מחקרים סרולוגיים. בדיקת דם Rsk מה זה סוגי מחקרים סרולוגיים

שיטת האבחון הסרולוגית כוללת שימוש ב-2 תחומי מחקר: סרודאיגנוזיס (זיהוי נוגדנים ספציפיים בסרום הדם של הנבדק) וזיהוי סרו (קביעת התכונות האנטיגניות של הפתוגן המבודד על מנת לבסס את סוגו וסוגו).

ב- serodiagnosis, אגלוטינציה, משקעים, תמוגה, RSK, משתמשים בתגובות באמצעות אנטיגנים או נוגדנים מסומנים. המרכיבים של תגובות אלו הם: סרום דם של החולים הנבדקים ותכשירים אנטיגנים סטנדרטיים. מטרת המחקר היא לקבוע את טיטר הנוגדנים לפתוגנים של מחלות זיהומיות בסרה הנחקרת.

זיהוי של טיטרים גבוהים של נוגדנים ספציפיים, במיוחד אם הם מגיעים לרמה של מה שנקרא טיטר "אבחוני", מאשר את האבחנה המוצעת. חשיבות רבה מיוחסת לחקר הסרה הזוגית, כאשר סמים שנלקחו ממש בתחילת המחלה (יום 3-4) וסרה שהתקבלו ביום ה-7-10 למחלה עוברים טיטרציה בו זמנית. לערך האבחוני יש עלייה של פי 4 בטיטרים של נוגדנים.

בזיהוי סירו, נעשה שימוש בתגובת האגלוטינציה על זכוכית לעתים קרובות יותר מאחרות. מרכיבי התגובה: תרבית טהורה גדלה של הפתוגן (אנטיגן) וסרה חיסונית סטנדרטית של ארנבת (נוגדנים).

היתרון של השיטה הסרולוגית- פשטות, נגישות, רגישות גבוהה, ספציפיות, מהירות.

פגמים:הצורך בתרופות וציוד סטנדרטיים יקרים.

שיטה אלרגולוגית

שיטה זו כוללת זיהוי של רגישות של הגוף לגורם זיהומי מסוים, שהוא בעל ערך אבחנתי רב. ידוע כי מהלך של כמה מחלות זיהומיות מלווה בהיווצרות של רגישות יתר מסוג מושהה. בהקשר זה, מתן תוך עורי של מנות קטנות של האלרגן לחולים כאלה גורם לתגובה מתאימה מהגוף, הנגרמת על ידי מפגש חוזר עם האלרגן. התגובה ממשיכה לפי סוג מושהה, ובמקום הזרקת האלרגן מופיעים אדמומיות, נפיחות ולעיתים הסתננות (תגובה חיובית) לאחר 48-72 שעות. אם הגוף אינו רגיש, מתן תוך עורי לא יגרום לתגובה כלשהי מהגוף (תגובה שלילית). התעשייה מייצרת תכשירים מיוחדים לבדיקות עור אלרגיות: טוברקולין, דיזנטריה, ברוצלין, טולארין וכו'.

השיטה האלרגולוגית חשובה במיוחד במקרים בהם זיהוי הגורם הגורם למחלה זיהומית קשה או בלתי אפשרי (למשל עם צרעת) או כאשר זה לוקח זמן רב (למשל עם ברוצלוזיס). בדיקת השחפת משמשת בפועל לא רק למטרות אבחון, אלא גם לקביעת עיתוי החיסון מחדש של ילדים עם חיסון BCG, כמו גם לחקר חסינות קולקטיבית נגד שחפת.

יתרונות השיטה האלרגולוגית - הפשטות, האמינות, הביטוי שלה.

פְּגָם - שימוש מוגבל, מכיוון שלא כל המחלות הזיהומיות יוצרות רגישות יתר מסוג מושהה.

תגובות סרולוגיות באבחון

מחלות מדבקות

כיום, נעשה שימוש נרחב בשיטות מחקר אימונולוגיות לאבחון מעבדתי של מחלות זיהומיות ולא זיהומיות.

תגובות אינטראקציה בין אנטיגנים לנוגדנים נקראות סרולוגיות (סרום - סרום, לוגו - הוראה).

המהות של כל התגובות הסרולוגיות היא השילוב הספציפי של אנטיגנים והנוגדנים המתאימים להם ליצירת קומפלקס. תגובה סרולוגית אפשרית אם יש התאמה אימונולוגית (הומולוגיה) - המרכיבים העיקריים - אנטיגנים ונוגדנים. הספציפיות האימונולוגית מבוססת על ההשלמה המבנית של אנטיגן ונוגדנים.

תהליך האינטראקציה בין אנטיגנים ונוגדנים מתקיים בשני שלבים - ספציפי ולא ספציפי. השלב הראשון מתפתח במהירות. הוא מורכב מחיבור ספציפי של המרכז הפעיל של הנוגדן עם הקבוצות הקובעות של האנטיגן המקביל (ההומולוגי). השלב שלאחר מכן מתפתח לאט יותר, לא ספציפי - זהו ביטוי חיצוני של תגובת האנטיגן-נוגדן (אובדן פתיתים, עכירות של המדיום וכו')

בדיקות סרולוגיות משמשות לשתי מטרות:

1) לזהות נוגדנים בסרום הבדיקה באמצעות אנטיגנים ידועים (סרודיאגנוזה);

2) לבסס אנטיגן לא ידוע באמצעות סרה ידועה (זיהוי סירו).

קביעת אנטיגן לא ידוע במהלך מחקרים מיקרוביולוגיים מתבצעת על מנת לקבוע את הגנרי, המינים, סוג הפתוגנים המבודדים מהנבדק. במקרים כאלה, מבין שני המרכיבים העיקריים של התגובה (נוגדן, אנטיגן), האנטיגן אינו ידוע, התגובה חייבת להתבצע עם נוגדנים ידועים. במקרה זה, האנטיגן הוא תרבית טהורה של מיקרואורגניזמים המבודדים מחומר הבדיקה. סרה אבחנתית חיסונית משמשת כנוגדנים ידועים. אלה האחרונים מתקבלים מדם של חיות (לרוב ארנבות) שחוסנו בעבר באנטיגנים החיידקיים המתאימים. סרה חיסונית צריכה להכיל רמה גבוהה של נוגדנים ספציפיים.

בנוסף, ניתן להשתמש בבדיקות סרולוגיות לקביעת אנטיגנים שונים שאינם חיידקיים: להקמת קבוצות דם, אנטיגנים של רקמות, גידולים, לבחירת זוגות של תורמים-מקבלים בהשתלת איברים ורקמות וכו'.

בדיקות סרולוגיות יכולות לשמש גם לאיתור נוגדנים בסרום הדם. במקרים כאלה יש צורך באנטיגן ידוע (דיאגנוסטיקום). תרחיפים של חיידקים חיים או מומתים, תמציות או חלקים כימיים מבודדים מהם יכולים לשמש כאנטיגנים.

בדיקות סרולוגיות רבות המשמשות כיום בפרקטיקה רפואית נבדלות בתופעה החושפת את הקשר בין אנטיגן לנוגדן. הביטוי לכאורה של התגובה יהיה שונה בהתאם לאיזו טכניקה משתמשים, באיזה מצב פיזי משתמשים באנטיגן או בסרום החיסון, והאם משלים מעורב בתגובה. לדוגמה, אם נעשה שימוש באנטיגן גופי, מתרחשת תופעת האגלוטינציה - הידבקות של חלקיקים (תגובת אגלוטינציה). מכיוון שאנטיגנים חלקיקים מורכבים מחלקיקים גדולים יחסית, נוצר משקעים פלקטיים גלויים. אם נעשה שימוש באנטיגן מסיס בתגובה, נצפה במשקע עדין - משקע (תגובת משקעים). אם גם משלים מוכנס לתגובת האינטראקציה בין אנטיגנים חיידקיים וסרום חיסון, מתרחשת בקטריוליזה (התמוססות של אנטיגנים חיידקיים) או תמוגה של אריתרוציטים (כאשר הם משמשים כאנטיגן). השימוש בסרה חיסונית המסומנת בפלואורכרומים, אנזימים או רדיואיזוטופים בתגובות סרולוגיות מאפשר לבסס את הקישור הספציפי של אנטיגנים לנוגדנים בהתאם לתופעה המתאימה (זוהר, שינוי צבע או פעילות התווית הרדיואיזוטופי).

קריטריונים כמו ספציפיות ורגישות משמשים להערכת תגובות סרולוגיות. ספציפיות היא היכולת של אנטיגנים להגיב רק עם נוגדנים הומולוגיים. רגישות - היכולת לאינטראקציה ספציפית עם כמויות מינימליות של אנטיגנים ונוגדנים.

תגובת צבירה

תגובת האגלוטינציה (RA) היא אינטראקציה ספציפית של אנטיגנים עם נוגדנים, המתבטאת בהיצמדות אנטיגנים בהשפעת נוגדנים בסרום ובמשקיעתם בנוכחות אלקטרוליט. היה הראשון מבין התגובות הסרולוגיות המוצעות.

תכונה של תגובת האגלוטינציה היא שתאים או חלקיקים גופניים אחרים משמשים כאנטיגנים בניסוח שלה. התגובה מבוססת על יכולתם של אנטיגנים גופניים לשלב באופן ספציפי עם נוגדנים הומולוגיים של סרה חיסונית עם היווצרות משקעים בצורת גרגרים, פתיתים, גושים. התגובה מתרחשת רק בנוכחות אלקטרוליטים. אנטיגנים המשמשים בתגובה נקראים agglutinogens, נוגדנים נקראים agglutinins, והמשקע שנוצר נקרא agglutinate.

כאנטיגן בתגובת האגלוטינציה, ניתן להשתמש בתרחיף של תרביות חיות בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית או חיידקים שנהרגים על ידי פורמלין, אלכוהול או חימום, כמו גם אריתרוציטים, לויקוציטים או תאים אחרים.

מקור הנוגדנים הוא נסיוב האגלוטינציה הידוע המתקבל על ידי חיסון בעלי חיים באנטיגנים המתאימים, או בסרום של החולה הנבדק.

ישנן דרכים שונות להגדיר את תגובת האגלוטינציה. מבין אלה, הנפוצים ביותר בשימוש הם: תגובת אוריינטציה על זכוכית, צבירה מורחבת במבחנות, המאגלוטינציה ותגובות המגלוטינציה עקיפה (RIHA).

מידע דומה.

