В своей практической деятельности ветеринарным специалистам при выполнение плана противоэпизоотических мероприятий, а также при исключении тех или иных инфекционных заболеваний приходится проводит взятие проб крови от животных. При этом у лошадей, крупного рогатого скота, верблюдов, оленей, овец и коз кровь берут из яремной вены в верхней трети шеи. Иглы для взятия крови обязательно стерилизуются кипячением . Кровь берется от каждого животного отдельной иглой . В последние годы забор крови от животных проводится вакуумными пробирками или одноразовыми шприцами из подхвостовой вены.

1. Шерсть на месте взятия крови тщательно выстригается, кожа дезинфицируется 70% спиртом.

2. При взятии крови специалист должен следить, чтобы кровь стекала по стенке пробирки струей, а не каплями. Кровь, взятая каплями и вспененная, скорее гемолизируется и часто дает неправильные результаты показаний при исследовании. Во время взятия крови ветспециалист должен следить, чтобы кровь не попадала в кормушку и на землю . Для этого ветспециалист при взятие крови из вены должен пользоваться тазиком с дезинфицирующей жидкостью, куда спускают первую порцию крови.

У свиней кровь берется из уха (иглой или шприцем) или из кончика хвоста. Хвост перед взятие крови обмывают водой с мылом и дезинфицируют 70% спиртом, затем кончик отрезают ножницами. После взятия крови кончик хвоста обрабатывают йодом, перевязывают или прижигают.

У птиц кровь берут из вены крыла или гребешка. Брать кровь надо по возможности утром, до кормления животного.

3. Объем: Для серологического исследования от крупных животных кровь берут в количестве 7-10мл, а от мелких животных в объеме 2-4мл.

4. Взятую кровь выдерживают около часа при температуре 30-35 градусов для свертывания, а затем выносят в прохладное помещение для отстаивания .

5. Сроки доставки: сыворотка крови должна быть доставлена в ветлабораторию, в течение первых суток. И в исключительных случаях не позднее третьего дня после ее взятия!!!

6. При пересылке сыворотки на большое расстояние, особенно летом ее необходимо консервировать 5%-ным раствором карболовой кислоты на физиологическом растворе из расчета на каждые 9мл сыворотки 1мл раствора карболовой кислоты или 1-2капли раствора на 1мл сыворотки.

Сыворотку можно консервировать также высушиванием. Для высушивания сыворотку наносят на фильтровальную бумагу размером 5*5см в количестве 0,4мл и выдерживают в комнате при рассеянном свете до полного высыхания . После этого на каждой бумаге с высушенной сывороткой делают соответствующие записи карандашом и завертывают в пергаментную бумагу (каждую пробу отдельно), а затем упаковывают в конверт и в таком виде отсылают в лабораторию.

7. Для серологического исследования в лабораторию особенно от вблизи расположенных хозяйств можно отправлять и цельную кровь, не отделяя сыворотку, но при условии, что в пути ее не будут встряхивать и она не подвергнется гемолизу.

8. Маркировка: на каждой пробе сыворотки крови или крови указывают ее порядковый номер, инвентарный номер животного (кличку животного, фамилию владельца животного).

9. Оформление: к сопроводительному письму на пробы крови, направляемые в плановом порядке для серологического или гематологического исследования, прилагается опись проб в 2-х экземплярах. Смотри приложение №1. (doc)

10. Упаковка и транспортировка: Пробирки с кровью или сывороткой плотно закрывают стерильными пробками и устанавливают для пересылки в строго вертикальном положении (на лицевой стороне посылки вверху должна быть надпись «осторожно-стекло!» и «Верх») . Зимой кровь и сыворотку упаковывают и пересылают так, чтобы они не замерзали .

На сегодня решил сделать еще один пост. И будет он посвящен самому трудоемкому, и самому массовому процессу в нашей ветеринарной жизни - это взятие крови у коров для диагностических исследований, таких как например: лейкоз, бруцеллез, лептоспироз и т. д., и для биохимического исследования в осенне-весенний период.

Наши дедушки с бабушками ветеринарной службы брали кровь традиционно, да и сейчас до сих пор так учат в наших ветеринарных ВУЗах - из яремной вены. Но наука и технологии не стоят на месте. Прогрессивные умы человечества постоянно работают над совершенствованием новых способов работ, стороной не обошло и ветеринарное направление.

