקרה זה, משתמשים בחלבונים הכלולים בדם המטופל. הם מופרדים בג'ל מיוחד, ולאחר מכן יש לעובדי המעבדה הזדמנות ללמוד את ההרכב המולקולרי של הדם.
העיתוי של אבחון HIV בשיטה זו הוא בין יום לשלושה ימים. לצורך מחקר לוקחים דם מהוריד הנבדק, אותו מניחים על בודק עם ג'ל. התוצאה, אשר מוטלת בספק, עלולה להתרחש במהלך ההריון, נוכחות של תהליכים אונקולוגיים, שחפת. תגובה שלילית כוזבת לבדיקה עלולה להתרחש אם המחקר מבוצע בצורה שגויה ואם הוא מבוצע מוקדם מדי. לפחות שלושה שבועות חייבים לעבור מרגע ההדבקה. אחרי הכל, אחרי איזה זמן מאובחן HIV, זה תלוי ישירות במצב החסינות.
שיטות אחרות לאבחון איידס ו-HIV
שיטות לאבחון קרינה באיידס משמשות, ככלל, בשלבים הסופיים או המשניים. בעזרתם ניתן לבסס שינויים המתרחשים בגוף עקב מחלות משניות או זיהומים אופורטוניסטיים.
אבחון ביו-תהודה של HIV, הנקרא גם סריקה לא ליניארית, משמש בעיקר במרפאות פרטיות לאיתור נגיף הכשל החיסוני. הרפואה הרשמית רואה בשיטה זו כלא מדויקת ויעילה מספיק. אולי שיפור האבחון הלא ליניארי בעתיד יאפשר לזהות את האבחנה הנוראה הזו כבר בתקופת הדגירה.
אבחון זיהום ב-HIV: שיטה סרולוגית ותכונותיה
מדובר בטכניקה חדשה יחסית שבה הקריטריונים המעבדתיים לאבחון זיהום ב-HIV מבוססים על עקרון האנטיגן-נוגדנים. במקרה של נגיף הכשל החיסוני, יש חיפוש אחר נוגדנים לנגיף בגוף האדם. לשם כך, נעשה שימוש באנטיגן שמקורו באופן מלאכותי, אליו חייבים להגיב נוגדנים. סמנים סרולוגיים ספציפיים של זיהום ב-HIV גורמים לשינויים ספציפיים בהרכב הדם. יש לציין כי שיטת מחקר זו יעילה ביותר בשלב האקוטי, המסתיים בהמרה סרוקית. אחריה מגיעה תקופה סמויה אסימפטומטית, שבמהלכה לא קל למצוא את האנטיגן.
אבחון התייחסות של זיהום ב-HIV: תיאור ותכונות
ערכי הייחוס של HIV נחשבים למדויקים ביותר בזיהוי האבחנה. שיטת מחקר זו משלבת בין בדיקת ELISA לבין סופג חיסון. מעבדת הייחוס לאבחון HIV מאפשרת דגימה ועיבוד לאחר מכן בשתי דרכים בו זמנית. זה מאפשר לך לקבל את התוצאה המדויקת ביותר תוך יום. בדיקה חוזרת של הניתוח שהתקבל במעבדת הייחוס נחוצה רק אם נתוני בדיקת ELISA והספיגה החיסונית סותרים זה את זה. זהו אירוע נדיר למדי, אשר מתרחש לרוב אצל אנשים עם מחלות נלוות שתוארו לעיל.
אבחון קליני ומעבדתי של זיהום ב-HIVיש שלושה כיוונים:
- ביסוס עובדת הדבקה ב-HIV, אבחנה של זיהום ב-HIV.
- קביעת שלב המהלך הקליני של המחלה וזיהוי מחלות משניות.
- פרוגנוזה של התקדמות המהלך הקליני של המחלה, מעקב מעבדתי אחר יעילות הטיפול ותופעות הלוואי של תרופות אנטי-רטרו-ויראליות.
1. ביסוס הדבקה ב-HIV, אבחנה של זיהום ב-HIV
כדי לקבוע זיהום ב-HIV, נעשה שימוש באינדיקטורים הספציפיים הבאים: נוגדנים ל-HIV, אנטיגנים של HIV, RNA של HIV ו-DNA פרו-וירוס. נוגדנים ל-HIV נקבעים על ידי בדיקת אנזים אימונו (ELISA) או immunoblotting, שהוא בעצם סוג של ELISA. אנטיגנים (חלבונים) של HIV נקבעים על ידי ELISA. בעזרת שיטות גנטיות מולקולריות של תגובת שרשרת פולימראז (PNR) ו-bDNA, ניתן לקבוע RNA HIV ו-DNA פרו-וירוס. השימוש בשיטה נוספת של הכלאה של חומצות גרעין עם בדיקות DNA ספציפיות מאפשר לך לבדוק את הספציפיות של רצפי DNA המתקבלים במהלך PCR. רגישות של PCR - זיהוי גנים ויראליים באחד מחמשת אלפים תאים.