בדיקה סרולוגית, או במילים אחרות, ניתוח סרולוגי, היא חקר חומרים ביולוגיים במעבדה. ניתוח זה מאפשר לך לקבוע נוכחות של חיידקים פתוגניים באורגניזם הנבדק, או במוצרים שעוברים בדיקת בקרה.

שיטות אבחון סרולוגיות

מחקר של סרה או חפצים ביולוגיים אחרים (חלב, מרה, רוק, שטיפות של רירית המעי, כמו גם קופרו-חומרים) נותן מושג אמין למדי על תגובת הגוף להחדרת חומר זיהומי. יש לציין כי השימוש בשיטות מחקר סרולוגיות הוא לא רק בעל ערך אבחוני, אלא מספק מידע מהימן על רמת ההגנה על הגוף, מצב חסינות האוכלוסייה ומחזורם של סוגים שונים של נגיפי רוטה באזור הנחקר. התוצאות של סקרים סרולוגיים יכולים גם לספק מידע לייעול ההרכב האנטיגני של תרופות מניעתיות ולשמש להערכת היעילות האימונולוגית של חיסונים.

עם זאת, יש לציין שהצורך במחקר סרחי דם מזווגים הנלקחים במרווחים של 1.5-2 שבועות, והזמינות של שיטות אבחון מהירות מפחיתות את הערך האבחוני של תגובות סרולוגיות.

לכן, בדיקות סרולוגיות מסורתיות - מבחן קיבוע המשלים (CFR) ומבחן עיכוב ההמגלוטינציה (HIT), נמצאות כיום בשימוש מוגבל בלבד. אף על פי כן, הפשטות של שיטות אלה, הזמינות והזול של ריאגנטים הופכים אותן לעדיין ישימות במעבדה. ההגדרה של RSK ו-RTGA מתבצעת על פי שיטות מקובלות.

דוגמה לשימוש ב-RSK לחקר חסינות לאחר החיסון היא עבודתו של K. Midkhan (1989). בבדיקת סרומים של 116 ילדים בני 5 חודשים, נרשמו המרות סרו מהימנות, לפי RSK, ב-44% מהמקרים, ולפי תוצאות בדיקת הנטרול (PH) ובדיקת אנזים אימונו (ELISA) - ב-83 ו-96%, בהתאמה.

מחקר חסינות

על מנת לחקור את חסינות האוכלוסייה בעזרת CSC, בדקנו 1246 סרום של חולים עם OKZ בגילאי מספר חודשים עד 80 שנים ומעלה. הוכח שהטיטרים הגיאומטריים הממוצעים של נוגדנים מקבעים משלימים היו הגבוהים ביותר בקבוצות הגיל של 2-4 ומעלה מ-60 שנים, מה שמאשר את הנתונים הקודמים שלנו על השכיחות הגבוהה ביותר של זיהום רוטה בקרב אנשים מקבוצות גיל אלו.

בדיקת רוטה וירוס

RTGA משמש במחקר של זיהום rotavirus לעתים קרובות יותר מאשר RSK, וככלל, בשילוב עם בדיקות מעבדה אחרות. לפיכך, Andrade J. P. et al. השתמש ב-RTGA, immunoblot, בלוק ELISA כדי לחקור נוגדנים לחלבונים מבניים של rotavirus VP2, VP4, VP6 ו-VP7. על פי המחברים, בילדים מגיל שנתיים עד 4, נמצאו נוגדנים אנטי-המגלוטינריים ל-rotavirus ב-70-80%.

בהתאם לרמת הנוגדנים לחלבונים מסוימים, לפי RTGA, הכותבים זיהו 4 קבוצות של פרטים. קבוצות I ו-II (60%) כללו ילדים עם רמות גבוהות של נוגדנים ל-VP4 ו-VP7 וסווגו כ"אימוניות". קבוצה III (4%) כוללת אנשים עם רמות נמוכות של נוגדנים ל- VP7 ו- VP6, מה שמכונה "חסינות חלקית". ילדים מקבוצה IV (36%), שלפי RTGA לא התגלו בהם נוגדנים, הוגדרו כ"לא חיסוניים" והיוו קבוצת סיכון, שכן ביניהם אפשרי התפתחות של זיהום רוטה וירוס חמור. יש לציין כי בתצפית זו, מדדי הרגישות של RTGA ובלוק ELISA היו דומים למדי.

RTGA שימש שוב ושוב כדי לחקור את החלבון המבני VP4. מחקרים הראו שפעילות ההמגלוטינציה שלו מעוכבת באופן ספציפי על ידי אנטיסראים, ובכך מאשרים ש-VP4 הוא ההמגלוטינין של נגיפי רוטה. נתונים דומים פורסמו קודם לכן על ידי מ' יחזקאל (1995).

לפיכך, העבודות המוצגות מראות ש-RSK ו-RTGA עדיין נמצאים בשימוש בחקר הדבקה ב-rotavirus, עם זאת, שיטות אלו הן בעלות אופי עזר ויש לשכפל אותן על ידי בדיקות אחרות.

מבחני נטרול

תגובת הניטרול מבוססת על יכולתם של סרה חיסונית של בני אדם או בעלי חיים לנטרל את רביית הנגיף ובכך למנוע את הביטויים הקשורים לתופעה זו. בהתאם למודל הביולוגי, ביטויים אלה יכולים להיות: התפתחות של מחלה עם מרפאה ספציפית, רבייה ובידוד של הנגיף, ייצור של נוגדנים ספציפיים, כמו גם הופעת אפקט ציטופטי או היווצרות פצעונים בעת שימוש תרבית תאים.

מודלים מקרוביולוגיים משמשים כיום בעיקר ברפואה הווטרינרית, גילוי וירוסים בבני אדם מתבצע ברוב המקרים על תרבית תאים, ראשונית ועירוי. שיטות PH מחולקות לשתי קבוצות לפי סכימת ההגדרה העיקרית. בקבוצה אחת של שיטות משלבים סרום לא מדולל עם דילולים סדרתיים של הנגיף, בשנייה בודקים דילולים בסרום במינון קבוע של וירוס. כדי להגדיר תגובת נטרול, עדיף פתוגן הגורם להשפעה ציטופטית בולטת או משוכפל אינטנסיבי במודל ביולוגי.

עם זאת, למרבה הצער, ל-rotavirus יש השפעה ציטופטית קלה, שהוכחה בצורה משכנעת על ידי חוקרים בראשות B. Weber (1992). מחקר של 121 דגימות צואה מילדים עם OKI בשיטה הקלאסית של בידוד וירוסים על תאי MA-104 בשליטה של ​​CPP גילה רק 4 מקרים חיוביים (3.3%), בעוד השימוש בשיטות מודרניות לאיתור נגיפי רוטה (ELISA, PCR , EF ב-PAAG) אפשרו להעלות נתון זה ל-54.4%. לכן, כדי להגביר את הרגישות של PH, נדרשות טכניקות מתודולוגיות נוספות שיעזרו להמחיש את הפחתת הנגיף, המשמשות כ: תווית רדיואקטיבית או אימונופלורסנטית, היווצרות פלאק, צביעת אימונופראוקסידאז וכו'. יש לציין שעצם העיקרון של קביעת רמת הנוגדנים המנטרלים וירוסים זהה לשיטת ה-PH הקלאסית, שונה ממנה רק בדרך הרזולוציה, כלומר בהדמיה של פעילות מנטרלת הווירוס של הסרום. במקרה זה, הפעילות של הסרום נקבעת על ידי יכולתו לדכא את ביטויי התכונות המדבקות של הנגיף.

נכון לעכשיו, רוב המחקרים משתמשים בשתי שיטות למדידת כמות הנוגדנים המנטרלים וירוסים ל-rotavirus. אחת מהן מבוססת על ספירת מספר התאים הנגועים בווירוס בודדים (שיטת Plaq) שנקשרים באופן ספציפי לנוגדנים מצומדים פלואורסצנטיים. בבדיקה אחרת, רמת הנטרול של הנגיף נשפטת על פי הירידה בייצור האנטיגן הנגיפי על ידי אנזים immunoassay. מחקר השוואתי של שתי השיטות הראה קשר ליניארי בין מדדי ה-ELISA לבין מספר היחידות היוצרות פלאק עבור כל זן אב-טיפוס של סרוטיפ הרוטה: Wa, DS-1, P, VA-70. הנתונים המתקבלים מקלים על קביעת דילול הסרום המספק נטרול של 60% מהנגיף המדבק (טיטר נוגדנים מנטרל). התברר כי טיטרי נוגדנים בעת בדיקת חומרים בשתי השיטות זהים ושתי הבדיקות אינן שונות בשחזור התוצאות. יתרון מסוים של השיטה המשתמשת בנוגדנים המסומנים בפלואורסטין, לדברי המחברים, טמון באובייקטיביות רבה יותר של התוצאות (רישום אוטומטי) ובפחות עמל.

כדי למדוד את הטיטרים של נוגדנים מנטרלים וירוסים, נעשה שימוש ב-PH מתוקן גם על ידי חסימת ELISA עם נוגדנים חד שבטיים.

• מחקר של עוצמת הייצור של נוגדנים מנטרלים וירוסים (VNA) במהלך זיהום טבעי וחיסון;
• היווצרות VNA לחלבונים מבניים שונים של נגיפי rotavirus;
• הערכת תפקידם של סרת דם VNA ונוגדנים מפרישים של רוק ורירית מעיים בהגנה מפני זיהום טבעי (Ward R. et al., 1990, 1992, 1993, 1995, 1997).

לסיכום, יש להדגיש כי תגובת הנטרול בשינויים השונים שלה עדיין נמצאת בשימוש נרחב הן במחקרים ניסויים והן במחקרים קליניים, ובעלת רגישות וסגוליות גבוהות, משמשת כסטנדרט לכל שאר השיטות הסרולוגיות.

ניתוח משקעים

בדיקות משקעים מבוססות על אינטראקציה של סרום עם אנטיגנים ויראליים באמצעות תהליכים אוסמוטיים או בהשפעת שדה חשמלי במדיום ג'ל או סוג אחר של נשא. אחת מהשיטות הללו היא התגובה של נגד אימונואלקטרופורזה (VIEF). המחברים בחנו את סרימת הדם של מבוגרים וילדים בריאים וחולים עם שלשולים בנגיף רוטה, וכן תכשירי אימונוגלובולינים ספציפיים לנוכחות נוגדנים לנגיף רוטה אנושי בשיטת VIEF ב-7% אגרוז בתוספת 4% פוליאתילן גליקול. התברר כי נוגדנים ל-RV הסתובבו די נרחב ונמצאו במבוגרים חולים וילדים ב-90.2-87.7%, בהתאמה, וכן ב-78.4% מהילדים הבריאים מתחת לגיל שנה. כל 32 סדרות האימונוגלובולינים הכילו נוגדנים ל-RV בטיטרים 1:4-1:128. לדברי המחברים, השיטה מתאימה לחקר חסינות האוכלוסייה.