Всех нас учат в институтах ветеринарии, что кровь нужно брать из яремной вены, в многоразовую стеклянную пробирку, используя многоразовую металлическую иголку разного диаметра.

Взятие крови в стеклянную пробирку

Как видно на верхнем фото, чтобы взять кровь, нужно во-первых зафиксировать животное, наложить на шею резиновый жгут (он нужно чтобы лучше определялась яремная вена). Далее нужно с размаха попасть в вену, пробив кожу моментально. И только потом подставлять пробирку. В чем сама неудобность - затрата времени, средств, сил, рабочей силы.

Но как выше писал я уже, человечество не стоит на месте, и постоянно совершенствует свои подходы к работе, попутно облегчая их.

Не так давно, а именно, в 2000-х годах к нам приехали иностранцы, и рассказывали о том что мы тут древние, ничего не знаем, и будем вас учить. И действительно, показали как нужно брать кровь у коров по современным стандартам. А именно, в вакуумную пробирку одноразового использования (см. фото ниже )

взятие крови у коровы из хвостовой вены в вакуумную пробирку

Скажу сразу, сейчас до сих пор есть противники такого метода - метода взятия крови из хвостовой вены, они считают, что является классикой, то не умирает никогда, ну как по Ленину.

Хотя, как вы можете видеть на фото, маленькая вакуумная пробирка, нет лишней или даже дополнительной фиксации животного(!) что очень важно для проведения зооветеринарных мероприятий. На такую процедуру взятия крови уходит максимум полминуты-минута, в то время, как при старом методе взятия крови, иногда уходит и до десяти минут!
Следующий фактор который нужно отнести в плюс - человек не контактирует с кровью, а значит риск заболеть лейкозом или бруцеллезом он минимален, или вообще исключен
Следующий фактор - кровь под вакуумом сама идет в пробирку, и занимает это секунды.
Следующий фактор - животное спокойнее стоит, когда у нее кровь берут из хвостовой вены, нежели их яремной вены.
Следующий фактор - кровь не попадает во внешнюю среду и на объекты внешней среды (подстилка, кормушка, поилка и т.д.) - это я указал в аспекте, если животное может быть больным лейкозом, бруцеллезом и т. д.
Следующий фактор - стоимость одной пробирки вместе с иголкой одноразовой 8 рублей. Да и не так часто приходится брать кровь - один-два раза в год (массово при ветеринарных обработках), да и в текущем плане - при биохимическом исследовании крови у коров. Раньше нужно было: намыть стеклянных пробирок ну грубо говоря пробирок 600-1000, затем их прокипятить, затем уложить, потом после того как слили кровь их снова помыть и так все по кругу. Да и бьются они часто, и травмирование ветеринарного работника и самого животного тоже часто бывает.
Следующий фактор - Не надо переливать кровь, после того как она отстоится. Сразу поставили в специальный планшет и отправляем в лабораторию.
Следующий фактор - подписывать нужно саму пробирку, и это очень удобно, в то время, как раньше это было очень трудоемко (нужно было нарезать специальные резиночки, потом одеть их на стеклянные пробирки, затем когда кровь возьмут подписать, а если нет резиночки, то бумажку заворачивали в ватку и сверху вводили в стеклянную пробирку).

Ну вот, вроде все рассказал, и это будет не последний мой пост. Очень много интересного вас ждет впереди!

У крупного рогатого скота, овец и коз, лошадей кровь берут из яремной вены в верхней трети шеи в объёме не менее 5 мл. в пробирку с антикоагулянтом 0,5 М ЭДТА* (200 мкл. на одну пробирку).

Гепарин и другие антикоагулянты использовать нельзя!
Транспортировка крови осуществляется с специальных термо-сумках с хладагентом, главное не заморозить и не сварить кровь.