במהלך זיהום ראשוני, נצפית הדינמיקה הבאה של סמני HIV בדם של הנדבקים. בחודש הראשון, כתוצאה מהפעלת תהליך השכפול, חלה עלייה חדה בעומס הנגיפי (תכולת ה-HIV RNA בפלסמה), לאחר מכן, עקב הפצת הנגיף וזיהום מסיבי של תאי מטרה בדם. בלוטות לימפה, זה הופך להיות אפשרי לקבוע DNA פרובירלי. ערך אבחוני עליון הוא העובדה של זיהוי של DNA פרו-וירוס המשולב בגנום של תא המטרה.
עומס ויראלי משקף את עוצמת תהליך השכפול בתאים נגועים. במהלך תקופת ההדבקה הראשונית, רמת העומס הנגיפי שונה כאשר נדבקים בתתי-סוגים שונים של HIV, אך הדינמיקה של השינויים שלו זהה בערך. אז, כאשר נדבקים בתת-סוג B, למשל, אם בחודש הראשון לאחר ההדבקה ערך העומס הנגיפי הוא 700 עותקים / מ"ל, אז בחודש השני יש ירידה ל-600, ב-3 - ל-100, ב הרביעי - עד 50 עותקים / מ"ל. דינמיקה כזו נצפית על רקע עלייה בתוכן של נוגדנים ספציפיים ל-HIV בדם. תכולת ה-DNA הפרובירלי בתאי הדם המונו-גרעיניים של נגועים ב-HIV מאופיין בקביעות יחסית במהלך 6 החודשים הראשונים עם תנודות קלות בתתי סוגים מסוימים. לפיכך, עומסי RNA ו-DNA אינם זהים.
במהלך שלב הדגירה, במשך זמן מה אין היווצרות נוגדנים ספציפיים ל-HIV בכמות המספיקה לקביעה בשיטות מעבדה קיימות. לפני גילוי נוגדנים נצפים לזמן קצר את הופעתו בדם של חלבון Nef המדכא את תהליך השכפול והחלבון המבני p24. ניתן לזהות את האנטיגן p24 בדם על ידי בדיקת אימונוסורבנט מקושר אנזים כבר 1-2 שבועות לאחר ההדבקה וניתן לקבוע אותו עד השבוע ה-8, ואז תכולתו יורדת בחדות. יתר על כן, במהלך הקליני של זיהום ב-HIV, מציינת עלייה שנייה בתכולת החלבון p24 בדם. זה נופל על תקופת היווצרות האיידס. היעלמותם של חלבוני הליבה p24 חופשיים (לא קשורים לנוגדנים) בדם והופעת נוגדנים ספציפיים לחלבוני HIV מסמנים את תחילתה של המרה סרוקית (איור 9.6).
וירמיה ואנטיגנמיה גורמות ליצירת נוגדנים ספציפיים מקבוצת IgM (אנטי-p24, אנטי-gp41, אנטי-gp120, אנטי-gp160). נוגדנים חופשיים של מחלקות IgM ו-IgG לחלבון p24 יכולים להופיע החל מהשבוע השני, תכולתם עולה תוך 2-4 שבועות, ומגיעה לרמה מסוימת, שנשארת למשך חודשים (IgM) ושנים (IgG) (איור 9.7 ).
הופעה של המרה סרוקית מלאה, כאשר רמה גבוהה של נוגדני IgG ספציפיים לחלבוני המבנה של HIV p24, gp41, gp120, gp160, מתועדת בדם ההיקפי, מקלה מאוד על האבחנה של זיהום ב-HIV. נוגדנים ל-HIV מופיעים ב-90-95% מהנדבקים תוך 3 חודשים לאחר ההדבקה, ב-5-9% - בתקופה שבין 3 ל-6 חודשים מרגע ההדבקה, וב-0.5-1% - במועד מאוחר יותר.
למרות העובדה שנוגדנים ל-HIV מופיעים אחרונים, האינדיקטור העיקרי לאבחון המעבדה עד כה הוא זיהוי של נוגדנים ספציפיים על ידי ELISA ואימונובלוטינג.
הנתונים המוצגים בטבלה 9.2 [הופעה] ו-9.3 [הופעה] , מדגימים בבירור את הרגישות הגבוהה של מערכות בדיקת ELISA מודרניות בזיהוי נוגדנים ל-HIV, אשר עולה על הרגישות של אימונובלוטינג. במקרים מסוימים, כאשר מקבלים תוצאה חיובית ראשונית ב-ELISA, ניתן לאשר אותה באימונובלוטינג רק לאחר 2-3 שבועות.