משקעים רדיואימוניים

טכניקת משקעים נוספת היא רדיואימוניות משקעים. המחברים השתמשו בשיטה זו כדי לחקור את התגובה החיסונית לחלבונים מבניים ולא מבניים בזיהום רוטה וירוס ראשוני והראו שהתגובה החיסונית הייתה בולטת יותר ל-VP4 מאשר ל-VP7.

כאשר חוקרים את התגובה האימונולוגית בסרום והתגובה ההפרשה לשימוש בחיסון רי-אסורנטי ארבע-ערכי בילודים. לשם כך, נעשה שימוש בטכניקת רדיואימונית יחד עם ELISA ו-PH. הוכח שהתגובה החיסונית בסרום תלויה במינון של האנטיגן הניתן; באשר לאיתור נוגדנים ברוק, המחברים מסבירים את הופעתם בצריכת חלב אם.

תגובת הרדיואימונית משמשת גם בעבודות מחקר משובחות. לפיכך, J. Tosser השתמש בשיטה זו כדי לחקור את הטופולוגיה של חלבון VP6 במבנה הגנום והציע כי VP 6 מעורב ביצירת תעלות קפסיד פנימיות.

חוקרים אחרים בשנת 1994 השתמשו גם הם בשיטה של ​​רדיואימוניות משקעים כדי לחקור שינויים אימונולוגיים בזיהום בנגיף הרוטה. המחברים הראו שבתקופה החריפה נרשמים בעיקר IgA ל-VP2 ו-VP6, בעוד שבתקופת ההבראה ירדה עוצמת היצור של נוגדנים מפרישים (IgA) לא רק ל-VP2, אלא גם לחלבונים מבניים ולא מבניים אחרים. . מאוחר יותר התקבלו נתונים דומים בשיטת הרדיואימונית. המחברים הראו כי בנוסף ל-VP4 ו-VP7, גם VP2, VP6 ו-NSP2 מעורבים בתהליך האימונולוגי.

לפיכך, נעשה שימוש באבחון חיסוני כדי לחקור את התגובה החיסונית בזיהום רוטה-וירוס טבעי.

בשנים האחרונות הוחלף משקעים חיסוניים בשיטת הרדיואימונית, המשמשת להערכת חסינות לאחר החיסון ולאחר זיהום בזיהום RV ולפיתוחים מחקריים משובחים.

שיטות הכלאה

שיטת האימונובלוט נמצאת בשימוש נרחב לקביעת נוגדנים לנגיפים רוטה. דוגמה לשימוש ב-Western-blot באבחון של זיהום ב-rotavirus היא עבודתו של H. Ushijima (1989), אשר, באמצעות אימונו-בלוטינג, אפיין את הספציפיות של נוגדנים לחלבוני RV מבניים ב-21 ילדים עם OKZ, כמו גם רמת נוגדנים משותפת של IgA ו-IgG לחלבונים אלו בילדים לא נגועים. הכותבים שיערו כי אימונובלוטינג יכול לאפשר לקבוע את האבחנה של המחלה על דגימה אחת של נוגדנים קופרו מבלי לבדוק סרחי דם מזווגים. האפשרות להשתמש ב-Western-blot כדי לקבוע את רמת הנוגדנים ל-VP1, VP2, VP4, VP6 ו-VP7 הוכחה על ידי Pavlov I. וחב' (1991). המחברים בדקו את סרחי הדם של בני אדם ובעלי חיים על נוכחותם של נוגדנים לזני rotavirus SA-11, DS-1, Wan Ito והגיעו למסקנה שניתן להשתמש בהצלחה ב-Western blot להערכת חסינות בתרגול קליני.

מאמינים שניתן להשתמש באימונובלוט כדי לאשר את האבחנה של זיהום בנגיף הרוטה ללא שימוש בסרה מזווגת עבור דגימה אחת של נוגדנים קופרו-נוגדנים.

יחד עם RTHA ו-ELISA, האימונובלוט שימש לחקר חסינות העדר. נמצאה קבוצה של אנשים שאינם חסינים בפני VP2, VP4, VP6 ו-VP7, המייצגים קבוצת סיכון, הדורשת בעיקר הגנה באמצעות חיסון אקטיבי ופסיבי (Andrade J. P. et al., 1996).

השימוש באימונובלוט במחקר של שינויים סרולוגיים בתהליך של זיהום טבעי ב-RV מצוין גם על ידי Begue R. et al. (1998). המחברים אישרו כי נוגדנים ל- VP2 ו- VP6 מעורבים לרוב בתגובה החיסונית לזיהום, ונוגדנים ל- VP7 ו- VP4 מעורבים פחות.

ניתוח אימונופלואורסצנטי

שיטה אימונופלואורסצנטי עקיפה תוך שימוש בסרה אנטי-מינים המסומנת בפלואורכרום משמשת לטיטרציה של סרחי בדיקה על תאים נגועים בנגיפים רוטה. התגובה מבוססת על אינטראקציה ספציפית של נוגדנים מסומנים ואנטיגן הומולוגי, בעוד שהקומפלקס של אנטיגן-נוגדנים מזוהה בקלות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

בשיטה זו ערכו המחברים סקר סרולוגי של שתי קבוצות של אינדיאנים מדרום אמריקה ומצאו אחוז גבוה של פרטים סרו-חיוביים בשתי הקבוצות: 67.8 ו-77.4% לפי ELISA ו-45.5 ו-56.7% לפי IFM, בהתאמה.

במחקר אחר על קביעת רמת הנוגדנים לקבוצת RV C בדם טבורי באמצעות IFM, הוכח כי 30% מהנשים בגיל הפוריות התגלו עם נוגדנים אלו, דבר המעיד על זיהום בעבר.

כיום נעשה שימוש ב-ELISA, יחד עם PH, באבחון סרולוגי של זיהום ב-rotavirus באופן נרחב ביותר. שיטה זו, המבוססת על שימוש בנוגדנים או אנטיגנים המסומנים באנזים, היא השיטה המתאימה והמבטיחה ביותר לאבחון סרולוגי של זיהום בנגיף הרוטה בשל קלות היישום והחסכונות שלה. השיטה מאפשרת לבצע סקרים סרופידמיים המוניים של האוכלוסייה, להעריך את היעילות האימונולוגית והאפידמיולוגית של חיסונים, לחקור את תפקיד ההגנה של נוגדנים ממעמדות שונים בנוזלים ביולוגיים שונים של גוף האדם, וכן לבצע אבחון סרולוגי של נגיף הרוטה. הַדבָּקָה.

מחקרים רבים באמצעות ELISA בוצעו על ידי R. Azeredo (1989), אשר הראו כי מספר החולים עם OKZ של אטיולוגיה מבוססת רוטה וירוס נמוך משמעותית מרמת הזיהום שלהם על פי תוצאות בדיקה סרולוגית. נתונים אלו מצאו שמקרים קליניים רבים של זיהום בנגיף רוטה אינם מאובחנים על ידי זיהוי של RV בצואה. מחקרים נוספים על השכיחות של זיהום בנגיף הרוטה אישרו הנחה זו. בעת עריכת סקרים סרופידמיולוגיים, נמצא כי ל-50-70% מהאוכלוסייה הייתה רמה גבוהה של נוגדנים, מה שמעיד על זרימת RV הנרחבת באוכלוסיית האדם.

הזדמנויות גדולות עוד יותר נפתחות על ידי ELISA בקביעת הדינמיקה של רמת הנוגדנים השייכים למחלקות שונות של אימונוגלובולינים. אז לפי מחברי המתודולוגיה ב-1989, הם טוענים שבמהלך תהליך החיסון נצפתה עלייה משמעותית בנוגדנים ל-RV בדם ב-83-96%. נוגדנים נגד וירוסים מסוג IgA ו-IgG זוהו היטב על ידי ELISA ו-PH על ידי הפחתת הפלזמה - 67.6 ו-70.0%, בהתאמה. המרה סרוקית של נוגדנים מסוג IgM זוהתה ב-53 ו-44% מהילדים על ידי ELISA ו-RSC, בהתאמה. בהתבסס על ניתוח עוצמת הייצור של נוגדנים ממחלקות שונות, החוקרים הגיעו למסקנה כי השיטה היעילה, הפשוטה והמהירה ביותר לאיתור המרות סרו לאחר חיסון היא השיטה של ​​זיהוי נוגדני IgA באמצעות ELISA.

מסקנה זו אושרה גם בעבודתו של ר' בישופ (1996), שהצביעה על כך שבהתבסס על תוצאות סקר של 68 זוגות אם-ילד שאובחנו עם זיהום RV, הוכח כי גילוי נוגדני IgA באמצעות ELISA ב חומרי צואה הם הסמן הרגיש ביותר, הן ביטוי קליני והן זיהום אסימפטומטי. תוצאות דומות בעת בדיקת ילדים עם שלשול RV חמור התקבלו על ידי J. Kolomina בשנת 1998.

עם זאת, כדי לחקור את עוצמת הסירו-המרות, יש צורך לחקור סרה זוגית, אשר מאריכה משמעותית את תהליך האבחון. יחד עם זאת, ידוע היטב כי הופעת נוגדנים מקבוצת IgM היא עדות להופעת התהליך הזיהומי. על פי הנתונים שלנו, שהתקבלו במהלך בדיקת חולים עם זיהום רוטה ב-ELISA ו-RSK, התברר כי על פי תוצאות ה-ELISA, כל הנבדקים מכילים בדמם נוגדני IgM ל-RV, בעוד שלפי RSK, רק 77% (ר

בשנים האחרונות, עם מימוש האפשרות לקבוע נוגדנים ספציפיים לגנים ולסרוטיפ, ELISA הפכה לשיטה אוניברסלית באמת לחקר זיהום בנגיף הרוטה, המשמשת:

• כאשר לומדים ייצור של נוגדנים של מחלקות IgA, M, G לחלבוני RV בודדים מבניים ולא מבניים;
• בהערכת היעילות האימונולוגית של סוגים שונים של חיסונים: מוחלשים, מותאמים לקור, מבוססי DNA, reassortant;
• כאשר לומדים את ייצור הנוגדנים בנוזלים ביולוגיים שונים של הגוף בתנאים של זיהום טבעי ובמהלך חיסון.