Иглы перед взятием крови от каждого животного обязательно стерилизуют кипячением.
Кровь от каждого животного берут индивидуальной иглой!
Место взятия крови тщательно дезинфицируют спиртом или 5% раствором йода. Для взятия крови животное фиксируют – привязывают голову животного. Большим пальцем нажимают на вену в нижней трети шеи. Задержка оттока крови вызывает набухание вены в виде толстого шнура. Кровопускательную иглу вводят под острым углом по направлению к голове, продвигая в полость сосуда приблизительно на 1 см.

Кровь в пробирку набирают по стенке пробирки струёй. Пробирка закрывается пробкой и переворачивается несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом). Встряхивание не допустимо! Каждая пробирка должна быть пронумерована (или указан инвентарный номер животного) согласно заранее подготовленной описи.

Образцы с гемолизом или образовавшимся сгустком исследованию не подлежат!

Пробирки с кровью хранить при температуре +4ºС – +8 ºС. Условия обычного холодильника, но не морозильной камеры.

У крупного рогатого скота более эффективным и безопасным является способ забора крови из хвостовой вены. Для взятия крови животное не фиксируют. Хвост животного берут рукой в области средней трети и медленно поднимают вверх. Кровь берут в средней трети тела 2-5 хвостовых позвонков, находящейся на линии, идущей вдоль хвоста и делящей его на 2 симметричные части. Место взятия крови также дезинфицируют спиртом или 5% раствором йода. Иглу вводят под углом 90 до упора на глубину 5-10 мм.

• Для упрощения процедуры забора крови возможно использование одноразовых стеклянных или пластиковых вакуумных пробирок любого доступного производителя уже содержащих жидкий или сухой ЭДТА (нанесённым на внутреннюю стенку пробирки). После взятия крови пробирку необходимо плавно перевернуть несколько раз. Пробирки с кровью хранить при температуре +4ºС – +8 ºС. Важно, кровь в таких условиях можно хранить две недели.*Приготовление 0,5М ЭДТА (рН 8,0). В мерной колбе на 100 мл растворяют 18,62 г этилендиаминтетрауксусной кислоты (молекулярный вес 372,2) в 80 мл дистиллированной воды. Раствором 30%-й натрия гидроокиси доводят рН раствора до 8,0. Затем дистиллированной водой – объём раствора доводят до метки и перемешивают. Хранят в колбе с притертой пробкой при комнатной температуре до 1 года.

Акмолинская область,

Бурабайский район,

«Сельскохозяйственный колледж село Катарколь»

Петрова Ю.Н.

преподаватель специальных дисциплин

НОВЫЙ МЕТОД ВЗЯТИЯ КРОВИ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Весна – это период проведения диагностических и лечебно-профилактических мероприятий у сельскохозяйственных животных. Массовое взятие крови у поголовья крупного рогатого скота для диагностических исследований на бруцеллёз – это трудоёмкая и иногда травмирующая животных процедура.

На сегодняшний день внедрение в животноводство новых, не травмирующих животных и наименее трудоёмких методов взятия крови, является актуальной задачей для ветеринарной службы Акмолинской области.

В течение нескольких лет специалистами управления ветеринарии Акмолинской области были организованы семинары, в практической части которых отрабатывалась методика взятия крови с помощью вакуумных систем. На сегодняшний день благодаря неоспоримым преимуществам данная методика получила широкое распространение и активно используется в хозяйствах всех форм собственности на территории Акмолинской области.

Использование вакуумных шприцев-контейнеров коренным образом меняет технологию взятия крови у поголовья крупного рогатого скота. Речь идёт не только об упрощении процедуры взятия крови, что само по себе немаловажно, но и о значительном снижении процента преаналитических ошибок, увеличении безопасности процедуры, снижении риска заражения скота различными заболеваниями, сохранения уровня надоев после процедуры и отсутствия осложнений у животных после взятия крови.

До сегодняшнего дня широко распространённым способом взятия проб крови у крупного рогатого скота оставался способ взятие её из ярёмной вены с использованием кровопускательных (или инъекционных) игл и стеклянных пробирок (не вакуумных).

Устаревший способ взятия крови у крупного рогатого скота

Взятие крови с использованием кровобрательных игл и пробирок. Иглы для взятия крови должны быть с коротким срезом и достаточно большим диаметром, чтобы не травмировать противоположную стенку вены и не вызвать повреждения эритроцитов. Иглы перед взятием крови обязательно стерилизуют кипячением. Шерсть на месте взятия крови тщательно выстригают, а кожу дезинфицируют дезинфицирующим раствором.