| טבלה 9.3. דוגמה לניטור המרת סירו (לפי H. Fleury, 2000) | |||||
| רגע של הגדרה | אנטיגן p24, pg/ml | נוגדנים לחלבוני HIV | |||
| ELISA, OD arr/OD cr ** | אימונובלוטינג | ||||
| HIV זוג | מסך Gen | מדים | |||
| מטופל 1 | |||||
| בְּרֹאשׁ וּבְרִאשׁוֹנָה | 17 | 1,24 | פחות מ 1 | פחות מ 1 | * |
| לאחר 4 ימים | 67 | 1,36 | 1,85 | פחות מ 1 | - |
| בעוד 7 ימים | * | 2,33 | 6,84 | פחות מ 1 | - |
| לאחר יומיים | * | 6,77 | 15,0 | 4,8 | gp160 |
| מטופל 2 | |||||
| בְּרֹאשׁ וּבְרִאשׁוֹנָה | 400 | 13 | פחות מ 1 | פחות מ 1 | - |
| בעוד 5 ימים | 450 | 18 | 2,11 | פחות מ 1 | - |
| לאחר 10 ימים | * | 33 | 12,19 | 2,9 | gp160 |
| הערה: * - לא נקבע ** - היחס בין הצפיפות האופטית של דגימת הסרום הנחקרת לערך הקריטי (הסף) של הצפיפות האופטית |
|||||
כאשר בודקים חולים עם הידבקות ב-HIV (נגועים ב-HIV) באמצעות מערכות בדיקת אימונובלוטינג של החברות המובילות בעולם, מתגלים נוגדנים ל-gp160 ו-p24/25 בכל המקרים, נוגדנים לחלבונים אחרים מתגלים ב-38.8-93.3% מהמקרים (טבלה 1). 9.4 [הופעה] ).
קשיים באיתור נוגדנים בחולים עם הידבקות ב-HIV עלולים להתעורר בתקופות של וירמיה ואנטיגנמיה מאסיבית, כאשר הנוגדנים הספציפיים הקיימים בדם קשורים לחלקיקים ויראליים, ותהליך השכפול הוא לפני ייצור נוגדנים אנטי-ויראליים חדשים. מצב זה עשוי לבוא וללכת במהלך התהליך הזיהומי.
בחולים עם מערכת חיסונית מוחלשת תחילה, וירמיה ואנטיגנמיה מופיעות מוקדם יותר ונשארות ברמה גבוהה עד לתוצאה של המחלה. לחולים כאלה יש תכולה נמוכה של נוגדנים חופשיים ל-HIV, משתי סיבות - ייצור לא מספיק של נוגדנים על ידי לימפוציטים B וקשירת נוגדנים על ידי ויריון וחלבוני HIV מסיסים, לכן, כדי לקבוע זיהום, בדוק מערכות עם רגישות מוגברת או שינויים של נדרשות שיטות ניתוח הכוללות את שלב שחרור הנוגדנים מתסביכי מערכת החיסון.
לרוב, ירידה בתכולת הנוגדנים ל-HIV מסיבות אלו מתרחשת בשלב הסופני, כאשר נוגדנים ל-HIV בנסיוב של החתך עלולים שלא להיקלט בשיטות אימונו-אסאי אנזימים, וגם לא ב-Immunoblotting (Western blot). בנוסף להופעת נוגדנים ספציפיים ל-HIV, התגובה החיסונית ב-4 החודשים הראשונים מאופיינת בירידה בתכולת CD4+ הנגועים בדם ובעלייה בתאי CD8+. יתר על כן, התוכן של תאים הנושאים קולטני CD4 ו-CD8 מתייצב ונשאר ללא שינוי למשך זמן מה. עלייה בתוכן של CD8-לימפוציטים היא תגובה מגנה, כי. ציטוטוקסיות תלוית תאים מתממשת על ידי CD8+-לימפוציטים, אשר מכוונים להרס של תאים נגועים ב-HPV. בתחילה, לימפוציטים ציטוטוקסיים (CTLs) מגיבים לחלבון הרגולטורי Nef של הנגיף, אשר ממלא תפקיד חשוב בהפחתת העומס הנגיפי (RNA) בפלסמה של אדם נגוע ב-HIV בחודשים הראשונים. לאחר מכן נוצרת תגובת CTL לאחרים, כולל. חלבונים מבניים של HIV, וכתוצאה מכך, 12 חודשים לאחר ההדבקה, ההשפעה cptotoxic עולה באופן משמעותי.
תוכניות לאבחון מעבדתי של זיהום ב-HIV
בהתחשב בדינמיקה הנתונה של סמנים ספציפיים של זיהום ב-HIV, בפועל רצוי לדבוק בסכימות הבאות לאבחון מעבדה במבוגרים (איור 9.8-9.10).
התוכניות משקפות את שלושת השלבים העיקריים של האבחנה העיקרית במעבדה של זיהום ב-HIV:
- סְרִיקָה.
- התייחסות.
- מוּמחֶה.
הצורך במספר שלבים של אבחון מעבדה נובע בעיקר משיקולים כלכליים. כך, למשל, עלות ביצוע מחקר מומחה אחד בעזרת מערכות בדיקה ביתיות על ידי אימונובלוטינג היא עד 40 דולר ארה"ב, ההקרנה (על ידי ELISA) היא בערך 0.2, כלומר היחס הוא 1:200.
בשלב הראשון (איור 9.8) נקבעים נוגדנים ל-HIV בנבדקים באמצעות מערכת בדיקת אנזים אימונו-אסאי אחת שנועדה לזהות נוגדנים לשני סוגי הנגיף - HIV-1 ו-HIV-2.
יצרנים במערכות הבדיקה המוצעות משתמשים בליזט ויראלי, חלבונים רקומביננטיים, פפטידים סינתטיים כבסיס אנטיגני. לכל אחד מהנשאים הרשומים של גורמים אנטיגנים ל-HIV יש יתרונות וחסרונות משלו. לכן, בבחירת מערכות בדיקה בעלות שווה בערך, יש להעדיף ערכות בעלות הרגישות הגבוהה ביותר (רצוי 100%). בין מערכות הבדיקה בעלות אותה רגישות, רצוי להתעכב על אלו בעלות הספציפיות המקסימלית.