לפיכך, כדלקמן מהנתונים המוצגים, ההיבטים האימונולוגיים של זיהום רוטה נלמדים באמצעות מגוון רחב של שיטות מעבדה. כתוצאה מכך, הבחירה בשיטת המחקר האופטימלית, תוך התחשבות ברזולוציה, בעלויות הכלכליות והזמן, היא מסובכת למדי ותלויה במשימות העומדות בפני החוקרים, כמו גם בציוד המעבדה. ועדיין, מתוך מגוון השיטות, לדעתנו, יש לבחור שתיים - תגובת הנטרול בתרבית תאים ובדיקת אנזים אימונו- המספקת חקר נוגדנים לקבוצות שונות של אימונוגלובולינים. האפשרות לאבחון מפורש של זיהום רוטה קובע את ההבטחה המסוימת של שיטות אלה לשימוש בתרגול רחב.

תוכן העניינים של הנושא "שיטות לגילוי וירוסים. שיטות לאבחון מיקוזים (מחלות פטרייתיות). שיטות לגילוי פרוטוזואה.":

איתור נוגדנים אנטי-ויראליים (AT) בסרום הדם. RTGA. RSK. שׁוּנִית. שיטות אימונוסורפטיות לאיתור נוגדנים אנטי-ויראליים.

גישה פשוטה ומשתלמת יותר - זיהוי של נוגדנים אנטי-ויראליים (AT) בסרום. יש לקחת דגימות דם פעמיים: מיד לאחר הופעת הסימנים הקליניים ולאחר 2-3 שבועות. חשוב ביותר לבחון בדיוק שתי דגימות סרום. תוצאות מחקר בודד אינן יכולות להיחשב חד משמעיות בשל חוסר היכולת לקשר בין הופעת AT למקרה הנוכחי. יתכן שנוגדנים אלו מסתובבים לאחר זיהום קודם. במצב כזה, בקושי ניתן להפריז בתפקיד המחקר של הסרום שהושג במהלך תקופת ההבראה. נוכחות המחלה במהלך תקופת נטילת הדגימה הראשונה מעידה על ידי עלייה של פי ארבע לפחות בטיטר ה-AT, אשר זוהה במהלך מחקר הדגימה השנייה.

השיטות המפורטות להלן אינם מאפשרים בידול של נוגדנים(AT) נוצר במהלך מחלה ומסתובב לאחר החלמה (משך תקופה זו משתנה עבור זיהומים שונים). מכיוון שלצורך אבחנה מספקת יש צורך לאשר עלייה משמעותית בטיטרי AT בשתי דגימות, המדגם הראשון נבדק בשלב החריף, והשני - במהלך תקופת ההחלמה (לאחר 2-3 שבועות). התוצאות המתקבלות הן רטרוספקטיביות ומתאימות יותר לסקרים אפידמיולוגיים.

RTGAמזהה AT מסונתז כנגד ההמגלוטינינים של וירוסים (לדוגמה, נגיף השפעת). השיטה מקלה על זיהוי נוגדנים כאלה (AT) בסרום המטופל.

RSK- בסיסי serodiagnosis של זיהומים ויראליים(בין הזמינים). התגובה מזהה IgM ו-IgG מקבעים משלים, אך אינה מבדילה ביניהם; כדי לייעל את התוצאות שהושגו, ניסוח התגובה דורש מיומנויות מסוימות של הצוות.

שׁוּנִית. אם ביופסיה של רקמה נגועה זמינה וקיימות ערכות AT מסחריות עם תווית פלואורססאין, אימונופלואורסצנטי ישיר יכול לאשר את האבחנה. ניסוח התגובה כולל דגירה של הרקמה הנחקרת עם AT, הסרתם לאחר מכן ומיקרוסקופ פלואורסצנטי של הדגימה.

שיטות אימונוסורפציה לאיתור נוגדנים אנטי-ויראליים

שיטות חיסון(לדוגמה, ELISA ו-RIA) הם אינפורמטיביים יותר, מכיוון שהם מזהים IgM ו-IgG בנפרד, מה שמאפשר לך להסיק מסקנות מסוימות לגבי הדינמיקה של התהליך הזיהומי או מצב ההבראה. כדי לזהות AT, Ag ידוע נספג על מצע מוצק (לדוגמה, על דפנות מבחנות, משטחי פלסטיק, צלחות פטרי) ומוסיפים דילולים שונים של הסרום של המטופל. לאחר דגירה מתאימה, מסירים ATs לא קשורים, מוסיפים אנטי-סרום מסומן באנזים נגד Ig אנושי, חוזרים על הליך הדגירה והשטיפה של ATs לא קשורים ומוסיפים כל מצע כרומוגני (רגיש לפעולת האנזים). מכיוון ששינוי הצבע הוא פרופורציונלי לתוכן של נוגדנים ספציפיים, ניתן בהחלט לקבוע את הטיטר שלהם בשיטה ספקטרופוטומטרית. באבחון של זיהום ב-HIV, שיטת האימונובלוטינג מצאה את השימוש הנרחב ביותר.

שיטות עקיפות לאבחון עגבת.

לאבחון של עגבת, נעשה שימוש בשיטות מחקר רבות, השונות בטכניקה ובמטרה. שיטות ישירות מכוונות לאיתור הפתוגן בחומר הבדיקה באמצעות מיקרוסקופיה (מיקרוסקופיה בשדה אפל וכו') או PCR.

בנוסף לשיטות לזיהוי ישיר של טרפונמה חיוורת (T. pallidum), בעת בדיקת עגבת, עקיפה ( סרולוגי) שיטות מחקר המזהות נוגדנים לגורם הסיבתי של עגבת בסרום הדם ובנוזל השדרה. שיטות עקיפות לאבחון עגבת כוללות בדיקות סרולוגיות של ELISA, RPHA, CSR, RIF ו-RIF-abs, RIBT, PCR, שיטת אקספרס, אימונובלוט ועוד.

שיטות סרולוגיות לאבחון מחלות זיהומיות.

קריטריונים לאבחון סרולוגימבוסס על תגובות אנטיגן-נוגדנים ספציפיות. אנטיגנים (מרכיבים של דפנות תאים, דגלים, כמוסות, DNA ורעלים) של אותם מיקרואורגניזמים שצריך לקבוע מגיבים עם נוגדנים הכלולים בסרה. קישור מתרחש בין אנטיגנים לנוגדנים התואמים להם, המהווה את הבסיס לשיטות אבחון סרולוגיות. בדיקות סרולוגיות משמשות לאיתור אנטיגן לא ידוע (שמקורו הוא חיידק, וירוס, רעלן וכו') באמצעות נוגדן ידוע או לאיתור נוגדן בסרום באמצעות אנטיגן ידוע.

תגובות סרולוגיות מסווגות בהתאם למצב האנטיגן ומאפייני הסביבה שבה האנטיגן והנוגדן מתקשרים, כמו גם שיטת הביצוע.

כדי לבצע תגובות סרולוגיות, נעשה שימוש בשיטות מעבדה רבות, כגון אגלוטינציה, משקעים, קיבוע משלים, אימונופלואורסצנטי, בדיקת אנזים חיסונית ורדיואימוניות ואחרות. תגובות אלו מאפשרות זיהוי מקדים יעיל של מיקרואורגניזמים.

הסרה הנדרשת להקמת תגובות סרולוגיות מתקבלות באופן ניסיוני, ובפרט, הן מיוצרות על ידי מכוני החיסונים והסרה, ומוצעות במסגרת ערכות אבחון מסחריות.

שיטות סרולוגיות הן כלי חשוב באבחון וטיפול במחלות זיהומיות בבני אדם ובבעלי חיים, שכן הן יכולות לא רק לזהות את הגורם הגורם למחלה, אלא גם לזהות נוגדנים ספציפיים לפתוגנים המתאימים בדם של חולים וחולים שהחלימו. שיטות סרולוגיות הן כיום שיטות האבחון היעילות ביותר כאשר בלתי אפשרי או קשה לבודד את הפתוגן, ובאופן נדיר יחסית נותנות תוצאות חיוביות שגויות ושליליות שגויות.

שימוש בשיטות סרולוגיות לאבחון עגבת

הבסיס לשיטות מעבדה סרולוגיות לאבחון עגבת הוא היכולת של הגוף לתת תגובה חיסונית להופעת הפתוגן. בעזרת תגובות סרולוגיות בסרום (פלזמה) של הדם (או נוזל השדרה) מתגלים עקבות של התגובה החיסונית לזיהום, כלומר נוגדנים לאנטיגנים של טרפונמה חיוורת, או לאנטיגנים עצמם.

על מנת לבסס את האופי הספציפי של הביטויים הקליניים הקיימים (כלומר, שהם תוצאה של עגבת) ובעתיד לשלוט על הדינמיקה של התהליך הפתולוגי, הוצעו מספר רב של שיטות מחקר סרולוגיות. אותן שיטות נמצאות בשימוש נרחב גם עבור מיון אוכלוסין.

בהתאם להנחיות הלאומיות ולהנחיות הקליניות העדכניות, במדינות רבות בעולם, נעשה שימוש בשיטות סרולוגיות מתקדמות בסקרי אוכלוסיה לזיהוי חולי עגבת ובקביעת אבחנה קלינית. הם משמשים הן בנוכחות סימנים קליניים של המחלה בחולים, והן בתקופות סמויות.

קביעת תגובות סרולוגיות היא אחת השיטות האמינות ביותר לאבחון עגבת. בדיקות סרולוגיות סטנדרטיות עם שיטת הגדרה מוסדרת נקראות בדיקות סרולוגיות לעגבת. בהתחשב בכך שכמעט כל התגובות הסרולוגיות לעגבת בתנאים מסוימים יכולות להיות חיוביות כוזבות או שליליות כוזבות, יש לשים אותן במתחם ובמידת הצורך בדינמיקה.

בדיקות סרולוגיות, המשמשות לקביעת נוגדנים בסרום הדם של המטופל, שונות זו מזו ברגישות, בספציפיות, במורכבות ההגדרה ובעלות. בנוסף לשיטות הקלאסיות, נעשה שימוש במבחנים וטכנולוגיות אימונולוגיות לסרודיאגנוזה יעילה של עגבת, שקיבלו תנופה חדשה להתפתחות במאה ה-21.

נוגדנים מתגלים בשיטות אימונוכימיות (סרולוגיות) שונות, לרבות תגובות משקע, בדיקת אנזים אימונו, אימונוכימילומינסנציה, מבחני אימונוכרומטוגרפיה, אימונו-בלוטינג ליניארי, פלואומטריית זרימה, טכנולוגיית אימונו-צ'יפ ועוד.