У крупного рогатого окота кровь берут из яремной вены в верхней трети шеи.

Брать кровь для получения сыворотки надо по возможности утром, до кормления животных. Для серологического исследования берут по 7-10 мл крови от крупного рогатого скота.

При взятии крови из яремной вены иглу вкалывают на границе перехода верхней трети шеи в среднюю. Чтобы вызвать достаточное наполнение вены и уменьшать ее подвижность, вену сдавливает в середине шеи резиновым жгутом или пальцем. При проколе вены необходимо держать иглу в руке так, чтобы направление ее совпало с линией хода вены и чтобы срез иглы был направлен вверх, к голове. Иглу вкалывают под острым углом – в 20–30°. При попадании в вену из иглы вытекает кровь.

Кровь должна стекать по стенке пробирки по избежании разрушения эритроцитов и при необходимости немедленно смешиваться с достаточным количеством антикоагулянта.

Перед извлечением иглы из вены резиновый жгут снимают, пережимают вену пальцем выше места вкола, иглу извлекают, а место вкола некоторое время сдавливают тампоном для предотвращения образования гематомы. В заключении область венепункции дезинфицируют дезинфицирующим раствором.

Устоявшаяся методика взятия крови у крупного рогатого скота:

Кровь берут из vena jugularis (яремная вена);

Место, где предполагается произвести прокол, дезинфицируют спиртом или 5% раствором йода;

Для взятия крови животное фиксируют – привязывают голову животного;

Большим пальцем нажимают на вену в нижней трети шеи. Задержка оттока крови вызывает набухание вены в виде толстого шнура;

Кровопускательную иглу вводят под острым углом по направлению к голове, продвигая в полость сосуда приблизительно на 1 см;

Кровь в пробирку набирают по стенке.

Кроме того, необходимо готовить посуду, добавлять антикоагулянт для анализов на общую гематологию, выделять сыворотку и удалять сгусток для анализов, требующих получения сыворотки. Но данная методика имеет ряд серьёзных недостатков:

1. Кровь набирается через кровопускательную иглу самотёком в открытую пробирку . Это очень часто приводит к разбрызгиванию крови, в связи, с чем возрастает риск инфицирования животных и человека. Некоторые ветеринарные специалисты использовали одноразовые шприцы, но это не избавляло от необходимости переливать кровь в открытую пробирку. Если нужна была не сыворотка, которая выделяется в стеклянной пробирке (но не в пластиковой), а цельная кровь, то нужно было вручную отмерять необходимый для исследований объём крови и затем вручную добавлять нужное количество реагентов (где также возможны были ошибки в дозировке). К тому же, переливание крови из одноразового шприца в стеклянную пробирку зачастую приводит к гемолизу, что искажает результаты исследований или делает их невозможными. Также, ошибочным является взятие крови шприцом с последующим переливанием крови в вакуумную пробирку.

2. Набранная самотёком в открытую пробирку, кровь теряет свою стерильность из-за воздействия на неё внешней среды, следовательно, результаты лабораторных исследований могут быть искажены. Стеклянные пробирки закрываются либо нестерильными резиновыми пробками, либо ватными тампонами, что часто приводит к открытию пробирки с разлитием крови.

3. Стеклянные пробирки часто разбиваются – соответственно, нужно не только ликвидировать последствия этого в виде осколков и разлитой крови, но и повторно брать пробу крови у животного.

4. При взятие крови из ярёмной вены необходима фиксация животного , то есть привлечение к процедуре дополнительного персонала, с соответствующими затратами труда, нервов, времени и финансов.

5. Жёсткая фиксация, а также боль при взятии крови толстостенными кровопускательными иглами большого диаметра вызывает стресс у животных . В случае с крупным рогатым скотом это приводит к неизбежному снижению надоев молока до 1 л в день в течение нескольких дней. На 1000 голов убытки от падения надоев могут составлять до 35 тысяч тенге (кстати, одна только эта сумма значительно превышает стоимость вакуумных систем для взятия крови, необходимых для взятия крови у 1000 голов).