בהתבסס על lysate הנגיף, נוצרו מערכות הבדיקה הראשונות לאבחון מעבדתי של זיהום ב-HIV. בשנות ה-80, מערכות בדיקה כאלה אופיינו ברגישות של פחות מ-100% ובספציפיות נמוכה, המתבטאת במספר רב (עד 60%) של תוצאות חיוביות שגויות.
במהלך היווצרותו של ויריון בתרבית של לימפוציטים, המעטפת שלו נוצרת מהממברנה החיצונית ולכן מכילה אנטיגנים של קומפלקס ההיסטו-תאימות העיקרי של מחלקות I ו-II. מצב זה גורם לתגובות חיוביות שגויות במקרה שבו קיימים נוגדנים לאלואנטגנים של היסטו-תאימות בדם של חולים.
מאוחר יותר, כדי להשיג את הנגיף, הוצע להשתמש בתרבית של מקרופאגים, שבה חלקיקים נגיפיים נוצרים בעיקר תוך-תאיים על ידי ניצנים לא מהקרום החיצוני של התא, אלא מהקרומים של הרשת האנדופלזמית. טכנולוגיה זו הפחיתה את מספר התוצאות החיוביות השגויות.
מבחני אימונו של אנזימים מוכרים כאחד הטובים ביותר מבחינת המאפיינים החשובים ביותר - רגישות וסגוליות - במסגרתם שילוב של ליזאט ויראלי מטוהר עם פפטידים סינתטיים, שהם האזורים המשמעותיים ביותר לאנטיגן של חלבוני הנגיף, או נעשה שימוש בחלבונים רקומביננטיים.
רגישות מערכת הבדיקה תלויה גם במאפיינים של רכיבים אחרים של הערכות. לפיכך, מערכות בדיקה המשתמשות בצמודים המזהים נוגדנים לא רק של מחלקת IgG, אלא גם של IgM ו-IgA, מאפשרות לזהות שלב מוקדם יותר של המרה סרוקית. נראה מבטיח להשתמש במערכות בדיקה שיכולות לקבוע בו-זמנית גם נוגדנים אנטי-ויראליים וגם את האנטיגן p24, מה שהופך את האבחנה המעבדתית של זיהום HIV מוקדם יותר.
יש לבדוק מחדש תוצאה חיובית ראשונית על ידי בדיקה חוזרת של הדגימה באותה מערכת בדיקה, אך רצוי באצווה אחרת ועל ידי עוזר מעבדה אחר. אם מתקבלת תוצאה שלילית במהלך הבדיקה השנייה, הבדיקה מתבצעת בפעם השלישית.
לאחר אישור תוצאה חיובית, רצוי ליטול דם חוזר ולבדוק אם נוגדנים ל-HIV כראשוני. דגימת דם חוזרת עוזרת למנוע שגיאה הנגרמת מסימון לא מדויק של צינורות ומילוי טפסי הפניה.
סרום חיובי בשלב הסקר נשלח למחקרי התייחסות המבוצעים באמצעות שתיים או שלוש מערכות בדיקת ELISA ספציפיות ביותר. במקרה של שתי תוצאות חיוביות, מחקר מומחה מבוצע על ידי אימונובלוטינג.
השימוש במבחני אימונוסורבנט המקושרים לאנזים באבחון ייחוס, אשר ניתן להשתמש בהם כדי להבדיל נוגדנים ספציפיים ל-HIV-1 ול-HIV-2, מקל על המשך העבודה ומאפשר לך לבחון דגימה חיובית בשלב המומחה באופן מיידי תוך שימוש באימונובלוטינג המתאים ( HIV-1 או HIV-2).
חוות דעת של מומחה מעבדה על הדבקה ב-HIV ניתנת רק על בסיס תוצאת Western blot חיובית. בעת ביצוע אבחון מומחה, יש צורך להשתמש במינוח של גנים ותוצרי גנים של HIV שהוצע בשנת 1990 על ידי קבוצת מומחי WHO (טבלה 9.5 [הופעה] ).
יש להעריך את הספציפיות של הרצועות על האימונובלוט בקפידה ובזהירות רבה, תוך שימוש בתוצאות של מחקרים על סרחי ביקורת (חיוביים ושליליים), המתבצעים במקביל למחקר של דגימות ניסויים, ודגימת אימונובלוט עם הכינוי של חלבוני HIV (מצורף על ידי היצרן למערכת הבדיקה). יש לבצע את הפרשנות של התוצאות המתקבלות בהתאם להנחיות המצורפות למערכת הבדיקה. ככלל, הקריטריון לחיוביות הוא נוכחות חובה של נוגדנים לשני חלבונים (מבשר, חיצוני או טרנסממברנה) המקודדים על ידי הגן env, ונוכחות אפשרית של נוגדנים לתוצרים של שני גנים מבניים אחרים של HIV - gag ו-pol ( טבלה 9.6 [הופעה] ).