Serodiagnosis (מחקר המשתמש בשיטות סרולוגיות) משמש עבור:

• אישור של האבחנה הקלינית של עגבת,
• אבחנה של עגבת סמויה,
• ניטור יעילות הטיפול, כאחד הקריטריונים לריפוי חולים עם עגבת,
• מניעת עגבת (בדיקת סקר של קבוצות מסוימות באוכלוסייה על מנת לזהות פתולוגיה).

המאפיינים החשובים ביותר הנדרשים על ידי בדיקות סרולוגיות - רגישות, ספציפיות, שחזור

הקריטריון המכריע לבחירת שיטת אבחון מעבדתית הוא יעילותה – רגישות, ספציפיות ושחזור.

רְגִישׁוּתהוא שיעור התוצאות החיוביות בחולים. רגישות השיטה נקבעת על פי אחוז התוצאות החיוביות של המחקר של דגימות שידוע כי מכילות סמנים ספציפיים של הפתוגן (למשל, אנטיגנים פתוגנים או נוגדנים אליהם).

ספֵּצִיפִיוּת- שיעור תוצאות הבדיקה השליליות בחולים בריאים. הספציפיות של השיטה נקבעת על פי אחוז התוצאות השליליות של המחקר של דגימות שכמובן אינן מכילות סמנים ספציפיים של הפתוגן. לפיכך, ככל שהרגישות והספציפיות גבוהות יותר, כך שיטת המחקר אמינה ואמינה יותר.

קריטריונים לאבחון חשוב כוללים גם יכולת שחזורתוצאות מבדיקות חוזרות של אותן דגימות. יש לציין שלמרות ההתקדמות המשמעותית בטכנולוגיה הגבוהה, אין שיטות המספקות 100% רגישות וסגוליות של 100% (מוחלטת) בכל הבדיקות הביולוגיות שנחקרו.

נכון לעכשיו, מערכות בדיקה, ערכות ומרכיבים שיש להם פחות מ-95% רגישות וסגוליות בעת הגדרת תגובה רשומים רשמית ברוסיה. לפיכך, תמיד קיימת האפשרות להשיג תוצאה לא מספקת.

סיווג הבדיקות לפי סוג האנטיגן בשימוש. בדיקות טרפונמל ולא טרפונמל לעגבת

בווריאולוגיה מודרנית, יותר מתריסר גרסאות של תגובות סרולוגיות לעגבת משמשות למטרות אבחון, אותן ניתן לחלק לקטגוריות שונות על פי קריטריונים שונים. הסיווג מתבצע על פי מתודולוגיית המחקר, היקף, מהירות, עלות נמוכה, דרישות לציוד מעבדה וכו'.

תגובות טרפונמל הן תיאורטית ספציפיות יותר, אך הן גם נותנות תוצאות חיוביות שגויות. יתר על כן, הם אינם מאפשרים להבדיל בין עגבת לא מטופלת לרפואה. התוצאות של תגובות טרפונמל יהיו חיוביות בשני המקרים. תגובות לא טרפונמאליות מבחינות בין זיהומים לא מטופלים או לאחרונה ונרפאים.

במהלך הבדיקה, מומלץ לבצע הן תגובות טרפונמל והן לא טרפונמל. כדי לבסס ולאשר את האבחנה של עגבת, נדרשות תוצאות חיוביות עבור שני סוגי הבדיקות - טרפונמל ולא טרפונמל. לכן, בדיקות לא טרפונמל משמשות בשילוב עם בדיקות טרפונמל, ומתבצעות לפני, במהלך ואחרי סיום הטיפול במרווחי זמן מסוימים.

1. בדיקות לא טרפונמאליות

המפורסמות ביותר מבין הבדיקות הלא-טרפונמאליות עם פרשנות חזותית של התוצאות הן

• RW - תגובת וסרמן עם אנטיגנים ליפידים (תגובת קיבוע משלים עם אנטיגן קרדיוליפין, RSKk)
• תגובת קאן (לא בשימוש כרגע),
• תגובה ציטוכולית של זקס-ויטבסקי (לא בשימוש כרגע),
• מיקרו תגובה של משקעים עם פלזמה או סרום לא פעיל (MRP או RMP),
• RPR (בדיקת Rapid Plasma reagin),
• TRUST (בדיקת סרום לא מחומם של טולוידין אדום).

בין הבדיקות הלא-טרפונמאליות, ישנן 2 בדיקות עם קריאה מיקרוסקופית של תוצאות התגובה:

1. VDRL - (מעבדה לחקר מחלות מין);

2. USR - בדיקה לקביעת reagins פלזמה פעילים (Unheated Serum Reagins).

תגובתיות בבדיקות nontreponemal מעידה בדרך כלל על נזק לרקמות ולא תמיד ספציפית לעגבת. קלות היישום והעלות הנמוכה מאפשרת להשתמש בהן כתגובות סקר בביסוס אבחנה מקדימה של עגבת.

2. בדיקות טרפונמל

בדיקות טרפונמל משתמשות באנטיגנים טרפונמל ספציפיים. בדיקות אלו נדרשות לאישור האבחנה (RPHA, RIT, RIF ו-ELISA). הם מורכבים ויקרים יותר מבדיקות קבוצה 1, אך גם ספציפיות ורגישות יותר. גילוי נוגדנים בנוזל השדרה מתבצע גם באמצעות בדיקות טרפונמל.

בדיקות טרפונמל מסורתיות המאשרות את האבחנה של עגבת דורשות ציוד מעבדה יקר וצוות מנוסה, ולכן הן מבוצעות רק לעתים רחוקות מחוץ למעבדות מיוחדות. עם זאת, כיום ניתן להחליף אותם בבדיקות טרפונמל פשוטות ומהירות שניתן לבצע בשטח ולהשתמש בדם מלא. ביצוע תגובות אלו אינו דורש הכשרה ארוכת טווח, תנאים מיוחדים לאחסון ריאגנטים וציוד.

הזולות היחסית, הנוחות והמעשיות של תגובות טרפונמל מביעות את תשומת הלב אליהן לא רק כשיטות לאישור האבחנה. תגובות אלו יכולות לשמש לבדיקת עגבת בטיפול ראשוני (ניתן לעשות אותן בשטח באותו מתקן בריאות) או באזורים שבהם אין מעבדות זמינות. עם זאת, מאחר ונוגדנים ל-T. pallidum נקבעים על פני מספר שנים, ללא קשר לשאלה אם החולה טופל או לא, לא ניתן להשתמש בתגובות מהירות של טרפונמל להערכת יעילות הטיפול ואבחון מבדל של עגבת לא מטופלת ונרפאה.

סיווג שיטות סרולוגיות לאבחון עגבת לפי סוג הנוגדנים שהתגלו

בדרמטובנרולוגיה מודרנית, תגובות סרולוגיות שונות לעגבת משמשות לאבחון. חלק מהשיטות שהיו רלוונטיות לפני עשר שנים כבר אינן בשימוש עקב מורכבות או חוסר ספציפיות. בהתאם לנוגדנים שזוהו, שיטות האבחון הסרולוגי של עגבת מחולקות לשלוש קבוצות:

I. תגובות ליפידים (reagin) - נוגדנים לאנטיגנים שומניים (reagins) נקבעים:

1) flocculation: microreaction על זכוכית עם אנטיגנים ליפידים - שיטת אבחון אקספרס (משקעים microreactions - MRP), VDRL, CMF (בדיקת מיקרופלוקולציה של קרדיוליפין), RPR וכו';

2) תגובת קיבוע משלים (RSK) עם אנטיגנים ליפידים: תגובת וסרמן (RV), שיטת הגדרה איכותית וכמותית, תרמוסטטית ובקור (תגובת קולמר);

3) תגובות משקעים שאינן בשימוש כיום: תגובת משקעי קאהן, תגובת סאקס-ויטבסקי הציטוכולית וכו';

II. תגובות טרפונמל קבוצתיות - נוגדנים לאנטיגנים טרפונמלים קבוצתיים (שהם חלק מהתא המיקרוביאלי של טרפונמה פתוגנית וספרופיטית כאחד) נקבעים:

1) CSC עם אנטיגן החלבון של רייטר;

2) תגובה אימונופלואורסצנטית (RIF);

3) תגובת הדבקה חיסונית (RIP).

III. תגובות טרפונמל לחלבון ספציפי למין - נוגדנים לאנטיגנים למין ספציפי של Treponema pallidum נקבעים:

1) תגובה של immobilization של treponemas חיוור (RIT);

2) תגובה חיסונית של RIF-abs והגרסאות שלה (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS וכו');

3) תגובה של hemagglutination עקיפה של treponemas חיוור (TPHA) והשינוי שלה TPPA.

4) בדיקת אנזים אימונו (ELISA);

5) אימונובלוטינג.

שימוש מעשי בבדיקות סרולוגיות לעגבת

בדיקות סרולוגיות שונות משמשות למטרות מעשיות שונות.

בחו"ל, בסקרים המוניים של האוכלוסייה ובמידת הצורך גילוי חירום של עגבת, משתמשים בתגובות סקר לא-טרפונמאליות (VDRL, RPR וכו'). האבחנה דורשת אישור על ידי בדיקות טרפונמל FTA-ABS, TPHA או TPPA. נכון להיום, מומלץ להשתמש ב-ELISA כתחליף ל-VDRL בבדיקות סקר. זאת בשל העובדה שבדיקת ELISA נבדלת ברגישות, בספציפיות, ביכולת לבצע אוטומציה של מחקר וכן בפיתוח ערכות בדיקות אבחון. בנוסף, תוכנית הפוכה של סדר הבדיקה של עגבת מבוססת, כאשר משתמשים תחילה בבדיקות טרפונמל.

על מנת לעקוב אחר יעילות הטיפול ולהעריך את פעילות הזיהום, מומלץ VDRL כמותי. בדיקת ELISA לנוגדני IgM antitreponemal משמשת כבדיקה מאשרת/נוספת.

בתרגול ביתי, נעשה שימוש בקומפלקס של תגובות סרולוגיות (CSR), כולל תגובת מיקרו-משקעים (RMP) עם אנטיגן קרדיוליפין ו-CSC עם אנטיגנים קרדיוליפין ואנטיגנים טרפונמאליים. לאחרונה, מומלץ ב-CSR להחליף את RSK ב-ELISA או RPHA. RIF (והשינויים שלו - RIF-Abs ואחרים), RIBT משמשים גם.

RIBT משמש כתגובת בדיקה במקרים של אי התאמות בתגובות טרפונמאליות.