6. Грубая фиксация приводит к массовому перезаражению лейкозом ранее здоровых животных , через травмированную слизистую оболочку носовой полости.

Новый метод взятия крови у крупного рогатого скота

Для взятия проб венозной крови наиболее предпочтительно использовать вакуумсодержащие системы. Этот способ имеет ряд преимущес тв, основным из которых является то, что кровь попадает непосредственно в закрытую пробирку, предотвращающую любой контакт ветперсонала с кровью животного.

Речь идёт не только об упрощении процедуры взятия крови, что само по себе немаловажно, но и о значительном снижении процента преаналитических ошибок, увеличении безопасности процедуры, снижении риска заражения скота, сохранения уровня надоев после процедуры и отсутствия осложнений у животных после взятия крови.

Вакуумсодержащая система представляет собой закрытую двухкомпонентную систему - вакуумный шприц-контейнер и специальную иглу. Выделение сыворотки или соединение крови с антикоагулянтом происходит в том же объёме шприца, в который берётся кровь, то есть после взятия крови сам шприц является транспортной пробиркой с антикоагулянтом или сывороткой.

Под действием вакуума кровь втягивается через иглу вакуумной системы напрямую из вены в пробирку и сразу же смешивается с химическим реактивом. Тщательно дозированный объем вакуума обеспечивает точное соотношение кровь/реагент в пробирке.

На основе возможностей вакуумной системы для взятия венозной крови Monovette был разработан новый метод взятия крови у крупного рогатого скота:

Кровь берут из vena с occygea (хвостовая вена).

Для взятия крови животное не фиксируют.

Хвост животного берут рукой в области средней трети и медленно поднимают вверх.

Место взятия крови, область 2-5 хвостовых позвонков, дезинфицируют спиртом или 5% раствором йода.

Кровь берут в средней трети тела 2-5 хвостовых позвонков, находящейся на линии, идущей вдоль хвоста и делящей его на 2 симметричные части.

Иглу вводят под углом 90° до упора на глубину 5-10 мм.

Преимущества взятия крови вакуумными системами Monovette из хвостовой вены:

Сокращение времени взятия крови ветврачом (до 200 животных за 2 часа)

Отсутствие фиксации животного;

Исключение контакта ветврача с кровью на всех этапах взятия и транспортировки крови;

Предупреждение распространения инфекций через кровь и загрязнения (контаминации) объектов окружающей среды; (особенно актуально при лейкозе КРС)

Минимизация осложнений и стресса у животных;

Отсутствие сокращения надоев в результате стресса и осложнений

Возможность получения стерильной крови.

Эти преимущества делают применение ваууумных систем для взятия крови в ветеринарии перспективной технологией, позволяющей быстро, качественно и безопасно решать проблему массового взятия крови у поголовья. Сохранение надоев и отсутствие осложнений – являются показательным экономическим аргументом необходимости повсеместного внедрения современной методики.

Приборы для взятия крови у крупного рогатого скота .

1. Вакуумные системы для взятия венозной крови у крупного рогатого скота.

Вакуумные системы для взятия венозной крови имеют преимущества, более чем достаточные для того, чтобы навсегда забыть о прежней методике взятия крови.

Состоит вакуумная система из трёх компонентов:

Двусторонняя игла - резьбовая, либо автоматическая (разной длины и диаметра).

Иглодержатель - резьбовой, либо автоматический.

Вакуумная пробирка.

Пробирка стерильна, герметична, изготовлена из небьющегося биологически инертного пластика (полиэтилентерефталат), не влияющего на результаты исследований.

Пробирки содержат реагент, распылённый по стенкам:

для получения сыворотки используется активатор свёртывания (кремниевое напыление, активирующее образование сгустка крови и выделение сыворотки);

для получения цельной крови используется антикоагулянт К2 ЭДТА (Трилон Б).

В пробирку не надо вручную добавлять реагенты – после забора крови вакуумную пробирку (как с крышкой, так и без неё) можно центрифугировать и помещать в анализатор.

Пробирки могут быть с разным объёмом вакуума (следовательно, и объёмом забираемой крови) – от 2 до 10 мл. Самые востребованные объёмы – 9-10 мл (для крупного рогатого скота, свиней, лошадей). Для мелких животных можно использовать пробирки на 2, 3, 4 мл.