| טבלה 9.6. קריטריונים לפירוש לתוצאות אימונובלוט עבור HIV-1 ו-HIV-2 (WHO, 1990) | |||
| תוֹצָאָה | HIV-1 | HIV-2 | |
| חִיוּבִי | +/- להקות פול +/- פסי גאג | 2 נתיבים env (קדם, gp חיצוני או gp טרנסממברני) +/- להקות פול +/- פסי גאג |
|
| שלילי | חוסר להקות ספציפיות ל-HIV-1 | אין להקות ספציפיות ל-HIV-2 | |
| לֹא בָּטוּחַ | פרופילים אחרים שלא נתפסו כחיוביים או שליליים | ||
במקרה של קבלת תוצאה מפוקפקת, יש צורך להשתמש ברשימת ההמלצות לבירור הסופי של תוצאות האימונובלוטינג (טבלה 9.7 [הופעה] ).
| טבלה 9.7. המלצות להבהרה סופית של תוצאות אימונובליטציה בלתי מוגדרות (WHO, 1990) | |
| נוכחות של להקות התואמות לחלבוני HIV | פרשנות התוצאה, פעולות נוספות |
| HIV-1 | |
| רק עמ' 17 | |
| רק p24 ו-gp160 | תמונה חריגה כזו עלולה להתרחש בתחילת המרת סרוק. יש לבדוק מחדש את המדגם מיד. במקרה של קבלת אותו פרופיל, יש צורך לקחת דגימה שנייה לבדיקה באימונובלוטינג שבועיים לאחר נטילת הדגימה הראשונה |
| פרופילים אחרים | פרופילים אלו (גאג ו/או פול ללא env) עשויים להצביע על המרה סירובית או על תגובות לא ספציפיות. |
| HIV-2 | |
| רק עמ' 16 | ניתן לסווג כשלילי, אינו דורש הגדרות נוספות |
| I lane env עם או בלי gag/pol | יש לבצע בדיקה חוזרת של אותה דגימה באמצעות אצווה אחרת של ריאגנטים. |
| רק p24 או gp140 | פרופיל חריג זה עשוי להתרחש בשלב מוקדם של המרה סרוקית. יש לבדוק מחדש את המדגם מיד. במקרה של קבלת אותו פרופיל, שבועיים לאחר נטילת הדגימה הראשונה, יש לקחת דגימה שנייה לבדיקה באימונובלוטינג |
| פרופילים אחרים | פרופילים אלו (גאג ו/או פול ללא env) עשויים להצביע על המרה סירובית או על תגובות לא ספציפיות. |
על פי המלצות המרכז המדעי והמתודולוגי הרוסי למניעה ובקרה של איידס, תוצאה חיובית נחשבת אם יש נוגדנים לפחות לאחד מהחלבונים gp41, gp120, gp160 בשילוב עם נוגדנים ל-HIV-1 ספציפי אחר חלבונים או בלעדיהם. המלצות אלו מבוססות על ניסיון עם סרה מילדים ממוקדים נוסוקומיים, שבהם התגלו לעתים קרובות נוגדנים רק לאחד מחלבוני המעטפת הוויראלית.
החלק העיקרי של המטופלים שנבדקו בתחילה סרו-חיוביים ב-ELISA שייך לשלב של לימפדנופתיה מתמשכת (PGL) או לשלב האסימפטומטי. לכן, על אימונובלוט (רצועת ניטרוצלולוזה שעליה מקובעים חלבוני HIV), נקבע בדרך כלל השילוב הבא של נוגדנים ל-HIV-1: נוגדנים לחלבוני המעטפת gp160, gp120 ו-gp41 המקודדים על ידי הגן env, בשילוב עם נוגדנים ל חלבוני הליבה p24 (נוקלאוקפסיד חלבון המקודד על ידי הגן gag) ו-p31/34 (אנדונוקלאז המקודד על ידי הגן pol).
תגובות חיוביות עם חלבוני gag ו/או פול בלבד עשויות להתרחש בשלב המוקדם של הסירו-המרה וגם להצביע על זיהום שנגרם על ידי HIV-2 או תגובה לא ספציפית.
אם מתקבלת תוצאה מפוקפקת, אפשר להשתמש בטכניקות מתודולוגיות שונות כדי להבהיר את עובדת הדבקה ב-HIV.
בהתאם ליכולות הטכניות (זמינות ערכות אבחון וריאגנטים, ציוד עם ציוד מיוחד והכשרת כוח אדם), מעבדת המומחים עורכת מחקרי אבחון נוספים (איור 9.10).
במקרים מסוימים, רצוי להשתמש בשיטות גנטיות מולקולריות כדי לקבוע את הרצפים הגנטיים של HIV בנסיוב, בלימפוציטים בדם או בדקירות של בלוטות הלימפה. אימות הספציפיות של רצפי DNA המתקבלים באמצעות PCR יכול להתבצע על ידי הכלאה של חומצות גרעין עם בדיקות DNA ספציפיות.
ניתן להשתמש בשיטות רדיואימוניות (RIP) ושיטות אימונופלואורסצנטיות עקיפות (IFl) לאימות סופית של סרום עם תוצאות אימונובלוט מפוקפקות.