גישות לאבחון סרולוגי במעבדה של עגבת בפדרציה הרוסית

הכנסת שיטות מאוחדות של מחקר מעבדה קליני הלכה למעשה בברית המועצות ובפדרציה הרוסית אפשרה להציג שיטות אבחון מתקדמות יותר, לייעל את עבודתן של מעבדות אבחון קליניות, להגדיל את פריון העבודה, להפחית כפילות של בדיקות מעבדה, והפכה לבסיס. לפיתוח צורות רציונליות של ערכות ריאגנטים מוכנות.

בשנת 1985, בברית המועצות, על מנת לשפר את האבחנה של עגבת, התגובה הלא-טרפונמאלית של CSC עם אנטיגן לא ספציפי (וסרמן) ותגובות משקעים (ציטוכוליות וקאנה) לא נכללו בתסביך האבחוני כפחות רגישים ואינם מספקים תוספת נוספת. מֵידָע.

במקום זאת, כחלק ממכלול הבדיקות הסרולוגיות לעגבת (CSR), סופק השימוש בתגובת קיבוע המשלים עם אנטיגנים טרפונמל וקרדיוליפין (RSKt) ותגובת המיקרו-משקעים עם אנטיגן קרדיוליפין (RMP). הרגישות ותכולת המידע הגבוהה יותר של מכלול התגובות הזה הבטיחו זיהוי לא רק של reagins, אלא גם נוגדנים אנטי-טרפונמאליים.

1985

1. RMP עם אנטיגן קרדיוליפין עם פלזמה בדם וסרום דם מומת. בדיקת בחירה במקרה של יישום מבודד.

2. CSC עם אנטיגנים טרפונמל וקרדיוליפידים; שיטות הגדרה איכותיות וכמותיות, תרמוסטטיות ובקור;

3. תגובת אימוביליזציה של Treponema pallidum (RIT); שיטות הגדרה של מבחנה ומלנג';

4. תגובה אימונופלואורסצנטית (RIF) בשינויים הבאים: RIF עם ספיגה (RIF-abs) עם סרום דם ודם קפילרי, RIF-200, RIF עם נוזל מוחי שלם (RIF-c); שיטות הגדרה איכותיות וכמותיות. אבחון צורות סמויות ומאוחרות של עגבת, הכרה של מקבלי החלטות (תוצאות חיוביות שגויות)

5. קומפלקס של תגובות סרולוגיות קלאסיות (CSR): RSC (תגובת ווסרמן) עם קרדיוליפין ואנטיגנים טרפונמלים + RMP. בדיקה מונעת של אוכלוסיית העגבת, אבחון כל צורות העגבת, מעקב אחר יעילות הטיפול, בדיקת אנשים שהם אנשי קשר לעגבת.

בשנת 2001 אישר משרד הבריאות של הפדרציה הרוסית מסמך רגולטורי חדש המסדיר את הליך ביצוע בדיקות אבחון - צו משרד הבריאות של הפדרציה הרוסית מס' 87 מיום 26 במרץ 2001 "על שיפור האבחנה הסרולוגית של עגבת ".

על מנת לשפר את האבחון המעבדתי של עגבת, לשפר את איכות העבודה ולמנוע התפשטות נוספת של שכיחות העגבת, מומלץ להחליף את ה-RSK במכלול ה-seroreactions (CSR) באבחון עגבת על ידי ELISA ו-TPHA כמו בדיקות סקר ואישור, t.to. מערכות בדיקה אלו הן רגישות ביותר, ספציפיות וניתנות לשחזור.

צו מס' 87 מיום 26 במרץ 2001 "על שיפור האבחנה הסרולוגית של עגבת" קובע את השימוש בשיטות הבאות לאבחון של עגבת בנוזל סרוו-שדרתי ברוסיה:

1. RMP ואנלוגים זרים (VDRL, RPR ומיקרו-תגובות דומות) כבדיקות סקר בעת בדיקת האוכלוסייה לאיתור עגבת. RMP מבוצע עם פלזמה או סרום דם לא פעיל.
2. בדיקת אנזים אימונו (ELISA). אנטיגן מ-treponema pallidum מתורבת או פתוגנית. תגובות אבחנתיות, כולל לאבחון משקאות חריפים. בשל קלות ההגדרה והזמינות של מערכות בדיקה מסחריות, הן יכולות לשמש כמבחני מיון.
3. התגובה של המאגלוטינציה פסיבית (RPHA). אנטיגן מ-treponema pallidum מתורבת או פתוגנית. סלקציה ותגובות אבחון.
4. גרסאות איכותיות וכמותיות של RIF (RIF-abs, RIF-c, RIF עם דם נימי מאצבע). אנטיגן - טרפונמה חיוורת פתוגנית של זן ניקולס.
5. קומפלקס של תגובות סרולוגיות (CSR) לעגבת, המורכב מתגובת קיבוע משלים (CFR) עם אנטיגנים טרפונמל וקרדיוליפין ו-RMP. אפשר להחליף את תגובת קיבוע המשלים ב-ELISA או RPHA גם בשילוב עם RMP. CSR מתייחס לבדיקות אבחון.
6. ריאקציית אימוביליזציה של טרפונמה חיוורת (RIBT), שבה משמשת טרפונמה פלידום פתוגנית של זן ניקולס כאנטיגן. RIBTs הן בדיקות אישור אבחנתיות.

לפיכך, מומלץ לתכנן את רצף הבדיקה של חולים לאיתור עגבת במתקני בריאות באופן הבא:

1. במהלך הבדיקה הראשונית, מתבצעת תגובת בחירה (הקרנה) של מיקרו-משקעים (RMP) או שינוי שלה (RPR, TRUST, VDRL) בגרסאות כמותיות ואיכותיות, ובמקרה של תוצאה חיובית, כל בדיקת טרפונמל מאששת ספציפית ( RPHA, ELISA, CSR, RIF, RIT);

2. לאחר סיום הטיפול, מניחים את ה-RMP או את השינוי שלו, והדינמיקה של התהליך הזיהומי ויעילות הטיפול נשפטת לפי הירידה בטיטר. אישור ליעילות הטיפול הוא ירידה בטיטר פי 4 או יותר בתוך שנה.

קבלת פנים בתיאום מראש! שבת ראשון.

מחקרים סרולוגיים(lat. serum serum + יוונית לוגו דוקטרינה) - שיטות אימונולוגיה החוקרים את התכונות הספציפיות של דם אנושי או בעלי חיים על מנת לזהות אנטיגנים או נוגדנים באמצעות תגובות סרולוגיות.

ההתחלה של ש' ו. לשים בסוף המאה הקודמת, לאחר שנמצא כי החיבור של אנטיגן עם נוגדן (ראה אנטיגן - תגובת נוגדן) מלווה במספר תופעות הזמינות לתצפית חזותית - צבירה (ראה), משקעים (ראה) או תמוגה. הייתה אפשרות להכרה ספציפית של אנטיגנים (ראה) או נוגדנים (ראה) אם אחד המרכיבים הללו ידוע.

בשנת 1897, F. Vidal דיווח כי נסיוב הדם של חולים עם טיפוס הבטן מצמיד באופן סלקטיבי חיידקי טיפוס, ולכן ניתן להחיל תגובה זו (ראה תגובה של Vidal) במעבדה. אבחנה של מחלת טיפוס. באותה שנה הוכח כי תסניני תרבית של חיידקי מגיפה, טיפוס וכולרה, בשילוב עם הסרה החיסונית המקבילה, יוצרים פתיתים או משקעים.

תגובת המשקעים הוכחה כמתאימה לזיהוי של אנטיגנים חלבוניים כלשהם. בשנים 1900-1901. ק.לנדשטיינר מצא שבאריתרוציטים אנושיים ישנם שני אנטיגנים שונים (A ו-B), ובסרום הדם שני אגלוטינינים (a ו-P), אשר תרמו לשימוש בתגובת ההמגלוטינציה לקביעת קבוצות דם (ראה).

תגובת האגלוטינציה לקביעת סוג הדם וגורם Rh משמשת בפרקטיקה מיילדותית, עם עירויי דם והשתלת רקמות. נוגדנים נגד גורם Rh (ראה) הם נוגדנים לא שלמים, הם אינם מסוגלים לתגובה ישירה עם אריתרוציטים חיוביים ל-Rh, לכן, כדי לזהות אותם, השתמש בתגובת Coombs (ראה תגובת Coombs), המבוססת על זיהוי של נוגדנים לא שלמים באמצעות אנטיגלובולין סרה. לאריתרוציטים בעלי סגוליות ידועה, מוסיפים את סרום הבדיקה, ואחריו סרום אנטיגלובולין נגד IgG (תגובת Coombs עקיפה). מקטעי Fab של נוגדנים לא שלמים של סרום הדם הנחקר נצמדים לאריתרוציטים, ונוגדנים נגד IgG נצמדים לשברי Fc חופשיים של נוגדנים אלה, ומתרחשת אגלוטינציה של אריתרוציטים. לאבחון של אנמיה המוליטית משתמשים בתגובת Coombs הישירה, בגוף של חולים כאלה כדוריות דם אדומות מתחברות עם נוגדנים שמסתובבים בדם כנגד גורם Rh. כדי לזהות אותם, מוסיפים נוגדנים נגד IgG לאריתרוציטים הנלקחים מהמטופל. הופעת צמיחת אריתרוציטים מאשרת את האבחנה של המחלה.

תגובת עיכוב ההמגלוטינציה - RTGA (ראה Hemagglutination) - מבוססת על תופעת מניעה (עיכוב) של המגלוטינציה של אריתרוציטים על ידי וירוסים על ידי סרום חיסוני. תופעת ההמגלוטינציה של וירוס אינה סרולית. תגובה ומתרחשת כתוצאה מהחיבור של הנגיף עם קולטני אריתרוציטים, עם זאת, HTA היא בדיקה סרולוגית המשמשת לאיתור וטיטרציה של נוגדנים אנטי-ויראליים. RTGA היא השיטה העיקרית לסרודיאגנוזיס של שפעת, חצבת, אדמת, חזרת, דלקת מוח הנישאת קרציות וזיהומים ויראליים אחרים, שהגורמים הגורמים להם הם בעלי תכונות המגלוטינציה.