Преимущества вакуумных систем в сравнении с обычными иглами и пробирками:

1. Двусторонние иглы с лазерной заточкой среза легко входят в вену, не вызывая сильных болезненных ощущений . Если кровопускательные или инъекционные иглы применяются диаметром 1,2 мм (18G), то двусторонние иглы вакуумных систем можно использовать диаметром 0,9 мм (20G) – так как эти иглы тонкостенные, то при меньшем внешнем диаметре иглы, её внутренний диаметр не уступает в пропускной способности иглам с толщиной 1,2 мм. Внешняя и внутренняя поверхности иглы обработаны силиконом, поэтому кровь свободно течёт в пробирку, не вызывая тромбирования иглы. Резиновый клапан на дистальном конце иглы предотвращает разбрызгивание крови в момент нахождения иглы в вене при отсутствии пробирки. Благодаря этому, можно набрать кровь в несколько пробирок, не вынимая иглы из вены - одна пробирка вынимается из иглодержателя, и вставляется другая пробирка для забора новой пробы крови (если необходимо взять кровь сразу на несколько видов исследований).

2. Сохраняется герметичность системы во время взятия пробы, кровь остаётся стерильной и не разбрызгивается, что исключает возможность перекрёстного инфицирования.

3. Вакуумная пробирка сделана из небьющегося материала. Не нужно собирать осколки стеклянных пробирок и убирать разлитую кровь (возможно инфицированную).

4. Сокращается время свёртывания крови в пробирке . Благодаря активатору свёртывания (кремниевое напыление) сыворотка выделяется за 20-30 мин.

5. Проба крови набирается в вакуумную пробирку, в ней же транспортируется в лабораторию, в ней же центрифугируется и в ней же исследуется в анализаторе. То есть, отпадает необходимость переливания крови из одной пробирки в другую.

2. Monovette - шприц-пробирка с иглой для взятия крови одноразового применения в ветеринарии.

Monovette - это технологическая новинка, которая совсем недавно появилась на рынке медицинских изделий. Вакуумный шприц-контейнер со специальными иглами предназначен для взятия венозной крови как шприцевым способом, так и вакуумным. Шприц-контейнер приспособлен для хранения и транспортировки крови.

Основные особенности системы Monovette.

Шприц-контейнер сделан из ударопрочного пластика, устойчивого к низким температурам, экологически безопасного. Внутри контейнера имеется реагент. Игла имеет диаметр 0,9 мм, благодаря чему отсутствую осложнения после взятия крови. Гладкие края иглы минимизируют повреждения клеток крови (гемолиз). Оптимальный угол заточки иглы, предотвращает «забивание» и тромбирование иглы.

Интернет-ресурсы:

http://aptekacentr.com

http://ordamed.kz

http://rts-engineering.ru

http://1uilim.e-stile.ru

http://agropost.ru

1. Исследование крови животных

К специальным методам исследования крови прибегают в тех случаях, когда необходимо и возможно установить диагноз на уровне изучения морфологических характеристик клеток в мазке или изменения их функциональных свойств под воздействием различных факторов. В первом случае исследования ведут с использованием цитохимических красителей, специфически реагирующих с определенными включениями или компонентами клеток; функциональные свойства клетки определяют как ответ на физико-химические воздействия .

1.1 Правила взятия крови у животного

Условия взятия крови и ее сохранность до начала лабораторных исследований имеют важное значение при получении достоверных результатов. Во многом эти результаты зависят от техники взятия крови и используемых при этой инструментов. В организме различает артериальную, венозную и капиллярную кровь, которая имеет незначительные цитологические и биохимические отличия. Для морфологических исследований пользуются почти исключительно капиллярной кровью, а при биохимических – венозной.

Капиллярную кровь берут из внутренней поверхности ушной раковины. Шерсть на месте взятия крови выстригают, очищают место укола ватным тампоном, смоченным спиртом-эфиром. Укол делают на глубину до 2 мм. Первую каплю крови стирают, т.к. она содержит случайные примеси и лимфу, а последующие берут для исследования. Очень важно, чтобы кровь вытекала из ранки без надавливания на ткани, иначе она смешивается с лимфой и изменяет свой клеточный и биохимический состав. Истечение крови можно ускорить, если предварительно прогревать место укола в теплой воде или источником сухого тепла (фен, электролампа).