זיהוי של HIV RNA בפלזמה בשיטה איכותית או כמותית אינו משמעותי לאבחון של זיהום HIV. יש לאשר תוצאה כזו בשיטות סטנדרטיות, כגון אימונובלוטינג, 2-4 חודשים לאחר קבלת תגובה ראשונית מפוקפקת או שלילית.
הבידוד של HIV בתרבית תאים הוא האמת האולטימטיבית. עם זאת, השיטה מסובכת, יקרה ומבוצעת רק במעבדות מחקר מאובזרות במיוחד.
התוכן של תאי CD4+ בדם הוא אינדיקטור לא ספציפי, עם זאת, במקרים שנויים במחלוקת (ELISA "+", immunoblot "-", נוכחות של סימנים קליניים של זיהום HIV / איידס), זה יכול לשמש כקו מנחה לקבלת החלטת מומחה. אם למעבדה יש יכולת לבצע אימונובלוטינג בלבד, יש לפעול לפי ההמלצות הניתנות בטבלה 1. 9.7 ובאיור. 9.9.
אנשים שהסרה שלהם מעוררת תוצאות מפוקפקות (בלתי מוגדרות) בבדיקת מומחה, למעט מקרים של גילוי נוגדנים רק ל-p17 (HIV-1) או p16 (HIV-2), צריכים לעבור בדיקה חוזרת תוך 6 חודשים (לאחר 3 חודשים). במקרה של הידבקות אמיתית ב-HIV, לאחר 3-6 חודשים, נצפית מגמה "חיובית" בספקטרום הנוגדנים - יצירת נוגדנים נוספת לחלבונים אחרים של הנגיף. תגובה מזויפת מאופיינת בהתמדה של דפוס אימונובלוט מפוקפק במשך זמן רב או היעלמות של להקות חשודות. אם, לאחר פרק הזמן שצוין, התוצאות של חיסונים חוזרים ונשנים שליליות או נותרות בספק, אזי בהיעדר גורמי סיכון, תסמינים קליניים או גורמים אחרים הקשורים לזיהום ב-HIV, האדם יכול להיחשב כסירונגטיבי לנוגדנים ל-HIV- 1 ו-HIV-2.
תוצאות חיוביות כוזבות עקב התוכן בדם של חולים של נוגדנים לאלואנטגנים של היסטו-תאימות, שהם חלק ממעטפת ה-HIV, מופיעות על האימונובלוט בצורה של פסים ברמה של gp41 ו-gp31. הסיבות לתגובות לא ספציפיות אחרות (לדוגמה, ל-p24, שנמצאות לעתים קרובות אצל אנשים עם תהליכים אוטואימוניים) עדיין לא הובהרו.
שיפור הטכנולוגיה לייצור מערכות בדיקת ELISA אפשר להגיע לרגישות גבוהה - עד 99.99%, בעוד שהרגישות של שיטת האימונובלוטינג היא 97%. לכן, תוצאת אימונובלוט שלילית עם תוצאות ELISA חיוביות עשויה להצביע על תקופה ראשונית של המרה סרוקית המאופיינת ברמות נמוכות של נוגדנים ספציפיים. לכן, יש צורך לחזור על המחקר לאחר 1.5-2 חודשים, כלומר משך הזמן הנדרש להשלמת המרה סרוקית, כדי להשיג ריכוז של נוגדנים ספציפיים בדם המספיק לזיהוי באמצעות אימונובלוטינג.
תוצאה חיובית (תוצאות) של המחקר בשלב ההתייחסות או ההקרנה בלבד של אבחון מעבדה של זיהום ב-HIV, כלומר, תוצאה חיובית בכל מערכת בדיקת אנזים חיסונית, בסופו של דבר לא מאושרת על ידי שיטות מומחים, מתפרשת כנוכחות של צולב. -נוגדנים תגובתיים בדם של הנוגדנים הנבדקים. תגובתיות צולבת מתייחסת לקשירה של נוגדנים לאתרים לא ספציפיים על חלבוני HIV או פפטידים המשמשים כבסיס אנטיגני במערכת הבדיקה שבה מתקבלת תוצאה חיובית.
בהיעדר כשל חיסוני וסימנים קליניים של הידבקות ב-HIV, אנשים כאלה נחשבים כסירונגטיביים לנוגדנים ל-HIV ויש למחוק אותם.
האבחנה הסופית של זיהום ב-HIV נקבעת רק על בסיס כל הנתונים הקליניים, האפידמיולוגיים והמעבדתיים. רק לרופא המטפל יש את הזכות ליידע את המטופל על האבחנה של זיהום ב-HIV.
השיטה העיקרית לאבחון מעבדתי מאשר (מומחה) של זיהום ב-HIV היא אימונובלוטינג. עם זאת, לאור רגישותו הנמוכה בהשוואה ל-ELISA, מספר חוקרים הציעו שימוש בשילוב של מספר מערכות בדיקה לקביעה סופית של נוכחותם של נוגדנים ספציפיים ל-HIV. לדוגמה, G. van der Groen et al. הציע חלופה לשיטת אימונובלוטינג לבדיקת תוצאות חיוביות של שלב ההקרנה של אבחון מעבדה של זיהום HIV. מדובר בחקר החומר במקביל בשלוש מערכות בדיקה, המבוססות על שיטות שונות לאיתור נוגדנים ספציפיים ל-HIV (מספר גרסאות של ELISA, תגובת אגלוטינציה) באמצעות אנטיגנים בעלי אופי שונה. המחברים הצליחו לבחור שילובים כאלה של מערכות בדיקה, שהשימוש בהם מספק 100% רגישות וסגוליות בהשוואה לתוצאות שהושגו באימונובלוטינג.