התגובה של hemagglutinations פסיביות, או עקיפות, זה משתמש אריתרוציטים או כימיקלים סינתטיים ניטרליים (למשל, חלקיקי לטקס), שעל פני השטח שלהם אנטיגנים (חיידקים, ויראליים, רקמה) או נוגדנים נספגים (ראה תגובת בוידן). הצבירה שלהם מתרחשת כאשר מוסיפים את הסרום או האנטיגנים המתאימים. RBCs עם רגישות לאנטיגנים נקראים אנטיגנים אריתרוציטים אנטיגנים ומשמשים לאיתור וטיטרציה של נוגדנים. אריתרוציטים שעברו רגישות על ידי נוגדנים נקראים אימונוגלובולינים אריתרוציטים (ראה) ומשמשים לאיתור אנטיגנים:

תגובת ההמגלוטינציה הפסיבית משמשת לאבחון מחלות הנגרמות על ידי חיידקים (טיפוס ופארטיפוס, דיזנטריה, ברוצלוזיס, מגיפה, כולרה וכו'), פרוטוזואה (מלריה) ווירוסים (שפעת, זיהומי אדנוווירוס, דלקת מוח בקרציות, דימום קדחת קרים, וכו'). התגובה של המגלוטינציה פסיבית ברגישות אינה נחותה משיטת הבידוד של הנגיף במחלות ארנווויראליות (ראה), בפרט עם choriomeningitis לימפוציטית. האנטיגן הנגיפי של choriomeningitis הלימפוציטית מתגלה בנשאי וירוסים (עכברי בית) בתגובת המוגלוטינציה פסיבית עם תרחיפים של איברים שחולצו מדוללים עשרות אלפי פעמים. עם סלמונלוזיס, חיידקים מתגלים בתגובה של המגלוטינציה פסיבית בריכוז של עד כמה מאות גופים מיקרוביאליים ב-1 גרם של צואה, חיידקי דיזנטריה במוצרי מזון מתגלים כאשר תכולת 1 גרם של חומר היא לפחות 500 גופים מיקרוביאליים.

תגובת ההמגלוטינציה הפסיבית משמשת לאבחון ומניעה של צהבת נגיפית B. בברית המועצות, כדי לזהות את אנטיגן HBs (ראה אנטיגן אוסטרלי) בדמם של חולים עם הפטיטיס B חריפה, מיוצר אבחון, שהוא אריתרוציטים של עוף רגיש עם אימונוגלובולין עיזים נגד אנטיגן HBs. טיפה של אבחון משולבת עם נפח שווה של סרום דם של האנשים הנבדקים, ואם קיים בו אנטיגן HBs, מתרחשת אגלוטינציה. התגובה מסוגלת ללכוד עד 1.5 ng/ml של אנטיגן HBs. כדי לזהות נוגדנים ל-HBs, נעשה שימוש באריתרוציטים עם אנטיגן HBs שנספג עליהם, מבודדים מדם של חולים. התגובה של המגלוטינציה פסיבית משמשת גם לאיתור רגישות יתר של המטופל לתרופות והורמונים, למשל פניצילין או אינסולין. במקרה זה, אריתרוציטים מקבוצת הדם 0 של אדם עוברים רגישות עם חומר תרופתי ולאחר מכן משמשים לאיתור אגלוטינינים אליו בסרום הדם של המטופל.

התגובה של המגלוטינציה פסיבית משמשת לזיהוי גונדוטרופין בשתן כדי לבסס הריון (ראה גונדוטרופין כוריוני). לשם כך, הסרום הסטנדרטי להורמון זה מודגרת עם השתן הנבדק. עם הוספה שלאחר מכן של אריתרוציטים עם ההורמון נספג עליהם, צבירה אינה מתרחשת (תשובה חיובית), שכן ההורמון הכלול בשתן ניטרל נוגדנים מצגרים.

תגובות המבוססות על תופעת המשקעים

הם משמשים לאיתור מגוון רחב של אנטיגנים ונוגדנים. הדוגמה הפשוטה ביותר לתגובה איכותית היא היווצרות רצועת משקעים אטומה בגבול שקיעת אנטיגן על נוגדן במבחנה. סוגים שונים של תגובות משקעים בג'לים נוזליים למחצה של אגר או אגרוז נמצאים בשימוש נרחב (שיטת אימונודיפוזיה כפולה לפי Ouchterlon, שיטת אימונודיפוזיה רדיאלית, אימונואלקטרופורזה), לשיפון הן איכותיות וכמותיות (ראה אימונודיפוזיה, אימונואלקטרופורזה) .

כדי להגדיר אימונודיפוזיה כפולה, יוצקים שכבה של ג'ל מומס על צלחת זכוכית ולאחר התקשות חותכים חורים בקוטר 1.5-3 מ"מ. את האנטיגנים הנבדקים מניחים בבארות המסודרות במעגל, והסרום החיסוני בעל הספציפיות הידועה ממוקם בבאר המרכזית. סמים ואנטיגנים הומולוגיים מתפזרים זה אל זה יוצרים משקעים. עם אימונודיפוזיה רדיאלית (על פי שיטת מנצ'יני), מכניסים סרום חיסון לאגר. האנטיגן המונח בבארות מתפזר דרך האגר, וכתוצאה ממשקעים בסרום חיסוני נוצרות סביב הבארות טבעות אטומות שקוטרן החיצוני פרופורציונלי לריכוז האנטיגן. שינוי של תגובה זו משמש באבחון של שפעת לצורך זיהוי נוגדני IgM ו-IgG (ראה אימונוגלובולינים). אנטיגן שפעת מוכנס לתוך האגר, וסרום הדם לתוך הבארות. לאחר מכן הצלחות מטופלות בסרה חיסונית נגד נוגדני IgM או IgG, מה שעוזר לזהות את התגובה של הנוגדנים המקבילים עם אנטיגנים. השיטה מאפשרת לקבוע בו זמנית את טיטר הנוגדנים ואת השתייכותם לקבוצה מסוימת של אימונוגלובולינים.

סוג של אימונואלקטרופורזה הוא רדיואימונופורזה. במקרה זה, לאחר ההפרדה האלקטרופורטית של האנטיגנים, החריץ שנחתך במקביל לתנועת האנטיגנים בג'ל מתמלא תחילה בסרום החיסון המסומן ביוד רדיואקטיבי כנגד האנטיגנים שייקבעו, ולאחר מכן בסרום החיסון כנגד נוגדני IgG, המזרזים את הקומפלקסים הנוצרים של הנוגדן עם האנטיגן. כל הריאגנטים הבלתי קשורים נשטפים, ותסביך האנטיגן-נוגדנים מזוהה על ידי אוטורדיוגרפיה (ראה).

משלימים תגובות. תגובות עם השתתפות של משלים (ראה) מבוססות על היכולת של תת-רכיב של משלים של Cl (Clq) ולאחר מכן רכיבים אחרים של משלים להצטרף לקומפלקסים של מערכת החיסון.

תגובת קיבוע המשלים מאפשרת לבצע טיטרציה של אנטיגנים או נוגדנים לפי מידת קיבוע המשלים על ידי קומפלקס אנטיגן-נוגדנים. תגובה זו מורכבת משני שלבים: האינטראקציה של האנטיגן עם סרום הדם הנבדק (מערכת הבדיקה) ואינטראקציה של סרום המוליטי עם אריתרוציטים של כבשים (מערכת אינדיקטור). עם תגובה חיובית במערכת הבדיקה, מתרחש קיבוע משלים, ולאחר מכן בעת ​​הוספת אריתרוציטים בעלי רגישות נוגדנים, המוליזה אינה נראית (ראה תגובת קיבוע משלים). התגובה נמצאת בשימוש נרחב לסרודיאגנוזה של עגבת קרביים (ראה תגובת וסרמן) וזיהומים ויראליים (ראה מחקרים וירולוגיים).

ציטוליזה. נוגדנים נגד מבנים תאיים יכולים, בהשתתפות המשלים, להמיס את התאים הנושאים את המבנים הללו. ניתן להעריך בקלות תמוגה RBC לפי מידת ועוצמת שחרור המוגלובין. תמוגה של תאים גרעיניים נאמדת על ידי ספירת אחוז התאים המתים שאינם צובעים במתילן כחול. לעתים קרובות גם להשתמש בכרום רדיואקטיבי, כדי-ry בעבר קשור כימית עם תאים. מספר התאים ההרוסים נקבע על פי כמות הכרום הבלתי קשור המשתחררת במהלך תמוגת התא.

התגובה של המוליזה רדיאלית של אריתרוציטים יכולה להתרחש בג'ל. השעיה של אריתרוציטים של כבשים מונחת בג'ל אגרוז, ומוסיפה שם השלמה; בארות עשויות בשכבה קפואה על זכוכית ומוסיפים להן סרום המוליטי. אזור המוליזה ייווצר סביב הבארות כתוצאה מפיזור רדיאלי של נוגדנים. הרדיוס של אזור המוליזה הוא פרופורציונלי ישר לטיטר הסרום. אם אנטיגן כלשהו נספג על אריתרוציטים, למשל, גליקופרוטאין ההמגלוטינין של נגיף השפעת, אדמת או דלקת קרציות, אזי ניתן לשחזר את תופעת המוליזה על ידי סרה חיסונית לנגיפים אלה. התגובה של המוליזה רדיאלית בג'ל מצאה יישום באבחון של זיהומים ויראליים בשל קלות השלב, חוסר רגישות למעכבי סרום ויכולת טיטרציה של סרום דם לפי קוטר אזור המוליזה מבלי להזדקק לדילול סדרתי.

הידבקות חיסונית. לאריתרוציטים, טסיות דם ותאי דם אחרים יש קולטנים לרכיב המשלים השלישי (C3) על פני השטח שלהם. אם מוסיפים לאנטיגן (חיידקים, וירוסים וכו') סרום חיסוני מתאים ומשלים, אז נוצר קומפלקס אנטיגן-נוגדנים המכוסה ברכיב C3 של המשלים. כאשר מערבבים עם טסיות דם, עקב מרכיב ה-C3 של המשלים, קומפלקס האנטיגן-נוגדנים ישקע על התאים ויגרום להצטברותם (ראה הידבקות חיסונית). תגובה זו משמשת לקביעת האנטיגנים של מערכת HLA (ראה חסינות השתלה) ובמחקר של מספר זיהומים ויראליים (דלקת קרציות, קדחת דנגי), לשיפון מלווים אימונופטול. תהליכים ומחזור הדם של אנטיגנים ויראליים בשילוב עם נוגדנים.