При венепункции прокол окружающих вену тканей и стенки вен делают в один прием. Иглы для взятия крови должны быть с коротким срезом и достаточно большим диаметром, чтобы не травмировать противоположную стенку вены и не вызвать повреждения эритроцитов. Предварительно иглы стерилизуют кипячением в 1%-ом растворе бикарбоната натрия, место вкола обрабатывают аналогично получению капиллярной крови.

При взятии крови из яремной вены иглу вкалывают на границе перехода верхней трети шеи в среднюю. Чтобы вызвать достаточное наполнение вены и уменьшать ее подвижность, вену сдавливает в середине шеи резиновым жгутом или пальцем. При проколе вены необходимо держать иглу в руке так, чтобы направление ее совпало с линией хода вены и чтобы срез иглы был направлен вверх, к голове. Иглу вкалывают под острым углом – в 20–30°. При попадании в вену из иглы вытекает кровь.

Кровь должна стекать по стенке пробирки по избежании разрушения эритроцитов и при необходимости немедленно смешиваться с достаточным количеством антикоагулянта.

Перед извлечением иглы из вены резиновый жгут снимают, пережимают вену пальцем выше места вкола, иглу извлекают, а место вкола некоторое время сдавливают тампоном для предотвращения образования гематомы. В заключении область венепункции дезинфицируют настойкой йода и заливают Колодием .

В зависимости от характера исследований готовят определенное количество пробирок. Стенки стеклянной посуды способны обмениваться ионами с кровью, а следы моющих средств и поврежденные пробирки влияют на активность, ферментов. Это можно исключить, если использовать пластмассовые, пробирки одноразового пользования; для некоторых исследований стенки стеклянных пробирок покрывают слоем парафина или силиконового масла.

В зависимости от задач исследования анализу подвергают цельную кровь, плазму или сыворотку.

В цельной крови определяют морфологические показатели, а также содержание глюкозы, кетоновых тел, меди, цинка, кобальта, марганца, селена и др., т.е. веществ, равномерно распределенных между плазмой и эритроцитами. Для исследования веществ, неравномерно распределенных между клетками и жидкой частью крови, следует использовать сыворотку или плазму. В сыворотке, например, исследуют общий белок и его фракции, остаточный азот, мочевину, свободные аминокислоты, липиды, холестерин, билирубин, кальций, неорганический фосфор, магний, йод, связанный с белком (СБЙ), каротин, витамины, ферменты и др. В плазме – резервную щелочность, содержание натрия, калия, неорганического фосфора, магния, каротина, витаминов А, С и др.

Для получения пробы цельной крови или плазмы ее стабилизируют, т.е. в пробирку вносят противосвертывающее вещество – антикоагулянт. Антикоагулянты лучше применять в виде растворов.

Для получения сыворотки пробирки с кровью рекомендуется в процессе взятия крови помещать в термостат с температурой до 38°С. При массовых обследованиях животных таким импровизированным термостатом может быть достаточная емкость с водой указанной температуры. После завершения работ по взятию крови, свернувшиеся пробы обводят тонкой спицей из нержавеющей стали для лучшего отделения сыворотки и ставят в термостат при 37–38°С на 1–2 часа для окончательного отделения сыворотки. Сыворотку сливают и центрифугируют 20 минут при 2000–3000 об/мин.

Для получения плазмы кровь с антикоагулянтом центрифугируют 20–30 минут при 2000–3000 об/мин. Плазма крови отличается от сыворотки наличием фибриногена.

Цельную кровь, плазму и сыворотку для непродолжительного хранения помещают в холодильник (+2…+4°С), длительное хранение сыворотки требует температуры – 20°С.