העלות הנמוכה של שיטה זו של אבחון מומחים היא יתרון ללא ספק, עם זאת, חוסר המידע על אילו חלבונים ספציפיים של הנגיף קיימים נוגדנים בדם המטופל אינו מאפשר להעריך את הספציפיות של התגובה בכל מקרה לגופו. כמעקב אחר שינויים בספקטרום הנוגדנים בשלב מוקדם של המרה סרוקית.
לאבחון מעבדתי של זיהום ב-HIV בילדים שנולדו מאמהות נגועות ב-HIV יש מאפיינים משלו. מרגע הלידה, במשך זמן רב (עד 15 חודשים), נוגדנים אימהיים ל-HIV יכולים להסתובב בדמם של ילדים כאלה. רק אימונוגלובולינים מקבוצת IgG חודרים למחסום השליה, לכן, זיהוי של מופוגלובולינים ספציפיים ל-HPV של מחלקות IgM ו-IgA אצל ילד יכול לאשר זיהום, אך תוצאה שלילית לא יכולה להצביע על היעדר HIV.
לילדים מתחת לגיל חודש אין עדיין שכפול של HPV, ו-PCR היא שיטת האימות היחידה. קביעת אנטיגן p24 בילדים מעל גיל חודש היא גם שיטה מאשרת.
היעדר נוגדנים ל-HIV ביילודים לא אומר שהנגיף לא חצה את מחסום השליה. בכל מקרה, ילדים לאמהות נגועות ב-HIV נתונים לבדיקת אבחון מעבדה ותצפית במשך 36 חודשים מהלידה.
התוצאות של בדיקות מעבדה לסמנים של זיהום ב-HIV דורשות פרשנות מדוקדקת ויש לשקול אותן רק בשילוב עם נתונים מסקרים אפידמיולוגיים וקליניים. מצד שני, יש לציין שלמרות הרגישות הגבוהה של השיטות המודרניות, תוצאות בדיקה שליליות אינן יכולות לשלול לחלוטין את נוכחות הדבקה ב-HIV. לכן, תוצאת בדיקה שלילית, למשל, על ידי אימונובלוטינג, יכולה להיות מנוסחת רק כהיעדר נוגדנים ספציפיים ל-HIV-1 ול-HIV-2.
אבחון של זיהום ב-HIV בחולים סרוננגטיביים
איכות מערכות הבדיקה המשמשות באבחון מעבדתי של הידבקות ב-HIV משתפרת מדי שנה, ורגישותן עולה. עם זאת, השונות הגבוהה של HIV יכולה להוביל להופעת סוגים חדשים, שנוגדנים אליהם עשויים שלא להיות מזוהים על ידי מערכות בדיקה קיימות. בנוסף, ידועים מקרים של תגובה הומורלית לא טיפוסית של מערכת החיסון של האורגניזם המארח לנגיף. אז, L. Montagnier בשנת 1996 דיווח על שני חולי איידס שלא זוהו נוגדנים ספציפיים בדמם במהלך השנים הקודמות, האבחנה נעשתה על בסיס נתונים קליניים ואושרו במעבדה רק על ידי בידוד של HPV-1 בתרבית תאים. במקרים כאלה, יש צורך להשתמש בהמלצות ארגון הבריאות העולמי, לפיהן האבחנה הקלינית של זיהום ב-HIV במבוגרים וילדים מתאפשרת בנוכחות אחת מ-12 המחלות המגדירות איידס:
- קנדידה של הוושט, קנה הנשימה, הסימפונות, הריאות;
- קריפטוקוקוזיס מחוץ לריאה;
- cryptosporidiosis עם שלשול במשך יותר מחודש אחד;
- פגיעה בנגיף הציטומגלו באיבר כלשהו (למעט ובנוסף לכבד, לטחול ולבלוטות הלימפה בחולה מעל גיל חודש):
- זיהום הנגרם על ידי נגיף הרפס סימפלקס הנמשך יותר מחודש בחולה מעל לחודש;
- לימפומה מוחית בחולה מתחת לגיל 60;
- דלקת ריאות אינטרסטיציאלית לימפוציטית בילד מתחת לגיל 13;
- זיהום מפוזר הנגרם על ידי חיידקים מקבוצת Mycobacterium avium intracellulare או M. Kansassii;
- דלקת ריאות pneumocystis;
- לוקואנצפלופתיה מולטיפוקל מתקדמת;
- טוקסופלזמה של מערכת העצבים המרכזית בחולים מעל גיל חודש.
הימצאותה של אחת מהמחלות הללו מאפשרת לאבחן זיהום ב-HIV בהיעדר בדיקת דם מעבדתית לנוגדנים ל-HIV, או אפילו כאשר מתקבלת תוצאה סרונית שלילית.