תגובת הנטרול מבוססת על יכולתם של נוגדנים לנטרל פונקציות ספציפיות מסוימות של אנטיגנים מקרומולקולריים או מסיסים, למשל פעילות אנזימים, רעלנים חיידקיים, פתוגניות של וירוסים. בבקטריולוגיה משתמשים בתגובה זו לזיהוי אנטיסטרפטוליזינים, אנטיסטרפטוקינאז ואנטיסטפילוליזינים. ניתן להעריך את התגובה של נטרול רעלים על ידי ביול. השפעה, למשל, סרה אנטי-טטנוס ואנטי-בוטולינום עוברת טיטרציה (ראה טוקסין - תגובה נוגדת רעלן). תערובת של רעלן ואנטי-סרום הניתנת לבעלי חיים מונעת את מותם. גרסאות שונות של תגובת הנטרול משמשות בווירולוגיה. על ידי ערבוב הנגיפים עם האנטי-סרום המתאים והחדרת תערובת זו לבעלי חיים או לתרביות תאים, מנוטרלת הפתוגניות של הנגיפים.

תגובות באמצעות תוויות כימיות ופיזיות

האימונופלואורסצנטי שפותח על ידי Koons (AN Coons) בשנת 1942 מורכב בשימוש עבור סרול. תגובות של סרה המסומנת עם פלואורכרום (ראה אימונופלואורסצנטי). הסרום המסומן בפלואורוכרום יוצר קומפלקס אנטיגן-נוגדנים עם האנטיגן, שהופך זמין לתצפית תחת מיקרוסקופ בקרניים אולטרה סגולות המעוררות את זוהר הפלואורוכרום. התגובה האימונופלואורסצנטית הישירה משמשת לחקר אנטיגנים תאיים, זיהוי וירוסים בתאים נגועים וזיהוי חיידקים וריקטסיה במריחות. לכן, לצורך אבחנה של כלבת, הדפסים של פיסות מוח של בעלי חיים החשודים כנושאים נגיף מטופלים בסרום זוהר נגד כלבת. עם תוצאה חיובית, גושים של צבע ירוק בהיר נצפים בפרוטופלזמה של תאי עצב. האבחנה המהירה של זיהום בשפעת, פארא-אינפלואנזה ואדנו-וירוס מבוססת על זיהוי אנטיגנים של וירוסים בתאי הטביעות מרירית האף.

שיטת החיסון העקיפה נמצאת בשימוש נרחב יותר, המבוססת על זיהוי של קומפלקס אנטיגן-נוגדנים באמצעות סרום חיסון זוהר נגד נוגדני IgG ומשמשת לאיתור לא רק אנטיגנים, אלא גם טיטרציה של נוגדנים. השיטה מצאה יישום בסרודיאגנוזה של הרפס, ציטומגליפס, קדחת לאסה. במעבדה יש ​​לשמור מלאי תכשירים של תאים המכילים אנטיגן, למשל תאי VERO נגועים בנגיף או פיברובלסטים של עוף מקובעים באצטון, ב-20 מעלות צלזיוס. סרום הדם הנחקר מונח בשכבות על התכשירים, התכשיר ממוקם בתרמוסטט ב-f 37° ליצירת קומפלקסים חיסוניים, ולאחר מכן, לאחר שטיפת ריאגנטים לא קשורים, מתחמים אלו מתגלים בסרום זוהר מסומן כנגד גלובולינים אנושיים. באמצעות סרה חיסונית מסומנת כנגד נוגדני IgM או IgG, ניתן להבדיל בין סוג הנוגדנים ולזהות תגובה חיסונית מוקדמת על ידי נוכחות נוגדני IgM.

באנזים - שיטה אימונולוגית מיישמים את הנוגדנים המצומדים באנזימים, hl. arr. פרוקסידאז חזרת או פוספטאז אלקליין. כדי לזהות את הקשר של סרום מסומן עם אנטיגן, מוסיפים מצע, שמפורק על ידי אנזים המחובר לסרום עם מראה של צביעה בצבע צהוב-חום (פרוקסידאז) או צהוב-ירוק (פוספטאז). משתמשים גם באנזימים שמפרקים לא רק את המצע הכרומוגני, אלא גם את המצע הלומוגני. במקרה זה, עם תגובה חיובית, מופיע זוהר. כמו אימונופלואורסצנטי, בדיקת אימונו אנזים משמשת לאיתור אנטיגנים בתאים או לטיטרציה של נוגדנים על תאים המכילים אנטיגן.

הסוג הפופולרי ביותר של שיטת אנזים-אימונולוגית הוא אימונוספיחה. על נשא מוצק, קרים יכול להיות תאית, פוליאקרילאמיד, דקסטרן ופלסטיקים שונים, סופחים את האנטיגן. לעתים קרובות יותר, פני השטח של בארות מיקרופאנלים משמשים כמנשא. סרום הדם הנחקר, ולאחר מכן האנטי-סרום המסומן באנזים והמצע מוכנסים לבארות עם האנטיגן הנספג. תוצאות חיוביות נלקחות בחשבון על ידי השינוי בצבע של המדיום הנוזלי. כדי לזהות אנטיגנים, נוגדנים נספגים על הנשא, לאחר מכן חומר הבדיקה מוכנס לתוך הבארות ומתגלה תגובה עם סרום אנטי-מיקרוביאלי מסומן באנזים.

השיטה הרדיואימונולוגית מבוססת על שימוש בתווית רדיואיזוטופית של אנטיגנים או נוגדנים. זה פותח במקור כשיטה ספציפית למדידת רמת ההורמונים במחזור הדם. מערכת הבדיקה הייתה הורמון מסומן באיזוטופ (אנטיגן) ואנטי-סרום אליו. אם חומר המכיל את ההורמון הרצוי מתווסף לאנטי-סרום כזה, אז הוא יקשור חלק מהנוגדנים, עם הכנסת ההורמון הטיטרציה שסומן לאחר מכן, כמות מופחתת שלו בהשוואה לבקרה תיקשר לנוגדנים. התוצאה מוערכת על ידי השוואת העקומות של תווית רדיואקטיבית קשורה ולא קשורה. סוג זה של שיטה נקרא תגובה תחרותית. ישנם שינויים נוספים בשיטה הרדיואימונולוגית. שיטת הרדיואימונואסאי היא השיטה הרגישה ביותר לקביעת אנטיגנים ונוגדנים המשמשים לקביעת הורמונים, תרופות ואנטיביוטיקה, לאבחון מחלות חיידקיות, ויראליות, ריקטציאליות, פרוטוזואלים, לחקר חלבוני דם, אנטיגנים של רקמות.

מאפיינים השוואתיים ושימוש בשיטות מחקר סרולוגיות בפרקטיקה הרפואית

שיטות ש' ו. שיפור מתמיד בכיוון של רגישות מוגברת ורבגוניות שימוש. בהתחלה סרול. האבחנה התבססה על איתור נוגדנים. עם כניסתה של אמצע המאה ה-20 תגובות של אימונופלואורסצנציה והמגלוטינציה פסיבית, שיש להן רגישות רבה יותר, אפשר היה לזהות לא רק נוגדנים, אלא גם אנטיגן ישירות בחומר מהמטופלים. שיטות אנזים-אימונולוגיות ורדיואימונולוגיות, ברגישות של 2-3 סדרי גודל גדולה יותר מאשר אימונופלואורסצנטיות והמגלוטינציה פסיבית, מתקרבות לשיטות הביול. איתור חיידקים ווירוסים. היקף היישום שלהם לאיתור אנטיגנים ונוגדנים כאחד הוא בלתי מוגבל תיאורטית.

Serodiagnosis inf. המחלה מבוססת על הופעת נוגדנים לפתוגן מבודד או חשוד, ללא קשר לשאלה אם הפתוגן זוהה בשלב החריף של המחלה. בדקו זוגות של סרחי דם שנלקחו עם הופעת המחלה ו-2-3 שבועות. מאוחר יותר. עלייה בנוגדנים בסרום הדם השני לפחות פי 4 בהשוואה לראשון היא משמעותית מבחינה אבחנתית. זה גם משנה באיזה סוג של נוגדני אימונוגלובולינים מיוצגים. נוגדני IgM נמצאים בסוף התקופה החריפה של המחלה ובשלב מוקדם של ההבראה. נוגדני IgG מופיעים בשלבים מאוחרים יותר של ההבראה ומסתובבים במשך זמן רב. אם נמצא לאישה בשליש הראשון להריון נוגדנים מסוג IgM לנגיף האדמת, הרי שהדבר משמש בסיס להפסקת ההיריון, שכן בתקופה זו העובר רגיש במיוחד לנגיף. באינפ שונה. מחלות משתמשות באופן סלקטיבי בשיטות הספציפיות והנוחות ביותר.

ס.י. בשימוש נרחב באפידמיולוגיה. איסוף ומחקר שיטתי של דגימות דם של קבוצות שונות באוכלוסיה מאפשרים להבין מגעים של האוכלוסייה עם מקור מפעילים אינפ. מחלות. חקר רמת החסינות הקולקטיבית מאפשר לזהות קבוצות בסיכון גבוה ולתכנן פעילויות חיסונים, ללמוד את ההתפלגות הגיאוגרפית של זיהומים. ס.י. קבוצות גיל שונות של האוכלוסייה אפשרו, למשל, לזהות בדיעבד את זרימתם של גרסאות שונות של נגיף השפעת בפרקי זמן מסוימים.

ס.י. הם בעלי חשיבות רבה בחקר מחלות תורשתיות (ראה) ומחלות אוטואימוניות, המלוות בהופעת נוגדנים ספציפיים לרקמות ואיברים המשמידים את תאי המטרה המתאימים, וכן באונקולוגיה לגילוי אנטיגנים של גידול. לפיכך, האבחנה החיסונית של סרטן הכבד מבוססת על קביעת אלפא-פטופרוטאין ואנטיגנים עובריים אחרים בסרום הדם של חולים על ידי שיטות אימונודיפוזיה ורדיואימוניות.

התקדמות ניכרת של המדע בחקר המבנה האנטיגני העדין של אנטיגנים תאיים, אנטיגנים של חיידקים ווירוסים מושגת הודות ליישום בסרול. תגובות של נוגדנים חד שבטיים, לשיפון אפשר לקבל כדי להפריד אנטיגן דטרמיננטים.

בִּיבּלִיוֹגְרָפִיָה:שיטות מחקר באימונולוגיה, עורך. I. Lefkovits and B. Pernis, trans. מאנגלית, מ', 1981; מדריך לאימונולוגיה, עורך. O. E. Vyazova and Sh. X. Khodzhaev. מוסקבה, 1973. הנחיות לאבחון מעבדה קליני, ed. V. V. Menshikov. מוסקבה, 1982. אימונולוגיה, עורך. מאת J.-F. באך, ניו יורק, 1978.

ס' יא גאידמוביץ'.