Нарушение условий хранения проб может стать причиной погрешностей анализа. В результате длительного стояния сыворотки, над эритроцитами могут наступить сдвиги в концентрации ряда компонентов: повышается концентрация калия, активности кислой фосфатазы, аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, гидроксибутиратдегидрогеназы, понижается содержание глюкозы вследствие гликолитических процессов. При температуре около 20°С в цельной крови возрастает содержание аммиака, многие ферменты даже при температуре холодильника быстро теряют свою активность (креатинкиназа, кислая фосфатаза), в лактатдегидрогеназа, напротив, быстрее теряет активность при низких температурах .

Возникший при взятии или хранении гемолиз эритроцитов приводит к повышению концентрации калия, активности кислой фосфатазы, аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, гидроксибутиратдегидрогеназы. Неумелое встряхивание проб при перемешивании их содержимого или при транспортировке также может вызвать гемолиз эритроцитов.

При проведении специальных исследований нужно внимательно следить за выполнением особых, оговоренных в описании методик правил взятия, консервации и хранения проб крови .

1.2 Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ)

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) – неспецифический лабораторный показатель крови, отражающий соотношение фракций белков плазмы; изменение СОЭ может служить косвенным признаком текущего воспалительного или иного патологического процесса. Проба основывается на способности эритроцитов в лишенной возможности свёртывания крови оседать под действием гравитации. В норме величина СОЭ у собак не превышает 2–5 мм/час, а у кошек – 6–10 мм/час.

Принцип метода заключается в следующем. Удельная масса эритроцитов превышает удельную массу плазмы, поэтому они медленно оседают на дно пробирки. Скорость, с которой происходит оседание эритроцитов, в основном определяется степенью их агрегации, то есть их способностью слипаться вместе. Из-за того, что при образовании агрегатов уменьшается отношение площади поверхности частиц к их объёму, сопротивление агрегатов эритроцитов трению оказывается меньше, чем суммарное сопротивление отдельных эритроцитов, поэтому скорость их оседания увеличивается. Агрегация эритроцитов главным образом зависит от их электрических свойств и белкового состава плазмы крови. В норме эритроциты несут отрицательный заряд и отталкиваются друг от друга. Степень агрегации (а значит и СОЭ) повышается при увеличении концентрации в плазме так называемых белков острой фазы – маркеров воспалительного процесса. В первую очередь – фибриногена, C-реактивного белка, церулоплазмина, иммуноглобулинов и других. Напротив, СОЭ снижается при увеличении концентрации альбуминов.

Определение СОЭ проводят методом Панченкова (в капилляре). В методе Панченкова в качестве антикоагулянта используют цитрат натрия. В капилляр набирают 2,5 мкл цитрата и в тот же капилляр добирают 7,5 мкл крови или в заранее раскапаные пробирки с цитратом добавляют 7,5 мкл крови, кровь с цитратом перемешивают в пробирке, снова набирают в капилляр и устанавливают в специальный штатив на 1 час. По методу Вестергрена (в пробирке).

В градуированный на 100 делений капилляр Панченкова набирают до метки «Р» 5%-ый раствор цитрата натрия и переносят его на часовое стекло. Затем в тот же капилляр набирают дважды кровь до метки «К» и оба раза выдувают её на часовое стекло. Кровь, тщательно перемешанную с цитратом натрия, вновь набирают в капилляр до метки «К». Капилляр ставят в штатив строго вертикально. СОЭ учитывают через 1 час, при необходимости через 24 часа и выражают в миллиметрах.

Более ста лет данный лабораторный тест применяется для количественного определения интенсивности разнообразных воспалительных процессов. Так, чаще всего увеличение СОЭ связано своспалительными процессами, отравлениями, инфекциями, инвазиями, опухолями, гемобластозами, кровопотерей, травмами, оперативными вмешательствами.

Хотя воспаление и является наиболее частой причиной ускорения оседания эритроцитов, увеличение СОЭ также может обусловливаться и другими, в том числе и не всегда патологическими, состояниями .

Несмотря на свою неспецифичность определение СОЭ все еще является одним из наиболее популярных лабораторных тестов для установления факта и интенсивности воспалительного процесса.

1.3 Определение содержания гемоглобина

Определение содержания гемоглобина в крови животных является одним из самых важных и массовых показателей. Для определения гемоглобина чаще всего анализируют производные гемоглобина, образовавшиеся в процессе его окисления и присоединения к гену различных химических групп, приводящих к изменению валентности железа и окраски раствора .