מָקוֹר: אבחון מעבדה רפואית, תוכניות ואלגוריתמים. אד. פרופ' Karpishchenko A.I., St. Petersburg, Intermedica, 2001
רק בדיקות מיוחדות יכולות לזהות איידס. תהליך הבדיקה עצמו מורכב מאיתור נוגדנים המיוצרים על ידי הגוף בתגובה להופעת הנגיף. שיטות מעבדה לאבחון איידס כוללות ארבע בדיקות המשמשות לאיתור מחלה זו.
הראשונה - ELISA (בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים) היא שיטת האבחון הנפוצה ביותר. ניתוח זה יכול לקבוע את כמות הנוגדנים שהצטברו בגוף. זה בדרך כלל אפשרי רק אם נגיף נכנס לזרם הדם ועברו שלושה חודשים מאז. כפי שמראות תוצאות התרגול, אחוז אחד מהמקרים נותנים תוצאה שלילית שגויה או חיובית שגויה.
תוצאה שלילית כוזבת אפשרית אם עדיין לא פותחו נוגדנים לנגיף או אם האיידס נמצא בשלב הסופני, כלומר הנגיף קיים בדם, אבל יש כל כך הרבה ממנו עד כדי כך שנוגדנים ותאי CD-4 נעדרים כמעט. כדי לאמת תוצאה שלילית, אתה יכול לקחת שוב את ה-ELISA, אך רק לאחר 3 חודשים.
ברוב המקרים, תוצאה חיובית כוזבת נותנת סקר של חולים הסובלים ממחלות אוטואימוניות כרוניות, זיהומיות, אונקולוגיות ואחרות. תוצאות חיוביות כוזבות יכולות להופיע גם אצל נשים בהריון. לכן, כל תוצאה חיובית נבדקת בהכרח מחדש, אבל רק על האימונובלוט - זוהי בדיקה רגישה יותר.
אם תוצאת האימונובלוט חיובית, במיוחד לאחר תוצאת ה-ELISA, הרי שהאמינות היא 99.9%, וזהו הדיוק המקסימלי לבדיקה רפואית (וכל אחת).
השני הוא immunoblot (אימונובלוט מלא). בדיקה זו מזהה נוכחות של נוגדנים ספציפיים ל-HIV. במקרה זה, התוצאה שלילית, חיובית, מפוקפקת (זה נקרא גם בלתי מוגדר).
תוצאה מפוקפקת עשויה להצביע על כך ש-HIV קיים בזרם הדם, שעבורו הגוף טרם פיתח את כל מגוון הנוגדנים. במקרה זה, נוגדנים ל-HIV בסרום מופיעים לאחר 1-3-6 חודשים. בזה אחר זה, מהרגע שהושגה התוצאה המפוקפקת הראשונה. אם התוצאות מאושרות, אז זה מצביע על זיהום HIV בשלב הראשוני
תוצאה בלתי מוגדרת של בדיקה זו עשויה להצביע על ההפך. אין זיהום ב-HIV עצמו, אבל נוגדנים הדומים לנוגדנים ל-HIV חיים בגוף האדם. ככלל, תוצאה מפוקפקת מתרחשת אצל נשים בהריון, בחולי שחפת, בחולי סרטן, וגם אצל אלו שקיבלו עירוי דם (כלומר עירוי דם) שוב ושוב. חולה שתוצאת בדיקה זו הראתה אי ודאות נצפה על ידי מומחה למחלות זיהומיות במשך שישה חודשים ונבדק לאחר 1-3-6 חודשים.
השלישי הוא PCR (תגובת שרשרת פולימראז). אבחנה זו של איידס מאפשרת לקבוע את ה-DNA וה-RNA של הנגיף. זוהי תגובה רגישה ויעילה למדי, המאפשרת לקבל תוצאה על ידי בדיקת DNA. במקרה זה נלקח DNA מתא אחד ונבדק על ידי הכפלת רצפי ה-DNA האופייניים
מבחן זה חל:
- כדי לקבוע איזה וירוס נמצא בגוף (יש HIV 1 ו-HIV-2);
- לקבוע נוכחות של HIV או היעדרו;
- לקבוע ולנטר עומס ויראלי;
- כדי לקבוע את מצב ה-HIV של יילוד שנולד לאם נגועה ב-HIV.
בדיקה זו היא רגישה ביותר: היא יכולה לזהות את הנגיף גם אם חלפו כעשרה ימים מרגע ההדבקה המשוער. רגישות גבוהה זו של הבדיקה מגיבה גם לזיהומים אחרים, ולכן היא נותנת פעמים רבות תוצאות חיוביות שגויות. תוצאות בדיקה זו אינן הבסיס לאבחנה סופית.
ביצוע בדיקה זו דורש צוות רפואי מוסמך וציוד מעבדה משוכלל. זוהי בדיקה יקרה, ולכן היא אינה משמשת בבדיקת HIV בחינם.
הרביעי הוא מבחן מהיר. בדיקה זו משמשת בעיקר במקרים חירום - במהלך הלידה, מסיבות בריאותיות במהלך הניתוח. התוצאה של בדיקה מהירה מאושרת בדרך כלל על ידי בדיקת HIV שגרתית.